HPLC异硫氰酸苯酯柱前衍生化测定黄柏及其不同炮制品中17种氨基酸的含量

目的:研究黄柏炮制前后17种氨基酸的含量变化情况进而评价黄柏炮制前后的寒热药性的变化。方法:采用反相高效液相色潽法,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析。采用C18(250mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温为43℃;流动相A为0.1 mol·L-1醋酸钠缓冲液(以醋酸调p H 6.5)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱,流速为1.0 m L·min-1;检测波长为254 nm。结果:17种氨基酸浓度在线性范围内呈良好的线性关系(r=0.996 8~0.999 5);回收率在96.7%~104.26%之间,RSD均小于3.0%。结论:本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于黄柏中氨基酸的检测。     

柱前衍生RP-HPLC法测定黄芩中氨基酸含量

目的采用柱前衍生RP-HPLC法对黄芩中游离及总氨基酸进行测定。方法以异硫氰酸苯酯为柱前衍生化试剂;色谱柱为Ultimate Amino Acid氨基酸分析专用柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:A为乙腈-水(80∶20,V/V),B为三水合醋酸钠缓冲溶液(pH 6.5)-乙腈(93∶7,V/V),梯度洗脱;检测波长为254 nm。结果 21种氨基酸在0.002 5~2.500 0 mmol/L内呈良好的线性关系(R20.999 0)。21种游离氨基酸平均回收率在93.72%~105.03%之间,RSD在0.81%~3.15%之间(n=6);总氨基酸平均回收率在95.22%~102.04%之间,RSD在0.47%~2.44%之间(n=6)。结论柱前衍生RP-HPLC法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,适合黄芩中氨基酸含量测定。     

柱前衍生RP-HPLC测定仙灵骨葆胶囊中16种氨基酸

目的:建立柱前衍生RP-HPLC同时测定仙灵骨葆胶囊中16种氨基酸的方法。方法:以正亮氨酸为内标物,异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生剂,用高效液相色谱测定仙灵骨葆胶囊中水解氨基酸的量。采用Hypersil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1 mol·L-1乙酸钠溶液-乙酸(7∶93∶0.05)为流动相A,乙腈-水(80∶20)为流动相B进行梯度洗脱,体积流量1 m L·min-1,检测波长254 nm,柱温40℃。结果:33 min内可完成仙灵骨葆胶囊中16种氨基酸的分离测定,线性关系良好(r0.996 8),回收率97.5%~100.7%,RSD5%。结论:该方法简便快速、准确可靠,可用于仙灵骨葆胶囊中氨基酸的含量测定。     

利用柱前在线衍生-高效液相色谱法测定培植牛黄及天然牛黄中18种氨基酸的含量

目的:建立1种利用高效液相色谱同时测定培植牛黄药材中18种氨基酸含量的方法。方法:以邻苯二甲醛(OPA)和9-芴甲基氯甲酸酯(FMOC)为柱前衍生化试剂。色谱柱为AJS-02氨基酸分析专用柱C18(150 mm×4.6 mm,3μm);流动相A为磷酸氢二钠-四硼酸钠缓冲液(pH 8.2),流动相B为甲醇-乙腈-水(9∶9∶2),梯度洗脱;流速为1.6 mL·min^-1;柱温为50℃;检测波长为338 nm(一级氨基酸)和262 nm(二级氨基酸)。结果:各个氨基酸在线性浓度范围内,峰面积与内标比值与浓度呈良好的线性关系(除Lys外,r>0.9990),平均回收率为90%~110%。结论:本方法准确、灵敏、简便,适用于培植牛黄药材中门冬氨酸等18种氨基酸的含量测定。     

