~(51)Cr释放方法测定LAK细胞活性若干实验条件的选择

本文探讨了(51)~Cr释放试验测定LAK细胞活性的若干实验条件。应用200μCi国产铬酸钠(Na_2~(51)CrO_4),在细胞浓度2×10~8/ml、容积0.5ml、2小时的标记条件下,1×10~4k_(562)细胞的同位素掺入量大于1800cpm,自然释放率为17～20％。以IN HCI与等容量k_(562)靶细胞共育为最大释放,其最大释放率为70.08％。效/靶比例为50∶1、共育6小时的基本条件下,(51)~Cr释放方法测定的LAK细胞杀伤K_(562)细胞活性为65.33±7.4％。     

人参茎叶皂甙对LAK细胞抗肿瘤活性的正向调节作用

体外实验,79例正常人PBL诱生的LAK细胞分别对13例新鲜急性白血病细胞和K562细胞的杀伤活性,较7例未经IL—2激活的PBL对同样靶细胞的杀伤活性明显高。适宜浓度的人参茎叶皂甙可明显增强LAK细胞抗肿瘤活性。提示人参茎叶皂甙对辅助LAK细胞联合IL—2过继输入治疗恶性肿瘤有潜在的使用价值。     

LAK细胞可溶性因子介导K_(562)细胞的损伤

采用~(51)Cr释放方法探讨LAK细胞可溶性因子介导的K_(562)细胞的损伤。15例中有12例LAK细胞培养上清介导的K_(562)细胞的损伤为10.96±5.15％。将LAK细胞洗去培养上清后与K_(562)细胞共育6小时,5例此种效靶细胞共育后的上清介导的Ks6z细胞的损伤为12.41±6.54％。结果表明,LAK细胞杀伤K_(562)细胞的作用至少一部分是由LAK细胞分泌的可溶性因子完成的。     

短期培养和长期培养的自体LAK细胞的制备和应用研究

用密度梯度离心法分离单个核细胞,在体外经短期(3~5d)和长期培养(7~15d)后将自体LAK细胞回输给病人。结果显示:长期培养LAK细胞的扩增细胞数明显多于短期培养LAK细胞扩增数(P<0.005);两者在体外均能杀伤人髓样白血病K_562细胞,前者的平均杀伤活性为39.24±2.81%,后者的平均杀伤活性为35.99±1.31%,病人经自体LAK细胞治疗后,共症状和体征均有所改善。     

缺锌儿童外周血诱生α干扰素能力与自然杀伤细胞活性的研究

本文对100例缺锌患儿与健康儿童外周血诱生α干扰素(IFN-α)能力、自然杀伤细胞(NK)活性、发锌和全血锌含量以及它们之间的关系进行研究。结果显示:缺锌患儿发锌(57.4±6.2μg/g)、全血锌(5.8±0.9μg/ml),诱生IFN-α水平(1.82×10~6±5.02×10~4IU/L)和NK细胞活性(29.34+4.12％)均显著低于健康儿童(发锌: 110.5±8.1μg/g、全血锌:13.7±3.9μg/ml、NK细胞活性:38.42±2.21％,IFN-α效价:2.41×10~6±4.12×10~4 IU/L),其他元素铜、铁含量同诱生IFN-α能力、NK细胞活性之间无明显相关关系。提示锌缺乏可能是导致机体抗感染免疫功能低下而致使缺锌儿童对感染性疾病抵抗力降低的重要因素之一。     

CD3 AK细胞与LAK细胞的诱导和体外杀伤活性的比较

目的：探讨CD3AK细胞与LAK细胞的诱导、增殖动力学和杀伤活性的变化。方法：采用抗CD3单克隆抗体（anti-CD3McAb)和rIL-2及PHA（植物血凝素）共刺激法诱生扩增CD3AK细胞,用等量rIL-2 t PHA共刺激法诱生LAK细胞。观察它们的增殖动力学变化;用MTT法以K562细胞和H7402细胞为靶细胞,测量CD3AK细胞和LAK细胞的杀伤活性。结果：微量的anti-CD3McAb辅以少量的rIL-2和PHA就能诱导和大量扩增CD3AK细胞,其扩增能力显著高于LAK细胞（P<0.001);CD3AK细胞对K562细胞和H7402细胞的杀伤活性显著高于LAK细胞（P<0.05)。结论：CD3AK细胞的扩增能力及杀伤活性均较LAK细胞为强,是更为有效的杀瘤效应细胞。     

