蛇床子素对Y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞皮质功能的影响

目的研究蛇床子素(Osthole,Ost)对肾上腺皮质功能的影响。方法以Y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞为实验对象,以含10%、1%和0.1%血清培养液培养细胞,分别采用1、10、25、50、100、200μmol/L Ost处理Y1细胞24、48 h,以0.1%二甲基亚砜(DMSO)为阴性对照组,腺苷酸环化酶激活剂(Bu)2cAMP为阳性对照组,倒置显微镜下观察细胞形态变化,采用ELISA法检测细胞分泌液皮质酮含量,RT-qPCR法检测类固醇急性调节蛋白(Star)、胆固醇侧链裂解酶(Cyp11a1)、21α-羟化酶(Cyp21a1)、3β-羟基类固醇脱氢酶(Hsd3b2)、11β-羟化酶1(Cyp11b1)、11β-羟化酶2(Cyp11b2)、17α-羟化酶/17,20-碳链裂解酶(Cyp17a1)及17β-羟基类固醇脱氢酶3(Hsd17b3)基因表达水平。结果 100、200μmol/L Ost组可明显抑制Y1细胞增殖,且对含0.1%血清培养液中细胞抑制作用更明显。与阴性对照组比较,阳性对照组Y1细胞Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Hsd3b2、Cyp11b1、Cyp17a1及Hsd17b3基因表达水平明显增强(P0.05);干预24、48 h,50μmol/L Ost组Y1细胞皮质酮水平明显升高(P0.05)。与24 h比较,干预48 h后,25、50μmol/L Ost组皮质酮含量明显升高(P0.01)。干预24 h后,25、50μmol/L Ost组Star、Cyp21a1、Hsd3b2基因表达明显增强(P0.05);干预48 h后,Star基因表达水平进一步增强(P0.05),但Cyp11a1基因表达无明显差异(P0.05)。干预24、48 h后,10、25、50μmol/L Ost组皮质酮合成酶Cyp11b1和性激素合成酶Cyp17a1基因表达明显增强(P0.05);Ost对醛固酮合成酶Cyp11b2和性激素合成酶Hsd17b3基因表达水平未见明显作用。结论蛇床子素通过增强类固醇激素合成相关酶基因表达,参与调节肾上腺皮质功能,并以促进皮质酮的合成与分泌作用为主。     

附子肉桂抑制小鼠肾上腺皮质瘤细胞皮质酮生成的研究

  目的：研究温热散寒中药药对“附子肉桂”对肾上腺皮质功能的影响。  方法：以Y1小鼠肾上腺皮质瘤细胞为实验对象,设置空白对照组,1 μmol/L 佛司可林(FSK)组,以及不同浓度附子肉桂水煎醇沉液组(0.25 g/L、1 g/L、4 g/L、8 g/L),干预Y1细胞36 h或48 h。分别采用MTT检测细胞增殖,运用ELISA检测细胞分泌皮质酮含量,RT-qPCR检测类固醇激素合成酶基因表达,Western blot检测蛋白表达。  结果：与对照组(Con)比较,0.25 g/L、1 g/L、4 g/L、8 g/L附子肉桂组Y1细胞活力被显著抑制(P＜0.05);4 g/L与8 g/L附子肉桂组Y1细胞皮质酮分泌显著下降(P＜0.01);0.25 g/L、1 g/L、4 g/L、8 g/L附子肉桂组Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1基因表达显著下调(P＜0.01),而8 g/L附子肉桂促进Star基因表达(P＜0.01),且4 g/L附子肉桂显著抑制CYP11A1、CYP21A2、CYP11B1蛋白表达。与FSK组比较,4 g/L附子肉桂抑制Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1基因表达后不能再被FSK诱导表达(P＜0.01)。  结论：附子肉桂通过抑制细胞活力和下调类固醇激素合成酶表达,以抑制肾上腺皮质功能。     

