艾灸对D-半乳糖衰老小鼠学习记忆、大脑组织NOS/NO-cGMP信号系统及c-fosmRNA的影响

目的探讨艾灸疗法改善学习记忆的作用机制。方法将72只雄性小鼠随机分为生理组、模型组、艾灸1组、艾灸2组、电针组和尼莫地平组,每组12只。模型组及艾灸组连续42 d于小鼠颈背部皮下注射D-半乳糖,生理组注射等量生理盐水。造模第13天开始干预治疗,艾灸1组灸足三里、悬钟穴,艾灸2组灸关元、百会穴,隔天治疗1次,共治疗15次。采用水迷宫检测学习记忆,检测脑组织匀浆一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量,原位杂交检测各组小鼠大脑皮层、海马CA3区c-fosmRNA的表达。结果模型组"潜伏期"较生理组、艾灸1组、艾灸2组、尼莫地平组延长(P<0.01,P<0.05),模型组"原象比"和"垮台次数"较其他各组缩短、降低(P<0.01,P<0.05)。模型组脑组织NO含量、总一氧化氮合酶(TNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活力较其他5组均显著升高(均P<0.01),模型组脑组织cGMP含量较其他5组均显著降低(均P<0.01)。模型组小鼠大脑皮质、海马CA3区c-fosmRNA表达的神经元密度较其他5组均降低(P<0.01,P<0.05)。结论艾灸疗法可能通过提高cNOS的活力,生成生理活性的NO,增加第二信使cGMP的含量,即通过NO-cGMP信号转导系统,促进大脑皮质、海马CA3区神经元细胞c-fosmRNA表达,维持长时程增强(LTP),改善学习记忆能力。     

艾炷灸对D-半乳糖衰老小鼠学习记忆能力和大脑皮质、海马区c-fos蛋白表达的影响

目的观察艾炷灸对D-半乳糖衰老小鼠学习记忆能力的影响与学习记忆相关脑区c-fos蛋白表达的关系。方法健康3月龄昆明雄性小鼠体质量(30±2)g,60只,水迷宫检测后按随机区组设计分为:生理盐水组,造模组,艾灸1、2组,尼莫地平组等5组,每组各12只。造模组,艾灸1,2组,尼莫地平组连续42 d颈背部皮下注射D-半乳糖造成小鼠衰老模型;生理盐水组连续42 d颈背部皮下注射等量生理盐水,12 d后艾灸1、2组,分别选取小鼠"足三里、悬钟","关元、百会"行艾柱灸治疗,尼莫地平组给予尼莫地平灌胃,均为隔日1次,共15次。采用水迷宫检测学习记忆、免疫组化方法观察各组小鼠大脑皮层、海马CA3区c-fos蛋白的表达。结果模型组潜伏期较生理盐水组、艾灸1、2组、尼莫地平组延长(P<0.01或P<0.05),模型组原象比、垮台次数较其他各组缩短、降低(P<0.01或P<0.05),模型组小鼠大脑皮质、海马CA3区c-fos蛋白表达的神经元密度较生理盐水组、艾炷灸组、尼莫地平灌胃治疗组降低(P<0.01)。结论艾炷灸足三里、悬钟,关元、百会穴位处方可能通过提高D-半乳糖衰老小鼠脑组织大脑皮层、海马CA3区c-fos蛋白的表达改善学习记忆能力。     

艾炷灸对D-半乳糖衰老小鼠脑组织NO、NOS的影响

目的：探讨艾炷灸抗衰老作用机制。方法：连续42天颈背部皮下注射D-半乳糖造成小鼠衰老模型；观察艾炷灸小鼠脑皮层NO（一氧化氮）含量、NOS（一氧化氮合酶）活力的影响。结果：①D-半乳糖致衰老小鼠和18月龄自然衰老的小鼠其脑组织NO含量和NOS活力都呈增高的趋势。②艾炷灸治疗组与生理盐水对照组小鼠脑组织NO含量和NOS活力水平较模型组和自然衰老组低，并有显著差异。结论：艾炷灸足三里、悬钟可以降低D-半乳糖致衰老小鼠脑组织NO含量和NOS活力，从而抑制了增高的NO产生的细胞毒性，起到延缓衰老的作用。     

艾炷灸对D-半乳糖衰老小鼠大脑皮层细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子、视网膜母细胞瘤抑制蛋白及c-fos的影响