人参皂甙Rg3对肺癌荷瘤小鼠免疫功能影响的研究

目的探讨人参皂甙Rg3对肺癌荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法将48只C57BL/6肺癌荷瘤小鼠随机分为4组:人参皂甙Rg3高剂量组(15 mg/kg)、人参皂甙Rg3低剂量组(5 mg/kg)、顺铂(DDP)组(DDP0.5 mg/kg)和生理盐水组,检测各组给药后荷瘤小鼠的脾自然杀伤细胞(NK)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)、细胞毒性T细胞(CTL)活性及血清肿瘤坏死因子(TNF)水平。以正常小鼠12只作为对照组。结果 Rg3低剂量组、Rg3高剂量组、DDP组生存素阳性率明显低于生理盐水组(P<0.05);Rg3低剂量组、Rg3高剂量组瘤体质量小于生理盐水组(P<0.05),但大于DDP组(P<0.01);生理盐水组NK、LAK和CTL活性及血清TNF水平均较正常对照组显著下降(P<0.05);DDP组NK、LAK和CTL活性及血清TNF水平较生理盐水组低(P<0.05);Rg3低剂量组和Rg3高剂量组NK、LAK和CTL活性及血清TNF水平较生理盐水组、DDP组明显提高(P<0.05),但仍低于正常小鼠组(P<0.05);Rg3低剂量组NK、LAK和CTL活性及血清TNF水平与Rg3高剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论人参皂甙Rg3可明显诱导提高荷瘤小鼠特异性抗肿瘤免疫反应。     

CD3AK、LAK与CIK细胞生物学特性的研究

①目的探讨CD3AK、LAK及CIK细胞的诱导、增殖能力及杀伤活性的变化.②方法采用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞,用IL-2刺激诱生LAK细胞,采用第0天加入IFN-γ,第1天加入IL-1,CD3单抗,IL-2诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况;用MTT法以K562和H7402细胞为靶细胞,测定CD3AK、LAK及CIK细胞的杀伤活性.③结果CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P＜0.05).CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第19、22天时CIK细胞的扩增能力显著高于CD3AK的扩增倍数(P＜0.05).CD3AK和CIK细胞对K562和H7402细胞的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P＜0.05).④结论CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀瘤效应细胞.     

人参皂苷Rg1联合阿霉素对K562/ADR细胞增殖及耐药的影响

目的 探究人参皂苷Rg1对人慢性髓细胞白血病耐阿霉素(adriamycin, ADR)细胞K562/ADR增殖的影响及其对K562/ADR细胞的耐药逆转作用。方法 CCK-8法检测不同浓度的人参皂苷Rg1对K562/ADR细胞增殖的影响;CCK-8法检测人参皂苷Rg1与ADR联用对K562/ADR细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC₅₀)和逆转倍数;集落形成实验检测人参皂苷Rg1联合ADR对K562/ADR细胞集落形成能力的影响;流式细胞术检测人参皂苷Rg1联合ADR对K562/ADR细胞周期的影响。结果 与对照组相比,各浓度和作用时间的人参皂苷Rg1均可抑制K562/ADR细胞增殖(P<0.001),当人参皂苷Rg1浓度为120μg/mL,作用时间为48 h时,细胞增殖抑制率最高(P<0.05);与单用ADR相比,人参皂苷Rg1联合ADR作用48 h后,K562/ADR细胞IC₅₀值明显下降(P<0.05),人参皂苷Rg1对K562/ADR细胞的耐药逆转倍数为2.34;与对照组和ADR或人参皂苷Rg1单药作用相比,人参皂...     

银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞的保护作用

目的：研究银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞的保护作用。方法：采用四甲基偶氮唑(MTT)比色分析法观察银杏内酯(37．5μg／ml)、刺五加皂甙(50μg／ml)、人参皂甙(60μg／ml)对氯化钴诱导化学缺氧的PC12细胞活性的影响。结果：银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙能显著提高氯化钴诱导缺氧的PC12细胞的活性。结论：银杏内酯、刺五加皂甙、人参皂甙对氯化钴诱导缺氧损伤的PC12细胞有明显的保护作用。     

