骨髓增生异常综合征CD34+造血干祖细胞生物学特征研究进展

骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性、克隆性造血干/祖细胞疾病.本文就MDS恶性造血克隆的起源、CD34+造血干/祖细胞增殖动力学异常、凋亡异常及其机制、信号传导异常等作一综述.     

骨髓增生异常综合征的病态造血分析

骨髓增生异常综合征（MDS）是一种造血干细胞异常克隆性血液病，主要表现为明显的骨髓细胞发育不良，以及血细胞无效生成导致的难治性血细胞减少和极易发展为急性白血病。笔者对96例MDS患者的血液学特征进行了分析，报告如下。     

骨髓增生异常综合征骨髓方面的研究进展

MDS是一类或者一类以上髓系发育不良或者血细胞生成障碍为特征的造血干细胞异常的一种疾病的总称。近来研究发现其骨髓有一定特征性变化，本文做一概述。     

107例骨髓增生异常综合征骨髓原始细胞和病态造血诊断意义探讨

本文报道了ＭＤＳ骨髓原始细胞（簇）和病态造血的系列，程度及它们的诊断意义，结果表明ＭＤＳ时有一半病例原始细胞半不增多，当原始细胞明显增多（〉５．０％时对ＭＤＳ诊断几乎具有决定性意义，当不增多（〈２．０％）时，只有明显的病态造血的可诊断，同时对病态造血量的概念作了介绍。     

骨髓增生异常综合征血细胞造血生长因子受体的异常

血细胞上造血生长因子受体的异常改变血细胞增殖分化的平衡,在骨髓增生异常综合征和白血病的发生发展中起一定作用。     

骨髓增生异常综合征的造血生长因子治疗

本文综述粒－单核细胞集落刺激因子，粒细胞集落刺激因子，白细胞介素１、３、６和红细胞生成素对骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）的治疗作用对ＭＤＳ转化为白血病病程的影响。     

环孢菌素A体外对骨髓增生异常综合征患者因祖细胞的作用

近年来国内外相继报告了临床应用环孢菌素Ａ(ＣｓＡ)治疗再生障碍性贫血 (ＡＡ)取得较好疗效 ,ＣｓＡ用于骨髓增生异常综合征 (ＭＤＳ)亦有个别报道 ,为研究ＣｓＡ对ＭＤＳ的疗效 ,我们观察了ＣｓＡ在体外对 17例ＭＤＳ患者ＣＦＵ ＧＭ、ＣＦＵ Ｅ的作用。材料和方法1　骨髓来源　ＭＤＳ患者 17例采用ＦＡＢ诊断和分型标准 ,其中难治性贫血 (ＲＡ) 10例 ,环形铁粒幼细胞性难治性贫血(ＲＡＳ) 1例 ,ＲＡ伴有原始细胞增高 (ＲＡＥＢ) 5例 ,转变中的ＲＡＥＢ(ＲＡＥＢ ｔ) 1例。所有患者试验前均未接受过免疫抑制剂、细胞毒性药物及细胞因子的…     

病态造血在骨髓增生异常综合征诊断中的意义

目的研究骨髓病态造血在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断中的意义。方法回顾性分析本院2008年1月至2015年2月采集的160例原发性MDS标本,另选取28例阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH),104例特发性血小板减少性紫癜(ITP),53例非重症再生障碍性贫血(NSAA),40例巨幼细胞性贫血及50例感染和自身免疫性疾病作为对照组,进行外周血和骨髓形态学检查。结果在MDS、巨幼细胞贫血和PNH三者之间,各种细胞病态造血的发生率差异无统计学意义(P0.05)。但是,在NSAA和MDS之间的三系细胞的质和量的变化有明显的不同。ITP和MDS在骨髓髓系和红系形态改变上差异有统计学意义(P0.05)。在感染、自身免疫性疾病和MDS之间差异也有统计学意义(P0.05),主要表现在红细胞和巨核细胞的多种改变。与骨髓增生异常综合征密切相关的异常形态包括多核红细胞、环状铁粒幼、异形红细胞病、巨大红细胞、假Pelger中性粒细胞、环形核和小巨核细胞。结论通过细胞形态学手段来区分巨幼细胞性贫血、PNH和MDS是很困难的,特殊的病态造血在MDS中有特异性诊断价值。     

造血干细胞移植治疗骨髓增生异常综合征

骨髓增生异常综合征的本质是造血干/祖细胞的恶性克隆性疾病,造血干细胞移植(HSCT)是唯一可能治愈该病的手段.对于FAB中的RAEB及RAEB-t患者,IPSS系统中的中危-2及高危MDS患者,进行HSCT是最佳选择.具有高危染色体核型的患者也应进行HSCT.严重输血依赖也是HSCT的适应症.关于供者的选择.同胞全相合供者是首选;配型相合的非血缘供者是另一选择;在有条件的中心,可以进行亲属HLA部分相合/单倍体供者的HSCT.对于高复发风险的MDS患者,选用PBSC对于生存更有益.常采用的标准剂量的预处理方案,通常包括清髓剂量的TBI或马利兰,两者疗效相似.采用减低剂量的预处理方案在一定程度上扩大了可以进行HSCT的患者范围,但生存率没有改善,因此没有标准预处理方案的禁忌症的患者不应选择RIC.     