目的:探讨艾炷灸治疗D-半乳糖衰老小鼠的可能机制。方法:雄性昆明小鼠60只随机分为生理盐水组、造模组、艾灸1组、艾灸2组、尼莫地平组,每组12只。皮下注射D-半乳糖造成小鼠衰老模型。艾灸1、2组分别选取小鼠"足三里""悬钟""关元""百会"行艾柱灸治疗,尼莫地平组给予尼莫地平灌胃。采用免疫组化法观察各组小鼠细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(P16)、视网膜母细胞瘤抑制蛋白(pRb)及c-fos的表达。结果:造模组小鼠大脑皮质P16蛋白表达的神经元密度较生理盐水组增高(P0.01),艾灸1、2组及尼莫地平组较造模组降低(P0.01)。造模组小鼠pRb、c-fos蛋白表达的神经元密度较生理盐水组、艾炷灸、尼莫地平组降低(P0.01,P0.05)。其余组各指标比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:艾炷灸"足三里""悬钟""关元""百会"可调控D-半乳糖衰老小鼠脑组织P16、pRb、c-fos蛋白的表达。     

隔物灸对寒湿凝滞型原发性痛经患者内皮素和一氧化氮含量的影响

目的:探讨隔物灸治疗寒湿凝滞型原发性痛经的作用机制。方法:以神阙穴艾炷隔盐姜灸、关元穴艾炷隔姜灸治疗寒湿凝滞型原发性痛经患者105例,并设中药月月舒冲剂对照组(104例)。观察两组疗效,同时随机对部分患者(两组各40例)治疗前后及正常人经期血浆内皮素(ET-1)含量(用放射免疫法)、血清一氧化氮(NO)含量(用硝酸还原酶法)进行检测。结果:艾灸组疗效明显优于对照组(P<0.05)。艾灸组和对照组治疗后血浆ET-1含量均较治疗前明显下降(P<0.01,P<0.05);治疗后艾灸组ET-1含量明显低于对照组(P<0.01)。治疗后两组血清NO含量与治疗前比较均明显升高(P<0.01),并均恢复至正常组水平(P>0.05)。结论:隔物灸治疗原发性痛经具有较好疗效,其作用机制之一可能与调节ET-1与NO失衡有关。     

艾灸对D-半乳糖致小鼠衰老模型抗衰老作用的研究

目的:探讨艾灸延缓衰老的作用机制。方法:33只3月龄昆明小鼠随机分为模型组、生理盐水对照组、艾灸组,另选16月龄小鼠作为自然衰老组(实验结束为18月龄)。模型组、艾灸组小鼠连续42d颈背部皮下注射D-半乳糖造成衰老模型,生理盐水对照组小鼠连续42d颈背部皮下注射等量生理盐水。注射12d后艾灸组选取"足三里"悬钟"两穴进行米粒大艾柱灸治疗,每穴每次3炷,隔日1次,共15次。用硝酸还原酶法测定小鼠大、小脑皮层一氧化氮(NO)含量,用双波长分光光度法测定小鼠大、小脑皮层一氧化氮合酶(NOS)活力。结果:D-半乳糖致衰老小鼠和18月龄自然衰老小鼠其脑皮层NO含量和NOS活力都呈增高的趋势,艾灸组小鼠脑皮层NO含量和NOS活力水平较模型组和自然衰老组明显降低(P<0.05,0.01)。结论:艾灸"足三里"悬钟"可以降低D-半乳糖致衰老小鼠脑皮层中NO含量和NOS活力,从而抑制了增高的NO产生的细胞毒性,起到延缓衰老的作用。     

线香点按瘢痕灸预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠SOD、NO的影响

目的 :观察线香点按瘢痕灸预处理对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)的影响,为探索中医针灸特色的脑保护预处理方法提供实验依据。方法:SD大鼠40只,随机分为假手术对照组、脑缺血再灌注模型组、艾炷灸预处理组、线香点按瘢痕灸预处理组,每组10只大鼠。各组分别于手术后24 h处死取脑。分别测定脑组织SOD和NO含量。结果:线香点按瘢痕灸预处理组与艾炷灸预处理组术后SOD活性与模型组比较明显增高,有非常显著性差异(P<0.01);但两组之间无显著性差异。线香点按瘢痕灸预处理组术后脑匀浆NO值与模型组比较明显降低,有显著性差异(P<0.05)。结论:灸治预处理对脑缺血再灌注大鼠神经细胞具有保护作用,但线香点按瘢痕灸预处理在对脑匀浆NO值的降低方面更显优势。     

