Syndecan-1对卵巢癌SKOV3细胞NF-κB/MAPK信号通路的影响

目的:研究多配体蛋白聚糖-1(SDC1)对卵巢癌SKOV3细胞NF-κB/MAPK信号通路的影响。方法:将SDC1-shRNA转染至SKOV3细胞,分为空白对照组(control组)、空质粒转染组(NC组)、SDC1-shRNA组(SDC1组)。通过免疫荧光激光共聚焦实验和荧光PCR实验检测细胞中SDC1、MMP-2、MMP-9、VEGF、NF-κB/MAPKs通路的蛋白及mRNA表达。结果:与对照组和NC组比较,SDC1组中SDC1、MMP-2、MMP-9、VEGF、MAPK和NF-κB表达显著下调(P0.01),IkB-a表达显著上调(P0.01)。结论:SDC1-shRNA通过阻断NF-κB/MAPK信号通路下调了MMP-2、MMP-9和VEGF的mRNA和蛋白表达,可能抑制SDC1-shedding及卵巢癌细胞的血管生成,有望成为卵巢癌靶向治疗新靶点。     

脂质体转染白介素-12基因至卵巢癌SKOV3细胞检测VEGF表达及抗肿瘤作用探讨

目的:观察含mIL-12基因的质粒转染至SKOV3卵巢癌细胞,效应细胞存在情况下对卵巢癌细胞株血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:用脂质体转染技术将基因质粒及空质粒转染至SKOV3卵巢癌细胞(SKOV3/IL-12)及SKOV3/neo;用ELISA法检测IL-12及INF-γ的表达;用逆转录聚合酶联反应(RT-PCR)半定量法测定SKOV3/IL-12+S(脾细胞)0,12,24,36,48,60hVEGFmRNA含量;用ELISA法测定细胞培养上清液中VEGF蛋白含量及其抑制率。结果:基因转染至SKOV3可检测到IL-12蛋白表达;分泌的IL-12蛋白具有活性,使脾细胞产生INF-γ,12h时迅速出现,作用后24h表达量最高;SKOV3/IL-12细胞与脾细胞作用12h后即出现VEGFmRNA表达抑制,24h达到高峰,与对照组有显著差异(P0.05);培养24h后上清中VEGF蛋白含量减少,与对照组有显著差异(P0.05)。结论:将IL-12基因转染至SKOV3卵巢癌细胞并表达IL-12;分泌的IL-12蛋白具有活性,使脾细胞产生INF-γ;SKOV3/IL-12与效应细胞脾细胞作用后产生INF-γ能在核酸水平下调VEGF并能抑制VEGF蛋白的表达。     

白细胞介素-1β对人早孕期细胞滋养层细胞核因子-κB的激活机制

目的:研究核因子-κB(NF-κB)在离体培养的人早孕期细胞滋养层细胞激活的机制。方法:离体培养人早孕期细胞滋养细胞,以白细胞介素-1β(IL-1β)和NF-κB抑制剂——吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)作为处理因素,通过免疫荧光检测NF-κB的亚基p65的核转位;凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法检测NF-κBDNA结合活性。结果:①IL-1β作用30min后细胞滋养细胞出现了p65的核转位;②细胞滋养细胞NF-κBDNA结合活性显著增高;PDTC能显著降低NF-κBDNA结合活性。结论:IL-1β在离体培养的人早孕期细胞滋养细胞可引起NF-κB的短暂激活,PDTC可以抑制IL-1β诱导的NF-κB的激活。这为进一步研究激活或抑制NF-κB是否能调节NF-κB的靶基因、尤其是在胚胎着床和妊娠发挥重要作用的靶基因提供了理论基础。     