骨髓增生异常综合征患者源成骨细胞表达多种细胞因子并体外维持造血祖细胞存活

为了解骨髓增生异常综合征（MDS）患者成骨细胞的生物学特性,并探讨其对体外造血的支持能力,利用骨髓间充质干细胞多向分化潜能将其诱导分化为成骨细胞,在体外和造血细胞构建二维培养体系,研究其体外支持造血祖细胞生存的作用;同时采用RT-PCR的方法在mRNA水平上分析由骨髓间充质干细胞诱导分化的成骨细胞细胞因子的表达并与人成骨细胞系hFOB1.19比较。结果发现,来源于MDS患者的成骨细胞在无外源性细胞因子的条件下能够短期维持GM-CFC造血祖细胞的存活。经过RT-PCR证实,人成骨细胞系hFOB1.19表达SCF、IL-6、SDF-1α、G-CSF、GM-CSF等细胞因子,来源于MDS患者和正常人的成骨细胞也能表达上述细胞因子,但却不表达GM-CSF。结论：与正常人相比,MDS患者源的成骨细胞同样能够维持GM-CFC的存活,这可能和成骨细胞表达多种重要的造血相关的细胞因子有关。     

骨髓增生异常综合征患者血红素加氧酶表达水平及其临床意义

目的：观察初诊低危骨髓增生异常综合征（MDS）患者血红素加氧酶-1（HO-1）表达水平的变化及其基础水平与患者预后的关系,探讨HO-1在该病中可能的作用机制和临床应用前景。方法收集60例初诊低危 MDS 患者以及20例缺铁性贫血（IDA）患者的骨髓单个核细胞（BMMNCs）,予不同浓度（0、5、10、20μM）的HO-1诱导剂Hemin体外孵育,用蛋白免疫印迹法检测HO-1蛋白表达水平和MAPK信号通路中c-Jun氨基末端激酶（JNK）磷酸化表达水平的变化,并随访分析HO-1的基础表达水平与患者无进展生存期（PFS）的关系。结果①低危 MDS 患者BMMNCs中HO-1蛋白基础表达水平与IDA患者比较差异无统计学意义（P＞0．05）;随着Hemin干预浓度的增加,HO-1蛋白表达量逐渐升高,JNK信号分子磷酸化表达水平亦逐渐升高,呈浓度依赖性（均为P＜0．05）;② HO-1高表达的患者PFS长于低表达患者组（中位数41．6个月 vs．32．0个月,P＝0．047）。COX回归分析显示HO-1表达水平是判断低危MDS患者预后的独立因素（P＝0．006）。结论在低危MDS患者中,HO-1高表达者预后较好,HO-1可能通过JNK信号分子途径影响MDS的疾病过程。上调HO-1有可能成为改善疾病预后的新的治疗靶点。     

骨髓增生异常综合征髓系细胞免疫表型及其临床意义的研究

探讨骨髓增生异常综合征髓系细胞免疫表型的变化及其临床意义，应用一组单克隆抗体，采用免疫酶标法对５１例ＭＤＳ、２１例 再生了阉生贫血、２１例阵发性睡眠性血红蛋白尿症、１０例急性髓系白轿病患者及１５名正常人骨髓细胞膜表面抗原ＣＤ１３、ＣＤ１４、ＣＤ３３和ＣＤ１５进行检测，同时还检测ＭＤＳ患者的骨髓细胞形态、染色体核型及姊妹染色单体分染并按分型进行促分化、促造血和小剂量化疗ＭＤＳ骨髓单个核细胞较正常人表     