柱前衍生化RP-HPLC同时测定不同产区锁阳中17种游离氨基酸含量及其多元统计分析

目的:建立柱前衍生化反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定不同产区锁阳中17种游离氨基酸含量的方法并进行多元统计分析。方法:采用柱前衍生化RP-HPLC检测,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,采用Wonda Sil C18-WR色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相A为0.05 mol·L^-1乙酸钠缓冲液(pH 6.5),流动相B为乙腈-甲醇-水(3∶1∶1),梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,检测波长254 nm,柱温35℃。建立主成分分析(PCA)及系统聚类分析(HCA)模型进行多元统计分析并进行质量评价。结果:从锁阳中共分离鉴定了17种氨基酸,含7种人体必需氨基酸。17种氨基酸在各自质量浓度范围内呈良好线性关系,r在0.9990~0.9999;平均回收率在98.03%~103.89%,RSD均<3.5%。PCA和HCA结果基本一致,均可将12个市级产区明显区分为6个区域;PCA可根据不同市级或省级产区对锁阳进行聚类,而HCA可根据省级产区对锁阳进行归类,说明不同市级、省级产区锁阳的氨基酸含量具有产区差异性,且含量分布表现出明显的地域聚集性特点;PCA表明甘肃、内蒙古所产锁阳氨基酸含量较高,质量较佳。结论:所建方法可用于不同产区锁阳中17种游离氨基酸的含量测定,为其综合质量评价提供参考。     

PITC柱前衍生HPLC测定柴胡炮制前后17种氨基酸含量

目的:建立一种同时测定鳖血柴胡中17种氨基酸含量的方法,为该药材的质量控制提供参考。方法:以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生试剂,采用Prevail C18色谱柱,流动相[乙腈-水(4∶1)]-[乙酸钠缓冲溶液(p H 6.5)-乙腈(97∶3)]梯度洗脱,检测波长254 nm,测定柴胡炮制前后氨基酸的含量。结果:17种氨基酸在32 min内可良好分离;样品平均加样回收率93.4%~107.1%,RSD 1.8%~3.9%。结论:与其他柱前衍生测定氨基酸含量的方法相比,该方法具有可操作性强、成本低、易推广等优势,可作为柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法。     

珍珠明目滴眼液及珍珠液中蛋白多肽类成分的分析

目的分析不同厂家珍珠明目滴眼液及珍珠液中蛋白多肽类成分的差异,为保证原料药生产工艺的稳定性,有效地控制珍珠明目滴眼液的质量提供参考依据。方法采用UPLC-Q-TOF MS正离子模式进行分析,鉴定珍珠明目滴眼液及珍珠液中的肽类成分,Acquity UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,乙腈-0.1%甲醇水溶液作为流动相;柱前衍生化HPLC-DAD法测定珍珠明目滴眼液中16种氨基酸。结果不同生产企业的珍珠明目滴眼液及珍珠液中多肽的相对分子质量(MW)、16种氨基酸分别占总氨基酸量的百分比差异较大。5家企业中3家的原料药珍珠液中肽的MW均小于2 000,另2个厂家珍珠液中肽的MW为500~4 746,以大于2 000的肽为主。7个厂家的珍珠明目滴眼液样品中,2个厂家样品中肽的MW以2 000~4 000为主,并含有4 000以上的肽,另5个厂家样品中不含4 000以上的肽。7个厂家的珍珠明目滴眼液中16种氨基酸质量浓度相对总氨基酸质量浓度的百分比差异较大,2个厂家采用酸/酶水解工艺的珍珠液中脯氨酸与丙氨酸质量浓度的比值1,5个厂家采用水直接提取工艺的二者比值小于1。结论建议修订珍珠液质量标准,明确制备工艺为水直接提取,确保滴眼液中的有效成分多肽(MW在500~5 000),珍珠液及珍珠明目滴眼液质量标准增加检查项脯氨酸与丙氨酸质量浓度的比值及定量测定项氨基酸总量,以有效控制珍珠明目滴眼液的质量,确保其有效性。     