马兜铃酸诱导TM3小鼠睾丸间质细胞凋亡机制

目的:探讨马兜铃酸(AAs)对TM3细胞凋亡的作用及分子机制。方法:用2.5、10、25、100、400、1000 μmol/L浓度的马兜铃酸分别对TM3细胞作用24、48、72 h后,CCK-8法测定细胞活力; 25、100、400 μmol/L的马兜铃酸对TM3细胞作用48 h后,TUNEL检测细胞凋亡率,实时荧光定量法检测Caspase通路相关基因Caspase-3、Caspase-9和Bax mRNA相对表达情况,并通过Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9和Bax蛋白表达水平变化。结果:不同浓度的马兜铃酸对小鼠睾丸间质细胞的活力有一定的抑制作用; 用25、100、400 μmol/L浓度的马兜铃酸处理TM3细胞48 h后,通过TUNEL染色发现,不同浓度的马兜铃酸能够促进细胞的凋亡,Caspase-3、Caspase-9、Bax mRNA和蛋白表达水平升高。结论:马兜铃酸通过Caspase途径促进TM3细胞的凋亡来影响生殖细胞的发育。     

不同温补肾阳中药有效成分对TM3小鼠睾丸间质细胞生长抑制作用比较研究

目的比较不同温补肾阳中药有效成分对睾丸间质细胞生长的影响。方法以小鼠TM3睾丸间质细胞为实验对象,分别采用10、20、40、80、160和320μmol·L~(-1)淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素、松脂醇二葡萄糖苷、仙茅苷、金丝桃苷、松果菊苷和耐斯糖处理细胞24h、48h和72h,并设置0.1%DMSO为对照组,运用MTT方法检测各时点细胞增殖情况。结果铺板24~72h内,对照组细胞进入快速的指数生长期;同一时点,与对照组比较,40~320μmol·L~(-1)淫羊藿苷显著抑制TM3细胞增殖(P0.05),80~320μmol·L~(-1)补骨脂素和异补骨脂素显著抑制TM3细胞增殖(P0.05),320μmol·L~(-1)松脂醇二葡萄糖苷显著抑制TM3细胞增殖(P0.05),大于160μmol·L~(-1)仙茅苷显著抑制TM3细胞增殖(P0.05)。然而,各浓度的金丝桃苷、松果菊苷和耐斯糖对TM3细胞生长无明显抑制作用。结论相同浓度的各温补肾阳中药有效成分对小鼠TM3睾丸间质细胞增殖抑制作用由强到弱分别是,淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素、松脂醇二葡萄糖苷、仙茅苷、金丝桃苷、松果菊苷、耐斯糖。     

蛇床子素上调miR-9促进神经干细胞分化的研究

目的:探讨蛇床子素对β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导的神经干细胞分化的作用及其可能作用的机制。方法:体外分离并培养新生小鼠脑源NSCs,体外以20μmol/L的Aβ1-42诱导神经干细胞,建立阿尔茨海默病的神经干细胞模型,通过CCK-8法检测神经干细胞存活率;免疫荧光细胞化学法研究蛇床子素对Aβ1-42诱导的神经干细胞分化能力的影响;RT-PCR检测miR-9 mRNA的表达情况。结果:免疫荧光细胞化学法显示神经球显Nestin、Sox2阳性,即所培养的细胞为NSCs;CCK8法结果显示50μmol/L、100μmol/L蛇床子素作用可明显促进NSC存活;Aβ1-42孵育的NSCs用蛇床子素(50、100μmol/L)作用后,神经干细胞向神经元分化的数量明显增加,以蛇床子素100μmol/L作用神经干细胞向神经元分化的数量增加最显著。而转染了miR-9抑制剂后,与Aβ1-4220μmol/L组相比,Aβ1-4220μmol/L+miR-9抑制剂组的NF-M阳性细胞率明显降低,而Aβ1-4220μmol/L+miR-9抑制剂+蛇床子素100μmol/L组NF-M阳性细胞率与Aβ1-4220μmol/L+miR-9抑制剂组相比显著增加;PCR结果显示,蛇床子素100μmol/L可增加miR-9 mRNA的表达。结论:蛇床子素可促使NSCs向神经元分化,其机制可能与蛇床子素上调miR-9信号通路有关。     