抗纤灵颗粒对单侧输尿管梗阻模型大鼠肾组织NO cNOS iNOS的影响

目的:观察抗纤灵颗粒对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾组织一氧化氮(NO)、结构型一氧化氮合酶(cNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、抗纤灵组、氯沙坦组。造模后7、14、21、28天分批处死,进行肾组织匀浆,检测NO及cNOS、iNOS的含量。结果:模型组大鼠NO含量明显降低、cNOS活力显著下降,iNOS活力显著升高,与正常组及假手术组比较有统计学意义(P<0.01);抗纤灵组大鼠NO含量显著升高、cNOS活力明显增强,iNOS活力明显下降,与模型组比较有统计学意义(P<0.01,P<0.05),与氯沙坦组比较,有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论:抗纤灵颗粒通过上调cNOS诱导的NO含量,下调iNOS诱导的NO含量,引起TGF-β1表达下调,减轻肾间质纤维化,延缓肾小球硬化,从而对肾脏起到一定的保护作用。     

电针对脑缺血再灌注大鼠外周血内源性内皮祖细胞的作用

目的:初步探讨电针对脑缺血后内源性内皮祖细胞(EPCs)及其相关因子的影响。方法:72只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、针刺组,各组分24、48、72h3个时间点,每个时间点6只。大脑中动脉闭塞法制造脑缺血再灌注模型。电针刺激大鼠单侧"足三里"曲池",针刺30min,每日1次。使用流式细胞术检测EPCs的数量,ELISA法检测血清中内皮生长因子(VEGF)含量,分光光度法检测总一氧化氮合酶(TNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活力。结果:模型组脑缺血再灌注后24h外周血EPCs数量和血清TNOS、iNOS活力都明显升高(P<0.01,P<0.05);48h时,针刺组EPCs数量升高,与其它各组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);72h时,针刺组EPCs数量较模型组降低(P<0.01)。针刺组在各时间点血清中VEGF含量都高于其它各组(P<0.01,P<0.05)。结论:脑缺血再灌注损伤后外周血EPCs数量和血清iNOS活力增加。电针能够影响脑缺再灌注损伤大鼠内源性EPCs,该作用可能与VEGF表达上调有关。     

艾炷灸对衰老小鼠学习记忆力及胰岛素水平的影响

目的:观察艾炷灸对D-半乳糖衰老小鼠学习记忆及血清、脑组织胰岛素(INS)水平的影响。方法:将75只小鼠随机分为对照组、造模组、艾灸1组、艾灸2组、艾灸3组,每组15只。艾灸1组艾炷灸足三里穴+悬钟穴,艾灸2组艾炷灸百会穴+关元穴,艾灸3组艾炷灸腕背关节上1mm与膝髌正中上沿上2mm。用Morris水迷宫测试学习记忆力,用酶联免疫法检测血清及脑组织INS水平。结果:治疗前各组小鼠水迷宫各项指标及学习记忆能力比较,差异无统计学意义(P0.05);治疗后,造模组与对照组、艾灸1组、艾灸2组比较,各项指标差异均有统计学意义(P0.01或P0.05);对照组、艾灸1组、艾灸2组与艾灸3组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。造模组血清和脑组织INS水平较对照组、艾灸1组和艾灸2组升高或降低,差异均有统计学意义(P0.01或P0.05);对照组、艾灸1组、艾灸2组与艾灸3组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:艾炷灸足三里穴+悬钟穴、关元穴+百会穴均能显著提高D-半乳糖衰老小鼠学习记忆能力,与降低外周循环胰岛素水平、提高脑组织的胰岛素浓度有关,具有延缓脑衰老作用。     

正交设计研究艾灸对溃疡性结肠炎大鼠穴区温度和Cx43表达的作用

目的采用正交实验设计方法,观察麦粒灸三因素三水平不同灸量对溃疡性结肠炎（UC）大鼠穴区温度和Cx43表达的影响。方法 90只SD大鼠随机抽取8只作为正常组,余82只大鼠采用免疫学方法加局部刺激制备UC模型,在确认模型成功的基础上分为模型组与麦粒灸干预组,麦粒灸干预组又随机分为9个不同灸量干预亚组,以三因素（频次、疗程、壮数）三水平组成的灸量于UC大鼠双侧天枢穴施麦粒灸。结果与结论麦粒灸三因素三水平组合的不同灸量对UC大鼠灸后即刻、灸后5min穴区皮肤温度以及Cx43阳性表达具有不同的影响,对灸后10min穴区皮肤温度的影响无显著差异。艾灸壮数是影响灸后即刻穴区皮肤温度的主效应因素,2次/d、3壮/次、5d的灸量组合作用最显著;频次是影响灸后5min穴区皮肤温度的主效应因素;疗程是影响灸后穴区Cx43阳性表达的主效应因素,1次/2d、3壮/次、10d的灸量组合作用最显著。     

