应用DNA PCR法扩增检测苯丙酮尿症基因突变

DNA体外扩增是近年来分子遗传学与分子生物学发展起来的高效DNA分析技术．多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是在一个简单的试管体系中，利用人工合成的与特异突变点两侧DNA序列互补的两寡核苷酸引物，通过DNA变性、退火、引物延冲反应这样数十个循环后，目的区域的DNA可扩增百万倍，从而提高了DNA分析的灵敏度，     

非经典型苯丙酮尿症的基因突变检测

为探讨非经典型苯丙酮尿症的基因突变特征，应用高效液相层折法技术、反转录－聚合酶链反应和ｃＤＮＡ序列分析等方法，对２例６－丙酮酰－四氢生物喋呤合成酶（６－ｐｙｒｕｖｏｙｌｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｂｉｏｐｔｅｒｉｎｓｙｎｔｈａｓｅ，ＰＴＰＳ）缺陷症患儿及其家系进行了基因分析。其结果发现２个基因突变位点，分别为第１５５Ａ→Ｇ突变和第２５９Ｃ→Ｔ突变。为早期诊断ＰＫＵ患儿提供了依据。     

高分辨率熔解曲线分析技术检测苯丙酮尿症患者的苯丙氨酸羟化酶基因突变

目的 应用高分辨率熔解曲线（HRM）分析技术检测苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变.方法 利用PCR扩增13例苯丙酮尿症（PKU）患者的苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因第6、7、11及12外显子,然后对PCR产物进行HRM分析,通过DNA测序对HRM结果进行验证.结果 在13例PKU患者的26个PAH等位基因中共检测出5种不同突变基因,总检出率为38.5％.常见的突变类型是R243Q和A434D.检测出两种多态性位点为Q232Q和V245V.HRM分析结果与测序结果完全一致.结论 HRM技术具有简单、快速、易操作、准确等优点,可用于PKU患者PAH基因突变筛查.     

二代测序技术检测伴神经内分泌分化乳腺癌的基因突变

目的探讨高通量测序技术在伴神经内分泌分化乳腺癌(breast carcinomas with neuroendocrine differentiation,BCND)分子遗传学中的应用,提高对该肿瘤生物学特性的认识水平。方法使用二代测序(next-generation sequencing,NGS)技术对20例BCND的石蜡包埋组织进行基因突变检测。使用Sanger测序对NGS检测的阳性结果进行验证,并通过qPCR检测对肿瘤中KRAS、PIK3CA、EGFR、BRAF和NRAS基因突变进行对比分析。结果 NGS和qPCR检测发现2例BCND分别存在PIK3CA、H1047R和E542K突变,其中H1047R突变也通过Sanger测序证实。2例PIK3CA突变肿瘤HER-2均阳性。结论高通量NGS技术可用于BCND石蜡标本的基因突变检测,BCND具有不同于非特殊型浸润性乳腺癌的基因突变谱,其PIK3CA突变可能与HER-2阳性相关。     

应用二代测序对成骨不全家系进行基因突变检测和产前诊断

目的应用全外显子测序技术对一个成骨不全(Osteogenesisimperfect,OI)家系进行分子遗传学检测,确定致病基因,实现该家系的基因诊断及产前诊断。方法对1个成骨不全家系先证者进行全外显子检测,采用生物信息软件对变异位点进行过滤和注释,利用SIFT和Polyphen-2软件对突变位点进行致病分析,预测致病性,结合临床特征,确定患者的致病突变。对先证者及家系其他成员进行Sanger测序验证。抽取脐血,进行产前基因诊断,采用STR法,进行母血污染鉴定,避免因母血污染而导致的误诊。结果通过数据的对比过滤,最终选定COL1A2基因的杂合突变c.4048GA(p.Gly1350Ser)为可疑致病突变,经SIFT和Polyphen-2预测,该突变位点为有害。经Sanger测序证实,该家系的患者均携带该突变位点,家系中正常成员则无此突变。对脐血进行检测,胎儿亦携带该突变位点。结论应用全外显子测序技术对成骨不全家系进行诊断,明确了该家系的基因致病位点,有助于家系的遗传咨询及产前诊断。本研究结果也进一步丰富了COL1A2的突变谱。     