蛇床子素诱导内质网应激抑制SMMC7721人肝癌细胞增殖的机制研究＊

目的 研究蛇床子素抑制肝癌细胞增殖的机制。方法 采用20 - 100 μM蛇床子素干预SMMC7721人肝癌细胞24 h、48 h和72 h，运用MTT方法检测细胞增殖；采用20 - 80 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞24 h，运用流式细胞术检测细胞凋亡及Western blot检测Bax和Bcl-2蛋白表达；采用 60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h，运用流式细胞术检测细胞周期，以实时荧光定量PCR技术检测GRP78、DDIT3、GADD34、ATF4、EIF2A、GDF15、CDKN1B、FOXO3、RICTOR、SGK1基因表达，Western blot方法检测CyclinD1、CyclinE1、p27^Kip1和CDK4细胞周期蛋白及GRP78、GRP94、PERK、XBP-1s、CHOP、p-eIF2α(Ser51)内质网应激蛋白表达。各实验均以0.1% DMSO为对照组，并以0.1 μM毒胡萝卜素为内质网应激诱导剂组。结果 与对照组比较，100 μM蛇床子素干预24 h显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，其抑制率为36.76%（P < 0.05）；60 - 100 μM蛇床子素干预48 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为30.84%-52.49%（P < 0.05）；40 - 100 μM蛇床子素干预72 h后显著抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，抑制率为32.7%-73.15%（P < 0.05）。大于60 μM蛇床子素可诱导SMMC7721肝癌细胞晚期凋亡且显著抑制促凋亡蛋白Bax表达（P < 0.05）。60 μM蛇床子素干预SMMC7721肝癌细胞48 h后，G1期细胞数增加、G2期和S期减少，且CyclinD1、CyclinE1和p27^Kip1蛋白表达显著被抑制（P < 0.05）。20 - 80 μM蛇床子素处理SMMC7721肝癌细胞24 h后，均显著促进GRP78、DDIT3（CHOP）、ATF4、FOXO3、RICTOR和SGK1基因表达（P < 0.05）； 20 μM蛇床子素显著促进GADD34和EIF2A基因表达（P < 0.05）；80 μM蛇床子素显著促进GDF15基因表达（P < 0.05），且CHOP、XBP-1s蛋白表达显著增强。结论 蛇床子素通过诱导内质网应激反应以抑制SMMC7721肝癌细胞增殖，从而发挥抗肝癌活性。     

蛇床子素通过Akt/eNOS降低氧化低密度脂蛋白诱导血管内皮细胞凋亡

目的:探讨蛇床子素对低密度脂蛋白诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响及其机制研究。方法:采用HUVEC细胞,设置正常组、模型组和给药组,细胞培养12 h后,低密度脂蛋白进行细胞损伤,同时给予不同浓度蛇床子素(10、20、40μmol/L)进行干预,应用MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC标记的流式细胞术检测细胞凋亡;检测一氧化氮生成量;免疫印迹法检测p-AKt和p-eN OS蛋白表达水平。结果:与正常组相比,模型组细胞活力和凋亡率有显著差异;与模型组相比,蛇床子素提高细胞活力,抑制细胞细胞凋亡,作用效果呈剂量依赖性,20、40μmol/L蛇床子素均有显著性差异;与模型组相比,20、40μmol/L蛇床子素显著促进细胞一氧化氮合成;蛋白质检测结果显示,与模型组相比,蛇床子素可上调HUVEC细胞中Akt和eN OS蛋白磷酸化水平。结论:蛇床子素能够抑制ox-LDL诱导HUVEC的凋亡而发挥其保护作用,其作用机制可能与其激活Akt/eNOS/NO的信号通路相关。     