山羊角提取物中氨基酸含量测定研究

目的:对山羊角提取物中氨基酸进行含量测定研究。方法:采用高效液相柱前衍生2,4-二硝基氟苯法(DNFB-HPLC)检测山羊角提取物中常规氨基酸含量。色谱柱为Elite AAK(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相A:乙腈-水(1∶1),流动相B:0.05 mol/L的醋酸钠缓冲液(pH=6.4),流速为1.2 mL/min,检测波长360 nm,柱温27℃。结果:氨基酸浓度在2.50～125.0μg/mL范围内,线性相关系数均大于0.99;氨基酸的平均回收率在97%～106%之间。但山羊角提取物各批次之间氨基酸含量差异较大。结论:柱前衍生DNFB法适合用于山羊角提取物中氨基酸的检测。     

哈药别克参中氨基酸成分薄层鉴别及测定

目的建立哈药别克参(新疆猪牙花肉质鳞茎)的氨基酸成分的TLC定性及HPLC法定量鉴别。方法 TLC法以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶1)为展开剂和0.2%茚三酮乙醇试剂为显色剂。HPLC法采用ACQ柱前衍生,Hypersil BDS C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相A为乙腈-醋酸钠缓冲盐溶液(7∶93,pH=6.5),流动相B为甲醇-乙腈-水(20∶60∶20),线性梯度洗脱。结果 TLC法鉴别出别克参中所含精氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸和苏氨酸4种氨基酸,斑点清晰,分离度高。HPLC法测定别克参中13种氨基酸。结论别克参的氨基酸成分以精氨酸、苏氨酸和谷氨酸的含有量为多。     

柱前衍生化HPLC测定杜仲乔林叶与矮林叶氨基酸含量

建立柱前衍生化HPLC测定杜仲叶中16种氨基酸含量的方法，比较矮林与乔林栽培模式及不同采收期杜仲叶氨基酸含量差异。以异硫氰酸苯酯为柱前衍生剂，色谱柱为安捷伦ZORBAX C₁₈柱(4.6 mm×250 mm, 5μm),流动相A为乙腈-水(80∶20),流动相B为0.1 mol·L^-1醋酸钠溶液-乙腈(94∶6),梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1,进样量5μL,柱温40℃,检测波长254 nm。色谱图显示16种氨基酸分离度良好，杜仲叶氨基酸可达16.26%,杜仲矮林叶氨基酸含量高于乔林叶，氨基酸含量随不同采收期而变化，通过正交偏最小二乘法判别分析比较杜仲乔林叶与矮林叶氨基酸，可以将乔林叶与矮林叶区分开，利用主成分分析法对杜仲叶氨基酸进行综合评分，结果表明杜仲矮林叶评分高于乔林叶，营养评价结果显示杜仲叶中的蛋白属于优质植物蛋白。所建立的氨基酸含量测定方法可靠，以氨基酸含量为指标，杜仲矮林叶质量优于乔林叶，为杜仲矮林栽培模式的种植推广及杜仲叶食药两用产品合理开发提供了理论依据。     

OPA-FMOC在线衍生化法测定氨基酸的含量

目的:建立了测定氨基酸的在线衍生化方法.方法:以邻苯二甲醛( OPA)和9-芴甲基氯甲酸酯为衍生化试剂,对其氨基酸进行在线衍生化色谱分析.色谱柱:Zorbax Eclipse-AAA氨基酸分析柱(4.6 mm ×150 mm,5μm),流动相A为40mmol·L-1 Na2HPO4(用8 mol·L-1氢氧化钠溶液调pH 7.8),流动相B为乙腈-甲醇-水(45:45:10)梯度洗脱,流速2 mL·min -1,检测波长338,262 nm,柱温40℃.结果:氨基酸浓度在一定范围内,此法可以测定27种氨基酸的含量,但不适合清开灵注射液中氨基酸的含量测定.结论:该方法不能对清开灵注射液中氨基酸进行准确定量.     

