DBA／1小鼠胶原诱发关节炎模型的特征及鉴定

目的 建立胶原诱发关节炎（CIA）的DBA／1小鼠模型，对其发病特点、临床表现特征及病理学变化分别予以分析，为相关药物疗效评价提供合适模型。方法 将牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂充分乳化，在DBA／1小鼠尾根部2～3cm处皮内注射100μl混合乳剂，3周后再重复注射等量乳剂，动态观察小鼠的临床表现，如肿胀程度、炎症指数和体重变化等，对中晚期发病关节进行组织病理学检测。结果 在首次免疫后28d左右，胶原注射小鼠踝关节开始出现明显红肿，5～6周肿胀厚度达到最高为（3．42±0．34）mm，小鼠的CIA发生率为100％，病理学结果显示，患病关节表现出周围炎性细胞浸润、滑膜增生、软骨和骨骼破坏等较为典型的变化；正常对照组小鼠则无上述表现；地塞米松磷酸钠注射液治疗组小鼠的上述表现明显减轻。结论 DBA／1小鼠皮下注射牛Ⅱ型胶原，可成功诱导CIA模型，而且发生率为100％，该模型在临床发病特点、组织病理学改变等方面，较充分模拟了人类RA的病变特征，适用于开展RA防治药物或其机制的实验研究。     

主要组织相容性复合物Ⅱ对Graves病发病影响的研究

目的应用主要组织相容性复合物（MHC）Ⅱ与人TSH受体（TSHR）共表达细胞（hM12细胞）模拟Graves病（GD）时的甲状腺细胞,免疫C57BL／6小鼠,诱导GD动物模型,以研究异常表达于GD患者甲状腺滤泡上皮细胞上的MHC—Ⅱ分子是否是GD的致病因素。方法试验组C57BL／6小鼠8只,用hM12细胞进行腹腔免疫,每2周1次,共6次,对照组C57BL／6小鼠5只,用M12细胞免疫,方法同试验组。受试小鼠末次免疫5周后,检测以下指标：甲状腺激素水平;甲状腺刺激性抗体（TSAb）;甲状腺组织学检查。结果C57BL／6小鼠试验组2／8小鼠诱导为Graves甲亢。C57BL／6小鼠的T细胞（MHC—Ⅱ为H-2^b）不能识别由hM12细胞（H～2^d）提呈的抗原,C57BL／6小鼠出现GD样变化可能是hM12细胞表达的TSHR被小鼠体内职业性抗原递呈细胞（APCs）获取,经加工处理提呈给T细胞,诱发自身免疫反应的结果。结论异常表达于GD患者甲状腺滤泡上皮细胞上的MHC—Ⅱ分子可能与GD的发病无关,而是一种自身免疫反应的继发现象。     

Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎模型关节炎症及血清抗体的动态变化

目的:制备Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎模型(CIA模型)并观察其关节炎症和血清中抗体的变化规律.方法:于第0天和第10天分2次多点皮内注射牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂以诱导大鼠CIA模型,应用足爪肿胀容积测定仪动态观察关节肿胀度,采用0～7级关节炎评分法进行关节炎评分,应用组织病理学、X线影像学动态观察踝关节组织的病理变化,应用ELISA方法动态检测血清中多种抗体.结果:CIA模型大鼠免疫后第12天即出现踝关节肿胀,第23天达高峰,持续至第72天(动物处死);X线检查显示:免疫后第30天,软组织明显肿胀,踝关节骨骼结构排列紊乱,间隙不清,可见囊性骨吸收和骨侵蚀;第60天后踝关节骨骼结构排列更加紊乱,骨质疏松和新骨形成并存,提示侵蚀性慢性关节炎.组织病理学观察显示,第72天踝关节滑膜炎性细胞浸润、滑膜增生,关节软骨及骨破坏,显示较明显的慢性关节炎症.血清中总IgG,IgM型类风湿因子(RF),IgG型RF和Ⅱ型胶原抗体于免疫后第15天均明显升高,以后维持在较高水平.结论:应用牛Ⅱ型胶原成功制备大鼠CIA模型,免疫后第12天即加强免疫之后即出现关节炎症的病理变化,至少可持续至第72天.     