大艾炷隔姜重灸脐及脐四边穴治疗腹泻临床观察

目的：探讨大艾炷隔姜重灸脐及脐四边穴治疗腹泻的疗效。方法：大艾炷隔姜重灸脐及脐四边穴30min治疗腹泻并观察其疗效。结果：治愈22例,有效5例。结论：大艾炷隔姜重灸脐及脐四边穴治疗腹泻疗效满意,适合临床运用。     

不同灸法对免疫抑制兔脾脏、胸腺影响的组织学研究＊

目的 观察不同灸法对环磷酰胺所致免疫抑制兔脾脏指数、脾组织形态学、胸腺组织形态学的影响。方法 大耳白兔40只，随机分成空白组、模型组、隔药饼灸组和艾条灸组4组，每组10只。除去空白组，模型组、隔药饼灸组和艾条灸组均连续7天经腹腔注射环磷酰胺60 mg·kg^-1，制备免疫抑制模型。造模成功后，隔药饼灸组用六味地黄汤组方药物制成的药饼放置在“神阙”、“关元”、“足三里（双）”、“脾俞（双）”、“肾俞（双）”上，以线香点燃置于药饼上的制备好的艾炷，燃尽更换，每穴连灸5壮；艾条灸组施以艾条灸，将自制的与5壮艾炷量相等的小艾条放置于上述穴位，燃尽即止；均隔日灸，共灸10次。空白组、模型组相同时间均绑缚固定到兔台上，不予干预。干预结束后次日，对动物进行称重、麻醉，取动物脾脏、胸腺，常规HE染色，镜下观察，并计算脾脏指数。结果 与空白组比较，模型组动物脾脏指数明显升高（P < 0.01）；脾脏白髓面积缩小，红髓内有较多色素沉积；胸腺皮髓界限不清，皮质淋巴细胞减少。与模型组比，隔药饼灸组和艾条灸组的脾脏指数明显下降，其中隔药饼灸组（P < 0.01），艾条灸组（P < 0.05）；隔药饼灸组脾脏白髓面积增大，动脉周围淋巴鞘淋巴细胞增多，红髓内色素沉积较少；胸腺结构恢复，皮髓界限清楚，皮质淋巴细胞增多。艾条灸组部分脾脏的白髓面积增大，动脉周围淋巴鞘淋巴细胞较密集，红髓内有出血和色素沉积；胸腺皮质淋巴细胞较密集，皮髓界限清。结论 不同灸法都有调节免疫抑制兔脾脏指数的作用；还能改善因免疫抑制导致的脾组织、胸腺组织的受损情况，提高免疫抑制兔的免疫功能；且隔药饼灸组改善的效果要优于艾条灸组。     

斑蝥天灸对环磷酰胺小鼠造血功能的影响及其机理探讨

目的:观察斑蝥天灸对化疗小鼠造血功能和腹腔巨噬细胞分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor,GM-CSF)能力的影响.方法:将环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)小鼠模型随机分为6组,对照组10只不予任何治疗;天灸I-Ⅳ组分别采用不同浓度的斑蝥酊灸大椎、肾俞、足三里;麦粒灸组10只用精制艾绒制备的小艾炷灸上述穴位;另设正常组10只作对照.检测不同时期小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞数、脾指数及腹腔巨噬细胞诱生GM-CSF的能力.结果:CTX化疗可致小鼠出现明显的骨髓抑制,骨髓有核细胞计数和外周血白细胞(White BloodCell,WBC)数显著减少,脾指数减少,且其腹腔巨噬细胞诱生GM-CSF能力降低.天灸大椎、肾俞、足三里穴,不但可以不同程度地减轻骨髓抑制,促进骨髓增生活跃,提高骨髓有核细胞计数,提前回升外周血-WBC数,缩短化疗所致WBC的持续低值期,还可增强化疗小鼠巨噬细胞诱生GM-CSF的能力.结论:斑蝥天灸对化疗小鼠具有抗化疗骨髓抑制作用,能够增强化疗小鼠腹腔巨噬细胞诱生GM-CSF的能力.     