S1P/S1PR对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的研究

目的:探究鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受体(S1P/S1PR)对人卵巢癌SKOV3细胞促血管生成作用的影响和机制。方法:管腔形成实验探究S1P对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的影响;实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测S1P处理后的人卵巢癌SKOV3细胞中血管生成因子白细胞介素8(IL-8)、IL-6、血管内皮生长因子(VEGF)的变化情况;设计合成小干扰RNA(siRNA)干扰序列基因沉默SKOV3细胞中S1PR1、S1PR2和S1PR3的表达,蛋白质印迹(Western-blot)和qRT-PCR检测SKOV3细胞中S1PR的下调结果;qRT-PCR检测S1PR对SKOV3细胞IL-8、IL-6、VEGF表达的影响。结果:管腔形成实验结果显示,S1P处理后的SKOV3细胞培养上清液重悬人脐静脉内皮细胞融合细胞(EA.hy926),其管腔形成的数量多于对照组(t=3.667,P=0.021),表明S1P促进了人卵巢癌细胞SKOV3的促血管形成能力。S1P处理后的SKOV3细胞中血管生成因子IL-8、IL-6、VEGF mRNA的表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(均P0.05)。S1PR1和S1PR3基因沉默可显著降低SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的mRNA表达水平,差异有统计学意义(均P0.05),而S1PR2基因沉默后IL-8、IL-6、VEGF的mRNA变化不明显。结论:S1P通过S1PR1/3上调人卵巢癌SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的表达,从而增强了SKOV3细胞的促血管生成作用,S1P/S1PR通路有望成为抑制卵巢癌生长的治疗新靶点。     

尿激酶型纤溶酶原激活因子介导的卵巢上皮癌细胞浸润转移体外的实验研究

目地:探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子在卵巢上皮癌浸润转移中的作用机制。方法:用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA基因cDNA全长,克隆至pGEM-T Easy Vector,鉴定后与真核表达载体PCMV-HA连接,酶切及测序。用脂质体法将重组质粒DNA转染至SKOV3细胞。加压筛选并培养PCMV-HA-uPA及对照细胞。分别用RT-PCR和W estern blot方法检测转染前后SKOV3细胞uPA的表达。细胞增殖能力测定用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验,细胞周期测定用流式细胞仪法,细胞体外侵袭,迁移和黏附能力测定分别采用Matrigel Invasion,TranswellM igration和Adhersion Assay方法。结果:(1)uPA阳性表达能介导SKOV3细胞克隆形成,与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05);(2)uPA阳性表达能介导SKOV3细胞的细胞周期中S期比例增加,与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05);(3)uPA阳性表达介导SK-OV3细胞的体外侵袭,迁移和黏附能力均明显强于对照细胞株,差异有统计学意义(P=0.0002,<0.0001和0.0049)。结论:uPA通过促进肿瘤细胞侵袭,迁移和黏附能力在卵巢上皮癌浸润转移中起了重要作用。     

TWEAK对人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响及其机制的研究

目的:研究肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用机制。方法:水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力的影响,细胞黏附和移动实验检测TWEAK对细胞体外黏附和移动力的影响,细胞侵袭重建基底膜实验检测TWEAK组细胞体外侵袭力的变化。采用Western blot法检测TWEAK对细胞IκB-α、NF-κB(P65)和VEGF蛋白表达的影响。通过应用NF-κB拮抗剂PDTC,观察阻断NF-κB通路后VEGF蛋白表达的变化。结果:TWEAK组在24、48h和72h时细胞增殖率无明显变化(P>0.05)。TWEAK组细胞黏附力提高23.67%(P<0.01);TWEAK可增强细胞体外的移动和侵袭力,其趋化指数和侵袭指数分别为1.9±0.3和1.7±0.3(P<0.01)。TWEAK能显著下调IκB-α蛋白表达,上调NF-κB(P65)蛋白在核内的表达,并使VEGF蛋白表达量显著增加。用NF-κB拮抗剂PDTC阻断NF-κB通路,能有效抑制VEGF蛋白的表达。结论:TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力无明显影响。TWEAK能促进HO-8910PM细胞移动、黏附和侵袭力。TWEAK促肿瘤侵袭转移的机制之一可能是通过激活NF-κB通路上调VEGF蛋白表达。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对人子宫颈癌细胞株HeLa增殖和凋亡的影响