口服Ⅱ型胶原诱导免疫耐受对大鼠类风湿性关节炎和创伤性骨性关节炎的影响

目的 :探讨应用口服Ⅱ型胶原诱导免疫耐受对创伤性骨性关节炎的影响。材料和方法 :应用切断大鼠膝关节内侧副韧带和内侧半月板的方法制备大鼠膝关节骨性关节炎的动物模型 ,以关节软骨组织学和组织化学染色以及T淋巴细胞转化实验为观察指标 ,观察口服Ⅱ型胶原对其病程发展的影响 ,并以经典的大鼠胶原引发关节炎症的类风湿性关节炎模型为对照。结果 :在创伤性骨性关节炎时 ,大鼠的T淋巴细胞增殖程度受到口服Ⅱ型胶原的抑制 ,从一个侧面反映针对Ⅱ型胶原的自家免疫可能参与了病变的发生和发展过程。但是 ,从病理改变来看 ,口服Ⅱ型胶原却不能抑制OA的发展 ,因此 ,创伤性骨性关节炎虽然在病变发生和发展过程中可能有免疫因素的参与 ,但是 ,相比RA ,这种参与不是主要的 ,OA的发病过程仍然是由于机械因素导致关节软骨破坏 ,在此基础上逐步发展起来的。口服Ⅱ胶原不能减轻OA的发病程度 ,因此不能应用口服Ⅱ型胶原的方法来治疗OA。     

胶原性关节炎大鼠关节石蜡切片快速制备方法的建立

胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型是人类类风湿性关节炎疾病的重要动物模型之一,对其关节进行病理组织学评估是研究药物抗类风湿关节炎作用的重要内容。CIA大鼠关节石蜡切片的质量是实现准确评估的关键,传统的EDTA脱钙方法周期较长,本研究尝试采用低浓度甲酸和混合脱钙液对CIA大鼠关节脱钙,以期提高CIA大鼠关节石蜡切片的制备效率和质量。1材料与方法将牛Ⅱ型胶原与弗氏不完全佐剂乳化后多点皮内免疫Wistar大鼠,复制CIA大鼠模型。待大鼠出现关节炎症状后脱颈处死,取双侧后足4%甲醛固定48h。将大鼠分为甲酸组、混合脱钙液组和EDTA组(n=6),进行脱     

类风湿关节炎患者蛋白聚糖aggrecan G1区特异性T细胞诱导SCID小鼠产生膝关节炎的实验研究

目的探讨针对蛋白聚糖的自身免疫反应在类风湿关节炎（RA）发病中的作用。方法从人软骨细胞中克隆获得aggrecan G1区的cDNA片段,应用杆状病毒表达系统获取重组人aggrecan G1区蛋白（rAG1）。用rAG1刺激来自RA患者关节液的单个核细胞,采用β-液闪计数仪对培养细胞进行放射性检测并计算刺激增长指数（SI）,取SI超过3者为rAG1特异性T细胞。将取自3个人的rAG1特异性T细胞克隆腹腔注射至8只SCID Beige小鼠,同时在小鼠左膝注射rAG1。于注射后第8天处死小鼠,取双膝关节行组织病理学检查,观察炎细胞浸润及软骨和骨糜烂情况。结果从RA患者关节液单个核细胞分离得到rAG1特异性T细胞,主要为CD4^＋CD8^-T细胞,分泌Th1型细胞因子（γ-干扰素）。部分腹腔注射人rAG1特异性T细胞的小鼠左膝出现了关节滑膜单个核细胞浸润和早期软骨侵蚀改变。结论人特异性rAG1反应性T细胞在rAG1刺激下可向关节局部归巢而导致关节炎症反应,提示针对rAG1的自身免疫反应可能参与了RA的发病。     

骨性关节炎关节软骨中Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原的分布

目的 :研究成人骨性关节炎关节软骨中的Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原的分布。方法 :分别用抗Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅹ型胶原单克隆抗体对成人骨性关节炎关节软骨切片进行免疫组织化学染色法。结果 :骨性关节炎关节软骨全层无Ⅰ型胶原 ;Ⅹ型胶原分布在深层和钙化层 ;Ⅱ型和Ⅲ型胶原分布相同 ,轻度病变时分布于软骨全层 ,中、重度病变时主要分布于中、深层。结论 :成人骨性关节炎关节软骨中不仅含有Ⅱ型胶原 ,而且含有大量Ⅲ型和Ⅹ型胶原 ,但无Ⅰ型胶原。Ⅹ型胶原和Ⅱ、Ⅲ型胶原的分布有重叠区     

