脑源性神经营养因子和脑缺血

有证据表明BDNF在脑缺血的保护中起重要作用。BDNF保护缺血引起的神经细胞损伤的机制为(1)稳定细胞内钙离子水平,减少兴奋性氨基酸引起的损伤;(2)拮抗NO介导的细胞毒作用;(3)调节自由基代谢;(4)对损伤神经元具有修复作用。     

脑源性神经营养因子基因工程细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠的实 …

目的观察脑源性神经营养因子基因工程成肌细胞脑内纹状体移植对帕金森病大鼠的治疗作用。方法 建立逆转录病毒介导的ＢＤＮＦ表达质粒并转染成肌细胞,筛选阳性细胞进行脑内移植。结果 基因工程成肌细胞脑内移植可明显提高帕金森病大鼠黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元的存活率,使纹状体多巴胺含量明显增加,动物的旋转行为改善约５０％,并持续２个月之久。结论脑源性神经营养因子基因工程成肌细胞脑内纹状体移植可明显改善动物的旋转     

脑源性神经营养因子基因工程细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠的实验研究

目的观察脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）基因工程成肌细胞脑内纹状体移植对帕金森病大鼠的治疗作用。方法建立逆转录病毒介导的ＢＤＮＦ表达质粒并转染成肌细胞,筛选阳性细胞进行脑内移植。结果基因工程成肌细胞脑内移植可明显提高帕金森病大鼠黑质酪氨酸羟化酶（ＴＨ）阳性神经元的存活率,使纹状体多巴胺含量明显增加,动物的旋转行为改善约５０％,并持续２个月之久。结论脑源性神经营养因子基因工程成肌细胞脑内纹状体移植可明显改善动物的旋转行为并可促进黑质神经原的存活,为帕金森病的治疗提供了一种新的有效的治疗方法     

脑源性神经营养因子诱导大鼠骨髓基质细胞成为神经干细胞及其分化作用的实验研究

目的探讨脑源性神经营养因子(BDNF)诱导大鼠骨髓基质细胞(BMSCs)成为神经干细胞及其分化作用。方法取成年大鼠BMSCs,分别以BDNF和BDNF+RA(维甲酸)作为诱导物诱导,于诱导3d、7d后行巢蛋白(Nestin)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白免疫细胞化学染色。结果诱导3天后BDNF和BDNF+RA诱导组均有大量Nestin染色阳性细胞,BDNF+RA组阳性率高于BDNF组(P<0.01)。NSE、GFAP免疫阳性细胞在诱导3d后也有少量表达。诱导7天后BDNF和BDNF+RA诱导组Nestin阳性细胞明显减少,与诱导3天后比较差异有显著性(P<0.01),而NSE、GFAP阳性细胞数增多,与诱导3天后相比差异有显著性(P<0.01),且BDNF+RA组阳性率高于BDNF组(P<0.01)。结论联合应用BDNF与RA可提高BMSCs神经转化,并促进其向神经元及星形胶质细胞细胞分化。     

脑源性神经营养因子诱导大鼠骨髓基质细胞成为神经干细胞及其分化作用的实验研究

目的探讨脑源性神经营养因子（BDNF）诱导大鼠骨髓基质细胞（BMSCs）成为神经干细胞及其分化作用。方法取大鼠BMSCs。分别以BDNF和BDNF＋RA（维甲酸）作为诱导物诱导,于诱导3d、7d后行巢蛋白（Nestin）、神经元特异烯醇化酶（NSE）、胶质纤维酸性蛋白免疫细胞化学染色。结果后BDNF和BDNF＋RA诱导组均有大量Nestin染色阳性细胞,BDNF＋RA组阳性率高于BDNF组（P〈0．01）。NSE、GFAP免疫阳性细胞在诱导3d后也有少量表达。诱导7d后BDNF和BDNF＋RA诱导组Nestin阳性细胞明显减少．与诱导3d后比较差异有显著性（P〈0．01）,而NSE、GFAP阳性细胞敷增多,与诱导3b比较差异有显著性（P〈0．01）,且BDNF＋RA组阳性率高于BDNF组（P〈0．01）。结论联合应用BDNF与RA可提高BMscs神经转化．并促进其向神经元及星形胶质细胞细胞分化。     