蛇床子素对口腔癌KB细胞周期进程及凋亡的影响

目的 研究蛇床子素对口腔癌KB细胞周期进程、凋亡的影响。方法 CCK-8法检测KB细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期进程及凋亡率，RT-qPCR法检测细胞c-myc、cyclin A、cyclin D1 mRNA表达，Hoechst 33258染色观察细胞凋亡形态，ELISA法检测细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9活性，Western blot法检测细胞p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果 与对照组比较，40、80、160μg/mL蛇床子素作用24、48、72 h后，KB细胞增殖抑制率均升高(P<0.05,P<0.01)。与对照组比较，40、80、160μg/mL蛇床子素组作用48 h后，G₀/G₁细胞比例、细胞凋亡率、caspase-3、caspase-8、caspase-9活性均升高(P<0.05,P<0.01),细胞核染色质浓缩现象明显，而c-myc、cyclin A、cyclin D1 mRNA表达和p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均降低(P<0.05,P<0.0...     

淫羊藿素联合阿霉素对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用的体外研究

目的探讨体外淫羊藿素联合阿霉素对人骨肉瘤MG-63细胞的抑制作用及分子机制。方法设置对照组及不同浓度梯度的淫羊藿素组(10、20、40、80、160μmol/L)、阿霉素组(1、2、4、8、16μg/m L)、联合组(淫羊藿素+阿霉素:20μmol/L+1μg/m L、20μmol/L+2μg/m L、20μmol/L+4μg/m L、40 mol/L+1μg/m L、40μmol/L+2μg/m L、40μmol/L+4μg/m L、80μmol/L+1μg/m L、80μmol/L+2μg/m L、80μmol/L+4μg/m L),分别培养骨肉瘤MG-63细胞用倒置相差显微镜观察各组药物作用24、48 h后细胞形态;CCK-8法测定各组的细胞增殖抑制率并计算半数抑制浓度;AnnexinⅤ-FITC/PI双染料流式细胞分析技术测定各组的细胞凋亡率;RT-PCR检测bcl-2、caspase-3及p21表达。结果淫羊藿素及阿霉素可明显抑制MG-63细胞增殖,随着淫羊藿素的浓度从10μmol/L逐渐增加至160μmol/L,细胞增殖抑制率也随之从(9.67±3.62)%逐渐增加至(89.18±9.66)%,二者的半数抑制浓度分别为:46.93μmol/L、3.87μg/m L;淫羊藿素与阿霉素可致细胞早期及晚期凋亡,使bcl-2基因表达下调、caspase-3、p21基因表达上调(P0.05);以上改变联合组较淫羊藿素组及阿霉素组更明显(P0.05)。结论淫羊藿素联合阿霉素对抑制人骨肉瘤MG-63细胞增殖具有协同或相加效应,其作用机制可能与调控bcl-2、caspase-3及p21基因有关。     

雄激素合成酶在H22荷瘤小鼠不同证候表达差异

目的:研究睾丸雄激素合成酶与肿瘤状态下小鼠证候的关系。方法:采用实验小鼠及其标准化四诊与辨证方法筛选H22荷瘤小鼠邪毒壅盛证、气虚证、阳气虚证、气阴阳虚证,并以Gene Chip Mouse Exon 1.0 ST Array技术检测睾丸组织基因芯片表达谱,重点分析睾丸基因芯片中雄激素合成酶及其调节因子在不同证候小鼠中的差异表达。结果:与正常组比较,Star、Stard5、Cyp17a1、Hsd3b6、Hsd17b3、Sult1e1等基因在早期邪毒壅盛证和气虚证小鼠呈现下调趋势,且在中晚期阳气虚证和气阴阳虚证下调幅度更加显著,Cyp11a1、Hsd3b1、Hsd17b10、Hsd17b11、Hsd17b12、Fdx1、Fdxr、Por、Sult1a1等仅在中晚期阳气虚证和气阴阳虚证中显著下调,Cyp17a1仅在睾丸组织特异性中表达。结论:H22荷瘤小鼠肿瘤形成后,自发产生的虚证越严重,其睾丸雄激素合成酶基因转录活性越低。     

试析植物干细胞与动物干细胞的异同

植物干细胞与动物干细胞的比较研究可以深入认识干细胞生物学的核心问题。植物干细胞与动物干细胞在细胞特征、功能、信号传导、研究方法等方面均有所不同。但是近年来对argonaute（AGO）与polycomb group proteins（PcG）蛋白研究表明动、植物干细胞行为之间有着某种分子相似性。     