99mTc-MDP显像对胶原诱导型关节炎大鼠的早期诊断作用

目的研究^99mTc-MDP显像在关节炎大鼠病程中的影像特点及其早期诊断价值。方法70只雄性Wistar大鼠随机分为对照组（n=28）与模型组（n=42）,两组再按不同时间点各分为7组,模型组大鼠通过皮内注射胶原与佐剂制作胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠模型。尾静脉注射^99mTc-MDP进行核素显像,感兴趣区法（ROI）计算双膝关节与全身放射性比（R=T／tT）。观察不同时间点核素浓聚情况,并与关节指数（AI）、足爪厚度、病理变化及X线结果比较。结果CIA大鼠膝关节核素浓聚明显增加（P〈0．05）,达高峰后逐渐下降,42天后又出现一个小峰值。结论^99mTc-MDP显像可反映CIA早期滑膜病变,与早期病理变化一致,早于足爪厚度的改变,且比X线检查敏感,对早期关节病变的诊断价值较高。     

PolyI:C诱导C57BL/6小鼠产生自身免疫样病变

目的探讨聚肌苷酸胞苷酸(polyinosinic polycytidylic acid,PolyI:C)注射C57BL/6小鼠产生的血清学和组织学自身免疫现象。方法50只6周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为药物组和对照组,药物组按5 mg/kg剂量注射PolyI:C,对照组注射无菌PBS,每月每组取5只实验小鼠眼眶采血,间接免疫荧光法测定血清抗核抗体(ANA)和抗线粒体抗体(AMA)。同时取小鼠肝脏做HE染色,显微镜观察病理改变。结果PolyI:C组小鼠血清AMA阳性率逐渐增高,第4月达到80%,此后维持不变,对照组只有1例出现AMA弱阳性。PolyI:C组ANA阳性率在第2月达到100%,对照组随着时间的进行也出现ANA阳性,在第4月达到100%;HE染色发现药物组小鼠肝脏汇管区及部分血管周围均出现不同程度的炎细胞浸润。结论PolyI:C注射C57小鼠可以刺激机体产生自身抗体ANA,AMA,并引起肝脏炎细胞浸润,产生自身免疫样病变,有发生自身免疫性肝病倾向。     

^99Tc-亚甲基二膦酸盐对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜及软骨凋亡相关因子的影响

目的探讨^99Tc-亚甲基二膦酸盐（MDP）对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的疗效,以及对滑膜和软骨细胞凋亡相关因子bcl-2、bax的影响。方法设立正常对照组;采用皮下注射法用牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂诱导CIA大鼠模型,分为模型对照组（尾静脉注射生理盐水）、^99Tc-MDP组（每天1次尾静脉注射^99Tc-MDP,按体质量0．04μg ^99Tc／kg）和甲氨蝶呤（MTX）组（按体质量每周1次尾静脉注射MTX 1mg／kg）,采用关节炎指数（AI）评价各CIA组大鼠关节炎程度,免疫组织化学染色法检测滑膜及软骨细胞bcl-2和bax表达;应用SPSS13．0软件对实验数据进行统计学处理。结果（1）^99Tc-MDP和MTX均能减轻CIA大鼠关节炎程度,降低AI评分,改善CIA大鼠关节滑膜炎的病理学变化。（2）与正常对照组[bcl-2：（7．56±1．18）％,bax：（6．14±1．71）％]比较,CIA模型对照组滑膜bcl-2和bax表达明显升高[（39．30±0．53）％、（27．37±2．45）％;q=46．27,24．57,P均〈0．001];与模型对照组比较,^99Tc-MDP组和MTX组滑膜细胞bcl-2水平降低[（30．24±2．09）％、（27．25±3．33）％;q=13．20,17．56,P均〈0．001],bax表达有所增加但差异无统计学意义,bcl-2／bax比值明显降低。（3）在软骨细胞中,CIA模型对照组bcl-2和bax表达[（20．20±2．78）％、（36．40±1．67）％]显著高于正常对照组[（9．91±4．09）％、（6．71±3．50）％;q=10．51,37．01,P均〈0．001];与模型对照组比较,^99Tc-MDP组和MTX组bcl-2增高[（26．58±2．52）％、（27．06±1．92）％;q=6．53,7．01,P均〈0．001],而bax水平降低[（24．26±2．75）％、（23．53±0．74）％;q=15．12,16．04,P均〈0．001],bcl-2／bax比值增高。结论凋亡相关因子bcl-2和bax的异常表达与CIA的发生发展密切相关。^99Tc-MDP能够减轻CIA大鼠关节炎程度,调节滑膜和软骨细胞b