骨髓间质干细胞联合脑源性神经营养因子用于大鼠脑出血的实验研究

目的观察骨髓间质干细胞(MSCs)联合脑源性神经营养因子(BDNF)治疗大鼠脑出血(ICH)的疗效。方法建立大鼠ICH模型,体外培养标记纯化的MSCs,经侧脑室植入脑部,同时局部注入BDNF。记录对照组、BDNF组、MSCs组和MSCs+BDNF组7d、14d、21d大鼠神经功能改善程度;免疫组化法检测MSCs脑内迁移及分化;电子显微镜观察神经凋亡细胞。结果 MSCs组大鼠运动功能有明显改善,MSCs+BDNF组对ICH损伤的修复作用最明显。MSCs+BDNF组各时间点MSCs阳性细胞数及NEUN、GFAP、CNP免疫阳性细胞数均高于MSCs组(P<0.01),且MSCs+BDNF组神经细胞凋亡程度最轻。结论 MSCs脑部移植可促进大鼠ICH损伤部位结构和功能修复,BDNF对其修复具有协同作用。     

红景天苷和脑源性神经营养因子与神经干细胞共移植对致鼠神经干细胞定向分化的研究

目的：探讨红景天苷和脑源性神经营养因子（BDNF）、神经干细胞（NSCs）共移植对致鼠NSCs定向分化影响。方法：将戊四氮致大鼠分为模型组、NSCs组、NSCs＋BDNF组和NSCs＋BDNF＋红景天苷组。取新生大鼠海马组织,将培养的NSCs与BDNF＋红景天苷＋BDNF和基础培养基分别移植至致鼠海马组织中,苏木精-伊红染色及免疫组化检测不同时间点5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）、谷氨酸脱羧酶（GAD65）阳性细胞数,并观察大鼠行为学改变。结果：NSCs＋BDNF＋红景天苷共移植组与其他组比较,各时间点BrdU、GAD65阳性细胞数均增多（P〈0.05）。第3周开始,大鼠癫发作次数最少（P〈0.05）。结论：BDNF与红景天苷联合有利于神经干细胞向γ-氨基丁酸能神经元分化。两者联合移植至致鼠后能减少大鼠的癫发作次数。     

脑源性神经营养因子融合蛋白对大鼠局灶性脑缺血治疗作用的初步研究

目的 研究脑源性神经营养因子融合蛋白(BDNF-PTD)在大鼠脑缺血模型中对大脑神经元的保护作用.方法 SD大鼠采用随机数字表法分为给药模型组、空白模型组、阴性对照组、正常组,每组5只.前3组大鼠通过线栓法制作脑中动脉栓塞模型;正常组大鼠正常喂养.不做任何处理.栓塞1 h后给药模型组腹腔注射50 μg(50 μg/mL)BDNF-PTD,阴性对照组注射1 mL生理盐水,空白模型组不做处理.采用Bederson评分评价各组大鼠神经功能缺损情况.24h后将各组大鼠断头取脑,大脑切片TTC染色,观察各组大鼠脑梗死面积.结果 给药模型组大鼠神经功能缺损不明显,Bederson评分明显低于空白模型组及阴性对照组(P<0.05).TTC染色结果提示给药模型组大鼠脑梗死区域面积较空白模型组、阴性对照组明显缩小,差异有统计学意义(P<0.05).结论 BDNF-PTD能通过血脑屏障并且发挥其生物学效应.起到保护脑缺血后神经元作用.     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞移植对痴呆大鼠记忆功能的影响

