婴儿肝内胆汁淤积症SLC25A13基因突变分析

目的探讨SLC25A13基因突变在中国婴儿肝内胆汁淤积症患儿中的检出率,初步了解突变患儿血生化及氨基酸谱特征,肝脏活组织病理变化。方法2003年12月至2006年12月就诊于复旦大学附属儿科医院的婴儿肝内胆汁淤积症患儿,满足本研究入选条件者共115例进行了血氨基酸质谱分析,伴血浆瓜氨酸明显升高的患儿进行SLC25A13基因全部外显子及邻近序列测序,不伴血浆瓜氨酸明显升高的患儿进行SLC25A13基因常见突变851del4（突变Ⅰ）及突变1638ins23（突变Ⅲ）筛查,突变851del4采用实时荧光定量PCR双标记探针法检测,突变1638ins23采用PCR产物直接电泳法检测,对仅检出单个位点突变的筛查对象,继续进行其余已报道的10种突变位点检测。检测结果仍为单个杂合突变的对象进行SLC25A13基因所有外显子区及其邻近序列分析。对确诊突变患儿的临床表现、血生化及血氨基酸特征等进行分析。结果5例伴血瓜氨酸明显升高的患儿共检出突变4例,其中纯合突变851del4/851del41例,复合杂合突变851del4/1638ins231例,杂合突变851del42例;110例不伴血浆瓜氨酸明显升高患儿共检出突变6例,其中纯合突变851del4/851del41例,复合杂合突变851del4/1638ins231例,杂合突变851del44例。115例婴儿肝内胆汁淤积症患儿共检出SLC25A13基因突变10例,占8.7%。突变患儿血生化改变包括胆红素、γ-谷氨酰转移酶以及碱性磷酸酶等明显升高,AST升高较ALT明显。血串联质谱发现5例突变患儿有特征性氨基酸瓜氨酸、苏氨酸及蛋氨酸升高,另5例突变患儿并无血氨基酸改变。10例患儿中有7例行肝脏活组织病理学检查,4例有显著的脂肪变性。结论SLC25A13基因突变是中国婴儿肝内胆汁淤积症的重要原因之一。肝脏活组织病理、血生化及氨基酸谱等检查对诊断SLC25A13基因突变患儿有重要意义,但最终仍需通过基因检测确诊。     

新生儿肝内胆汁淤积症的质谱分析和SLC25A13基因检测

目的 对新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)患儿进行血液生化、血串联质谱、尿气相色谱质谱技术分析,同时进行SLC25A13基因突变分析,了解有无citrin缺陷,为NICCD的鉴别诊断提供思路.方法 对我院就诊的127例特发性胆汁淤积症患儿进行肝功能、总胆汁酸、甲胎蛋白、凝血功能等生化指标检测,结合血串联质谱、尿气相质谱...     

Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症临床和SLC25A13基因突变的研究

Objectives To investigate the clinical and laboratory features of neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency (NICCD) and to characterize the molecular basis and prognosis of this disease. Methods Twenty-six patients with NICCD were collected because of idiopathic intrahepatic cholestasis and jaundice. The diagnosis was made by routine laboratory data collection, tandem mass spectrometry (MS-MS) and gas chromatography mass spectrometry (GC-MS) analyses. SLC25A13 gene mutation was analyzed by using polymerase chain reaction (PCR), direct DNA sequencing and restriction fragment length polymorphism analyses. The patients were followed up for nearly 2 years. Results The NICCD patients showed low birth weight and the average onset of jaundice was 29 days. Laboratory data showed liver dysfunction, hyperbilirubinemia, hypoproteinemia, high levels of α-fetoprotein, prolonged prothrombin time, hypoglycemia and hyperammonemia. MS-MS analysis of the blood samples revealed specific elevation of citrulline, methionine, threonine, tyrosine and elevation of free carnitine, short-chain and long-chain acylcarnitines. GC-MS analysis of the urine samples showed elevated 4-hydroxyl phenyllactic acid and 4-hydroxyi phenylpyruvic acid. Twelve different mutations were identified, including 4 novel mutations, i. e. , G386V, R467X, K453R and 1192-1193delT. Forty-four mutated alleles were identified in the 52 alleles (84.6%). Among them, 851del4, 1638ins23 and IVS6+5G＞A mutations were the most frequent mutations, accounting for 40.9%, 20.5% and 11.4% of the total alleles examined respectively.Five of the 26 patients have not been recovered, including 4died and 1 accepted liver transplantation. No obvious relationship was found between the genotype and phenotype in NICCD. Conclusion The 851del4,1638ins23 and IVS6+5G＞A mutations are the hot-spot mutations in Chinese NICCD patients. Some NICCD patients have poor prognosis.     

Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症临床和SLC25A13基因突变的研究

目的 探讨citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(neonatalintrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency,NICCD)患儿的临床表现、实验室检查特点、SLC25A13基因突变情况及预后.方法 对26例NICCD患儿进行常规实验室检查、血氨基酸谱和酰基肉碱谱、尿有机酸和SLC25A13基因分析,并随访2年.结果 NICCD患儿出生体重偏低,平均黄疸出现年龄29 d.实验室检查改变包括肝功能异常、高胆红素血症、低蛋白血症、甲胎蛋白升高、凝血酶原时间延长及低血糖、高氨血症.串联质谱分析发现多数患儿有瓜氨酸等氨基酸特异性升高.尿气相色谱质谱有机酸分析有尿4-羟基苯乳酸和4-羟基苯丙酮酸升高.SLC25A13基因分析共发现12种致病突变,其中G386V,R467X,K453R,1192-1193delT为新突变.26例患儿的突变总检出率84.6%,851del4、1638ins23及IVS6+5G＞A为热点突变,突变率分别占总突变的40.9%、20.5%和11.4%.26例NICCD患儿中5例(19.2%)预后不良,4例死亡,1例接受肝移植.NICCD患儿的基因型与临床表型相关性不明显.结论 851del4、1638ins23及IVS6+5G＞A突变为中国人SLC25A13基因的热点突变,部分NICCD患儿可能预后不良.     

Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症临床和SLC25A13基因突变的研究

Objectives To investigate the clinical and laboratory features of neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency (NICCD) and to characterize the molecular basis and prognosis of this disease. Methods Twenty-six patients with NICCD were collected because of idiopathic intrahepatic cholestasis and jaundice. The diagnosis was made by routine laboratory data collection, tandem mass spectrometry (MS-MS) and gas chromatography mass spectrometry (GC-MS) analyses. SLC25A13 gene mutation was analyzed by using polymerase chain reaction (PCR), direct DNA sequencing and restriction fragment length polymorphism analyses. The patients were followed up for nearly 2 years. Results The NICCD patients showed low birth weight and the average onset of jaundice was 29 days. Laboratory data showed liver dysfunction, hyperbilirubinemia, hypoproteinemia, high levels of α-fetoprotein, prolonged prothrombin time, hypoglycemia and hyperammonemia. MS-MS analysis of the blood samples revealed specific elevation of citrulline, methionine, threonine, tyrosine and elevation of free carnitine, short-chain and long-chain acylcarnitines. GC-MS analysis of the urine samples showed elevated 4-hydroxyl phenyllactic acid and 4-hydroxyi phenylpyruvic acid. Twelve different mutations were identified, including 4 novel mutations, i. e. , G386V, R467X, K453R and 1192-1193delT. Forty-four mutated alleles were identified in the 52 alleles (84.6%). Among them, 851del4, 1638ins23 and IVS6+5G＞A mutations were the most frequent mutations, accounting for 40.9%, 20.5% and 11.4% of the total alleles examined respectively.Five of the 26 patients have not been recovered, including 4died and 1 accepted liver transplantation. No obvious relationship was found between the genotype and phenotype in NICCD. Conclusion The 851del4,1638ins23 and IVS6+5G＞A mutations are the hot-spot mutations in Chinese NICCD patients. Some NICCD patients have poor prognosis.     

Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症患儿SLC25A13基因突变与生化指标的相关性研究*

 目的：分析citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)患儿SLC25A13基因突变及生化改变特点,并探讨两者相关性。方法：2013年3月至2013年10月在暨南大学附属第一医院以胆汁淤积性肝病就诊的婴儿59例,其中经SLC25A13基因分析确诊的NICCD患儿36例为病例组,排除NICCD且未发现明确病因的23例特发性新生儿胆汁淤积症(INC)患儿为对照组。抽取静脉血提取DNA进行SLC25A13突变检测,并分析所有研究对象的血糖、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）、碱性磷酸酶（ALP）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）等数据资料。结果：NICCD组ALT及LDL-C水平低于对照组。检出SLC25A13基因突变10种,其中851del4、IVS16ins3kb、IVS6+5G>A和1638ins23 突变占全部突变数量的82%。不同性别及年龄段的NICCD患儿其SLC25A13基因突变分布未见不同。SLC25A13基因突变与患儿的血糖、ALT、AST、ALP、TG及HDL-C水平无关联,而与GTT的水平有关联。结论：低LDL-C血症可能是NICCD患儿血脂紊乱的特点。NICCD患儿SLC25A13基因的高频突变类型为851del4、IVS16ins3kb、IVS6+5G>A和1638ins23。本文NICCD患儿的SLC25A13突变分布与GGT水平之间存在相关性,但这一发现的意义有待深入研究。     

16例Citrin蛋白缺陷所致的婴儿肝内胆汁淤积症的 SLC25A13基因变异分析

目的:探讨16例Citrin蛋白缺陷所致的婴儿肝内胆汁淤积症(neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency,NICCD) SLC25A13基因的变异特点。 方法:应用高通量测序法对目标基因的编码外显子和侧翼区域进行捕获...     

16例Citrin蛋白缺陷所致的婴儿肝内胆汁淤积症的SLC25A13基因变异分析CSCD

目的探讨16例Citrin蛋白缺陷所致的婴儿肝内胆汁淤积症(neonatal intrahepatic cholestasis caused by citrin deficiency,NICCD)SLC25A13基因的变异特点。方法应用高通量测序法对目标基因的编码外显子和侧翼区域进行捕获,对变异位点进行Sanger测序验证和致病性分析。结果在16例NICCD患儿中,共发现致病变异15种,其中6种既往未见报道,包括IVS14-9A>G、c.1640G>A、c.762 T>A、c.736delG、c.1098delT、c.851G>A。结论通过高通量测序发现6种新变异,丰富了SLC25A13基因的变异谱,为患儿家系的遗传咨询和产前诊断提供了依据。     

金华地区育龄妇女SLC25A13基因突变筛查结果分析

目的了解金华地区育龄妇女SLC25A13基因突变携带率,对出生缺陷防控提供参考依据。方法收集2016年10月-2020年9月符合标准的育龄妇女标本742例,用高通量测序技术进行SLC25A13基因突变筛查,对携带相同基因夫妇进行验证。结果 742例检测中SLC25A13基因突变携带者阳性16例,携带率2.16%。其中以c.2TC,c.852_855del,c.1638_1660dup为主;并发现携带SLC25A13基因相同突变位点c.2TC夫妇1对。结论通过了解金华地区育龄妇女SLC25A13基因突变谱,为提高诊断策略和解释基因诊断提供了依据,为预测子女患病危险性,构建一级预防筛查体系提供研究数据。     