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人宫颈癌细胞株HeLa的作用机制。方法:将对数生长期的HeLa细胞用不同剂量的EGCG(0,10,20,40μmol)处理。细胞培养72h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞磷酸化-丝裂原活化蛋白激酶(p-p38)、丝裂原活化蛋白激酶(p38)、磷酸化核因子-κB(p-NF-κB)、核因子-κB(NF-κB)、B细胞淋巴因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化半胱胺酸蛋白酶蛋白3(Cleaved-Caspase-3)表达。ELISA和RT-PCR法分别检测细胞上清和细胞内肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-8(IL-8)表达。结果:EGCG可呈剂量依赖性诱导HeLa细胞增殖抑制与凋亡,并可增加Bax和cleavedCaspase3表达,下调p-p38、p-NF-κB、Bcl-2、TNF-α、IL-1β和IL-8表达,而对p38和NF-κB表达无明显影响。结论:EGCG可诱导HeLa细胞增殖抑制和凋亡,其作用机制与抑制p38/NF-κB信号通路介导的炎症相关。     

核因子kB诱捕脱氧寡核苷酸对异位内膜基质细胞RANTES含量及趋化能力的影响

目的 探讨核因子(NF)kB诱捕脱氧寡核苷酸(ODN)对子宫内膜异位症(内异症)患者异位内膜基质细胞中正常T淋巴细胞表达和分泌调节活化因子(RANTES)的含量,及其对单核细胞趋化能力的影响.方法 分离、培养11例内异症患者的卵巢异位内膜基质细胞.实验分为3组,即刺激组[用10μg/L白细胞介素(IL)1β刺激培养]、转染后刺激组(NF-kB诱捕ODN转染异位内膜基质细胞后,用10μg/L IL-1β刺激培养)和空白对照组.各组刺激培养4、8、12、24、36 h后分别取上清液,采用酶联免疫吸附试验检测RANTES蛋白的含量;采用Boyden小室趋化实验检测上清液中RANTES对单核细胞的趋化能力.另对刺激组培养24 h后,在上清液中加入不同浓度(0.5、1、2、4、8 mg/L)的抗RANTES抗体,采用Boyden小室趋化实验检测上清液中RANTES对单核细胞的趋化活性.结果 (1)培养8、12、24、36 h后RANTES蛋白的含量,刺激组分别为(58±10)、(150±35)、(360±46)、(586±42)ng/L,均高于空白对照组[分别为(32±6)、(32±7)、(31±6)、(33±8)ng/L],两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05);培养12、24、36 h后RANTES蛋白的含量,转染后刺激组分别为(86±16)、(128±28)、(183±32)ng/L,均低于刺激组,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)刺激培养12、24、36 h后RANTES对单核细胞的趋化指数,转染后刺激组分别为10.3±0.9、13.7±1.1、18.6±1.2,均低于刺激组(分别为15.3±1.2、24.3±1.4、32.4±1.6),两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)刺激组培养24 h后加入抗RANTES抗体浓度为0.5、1、2、4、8 mg/L时,单核细胞的趋化抑制率分别为5%、23%、40%、62%和61%.结论 NF-kB诱捕ODN可抑制IL-1β所诱导的异位内膜基质细胞中RANTES的含量,并降低其对单核细胞的趋化能力.在内异症病灶中,RANTES是单核.巨噬细胞的主要趋化因子.     