骨髓增生异常综合征患者CD34+细胞凋亡特征

目的　调查骨髓增生异常综合征 (MDS)造血细胞CD34 抗原表达及CD34 阳性细胞凋亡状况。方法　用免疫酶标记 (碱性磷酸酶 抗碱性磷酸酶系统 ,APAAP)检测 36例MDS患者骨髓冷包埋切片中CD34 阳性细胞数量及分布特征 ,结合DNA原位末端标记技术 (ISEL)研究此类细胞的凋亡状况。14例缺铁性贫血 (IDA)患者作对照。结果　①MDS组CD34 阳性细胞较对照组明显增多 [分别为 (4 9.2± 38.5 ) mm2 和 (10 .2± 9.7) mm2 ,P <0 .0 1]。MDS组凋亡细胞数与对照组比较也增多 [分别为 (6 9.1±2 8.2 ) mm2 和 (17.8± 11.2 ) mm2 ,P <0 .0 1]。②CD34+ 细胞在MDS RAEB组最高 ,与MDS RA RAS和MDS RAEB t组比较 ,差异有显著性 (P值均 <0 .0 5 ) ,而在后两组间无明显差异 ;MDS RA RAS、RAEB组的细胞凋亡数均明显高于RAEB t组 (P值分别 <0 .0 2和 0 .0 5 )。③ 36例MDS患者中未见CD34 阳性细胞发生凋亡。④CD34 阳性细胞及凋亡细胞均多见于骨小梁间区 ,均有成簇成片状分布的趋势 ,但两类细胞很少分布于同一区域。结论　MDS造血细胞过度表达CD34 抗原 ,MDS转化过程中同时存在CD34阳性细胞和凋亡细胞增加。CD34 阳性细胞的凋亡抵抗现象提示其来自恶性造血克隆。     

骨髓增生异常综合征免疫表型的研究

目的评价免疫表型测定在骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）诊断及预后判断中的价值。方法应用一组单克隆抗体采用免疫荧光法对３２例ＭＤＳ患者骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）进行免疫表型检测。结果ＭＤＳ患者髓系抗原表达明显增高,淋巴细胞抗原表达相对减少,而且随ＭＤＳ恶化,ＦＡＢ亚型的抗原表达出现规律性变化,随ＲＡ／ＲＡＳ向ＲＡＥＢ再向ＲＡＢＥｔ转化,较早期的髓系抗原（如ＣＤ１３、ＣＤ３３）逐渐增加,较晚期出现的髓系抗原逐渐减少,同时伴有Ｔ淋巴细胞抗原表达减少;ＲＡ／ＲＡＳ阶段骨髓ＣＤ３４＋细胞与正常组相比无显著增高,ＲＡＥＢ和ＲＡＥＢｔ阶段ＣＤ３４＋细胞数明显增高;较早期骨髓细胞（即祖细胞）表面抗原ＣＤ３８、ＨＬＡＤＲ、ＣＤ９９Ｒ、ＣＤ９在ＭＤＳ表达明显增加。ＣＤ３４和其它早期抗原表达增高者,预后较差,易于转化为白血病。结论ＭＤＳ患者骨髓ＭＮＣ表面标记的检测有利于ＭＤＳ的诊断,也可协助预后判断。     

原发性骨髓增生异常综合征染色体核型异常特征及其预后意义的研究

目的 研究原发性骨髓增生异常综合征(MDS)患者染色体核型特征及其预后意义.方法 对染色体核型可供分析的351例成人原发MDS患者进行回顾性分析.结果 染色体核型异常者237例(67.5%).其中仅有染色体数目异常者99例(41.7%),仅有染色体结构异常者70例(29.5%),同时有数目与结构异常者68例(28.8%);单一异常130例(54.8%),2种异常54例(22.8%),复杂异常(≥3种)53例(22.4%).整倍体数目改变有多倍体4例(1.7%);非整倍体及染色体臂的异常可见于所有染色体,常见的依次有+8、-20/20q-、-7/7q-、-5/5q-、-18、-11/11q-、+21、-Y、-21、-10、-16、-22、+9、del(12)(p12).-5/5q-(5.1%)的发生率低于西方国家(8.7%～23.4%),5q-综合征的发生率极低(0.3%),+8(19.1%)和-20/20q-(9.4%)的发生率高于西方国家(分别为1.2%～7.0%和2.0%～3.5%).237例染色体核型异常的患者中染色体易位有31例(13.1%),其中12种染色体易位在MDS中迄今尚无文献报道.i(17)(q10)有9例(3.8%),其中6例(66.7%)为单一异常.染色体重复有7例(3.0%),主要累及1号染色体(4例).按IPSS染色体核型分组,预后差的染色体核型检出率在RA、RARS、5q-综合征组,RCMD、RCMD-RS组,RAEB-Ⅰ组,RAEB-Ⅱ组依次升高,差异有统计学意义(X2=2.854,P＜0.01).351例MDS患者中,177例获得随访资料,中位随访时间14.5(1～131)个月,81例死亡,中位生存期(MS)12(1～90)个月.按IPSS染色体核型分组,染色体核型为预后好、中、差的患者MS分别为51[95%可信区间(CI)25～77]、35(95%CI 5～65)和13(95%CI 9～17)个月,Log-rank检验三组总体生存(OS)率差异有统计学意义(P=0.004).染色体核型按正常核型(NN)、嵌合核型(AN)、异常核型(AA)分组,NN、AN、从患者MS分别为51(95%CI 24～78)、36(95%CI 0.3～71)和23(95%CI 10～35)个月,Log-rank检验三组OS率差异有统计学意义(P=0.039).结论 我国MDS患者具有有别于两方国家MDS患者的染色体核型异常特征.染色体核型分析是MDS患者预后分层实现个体化治疗的重要依据.     