人骨肉瘤浸润淋巴细胞和LAK细胞体外抗瘤作用比较及表型分析

<正> 本文从10例骨肉瘤患者手术切除的实体瘤中,用酶消化和不连续密度梯度离心法分离肿瘤浸润淋巴细胞(TIL),从患者外周血分离淋巴细胞,以4h~(51)Cr 释放试验测定rIL_(-2)(500～100u/ml)激活后的TIL 和LAK 细胞体外抗瘤活性及特异性。用OKT 单克隆抗体对TIL 表型进行分析,结果表明:TIL 和LAK 细胞在培养期间具有良好的抗增速度,培养20d 分别扩增到原来的30～220倍和20～290倍。10例骨肉瘤患者的TIL 培养15～20d 对K_(562)和LiBr 靶细胞(效靶比25∶1)平均杀伤活性分别为56.3%和42.2%,LAK 细胞对K_(562)和LiBr 的杀伤活性分别为     

四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用的比较

目的：比较四种不同组织来源LAK细胞的体外扩增及抗肿瘤作用。方法：选用脐带血制备LAK细胞，并与临床常用的外周血、胎脾及胸腺LAK细胞在体外扩增及抗肿瘤作用方面比较。结果：脐带血的扩增能力显著高于其余3种LAK细胞（P＜0．01），每份脐带血LAK细胞总数可增殖至2．5×1010；抗肿瘤活性以脐带血LAK对SMMC-7221肝癌细胞出现最早（第3d）、活性最强（85％±3％），明显强于其余三者（P＜o．01）；对K562的杀伤作用仍属脐带血LAK最强；而胸腺LAK的活性最弱。结论：脐带血LAK细胞体外增殖快，杀伤活性强，可用于肿瘤的过继性免疫治疗。     

人参皂甙Rg3对胃癌细胞株BGC-823增殖凋亡的影响

目的 研究人参皂甙Rg3对胃癌细胞株BGC-823增殖凋亡及其对凋亡基因p53、S100A4表达的影响.方法 以62.5-500 μ g/ml人参皂甙Rg3作用后,通过MTT比色法检测细胞增殖抑制率、AO-EB双染法结合荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变、RT-PCR检测p53、S100A4基因的表达情况.结果 BGC-823细胞在62.5-500μg/ml人参皂甙Rg3作用后,细胞抑制率逐渐增加;Rg3处理细胞48 h的IC50为250μg/ml,BGC-823细胞出现染色质凝集、核片段化、凋亡小体等凋亡形态学特征;RT-PCR结果显示:人参皂甙Rg3能显著上调p53mRNA表达下调S100A4mRNA表达,且呈浓度依赖性.结论 人参皂甙Rg3能显著抑制胃癌细胞株BGC-823细胞的生长,其抗肿瘤机制可能与上调p53基因,下调S100A基因的表达有关.     

抗CD3mAb和IL-2共激活T杀伤细胞的免疫生物学活性研究

目的 探讨抗CD3单克隆抗体(CD3mAb)和rIL-2共同激活诱生的具有高效溶细胞活性的杀瘤效应细胞T-AK(T-activated killer)细胞的免疫生物特征。方法 观察从正常人外周血单个核细胞中诱生制备的T-AK细胞的形态学、免疫表型、细胞毒活性及其构成成分。结果 T-AK细胞具有活化淋巴母细胞的形态学特点;90％以上细胞表达T淋巴细胞表型(CD3^ ,CD8^ ),20％～50％细胞表达NK细胞表型(CD16^ ,CD56^ ),并表达IL-2受体(IL-2R)、CD38和MHCⅡ类抗原(HLA-DR^ )等激活淋巴细胞的表面标志;T-AK细胞对K562细胞、Raji细胞等具有高度杀伤活性,其活性主要由CD3mAb激活的CD3 AK活性(～50％)、IL-2诱生的LAK活性(～30％)、NK活性(～10％)和可溶性抑制因子的抑制活性(～10％)等4部分构成。结论 T-AK细胞为异质细胞群体,其主体为活化T淋巴细胞和NK细胞,具有CD3AK细胞和LAK细胞的共同活性。     

两种商陆体外诱生免疫干扰素的作用

本文报道了美洲商陆(PWM)和中国商陆皂甙(Es)在体外对正常外伤脾和病人脾细胞诱生干扰素的作用。PWM及Es诱生的干扰素对pH2或56℃处理敏感,能被人γ干扰素(IFN-γ)单克隆抗体中和,确证是人γ干扰素。10例外伤脾以PWM诱生IFN-γ平均效价为3.48±0.59 Log_(10) CPI_(50)。U/ml。以Es诱生效价为2.92±0.42 Log_(10) CPI_(50)。U/ml。两者效价有显著差异(p<0.05)。8例病人脾细胞以PWM或Es诱生IFN-γ效价平均达3.69±0.35Log_(10) CPI_(50)。U/ml和3.01±0.35 Log_(10) CPI_(50) U/ml。Es对病人脾细胞诱生IFN-γ的作用显著地低于美洲商陆(p<0.01)。     