核转录因子κB对哮喘患儿气道平滑肌作用机制的研究进展

核转录因子κB(NF-κB)是一种促进转录的蛋白质,可调节炎症介质的基因表达和气道内多种细胞的功能,是防治哮喘的研究的一个核心环节。NF-κB感受刺激而活化后能调控前炎性因子的生成,参与多种促炎反应因子和趋化因子基因的转录。NF-κB抑制蛋白(IκB)是NF-κB信号转导途径成员之一,以无活性形式存在于胞浆中,在外界信刺激下被激活而发生磷酸化,结果 NF-κB由抑制状态被激活。肿瘤坏死因子α刺激IκB激酶α进入细胞核,继而调控特定NF-κB应答基因的表达。     

LPS-TLR4-NF-κB通路在妊娠期糖尿病、正常孕妇及育龄妇女外周血单核细胞中的表达

目的:研究外周血单核细胞LPS-TLR4-NF-κB通路在妊娠期糖尿病(GDM)、正常孕妇及育龄妇女外周血单核细胞的表达,探讨GDM的发病机制。方法:选取GDM孕妇、正常孕妇以及育龄妇女各20例,抽取外周静脉血5ml,分离单核细胞,用内毒素(LPS)刺激培养,RT-PCR法检测TLR4及NF-κB mRNA的表达,ELISA法检测培养液中IL-1、IL-10、TNF-α水平。结果:3组妇女TLR4、NF-κB mRNA表达的差异有统计学意义(P=0.000)。GDM组及正常孕妇组TLR4与NF-κB mRNA表达水平有良好的相关性(rGDM=0.768,r正常孕妇=0.833)。育龄妇女组TLR4与NF-κB mRNA的表达水平相关性稍差(r育龄妇女=0.719)。3组培养液中IL-1、IL-10、TNF-α水平的差异有统计学意义。结论:GDM孕妇体内TLR4、NF-κB mRNA的大量表达,提示可能LPS-TLR4-NF-κB通路介导了炎症因子释放,参与了GDM的发病。     

核因子κB顺式诱骗寡脱氧核苷酸对子痫前期患者脐血清培养的脐动脉平滑肌细胞功能的影响

目的 探讨核因子κB顺式诱骗寡脱氧核苷酸(ODN)对子痫前期患者脐血清诱导人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)前胶原Ⅰ、Ⅲ及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响.方法 将原代培养的HUASMC分4组:A组(加入正常新生儿脐血清培养)、B组(加入子痫前期患者的新生儿脐血清培养)、C组(加入子痫前期患者的新生儿脐血清及核因子κB顺式诱骗ODN培养)和D组(加入子痫前期患者的新生儿脐血清及无序ODN培养).通过四甲基偶氮唑蓝比色法及流式细胞仪检测各组HUASMC的增殖活力[以吸光度(A)表示]和凋亡率;应用RT-PCR检测各组HUASMC的前胶原Ⅰ、ⅢmRNA的表达,蛋白印迹法检测TNF-α蛋白的表达[均以A值表示].结果 (1)增殖活力:A组为0.11±0.02,B组为0.19±0.02,C组为0.14±0.02,D组为0.18±0.03;B、C、D组增殖活力显著高于A组(P＜0.05),B、D组显著高于C组(P＜0.05).(2)凋亡率:A组为(14.3±1.2)%,B组为(7.8±1.3)%,C组为(10.1±1.2)%,D组为(8.1±1.3)%;B、C、D组凋亡率显著低于A组(P＜0.05),B组与C组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).(3)前胶原Ⅰ mRNA:A组为0.16±0.02,B组为0.31±0.04,C组为0.23±0.04,D组为0.30±0.03,B、C、D组前胶原Ⅰ mRNA表达水平显著高于A组(P＜0.05),B组与C组比较,差异也有统计学意义(P＜0.05).(4)前胶原ⅢmRNA:4组前胶原ⅢmRNA表达水平相互比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).(5)TNF-α蛋白:A组为0.15±0.03,B组为0.74±0.11,C组为0.36±0.09,D组为0.79±0.12,B、C、D组TNF-α蛋白表达显著高于A组(P＜0.05);B、D组又显著高于C组(P＜0.05),但B组与D组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 核因子κB顺式诱骗ODN能降调子痫前期患者脐血清促HUASMC增殖、胶原合成及炎性因子合成的作用.核因子κB在子痫前期患者胎盘血管病变过程中可能起重要作用.     