骨髓增生异常综合征患者循环microRNA-144的检测及其临床意义

目的探讨mi RNA-144在骨髓增生异常综合征(MDS)患者外周血中的表达情况及其临床意义。方法收集MDS患者24例,健康对照12例,q RT-PCR检测外周血mi RNA-144相对表达量,统计分析mi RNA-144在MDS中的表达情况及与其预后相关性。结果 mi RNA-144在MDS亚型难治性血细胞减少伴单系病态造血(RCUD)、难治性血细胞减少伴多系病态造血(RCMD)、难治性贫血伴环形铁粒幼细胞(RARS)、难治性贫血伴原始细胞增多-1(RAEB-1)及难治性贫血伴原始细胞增多-2(RAEB-2)中的相对表达量分别为3.81、3.64、4.56、6.49及8.73,均显著高于健康对照组,P<0.01;mi RNA-144在预后好和预后差组中的相对表达量分别为3.81和7.18,差异具有统计学意义,P<0.01。结论 mi RNA-144在MDS中高表达,且可作为潜在的预后评估指标。     

骨髓增生异常综合征患者凋亡造血细胞的克隆性初步研究

目的研究骨髓增生异常综合征(MDS)患者凋亡造血细胞的克隆性来源。方法经过G带或R带染色体核型分析，确定骨髓细胞有异常克隆存在的MDS患者共19例，其中10例取骨髓分离有核细胞制备离心涂片。同步进行DNA末端原位杂交(ISEL)及相应异常染色体的间期荧光原位杂交(FISH)(简称ISEL／FISH法)。计数有核细胞中异常克隆细胞百分比和凋亡细胞中异常克隆细胞百分比。4名正常人8张离心涂片经Fas单抗孵育诱导凋亡后行FISH／ISEL检测作为方法学对照。另9例患者骨髓有核细胞经膜联蛋白V(Annexin V)及碘化丙锭(PI)标记染色细胞，流式细胞术分选PI^ 、Annexin V^ PI^-、Annexin V^-PI^-细胞，离心涂片后再行FISH检测(简称FCM／FISH法)。结果10例经ISEL／FISH分析的MDS患者骨髓有核细胞中异常克隆细胞百分比平均为37．1％，凋亡细胞中异常克隆细胞百分比仅为24．0％。正常人经Fas单抗诱导的凋亡细胞核型不变。9例经FCM／FISH分析者，8例显示凋亡细胞中核型正常百分比高于非凋亡细胞。结论MDS凋亡细胞主要来源于残余正常造血细胞。     

骨髓增生异常综合征克隆细胞生物学特征的初步研究

目的 研究骨髓增生异常综合征（MDS）克隆细胞和急性髓系白血病（AML）克隆细胞的部分生物学差异。方法 对经核型分析证实有克隆标志的51例MDS和11例AML患者骨髓中克隆细胞（荧光原位杂交分析）和原始细胞百分比进行比较；检测MDS患者骨髓中晚期红系（血型糖蛋白A阳性的晚幼红细胞）、粒系（DAPI复染可分辨的分叶核细胞）和巨核系（CD61阳性磁珠分选，CD41阳性的形态学成熟的巨核细胞）中克隆细胞比例；同步检测MDS患者骨髓及外周血中克隆细胞比例；用流式细胞术检测含有克隆细胞的MDS患者外周血中性粒细胞的吞噬和氧化功能并与正常人和AML患者标本比较。结果 MDS患者骨髓克隆细胞百分比（平均48．2％）均高于原始细胞（平均6．7％）（P〈0．01）。进展型MDS与非进展型相比，克隆细胞与原始细胞数更接近。单纯染色体＋8异常与单纯5q-患者比较，克隆细胞与原始细胞数量更接近。而在11例AML患者，克隆细胞与原始细胞百分比的平均差距接近零。在MDS患者骨髓细胞中检出相当数量带有克隆标志的晚期造血细胞：分叶核细胞中平均为45．9％；晚幼红细胞中为46．0％；成熟巨核细胞中为38．0％。MDS患者外周血中检出与骨髓中核型一致的克隆细胞，数量与骨髓中克隆细胞数相关（骨髓中平均为48．6％，外周血中为37．3％）。功能性检测显示MDS患者外周血中的中性粒细胞具有与正常对照者几乎一致的对DHR的摄取和氧化功能（P〉0．05）。结论 MDS克隆细胞与AML克隆细胞具有明显的生物学差异。     