原发性肉碱缺乏症一家系的SLC22A5基因突变检测与产前诊断

目的对原发性肉碱缺乏症(PCD)病患者及一家系进行致病基因SLC22A5突变鉴定,为家系提供遗传咨询和产前诊断,同时研究c.394-1 GT突变所导致的SLC22A5基因剪接形式的改变。方法收集患者及父母的外周血标本,提取基因组DNA,采用Sanger法对家系中各成员进行SLC22A5基因的所有外显子进行测序,同时对发现的突变在100名正常对照中进行测序,以排除多态性位点;使用QIAGEN血液RNA提取试剂盒抽提患儿总RNA,通过RT-PCR和测序技术分析c DNA序列特征。对先证者母亲的羊水标本进行产前诊断。结果 Sanger法DNA测序检测出该家系中先证者为SLC22A5基因的两个杂合突变:c.394-1 GT,c.760CT(p.R254X),在100名正常对照中均未发现这两个位点的突变。先证者父亲、母亲分别携带SLC22A5基因c.394-1 GT、c.760 CT(p.R254X)杂合突变。先证者母亲的羊水标本的基因型与先证者一样。先证者的特定片段RT-PCR产物电泳时较非携带者的正常人多出一条小的亮带,经测序确认是由c.394-1 GT突变导致SLC22A5基因c DNA外显子2完整序列的缺失。结论 c.394-1 GT突变位点在国内外仅一例报道,本研究证实该突变的存在,同时证明该突变导致SLC22A5基因c DNA外显子2完整序列的缺失。这一发现丰富了SLC22A5基因突变谱,为原发性肉碱缺乏症(PCD)病的防治提供新的参考,Sanger测序等技术可为原发性肉碱缺乏症家系提供遗传咨询和产前诊断服务。     

妊娠期肝内胆汁淤积症与新生儿黄疸的关系

目的探讨妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)与新生儿黄疸的关系。方法选择36例ICP患者为观察组,36例同期来院分娩的正常孕妇为对照组,分别测定孕妇血清总胆汁酸水平及新生儿血清总胆红素水平。结果ICP孕妇血清总胆汁酸的水平及新生儿血清胆红素水平均较对照组明显增高,观察组新生儿血清胆红素水平明显增高且72h内黄疸发生率增高。结论母体发生ICP可使新生儿黄疸发生率增高。     

一个先天性肌营养不良症家系的POMT1基因突变鉴定与产前诊断CSCD

目的确定1个先天性肌营养不良症（congenital muscular dystrophy, CMD）家系的POMT1致病基因突变,并对该家系中孕11周的胎儿进行产前诊断。方法收集1例CMD患者及其表型正常父母的外周血标本,抽取母亲孕11周胎儿的绒毛标本。采用PCR扩增POMT1基因的第19和第20外显子,对PCR产物进行双向测序检测基因突变,明确致病突变来源后,进一步对胎儿进行产前诊断。结果先证者POMT1基因第19外显子检测到C．1939G〉A（P．Ala647Thr）杂合错义突变,来自其母亲;第20外显子检测到C．2141delG（P．Trp714Ter）杂合框移突变,导致蛋白质翻译的提前终止,该突变来自其父亲。产前诊断结果显示胎儿携带POMT1基因第19外显子c．1939G〉A杂合错义突变,推测其为与母亲相同POMn基因致病突变携带者的可能性大。结论POMT1基因第19外显子C．1939G〉A错义突变和第20外显子C．2141delG移码突变的复合杂合突变可能是该CMD家系的致病原因,符合常染色体隐性遗传的规律,通过基因产前诊断可以有效阻止致病突变的传递。     

中国人并多指(趾)畸形家系中HOXD13基因突变及产前诊断

目的对中国山东一个并多指(趾)，又称Ⅱ型并指(趾)，畸形大家系进行致病基因突变的鉴定．确定中国人并多指(趾)畸形家系中是否存在HOXD13基因突变；通过检测突变HOXD13基因对高危胎儿进行产前基因诊断。方法根据家族史、临床体征和手足X线检查进行临床诊断；采集家系成员外周血标本及受检孕妇羊水和绒毛标本，常规提取基因组DNA；设计并合成1对特异引物，通过PCR扩增HOXD13基因第1外显子内多聚丙氨酸链编码序列；PCR扩增片段经琼脂糖凝胶电泳检测，异常扩增片段经TA克隆后测序鉴定；产前诊断中，通过PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检查HOXD13基因内及基因两侧共3个微卫星多态标记进行单体型分析。结果本家系4代54人，患者16人(男6人，女10人)；手足共同表现为：3／4完全并指伴软组织蹼内多指，4／5并趾伴软组织蹼内多趾．外显率为100％，表现度变异明显。上述表现符合典型常染色体显性并多指(趾)的表型特征。对家系中18人(患者9人)进行HOXD13基因分析，结果显示：全部患者多聚丙氨酸链中丙氨酸残基数由正常的15个延长为24个。通过HOXD13基因多聚丙氨酸链延展突变检测和单体型分析，对家系中1女性患者两次怀孕进行产前诊断，发现胎儿均携带突变HOXD13基因。结论首次在中国人典型并多指(趾)大家系中发现HOXD13基因多聚丙氨酸链延展突变；联合HOXD13基因多聚丙氨酸链延展突变检测和单体型分析，首次完成2例并多指(趾)胎儿的产前基因诊断。     