AML骨髓LAK细胞抗肿瘤活性的体外研究

采用体外半固体培养技术,研究了10例急性髓细胞白血病(AML)患者和其中5例缓解期患者经IL-2体外诱导激活的骨髓LAK细胞对K_(562)白血病细胞系集落形成的抑制作用,以及对正常骨髓粒单系造血祖细胞集落(CFu-GM)的效应。结果显示:AML初诊及缓解期骨髓LAK细胞对K_(562)肿瘤细胞均有杀伤活性,缓解期骨髓LAK活性明显高于急性期,而对正常CFu-GM集落产率无明显抑制作用。为临床使用,尤其是ABMT的骨髓净化提供了实验依据。     

人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响.方法 将人红白血病细胞株K562细胞传代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的人参皂甙单体Rg3,并设置空白对照组.用MTT比色法观察Rg3对体外培养的K562细胞生长的抑制作用;在光学显微镜下观察不同浓度人参皂甙单体Rg3对K562细胞的凋亡作用及计数凋亡率(AR);硝基四氮唑(nitroblue tetrazolium,NBT)还原能力测定试验检测分化指标;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱.结果 MTT比色法测定显示,人参皂甙单体Rg3作用于K562细胞后可以抑制其增殖并诱导其凋亡,且呈剂量依赖性.结论 人参皂甙单体Rg3能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡.     

脐血LAK与CIK细胞杀伤活性研究

目的　寻求一种可用于过继免疫疗法的高效免疫活性细胞。方法　用多种细胞因子诱生CIK细胞 ,用MTT法测定LAK和CIK细胞杀伤活性。结果　在峰值期CIK细胞杀伤活性均显著高于LAK细胞 (P <0 .0 5 )。结论　CIK细胞与LAK细胞属不同的细胞毒性细胞 ,脐血CIK细胞的高杀伤活性提示其可能成为过继免疫疗法的生力军。     

银杏叶提取物增强细胞因子诱导的杀伤细胞杀伤肿瘤细胞活性的研究

探讨银杏叶提取物对人细胞因子诱导的杀伤细胞 ( CIK细胞 )杀伤肿瘤细胞活性的影响。在体外用不同浓度的银杏叶提取物诱导人 CIK细胞和肿瘤细胞 ,以观察银杏叶提取物对人 CIK细胞活性和对肿瘤细胞的影响。在银杏叶提取物浓度为 50 0μg/ ml,作用CIK细胞 4h后能明显增强 CIK细胞杀伤肿瘤细胞的活性 ,与对照组和其它浓度组相比 P<0 .0 1 ;CIK细胞对经银杏叶提取物处理后的 K562 (人红白血病细胞株 )和 SGC-790 1 (人胃癌细胞株 )杀伤活性也明显高于对照组 P<0 .0 1。银杏叶提取物在一定浓度时能明显提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性 ;经银杏叶提取物处理的 K562和 SGC-790 1更易被 CIK细胞杀伤     

20(R)-人参皂甙Rg3对K562/ADM细胞凋亡诱导的研究

目的 :探讨抗癌药物 2 0 (R) -人参皂甙Rg3(2 0 (R) -GinsenosideRg3)对肿瘤细胞凋亡的诱导。方法 :采用人红白血病耐阿霉素 (adriamycin ,ADM)细胞株K5 6 2 /ADM细胞作为实验模型 ,用ADM作阳性对照。结果 :MTT法细胞毒实验显示 ,Rg3对K5 6 2 /ADM细胞的IC 5 0为 10 4 9± 0 30 μg/ml;流式细胞仪法测定该细胞与浓度为 1 0 μg/ml(无毒剂量 )和 5 0 μg/ml(低毒剂量 )的Rg3共同培养 4 8h的细胞凋亡率分别为 3 39± 0 2 5 %和 9 36± 0 6 1% ;电镜下 ,可见凋亡的K5 6 2 /ADM细胞及凋亡小体。结论 :Rg3具有较强的诱导肿瘤细胞凋亡的能力 ,其诱导强度与其浓度呈正相关 ,对作用时间有依赖性。