背景：一些研究已显示，重组脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞具有向神经样细胞分化的潜能，且能提高脑缺血模型鼠的神经缺失功能。 目的：拟进一步观察脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞移植对阿尔茨海默病鼠学习记忆能力的改善。 设计、时间及地点：随机对照动物观察，于2006-01/2007-06在中山大学一附院神经病学实验室完成。 材料：清洁级8周龄雄性SD大鼠48只，随机分为正常对照组、损伤模型组、基因修饰细胞组、未修饰细胞组，12只/组。另取出生3 d的清洁级SD大鼠10只，用于骨髓间质干细胞的分离培养。 方法：取传至第6代的骨髓间质干细胞，双酶切后亚克隆至pcDNA3质粒，行增强型绿色荧光蛋白基因转染，采用电穿孔法得到重组腺病毒Ad-BDNF，转染293细胞进行病毒包装。除正常对照组外，其余3组大鼠均建立阿尔茨海默病模型。造模后12 d，基因修饰细胞组取重组腺病毒脑源性神经营养因子基因修饰的不含血清骨髓间质干细胞悬液，于伤侧侧脑室坐标前囟后1.6 mm、外侧1.5 mm、腹侧4.0 mm注入8 μL；未修饰细胞组移植等量的单纯骨髓间质干细胞悬液。 主要观察指标：Western blotting法鉴定重组病毒在骨髓间质干细胞中表达，流式细胞仪检测基因感染效率。细胞移植后2周采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力。 结果：Ad-BDNF感染的骨髓间质干细胞存在Mr14 000的脑源性神经营养因子蛋白条带，2 d后约34%骨髓间质干细胞被感染。基因修饰细胞组、未修饰细胞组大鼠平均逃避潜伏期均明显低于损伤模型组（P < 0.01），且前者基本达到正常水平。与损伤模型组寻找平台的运动策略比较，基因修饰细胞组与未修饰细胞组趋向式、直线式显著增多（P < 0.01），边缘式、随机式明显减少（P < 0.01），且前者基本达到正常水平。 结论：移植的骨髓间质干细胞经脑源性神经营养因子基因修饰后，可明显改善阿尔茨海默病模型鼠的记忆能力。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰神经干细胞移植短暂性脑缺血再灌注损伤大鼠半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达

背景：以往对脑缺血再灌注后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease 3,Caspase-3)的表达均缺乏长时间的动态观察。 目的：探讨胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞移植对暂时性脑缺血大鼠脑组织Caspase-3表达的影响。 设计：随机对照动物实验。 材料：清洁级成年SD大鼠60只,随机分为4组：正常对照组5只、缺血再灌注组5只、单纯细胞移植组25只、基因修饰细胞移植组25只。另取清洁级新生SD大鼠数只,用于分离培养神经干细胞。 方法：除正常对照组外,其余3组大鼠按改良性线栓法制备暂时性脑缺血模型。再灌注3 d,单纯细胞移植组从右侧侧脑室每只注入20 μL神经干细胞悬液,含(4.0~5.0)×105个神经干细胞;基因修饰细胞移植组每只注入等量胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞悬液;缺血再灌注组每只注入20 μL生理盐水。正常对照组、缺血再灌注组在缺血再灌注1周麻醉处死动物,单纯细胞移植组、基因修饰细胞移植组分别在缺血再灌注1,2,3,5,7周麻醉处死动物,5只/时间点。 主要观察指标：采用免疫组织化学SP法观察Caspase-3在海马和额顶皮质表达及分布特点。 结果：免疫组织化学染色显示,Caspase-3免疫阳性产物位于细胞核、细胞质和部分突起。在海马：单纯细胞移植组、基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数均随再灌注时间的延长而逐渐减少;除缺血再灌注第1周外,其余各时间点基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数均明显少于单纯细胞移植组(P < 0.05)。在额顶皮质：单纯细胞移植组、基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数亦均随再灌注时间的延长而逐渐减少;除缺血再灌注第1,2周外,其余各时间点基因修饰细胞移植组Caspase-3阳性细胞数均明显少于单纯细胞移植组(P < 0.05)。 结论：胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞移植通过降低Caspase-3的表达,减少神经元凋亡,从而抑制缺血性脑损伤的进行性恶化,其移植效果优于单纯神经干细胞移植。     

hBDNF-GFP基因转染神经干细胞后hBDNF的表达及生物学特性研究

目的 探讨慢病毒载体介导入脑源性神经营养因子(hBDNF)和绿色荧光蛋白(GFP)基因转染大鼠神经干细胞(NSCs)后hBDNF的表达及其生物学特性的变化.方法 构建hBDNF和GFP基因共表达的慢病毒载体并转染NSCs(hBDNF-GFP-NSCs组),同时设GFP转染NSCs组(GFP-NSCs组)和未转染的NSCs组(NSCs组).应用RT-PCR和Western blot法分别检测3组细胞中hBDNFmRNA和蛋白的表达:ELISA检测hBDNF-GFP-NSCs组细胞转染前后培养液中hBDNF含量的变化:使用上述3组细胞的上清液培养背根神经节(DRG)与NSCs,观察DRG的生长情况并应用流式细胞法检测NSCs分化为神经元的比例.结果 RT-PCR、Western blot结果显示转染后7 d hBDNF-GFP-NSCs组hBDNF mRNA和蛋白的表达均明显强于GFp-NSCs组和NSCs组;EUSA检测显示hBDNF-GFP转染NSCs后上清中hBDNF含量增加,第5天分泌达最高峰,与转染前比较差异均有统计学意义(P<0.05);使用hBDNF-GFP-NSCs组上清液培养DRG和NSCs,4 d后DRG很快伸出突起,流式细胞法检测显示NSCs分化为神经元的比例高于其他两组.结论 NSCs可作为基因转染载体,被hBDNF-GFP基因重组慢病毒转染后仍可保持原有生物学特性,并稳定表达和分泌有生物学活性的hBDNF和GFP.     