骨髓增生异常综合征患者T细胞异常极化导致的负性造血调控

目的研究骨髓增生异常综合征（MDS）患者骨髓T细胞极化状况及其与骨髓上清液中促凋亡因子TNF—α、INF-γ水平及造血细胞凋亡的关系。方法采用流式细胞术检测34例MDS患者骨髓T细胞极化亚群状况，用ELISA法检测骨髓上清液TNF—α、INF-γ水平，并用TdT介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测骨髓造血细胞凋亡状况，分析三者间的相关性。结果①MDS患者骨髓，Th1细胞百分比[（10．1±1．6）％]和Tc1细胞百分比[（24．0±3．6）％]以及Tc1／Tc2值（50．0±11．1）明显高于正常对照[分别为（4．0±0．5）％，（5．8±0．6）％和13．4±2．7]；MDS患者骨髓上清液INF．1浓度[（58．6±21．7）μg／L]和TNF—α浓度[（15．7±3．8）μg／L]较正常对照[分别为0和（0．3±0．2）μg／L]明显升高；MDS患者骨髓造血细胞凋亡指数[（7．8±1．5）％]明显高于正常对照[（2．1±0．3）％，P〈0．05]。骨髓Th1细胞数与骨髓上清液INF-γ和TNF—α浓度呈正相关（r值分别为0．38和0．39，P〈0．05），并与造血细胞凋亡指数呈正相关（r=0．33，P〈0．05）。骨髓上清液INF-γ，和TNF—α浓度与造血细胞凋亡也呈正相关（r值分别为0．74和0．73，P〈0．01）。②难治性血细胞减少伴多系发育异常（RCMD）组（18例）Th1、Tc1细胞百分比，Tc1／Tc2值较正常对照明显升高（P值均〈0．01），T细胞向Ⅰ型反应极化；RCMD伴环形铁粒幼细胞增多（RCMD—RS）（4例）、RAEB—1（5例）、RAEB-2组（7例）T细胞未显示异常极化。③IPSS低危组病例Th1细胞百分比、Tc1细胞百分比及Tc1／Tc2值均较正常升高，而高危组T细胞未见异常极化。④染色体核型正常的RCMD患者骨髓Th1细胞百分比、Tc1细胞百分比及Tc1／Tc2值均较正常对照明显升高。而核型异常组T细胞未见异常极化。结论MDS患者骨髓中Th1、Tc1细胞比例增高，Th1／Th2、Tc1／Tc2平衡向Ⅰ型反应极化，其中以RCMD组、IPSS低危组和染色体核型正常组患者的T细胞I型反应极化明显。骨髓造血细胞过度凋亡与Th1细胞以及INF-γ和TNF—α水平呈正相关，提示Th1细胞通过分泌INF-γ和TNF-α导致造血细胞过度凋亡。     

骨髓增生异常综合征血清降钙素和降钙素基因相关肽测定及其意义

目的寻找一个早期预测骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）向急性髓系白血病（ＡＭＬ）转化的指标。方法对ＭＤＳ患者４５例,ＡＭＬ患者４０例,对照组５０例,利用放射免疫法（ＲＩＡ）检测其血清中的人降钙素（ｈＣＴ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）水平,并对ＭＤＳＲＡ组、ＲＡＥＢ组中部分患者进行随访,观察其临床转归及与ｈＣＴ、ＣＧＲＰ血清水平的关系。结果ＭＤＳ各型及ＡＭＬ初发组患者ｈＣＴ、ＣＧＲＰ血清水平均有升高,与对照组相比差异均有显著性（Ｐ＜０．０１）,ＲＡＥＢ组高于ＲＡ组（Ｐ＜０．０５）,在ＲＡ向ＲＡＥＢ、ＲＡＥＢ向ＡＭＬ转化过程中ｈＣＴ、ＣＧＲＰ均逐渐升高。结论ｈＣＴ、ＣＧＲＰ血清水平检测可以作为早期预测ＭＤＳ向ＡＭＬ转化的指标