Mechanism of Moxibustion Regulation on Cellular Apoptosis in Rat＇s Precancerous Lesion of Primary Hepatocellular Carcinoma

目的：探讨艾灸调控原发性肝细胞肝癌（HCC）癌前病变细胞凋亡的机制。方法：74只SD大鼠随机分为正常组、模型组和艾灸组，以二乙基亚硝胺（DEN）诱导建立HCC模型。艾灸治疗选用“足三里”麦粒灸，3壮／穴，0．5mg／壮，1次／日，连续16星期，观测体重、肝、胸腺重量的变化；肝脏组织形态学变化以及γ-GT、GST酶学指标变化；采用免疫组化等检测方法观察相关凋亡基因C-myc、N-ras、突变型P53变化趋势及对细胞周期调控基因cyclinD1、CDK4、p16等的影响。结果：艾灸能较明显降低γ-GT和GST在血中的活性：能较为明显减少相关凋亡基因C-myc、N-ras、突变型p53的蛋白表达：能较为明显抑制相关细胞周期调控基因cyclinD1、CDK4过度表达和细胞周期调控基因p16的突变。结论：艾灸可能对减缓HCC癌前病变有一定作用，其作用机制可能与调控部分凋亡基因有关。     

隔药饼灸对不同年龄人群机体CD3、CD4及CD8的影响

目的:通过对神阙、关元等保健穴施以隔药饼灸,观察对不同年龄人群机体CD系列的变化,探讨艾灸调节机体免疫功能的机制。方法:将六味地黄丸中药物按方剂比例配伍,制成药饼,放置于神阙、关元、足三里(双)、脾俞(双)、肾俞(双)穴位上。将0.3 g圆锥形艾炷置于药饼上施灸,每穴灸3壮,隔日1次,共10次。分别在施灸前、后抽静脉血5 m L,观测CD3、CD4、CD8、CD4/CD8的变化并进行比较。结果:青年组隔药饼灸后CD3、CD4、CD4/CD8均较灸前均升高,CD8较灸前降低,差异均无统计学意义(P0.05)。中年组隔药饼灸后CD3较灸前升高,差异无统计学意义(P0.05),CD4、CD4/CD8较灸前升高,CD8较灸前降低,差异均有显著统计学意义(P0.05)。老年组隔药饼灸后CD3、CD4/CD8较灸前均升高,CD8较灸前降低,差异均有显著统计学意义(均P0.05),CD4较灸略有升高,差异无统计学意义(P0.05)。结论:隔药饼灸对3个不同年龄段机体免疫功能的调节以中、老年组为显著,对不同年龄组作用机制亦不同。     

Mechanism of moxibustion regulation on cellular apoptosis in rat’s precancerous lesion of primary hepatocellular carcinoma

Objective: To investigate the mechanism of moxibustion in regulating cellular apoptosis in rat’s precancerous lesion of primary hepatocellular carcinoma (HCC). Methods: Seventy-four rats were randomly allocated to normal group, model group and moxibustion group, and the diethylic nitrosamine (DEN) was used to establish HCC model. Moxibustion with moxa cone which is as big as a grain of wheat was performed on acupoint Zusanli (ST 36), 3 cones for each acupoint and 0.5 mg for each cone, the treatment was given once a day, totally 16 weeks. Then the changes in the body weight, liver weight and thymus weight, a morphological change in the liver tissue and changes in γ-GT and GST were observed; Immunohistochemical staining method was adopted to observe the tendency of changes in relevant apoptosis genes such as C-myc, N-ras and mutant type P53, and the influence of moxibustion on cell cycle modulation genes such as cyclinD1, CDK4 and p16. Results: Moxibustion could reduce the activities of γ-GT and GST in the blood, obviously decrease the protein expression of relevant apoptosis genes such as C-myc, N-ras and mutant type P53 and markedly inhibit the over-expression of relevant cell cycle modulation genes such as cyclinD1 and CDK4 and the mutation of cell cycle modulation gene p16. Conclusion: Moxibustion might play a certain role in relieving HCC precancerous lesion and its action mechanism might be related to the regulation on partial apoptosis genes.