人端粒酶催化亚基基因反义寡核苷酸对卵巢癌细胞端粒酶活性及细胞生长的影响

目的：探讨人端粒酶催化亚基（hEST2)基因反义寡核苷酸（AODN）对卵巢 癌细胞系SKOV3、COC1细胞端粒酶活性及细胞生长的影响。方法：分别采用逆转录聚酶链反应技术、端粒重复扩增法、四甲基偶氮唑蓝法、 绘制细胞生长曲线的方法检测hEST2基因AODN转染前后SKOV3、COC1细胞hEST2 mRNA表达、端粒酶活性的变化,以及对细胞增殖能力及细胞生长的影响。结果：hEST2基因AODN能够下调SKOV3、COC1细胞hEST2 mRNA的表达,降低端粒酶活性,抑制细胞的生长,作用具有明显的时效性。以浓度为30μmol／L的AODN治疗48h的作用最显著,SKOVE、COC1细胞hEST2 mRNA的表达分别下降54．6％、44．6％,对两 株细胞的端粒酶活性抑制率分别达到47．9％、42．7％,与相同浓度的随机寡核苷酸（RODN）、正义寡核苷酸（SODN） 相比,差异有显著性（P＜0．05)。结论：hEST2基因的反义治疗能够抑制卵巢癌细胞的增殖能力,该基因有望成为卵巢治疗的新方向。     

Function of estrogen receptor isoforms α and β in endometrial carcinoma cells

The aim of this study was to explore how to modulate the expression of estrogen receptors (ER) alpha and beta and to verify the role of ERalpha and beta in relationship to estrogen and tamoxifen (TAM). A series of oligodeoxyribonucleotides (ODN) corresponding to regions of the ERalpha or beta was tested in human endometrial cancer cell lines (HEC-1B). The change in HEC-1B proliferation in response to 17beta-estradiol (E(2)) and TAM under the impact of antisense ODN was studied. The results of the study are as follows: 1) transfection with antisense ODN significantly inhibited ERalpha and ERbeta protein production, 2) the cells lost the ability to proliferate in response to E(2) after transfection with ERalpha antisense ODN especially at 24, 48, and 72 h. There was no obvious change in response to E(2) in HEC-1B cell lines that were transfected with ERbeta antisense ODN, and 3) after transfection with ERalpha antisense ODN, HEC-1B cells lost the ability to proliferate in response to TAM at 48 h. This inhibition was also observed after transfection with ERbeta antisense ODN at 24 h. ERalpha may be the primary receptor in the proliferation of HEC-1B cells in response to E(2). Both ERalpha and ERbeta are involved in the agonist impact of TAM on endometrial cancer cells.     

Impact of progesterone on cytokine-stimulated nuclear factor-kappaB signaling in HeLa cells.

OBJECTIVE: A key event in the pathways leading to preterm labor may be the activation of nuclear factor-kappaB (NF-kappaB) in the fetal membranes and the cervix. Anti-inflammatory agents, such as the corticosteroids, inhibit the activation of NF-kappaB. We proposed to investigate the effects of progesterone pretreatment on cytokine-stimulated activation of NF-kappaB in HeLa cells, a human cervical epithelial cell line. METHODS: HeLa cells were pretreated with 10(-7) M progesterone for 24 hours and exposed to 1 ng/mL interleukin-1beta (IL-1beta) for 1 hour. Nuclear and cytosolic extracts were subjected to Western blot analysis using anti-p65 and anti-inhibitory protein-kappaBalpha (anti-IkappaBalpha) antibodies. Densitometric data (n=5) were compared using Kruskal-Wallis test. RESULTS: Pretreatment with progesterone interfered with IL-1beta-induced IkappaBalpha degradation. However, progesterone pretreatment resulted in a significant decrease in NF-kappaB protein subunit p65 in the cytoplasm. Pretreatment with progesterone did not reduce the amount of nuclear p65 and did not interfere with nuclear translocation of p65. CONCLUSION: Our observations suggest that any possible role played by progesterone in preterm labor prevention is not exerted through anti-inflammatory mechanisms of NF-kappaB down-regulation.     