Expression of brain-derived neurotrophic factor in rat hippocampus following focal cerebral ischemic injury

BACKGROUND： The functional role of brain-derived neurotrophic factor （BDNF） is enhanced following cerebral ischemic injury providing neurons with an important self-protection mechanism in early stage ischemia/hypoxia. OBJECTIVE： To investigate the expression pattern of BDNF in different rat hippocampal regions following focal cerebral ischemic injury. DESIGN, TIME AND SETTING： We performed a comparative and neurobiological study of animals in the Department of Histology and Embryology and the Central Laboratory, Hebei Medical University from March to December 2003. MATERIALS： Forty healthy Sprague Dawley rats were randomly divided into a cerebral ischemia group and a sham operation group, with 20 rats per group. METHODS： In the cerebral ischemia group, we occluded the right middle cerebral artery with a suture, threading it to a depth of 17-19 mm. In the sham operation group, the threading depth was approximately 10mm. MAIN OUTCOME MEASURES： We analyzed the expression of BDNF in different hippocampal regions by immunohistochemical staining of brain sections taken on post-operative days 7, 14, 21 and 30. RESULTS： Sham operation group： We observed a number of a few BDNF-positive cells with light staining in the hippocampal CA1 CA4 regions and dentate gyms. Cerebral ischemia group： compared with the sham operation group, BDNF increased on day 7, significantly increased on day 14, and reached a peak on day 21 （P 〈 0.05）. Furthermore, irnmunologically reactive products were darkly stained, and neurons had long axons. BDNF was particularly highly expressed in the hippocampal CA3 and CA4 regions and dentate gyms. CONCLUSION： Cerebral ischemic injury can damage hippocampal neurons. Neurons can increase their anti-ischemic capacity by increasing BDNF expression in the hippocampal CA3 and CA4 regions and dentate gyms.     

脂肪来源干细胞移植对脑缺血大鼠运动功能的影响

目的 观察脂肪来源干细胞(ADAS)移植入脑缺血大鼠后存活、迁移、分化以及大鼠的运动功能障碍恢复情况,探讨ADAS移植治疗大鼠局灶性脑缺血的有效性和可能机制. 方法 将雄性SD大鼠饲养至250～300 g时,制作左侧大脑中动脉阻塞模型(MCAO),按照随机数字表法分为未处理组、对照组和移植组,每组6只.未处理组造模后不作特殊处理,对照组在造模后3h通过尾静脉注射杜氏改良培养基(DMEM),移植组造模后3 h通过尾静脉注射ADAS.造模后14 d处死大鼠,通过免疫荧光染色观察5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、人微管相关蛋白2(MAP-2)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.造模后1、7及14 d时神经功能缺损评分评价大鼠运动功能改善情况. 结果 (1)移植后,标记了BrdU的ADAS大量出现在缺血灶周围;(2)MCAO后14d,缺血灶周围出现了少量BrdU/GFAP双染阳性细胞;同时出现少量BrdU/NSE和BrdU/MAP-2双染阳性细胞;(3)14d时移植组大鼠神经功能缺损评分与对照组相比明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 (1)成年大鼠ADAS在MCAO大鼠体内存活并少量分化为神经元样细胞和星形胶质细胞样细胞;(2)移植ADAS可使大鼠脑缺血所致的运动功能缺损得到改善.     