土鳖虫超微粉体中游离氨基酸的测定及指纹图谱研究

目的 建立土鳖虫超微粉体的游离氨基酸的HPLC指纹图谱,考察其主要氨基酸的量.方法 采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生,梯度洗脱进行色谱分离,固定相为依利特Hypersil BDS C18柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相A乙腈-水(4∶1),流动相B醋酸钠缓冲溶液(pH=6.5)-乙腈(97∶3),检测波长为254 nm,体积流量为1 mL/min,柱温为30℃.结果 初步建立了土鳖虫超微粉体中游离氨基酸的HPLC指纹图谱,标定了24个共有峰,同时定量分析了6种氨基酸成分.结论 建立的方法分离效果好,灵敏、准确、简单,可作为土鳖虫超微粉体质量评价的方法.     

金边土鳖HPLC指纹图谱及氨基酸含量测定

目的:建立金边土鳖氨基酸HPLC指纹图谱分析方法,并同时定量分析了6种氨基酸成分,为制订金边土鳖的质量标准提供参考。方法:采用异硫氰酸苯酯(PITC)-高效液相色谱(HPLC)柱前衍生化法,以Waters XBridge C18(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱;流动相A为0.1 mol·L-1乙酸钠(p H 6.5)-乙腈(95∶5),B为乙腈-水(4∶1);检测波长254 nm;流速0.8 m L·min-1梯度洗脱;柱温40℃。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)"和SPSS 22.0软件分别对其进行相似度评价和聚类分析。结果:初步建立了金边土鳖游离氨基酸HPLC指纹图谱共有模式,确定了21个共有峰,并指认了13种氨基酸成分;综合14批金边土鳖相似度分析、聚类分析和定量分析,结果显示相似度分析和聚类分析基本一致,且发现精氨酸含量的高低可能与产地有一定的关系。结论:建立了金边土鳖HPLC指纹图谱分析方法,可较全面反映该药材中氨基酸成分的信息,为金边土鳖药材鉴定和质量标准的制订提供参考。     

柱前衍生HPLC法测定梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸中氨基酸的含量

目的:建立测定梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸药材中17种氨基酸含量的方法。方法:采用柱前衍生-高效液相色谱法,色谱柱为Aglient ZORABX SB-Aq C18(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为40℃,检测波长为254 nm,流动相A为0.1 mol/L醋酸钠缓冲液(pH6.5)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(8∶2),流速为1 mL/min。结果:该方法线性关系良好(R2=0.9997),平均加样回收率为100.32%,RSD%为1.17%～4.01%。结论:鹿茸药材的质量受鹿的品种、自然环境、养殖技术等因素的影响。该方法适用于梅花鹿鹿茸和马鹿鹿茸中氨基酸的含量测定,可为质量控制提供保证。     

柱前衍生化RP-HPLC测定白芷中氨基酸含量

目的建立柱前衍生RP-HPLC法测定白芷中游离氨基酸含量的方法,并测定不同产地的白芷样品中游离氨基酸含量。方法样品以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,经与白芷中氨基酸柱前衍生,并以高效液相色谱法测定其含量,色谱条件采用Waters Symmetry RP18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相以[50mmol/L乙酸钠缓冲液(以冰醋酸调至p H6.5)](A)-[乙腈-甲醇-水(60:20:20)](B)进行梯度洗脱,柱温35℃,流速1.0 m L/min,检测波长254nm。结果 17种氨基酸均能达到基线分离,17种氨基酸的平均回收率在95.48%~104.30%之间,RSD在3.2%~4.9%之间(n=6)。结论柱前衍生RP-HPLC法灵敏,准确,重现性和稳定性良好,适用于对白芷中的氨基酸含量进行研究,为白芷药材的质量控制和评价提供了科学依据,不同产地的白芷样品中氨基酸的含量存在差异,必需氨基酸的比例也存在差异。     