S1P/S1PR对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的研究

目的：探究鞘氨醇-1-磷酸/鞘氨醇-1-磷酸受体（S1P/S1PR）对人卵巢癌SKOV3细胞促血管生成作用的影响和机制。方法：管腔形成实验探究S1P对人卵巢癌SKOV3细胞的促血管生成作用的影响;实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测S1P处理后的人卵巢癌SKOV3细胞中血管生成因子白细胞介素8（IL-8）、IL-6、血管内皮生长因子（VEGF）的变化情况;设计合成小干扰RNA（siRNA）干扰序列基因沉默SKOV3细胞中S1PR1、S1PR2和S1PR3的表达,蛋白质印迹（Western-blot）和qRT-PCR检测SKOV3细胞中S1PR的下调结果;qRT-PCR检测S1PR对SKOV3细胞IL-8、IL-6、VEGF表达的影响。结果：管腔形成实验结果显示,S1P处理后的SKOV3细胞培养上清液重悬人脐静脉内皮细胞融合细胞（EA.hy926）,其管腔形成的数量多于对照组（t=3.667,P=0.021）,表明S1P促进了人卵巢癌细胞SKOV3的促血管形成能力。S1P处理后的SKOV3细胞中血管生成因子IL-8、IL-6、VEGF mRNA的表达水平较对照组升高,差异有统计学意义（均P＜0.05）。S1PR1和S1PR3基因沉默可显著降低SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的mRNA表达水平,差异有统计学意义（均P＜0.05）,而S1PR2基因沉默后IL-8、IL-6、VEGF的mRNA变化不明显。结论：S1P通过S1PR1/3上调人卵巢癌SKOV3细胞中IL-8、IL-6、VEGF的表达,从而增强了SKOV3细胞的促血管生成作用,S1P/S1PR通路有望成为抑制卵巢癌生长的治疗新靶点。     

白细胞介素7基因转染卵巢癌细胞的体外研究

目的　观察白细胞介素 (IL) 7基因体外转染卵巢癌细胞后 ,细胞的增殖特性 ,表面抗原表达和细胞因子分泌的变化 ,及对淋巴因子激活的杀伤细胞 (LAK细胞 )杀伤敏感性的影响。方法　对卵巢上皮性癌细胞株SKOV3进行体外培养 ,将重组质粒pBK CMVIL 7导入SKOV3建立SKOV3 IL 7,将双相表达载体pBK CMV导入SKOV3建立SKOV3 Neo ,应用倒置相差显微镜、四甲基偶氮唑蓝比色试验及流式细胞术 ,观察IL 7基因转染前后 ,SKOV3的增殖特性变化 ;间接标记异硫氰酸荧光素 流式细胞术 ,测定细胞表面抗原表达 ;酶联免疫吸附试验测定细胞因子分泌 ;应用乳酸脱氢酶释放法观察细胞对LAK细胞杀伤敏感性的影响。结果　IL 7基因转染前后 ,SKOV3细胞基本形态、增殖特性及细胞周期分布无明显变化 ;细胞表面人类白细胞抗原ABC(HLA ABC)表达阳性率为 91 8%～99 9% ;人类白细胞抗原DR(HLA DR)未能检测到 ;IL 7基因转染后SKOV3细胞间粘附分子I(ICAM I)表达显著提高 ,SKOV3 IL 7为 (4 0 6± 3 7) % ,SKOV3 Neo为 (2 3 2± 2 7) % ,SKOV3为 (18 9± 7 2 ) % ;转化生长因子 β1 (TGF β1 )表达显著降低 ,SKOV3 IL 7为每 2 4h、10 6 细胞中 (下同 ) 15 8ng L ,SKOV3 Neo为 72 6 μg L ,SKOV3为 396ng L ;IL 7基因转染后 ,SKOV3细胞对LAK细胞