神经干细胞移植治疗小鼠机械性脑损伤的实验研究

目的探讨神经干细胞移植后的体内存活、增殖与分化,及其对小鼠机械性脑损伤的治疗作用。方法运用牙科钻制作小鼠运动区皮质机械性损伤模型。48只清洁级昆明小鼠,雌雄不拘,体质量为18～20g,按体质量编号随机分为4组:神经干细胞移植组(损伤后原位移植经鉴定确认的原代培养的小鼠神经干细胞)、3T3移植组(损伤后原位移植3T3细胞)、单纯损伤组(损伤后不行神经干细胞移植)和空白对照组(仅施行麻醉),每组12只小鼠。于伤后第3天进行行为学检测;第10、30天行损伤区脑组织nestin及NF200免疫荧光染色,观察神经干细胞生长、分化情况。结果损伤后,获得原代培养的神经干细胞在移植早期贴附于损伤区域且向周边组织呈浸润生长;移植后期Hoechst33342及NF200染色显示损伤区附近可见分化形成的神经元。单纯损伤组小鼠出现偏瘫症状;而神经干细胞移植组小鼠植入神经干细胞后则症状减轻,运动功能明显改善,与其他各组相比差异有显著性意义(P<0.001)。结论神经干细胞移植能够改善小鼠机械性脑损伤后的神经功能状态。     

bFGF基因修饰的间充质干细胞对大鼠脑缺血模型的保护作用

目的 观察碱性成纤维生长因子(bFGF)基因修饰的间充质干细胞(MSCs-bFGF)对大鼠脑缺血的保护作用.方法 将间充质干细胞(MSCs)或MSCs-bFGF通过静脉移植至实验性脑缺血大鼠体内,比较两者对大鼠脑缺血后神经功能及脑梗死体积的影响,并应用双重荧光标记方法观察移植细胞在脑内的存活和分化情况.结果 静脉移植MSCs和MSCs-bFGF均能改善脑缺血后大鼠的神经功能、减少脑梗死体积,且MSCs-bFGF的作用明显优于MSCs,MSCs-bFGF移植7 d后大鼠脑内BrdU阳性细胞数、BrdU-NeuN双标阳性细胞数分别为127.40±7.43、11.20±3.09,明显多于MSCs治疗组大鼠,而BrdU-GFAP双标阳性细胞数两组间差异无统计学意义.结论 MSCs移植对脑缺血具有保护作用,bFGF基因修饰可提高MSCs移植对大鼠脑缺血后损伤的保护和神经功能恢复作用.     

Modification of the brain-derived neurotrophic factor gene: a portal to transform mesenchymal stem cells into advantageous engineering cells for neuroregeneration and neuroprotection

Multipotential mesenchymal stem cells (MSCs) are ideal seed cells for recruiting the loss of neural cells due to their strong proliferative capacity, easy acquisition, and considerable tolerance of genetic modifications. After transduction of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) gene via recombinant retroviral vectors into the human MSCs, nearly 100% of cells expressed BDNF (which were therefore transformed into BNDF-MSCs) as detected by immunocytochemistry, and the quantity of BDNF in the culture medium was increased by approximately 20,000-fold. In spite of the genomic integration of an exogenous gene, BDNF-MSCs did not present any structural aberration in the chromosomes. All-trans-retinoic acid (RA) induction caused the BDNF-MSCs to differentiate into neural cells with significantly increased expressions of such neural-specific proteins as nestin, NeuN, O4, and glial fibrillary acidic protein (GFAP). The voltage-dependent K+/Ca2+ currents were recorded from the induced BDNF-MSCs using patch-clamp technique. Compared with the MSCs induced by both RA and BDNF, BDNF-MSCs survived in significantly greater number in the induction medium, and also more cells were induced into neuron-like cells (NeuN, P < 0.01) and oligodendrocyte-like cells (O4, P < 0.05). We suppose that, once engrafted into human central nervous system, the BDNF-MSCs would not only recruit the neuronal losses, but also provide, by way of paracrine, large quantities of BDNF that effectively perform the functions of neuroprotection and neuroregeneration, promoting the activation of endogenous neural stem/progenitor cells and their chemotactic migration. On the other hand, the BDNF-MSCs that can survive in the host environment and differentiate subsequently into functional mature cells may also serve as specifically targeting vectors for ex vivo gene therapy.     