一个中国人并多指(趾)畸形家系中HOXD13基因突变的检测

目的 在一个中国汉族并多指(趾)畸形家系中检测HOXD13基因致病突变.方法 通过PCR扩增HOXD13基因外显子序列,对产物进行直接测序及TA克隆测序寻找致病突变.结果 在患者中发现HOXD13基因外显子1的5'末端丙氨酸重复区内,具有27bp的不完全三核苷酸重复的插入突变,使其多聚丙氨酸链延长了9个丙氨酸残基.结论 HOXD13基因内9个丙氨酸残基的延展突变为该家系的致病突变.     

一个中国人并多指(趾)畸形家系中HOXD13基因突变的检测

目的 在一个中国汉族并多指(趾)畸形家系中检测HOXD13基因致病突变.方法 通过PCR扩增HOXD13基因外显子序列,对产物进行直接测序及TA克隆测序寻找致病突变.结果 在患者中发现HOXD13基因外显子1的5'末端丙氨酸重复区内,具有27bp的不完全三核苷酸重复的插入突变,使其多聚丙氨酸链延长了9个丙氨酸残基.结论 HOXD13基因内9个丙氨酸残基的延展突变为该家系的致病突变.     

一个中国人并多指(趾)畸形家系中HOXD13基因突变的检测

目的 在一个中国汉族并多指(趾)畸形家系中检测HOXD13基因致病突变.方法 通过PCR扩增HOXD13基因外显子序列,对产物进行直接测序及TA克隆测序寻找致病突变.结果 在患者中发现HOXD13基因外显子1的5'末端丙氨酸重复区内,具有27bp的不完全三核苷酸重复的插入突变,使其多聚丙氨酸链延长了9个丙氨酸残基.结论 HOXD13基因内9个丙氨酸残基的延展突变为该家系的致病突变.     

一个中国人并多指(趾)畸形家系中HOXD13基因突变的检测

目的 在一个中国汉族并多指(趾)畸形家系中检测HOXD13基因致病突变.方法 通过PCR扩增HOXD13基因外显子序列,对产物进行直接测序及TA克隆测序寻找致病突变.结果 在患者中发现HOXD13基因外显子1的5'末端丙氨酸重复区内,具有27bp的不完全三核苷酸重复的插入突变,使其多聚丙氨酸链延长了9个丙氨酸残基.结论 HOXD13基因内9个丙氨酸残基的延展突变为该家系的致病突变.     

一个中国人并多指(趾)畸形家系中HOXD13基因突变的检测

目的 在一个中国汉族并多指(趾)畸形家系中检测HOXD13基因致病突变.方法 通过PCR扩增HOXD13基因外显子序列,对产物进行直接测序及TA克隆测序寻找致病突变.结果 在患者中发现HOXD13基因外显子1的5'末端丙氨酸重复区内,具有27bp的不完全三核苷酸重复的插入突变,使其多聚丙氨酸链延长了9个丙氨酸残基.结论 HOXD13基因内9个丙氨酸残基的延展突变为该家系的致病突变.     

一个中国人并多指(趾)畸形家系中HOXD13基因突变的检测

目的 在一个中国汉族并多指(趾)畸形家系中检测HOXD13基因致病突变.方法 通过PCR扩增HOXD13基因外显子序列,对产物进行直接测序及TA克隆测序寻找致病突变.结果 在患者中发现HOXD13基因外显子1的5'末端丙氨酸重复区内,具有27bp的不完全三核苷酸重复的插入突变,使其多聚丙氨酸链延长了9个丙氨酸残基.结论 HOXD13基因内9个丙氨酸残基的延展突变为该家系的致病突变.