柱前衍生化RP-HPLC测定铁皮石斛中的氨基酸的含量

目的:测定不同产地的铁皮石斛样品中氨基酸的含量。方法:样品以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂,与铁皮石斛中氨基酸柱前衍生,采用高效液相色谱法测定其含量,采用CAPCELL PAK C18SG300色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相[0.05 mol·L-1乙酸钠缓冲液(以乙酸调p H 6.5)-乙腈(1∶1)](A)-[0.05 mol·L-1乙酸钠缓冲液(以乙酸调p H6.5)](B)梯度洗脱,柱温25℃,流速0.6 m L·min-1,检测波长254 nm。结果:游离氨基酸和总的氨基酸的回收率范围分别为92.48%~97.30%和90.95%~95.63%,RSD都小于3.0%,9个不同产地的样品游离氨基酸的含量范围在0.210 5%~0.571 2%,总的氨基酸含量范围在3.670 8%~6.890 4%,必需氨基酸占总的游离氨基酸的比例为0.094 4%~0.186 0%;必需氨基酸占总的氨基酸的比例范围为0.338 5%~0.374 1%。结论:该方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于铁皮石斛中氨基酸的检测,不同产地的铁皮石斛样品其氨基酸的含量存在差异,必需氨基酸的比例也存在差异     

虎掌南星中氨基酸含量测定

目的:建立虎掌南星中各氨基酸含量测定的方法。方法:采用柱前衍生化后进行高效液相色谱法定量分析。色谱柱为Diamonsil C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),柱温35℃;以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂;乙腈-醋酸铵缓冲液(pH=6.5)为流动相体系,梯度洗脱,流速1.0mL·min~(-1);检测波长254nm。结果:谷氨酸和色氨酸在2μg·mL~(-1)~100μg·mL~(-1)浓度范围内,精氨酸在6~300μg·mL~(-1)浓度范围内,其他氨基酸在0.8~40μg·mL~(-1)浓度范围内均与峰面积呈良好线性关系,相关系数均不低于0.999 5,平均回收率均在93.43%~111.01%之间,RSD均小于3%。结论:该方法灵敏、准确,重现性好,可用于虎掌南星中各氨基酸含量的测定。     

不同品种、产地瓜蒌皮中游离氨基酸类成分指纹图谱研究

目的:建立瓜蒌皮中游离氨基酸类成分指纹图谱,并比较研究不同品种、产地瓜蒌皮氨基酸含量差异,为科学评价与有效控制瓜蒌皮质量提供依据。方法:采用异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生试剂,色谱柱为Eclipse XDB C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相A:乙腈-水(4∶1),流动相B:醋酸钠-乙腈溶液(93∶7),梯度洗脱;流速:1m L/min;检测波长:254nm;柱温为30℃。结果:建立了瓜蒌皮中19种游离氨基酸类成分液相指纹图谱共有模式,并对不同产地瓜蒌皮药材进行了相似度比较和聚类分析。结论:本方法简便、快速、重复性好,可用于鉴别和区分不同来源的瓜蒌皮药材,为全面控制瓜蒌皮药材的质量提供依据。     

HPLC法测定清香藤中阿魏酸的含量

目的:建立测定清香藤中阿魏酸含量的HPLC法.方法:采用日本岛津C18(VP-ODS 150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.085％磷酸(17∶83)为流动相,检测波长316nm,流速1.0mL·min-1,柱温30℃.结果:阿魏酸的线性关系为0.037 ～0.125μg(r =0.9992);平均回收率为96.52％(RSD为0.78％).结论:所建立的HPLC法可用于测定清香藤中阿魏酸的含量.     

柱前衍生化RP-HPLC测定鸡内金中16种氨基酸的含量

采用酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生化后进行HPLC分析。采用Ultimate Prime C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相A 0.1 mol·L^-1醋酸钠溶液（调pH至6.5）-乙腈（93∶7）,流动相B乙腈-水（8∶2）;流速1.0 mL·min^-1;柱温40 ℃;检测波长254 nm;梯度洗脱。氨基酸衍生溶液在36 h内保持稳定,16种氨基酸线性相关系数均大于0.999 5,加样回收率在98.01%~101.8%。该方法操作简便,精密度和重复性良好,可用于鸡内金中16种水解氨基酸含量的测定。