脑源性神经营养因子基因重组慢病毒转染骨髓间质干细胞移植治疗大鼠脑出血的实验研究

目的 观察脑源性神经营养因子(BDNF)基因重组慢病毒转染骨髓间质干细胞(MSCs)移植治疗大鼠脑出血的疗效.方法 分离培养大鼠MSCs;将带有BDNF的慢病毒载体转染MSCs;RT-PCR、蛋白质印迹检测转基因MSCs BDNF基因及蛋白水平表达.制备大鼠脑出血模型,采用抽签法随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、MSCs组、空病毒转染骨髓问质干细胞(MSCs-EGFP)组、脑源性神经营养因子基因重组慢病毒转染骨髓间质干细胞(MSCs-EGFP-BDNF)组,每组15只.72 h后细胞移植,记录各组细胞移植后7、14、21 d神经功能缺损改善程度;免疫荧光双标检测MSCs脑内迁移和分化情况.结果 MSCs-EGFP-BDNF组BDNF基因及蛋白水平表达明显高于MSCs组及MSCs-EGFP组;与PBS组(7 d:2.0±0.4,14 d:1.7 ±0.2,21 d:1.3±0.2)相比,MSCs组(7 d:1.6±0.2,14 d:1.2 ±0.3,21 d:0.8±0.2)、MSCs-EGFP组(7 d:1.6±0.3,14 d:1.1 ±0.2,21 d:0.8 ±0.3)及MSCs-EGFP-BDNF组(7 d:1.2±0.3,14 d:0.6±0.1,21 d:0.2 ±0.2)大鼠神经功能评分均有不同程度改善(F=6.667、18.417、20.882,均P＜0.05),其中MSCs-EGFP-BDNF组改善最为显著;免疫荧光双标显示MSCs-EGFP-BDNF组胶原纤维酸性蛋白、神经元特异性核蛋白、环核苷酸磷酸二酯酶阳性率明显高于MSCs组及MSCs-EGFP组,而MSCs组与MSCs-EGFP组比较差异无统计学意义.结论 BDNF基因重组慢病毒修饰的MSCs基因及蛋白水平表达均增高;修饰的MSCs移植后可迁移至脑出血灶周围存活并分化表达神经细胞标志物,促进脑出血后神经功能修复.     

BDNF-GFP转染神经干细胞修复大鼠脊髓损伤：发挥干细胞与神经因子的双重效应？

摘要 背景：神经干细胞移植入大鼠脊髓损伤模型可以促进功能恢复,基因治疗已被广泛用于治疗脊髓损伤。 目的：确定BDNF-GFP转染后神经干细胞移植对大鼠脊髓损伤的修复效果。 设计,时间和背景：本实验是在中国医科大学基础医学院发育生物学实验室与2009年5月至2010年1月完成。 材料：10只新生Wistar大鼠和88只2-3个月大,雌雄不限的Wistar大鼠。 方法：以携带BDNF-GFP基因的腺病毒转染神经干细胞。88只Wistar大鼠中假手术组8只, 80只大鼠制成T9左侧横断模型,并随机分成四组：BDNF和GFP修饰的神经干细胞移植组,GFP修饰的神经干细胞移植组;单纯神经干细胞移植组和模型组。在各神经干细胞移植组,脊髓损伤后向横断处显微注射等体积细胞,模型组在相同的部位注射等体积的PBS。 主要观察指标： BBB评分检测脊髓损伤模型运动功能恢复情况;制备脊髓损伤模型2周后取材,免疫组化评估BDNF-GFP转染的神经干细胞移植后的细胞学特点;制备脊髓损伤模型2、4、6、8周Real-time PCR检测脊髓横断处BDNF表达情况。 结果： BDNF-GFP转染后神经干细胞在脊髓半切模型中存活并表达BDNF和GFP,移植该细胞后的大鼠体内高表达具有生物活性的BDNF,且脊髓损伤动物运动功能较对照组明显恢复。 结论：移植BDNF-GFP转染后神经干细胞可能是一种修复脊髓损伤的有效的方法。 关键词：神经干细胞,脑源性神经营养因子;绿色荧光蛋白;脊髓损伤;移植。     

银杏叶提取物对脑缺血大鼠脑源性神经营养因子的影响

目的　观察银杏叶提取物 (GBE)对局灶脑缺血大鼠脑源性神经营养因子 (BDNF)表达的影响 ,探讨GBE与缺血损伤神经元可塑性的关系。方法　制作大鼠大脑中动脉闭塞 (MCAO)模型 ,应用免疫组化方法观察不同缺血时间 GBE治疗组及脑缺血组 BDNF阳性细胞数 ,并进行图像分析。结果　坏死灶中心区 GBE组及缺血组BDNF阳性神经元均消失 ,但在坏死灶周围区 ,两组 BDNF阳性细胞均显著增加。两组细胞形态无明显不同 ,但GBE治疗组阳性细胞数又显著高于相应缺血对照组。结论　银杏叶提取物可提高大鼠局灶脑缺血半暗带区 BDNF的表达水平 ,促进神经元的修复及重塑。