肿瘤细胞与血管内皮细胞相互作用及丹参干预作用

肿瘤转移的复杂机制在于肿瘤细胞与各种宿主细胞之间发生的广泛作用,而肿瘤能否建立转移则取决于肿瘤细胞诱导并利用宿主细胞协助自身发展的能力。其中肿瘤与血管内皮细胞间的相互作用在支持肿瘤血行转移中扮演了重要角色。研究表明活血化瘀药丹参对这一过程具有多成分、多环节的抑制作用,为以肿瘤细胞与血管内皮细胞相互作用为靶点的抗肿瘤候选药物研发提供参考。     

EGCG抑制KM3细胞生长和促凋亡作用机制研究

目的：寻找新的治疗药物及方法,提高单药或联合用药对复发难治性多发性骨髓瘤（multiple myeloma, MM）的治疗效果。方法：应用台盼蓝拒染法检测EGCG对KM3细胞生长抑制的影响。应用流式细胞术检测细胞凋亡。应用SYBR green realtime-PCR方法检测P65基因的表达情况。应用Western blotting技术检测P65蛋白、磷酸化P65蛋白（pP65）、PARP、及caspase3-,8-,9蛋白的表达变化。结果：EGCG抑制KM3细胞生长、促进其凋亡。EGCG可以抑制P65基因及其蛋白的表达,并通过激活caspase诱导细胞凋亡。当与Bortezomib联合时有协同作用。结论：EGCG单独作用于KM3细胞可以抑制其生长并诱导细胞凋亡,与Bortezomib联合时有协同效应。     

小白菊内酯对白血病K562细胞及其干细胞的作用

目的:研究小白菊内酯(parthenolide,PTL)对白血病K562细胞及其白血病干细胞(leukemia stem cells,LSC)的作用.方法:以白血病K562细胞为靶细胞,四氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性,Annexin V/PI染色法测定细胞凋亡;流式细胞术检测LSC相对含量,甲基纤维素集落形成法检测细胞的自我更新和增殖能力.结果:PTL显著抑制K562细胞的增殖,24,48,72 h的IC_(50)分别为17.1,8.67,9.42μmol·L~(-1).5,10 μmol·L~(-1)PTL处理48 h,K562细胞的凋亡率分别为(49.56±5.11)%,(71.88±2.12)%.结合干细胞免疫标志分析,K562细胞中LSC样(CD34~+ CD38~-)细胞的凋亡率分别为(52.63±4.14)%,(57.50±4.47)%.K562细胞中LSC的相对含量仅轻度增高,但高浓度(15 μmol·L~(-1))PTL处理,LSC含量则增高15倍.0.5～4.0 μmol·L~(-1)PTL显著抑制K562细胞的集落形成能力,集落数降低24.1%～89.2%;5～15 μmol·L~(-1)PTL预处理,存活K562细胞的集落形成数增高5.0%～50.0%.结论:小白菊内酯可抑制K562细胞及其干细胞的增殖活性,并诱导其凋亡.     

雷公藤红素对SGC-7901细胞和ECV304细胞增殖及能量代谢的影响

目的研究雷公藤红素对人胃癌细胞SGC-7901和人脐静脉内皮细胞ECV304增殖抑制活性及能量代谢干预的作用机制。方法选取SGC-7901和ECV304细胞,采用MTT法、生长曲线测定雷公藤红素对2种细胞增殖抑制活性;HE染色法观察细胞形态变化;分光光度法测定糖酵解途径酶[己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶(PK)和乳酸脱氢酶(LDH)]、三羧酸循环酶[琥珀酸脱氢酶(SDH)]的活力及能量代谢产物ATP的量;Western blotting法测定低氧诱导因子(HIF-1α)和单羧基转运体(MCF-4)蛋白表达水平。结果雷公藤红素对SGC-7901和ECV304细胞增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,引起2种细胞形态变化,降低2种细胞HK、LDH和SDH活力,使细胞内ATP的量明显减少,SGC-7901细胞中HIF-1α和MCT-4表达明显降低,而ECV304细胞内2种蛋白表达下降不明显。结论雷公藤红素通过降低SGC-7901细胞和ECV304细胞中HIF-1α和MCT-4蛋白表达水平,抑制2种细胞能量代谢相关酶活力,导致能量不足,细胞增殖受到抑制,从而达到抑制胃癌细胞生长和肿瘤血管生成的双重抗肿瘤作用。     

茶多酚对人癌细胞和人体细胞增殖及凋亡的实验研究

目的 选用4种人癌细胞和3种人体正常细胞进行试验，比较茶多酚(TP)对人肝癌细胞Bel—7402等和人体肝细胞CLC增殖周期的影响和诱导凋亡的作用。方法 用MTT法测定TP对人癌细胞和人体正常细胞的细胞毒作用，用流式细胞仪(FCM)观察TP对细胞的周期改变和诱导凋亡作用。结果 TP对人癌细胞Bel—7402，CNEl，KB和H—29的IC50依次为68．2，104．63，119．83和148．61μg／mL；对人体正常细胞CLC，HEK—293和HD—MEC的IC50均＞400μg／mL。150和300μg／mL TP处理Bel-7402细胞12，24和36h，细胞凋亡率分别为13．2％，37．6％，40．7％和17．1％，39．9％，57．7％。表明TP可诱导Bel—7402细胞凋亡，使细胞周期停滞于S—G2／M期，而对CLC细胞无此作用。结论 TP对人癌细胞的细胞毒作用显著高于对人体正常细胞的作用，提示TP对人癌细胞有一定的选择杀伤作用。     

黄芩苷对人口腔上皮癌KB细胞端粒酶活性和细胞周期的影响

目的:研究黄芩苷(bacailin)对KB细胞生长抑制作用及其对端粒酶活性和细胞周期的影响。方法:采用MTT法检测bacailin对体外培养的KB细胞增殖的抑制作用,TRAP-PCR-ELISA方法检测KB细胞在bacailin作用后端粒酶活性的变化,用流式细胞仪分析细胞周期的改变。结果:bacailin在0.5～2.0mmol/L剂量范围内对KB细胞有抑制作用,且呈剂量依赖关系(P<0.05),同时bacailin作用后,KB细胞端粒酶活性明显抑制(P<0.05),KB细胞的G2/M期细胞含量明显增高(P<0.01)。结论:bacailin对肿瘤细胞的端粒酶活性有抑制作用。     

人视网膜色素上皮细胞的体外分离培养冻存复苏

目的为研究色素上皮相关疾病的发病机制及探讨中医中药治疗此类疾病的作用机制提供细胞模型。方法用胰蛋白酶消化法获得人视网膜色素上皮细胞,免疫细胞化学法对其进行鉴定。采用超低温冷冻的方法对细胞进行冻存,复苏后观察细胞活性。结果人视网膜色素上皮细胞在体外生长良好,胞浆内充满了棕黑色色素颗粒,随着传代的增加,色素颗粒逐渐减少至消失。冻存后复苏的人视网膜色素上皮细胞生长良好,增生活跃。结论成功建立了人视网膜色素上皮细胞的体外培养模式。冻存的细胞复苏后细胞活性不受影响。     

消岩汤对肺癌A549细胞及肺癌干细胞迁移及侵袭的影响

目的探讨消岩汤对非小细胞肺癌转移的作用机制。方法通过划痕实验,观察消岩汤对肺腺癌A549细胞的迁移能力的影响;通过侵袭实验,观察消岩汤对肺癌干细胞(SP细胞)侵袭能力的影响。结果划痕实验中消岩汤组肺腺癌A549细胞在24、48、72 h的迁移距离明显短于各时刻对照组细胞(P0.05);侵袭实验中消岩汤干预下的SP细胞穿出Transwell小室的细胞数明显少于对照组(P0.05)。结论消岩汤可有效抑制肺腺癌A549细胞的迁移及SP细胞的侵袭。