二代测序技术检测650例非小细胞肺癌驱动基因突变

目的 探讨驱动基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的突变情况.方法 采用二代测序(next-generation sequencing,NGS)靶向检测,分析650例NSCLC组织中ALK、BCL2L11、BRAF、EGFR、ERBB2、FGFR、KRAS、MAP2K...     

河南省苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变的构成

目的 了解河南省苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因突变的特点,为临床遗传咨询、基因诊断及产前诊断提供科学依据.方法 应用聚合酶链反应和DNA正反测序技术对34例经典型PKU患者的PAH基因全部13个外显子及两侧部分内含子进行鉴定分析.结果 34例患者共68个PAH等位基因中共检出23种致病突变(包括错义突变12种、无义突变4种、剪接突变4种和缺失3种)和9种其它基因变异.致病基因突变的总检出率为92.65%(63/68).第7外显子的基因突变种类最多,其次是第5外显于和第11外显子.检索PAH基因突变数据库和查阅相关文献,确定有2种突变[A156P和P69_S70delinsP(delCTT)]国际上未见报道,4种突变(IVS2+5G＞C、G332E、IVS10-14C＞G、L367＞Wfs)国内未见报道.结论 河南省PKU患者PAH基因的突变构成及频率与中国其它地区人群稍有不同.     

应用高分辨熔解曲线技术检测经典型苯丙酮尿症患者PAH基因第7外显子基因突变

目的 建立操作简便、快速,使用成本低,结果准确的鉴定PAH基因第7外显子c.728G>A突变热点的基因诊断方法.方法 应用高分辨熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术,对山西省临床确诊的88例经典型苯丙酮尿症患儿第7外显子c.728G>A突变热点进行检测,并将检测结果进行测序验证.结果 受检患儿PAH基因第7外显子c.728G>A突变位点HRM技术检测结果和测序结果完全相符.结论 高分辨熔解曲线技术操作简便、快速,使用成本低,结果准确,可作为PAH基因第7外显子热点突变的快速、灵敏检测方法.     

甘肃地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变分析

.2%),IVS4-1G>A(5.2%),较常见的突变有Y356X(3.4%),R111X(3.4%),INS7+2T>A(3.4%).结论 甘肃地区PAH基因突变与中国其他地区相似,但部分突变基因比例存在明显的差异.     

河南地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变研究

Objective To study the characteristics of the phenylalanine hydroxylase gene (PAH)mutations in patients with phenylketonuria (PKU) in Henan province, in order to provide basic information for genetic counseling and prenatal diagnosis. Methods Mutations of the PAH gene were detected in exons 1-13 with flanking introns of PAH gene by PCR and DNA sequencing in 47 families with PKU. Results A total of 25 different mutations were detected in 83 out of 94 PAH alleles (88. 3%). Among them,E79fX13, H271R and D415Y have not been reported previously. It was the first time that IVS10-14C＞Gmutation was reported in Chinese PKU population. The mutations p. R243Q, EX6-96A＞G, p. Y356X,IVS4-1G＞A, p. R111X, p. V399V and p. R413P, were the prevalent mutations with relative frequencies of 20. 5 %, 12.0%, 9.6%, 9. 6%, 8. 4%, 8. 4% and 7.2% respectively. Conclusion The mutations of the PAH gene in patients with classical phenylketonuria in Henan province were similar to that in other areas of China. Prenatal gene diagnosis for PKU by PAH gene sequencing is efficient for most PKU families.     

河南地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变研究

Objective To study the characteristics of the phenylalanine hydroxylase gene (PAH)mutations in patients with phenylketonuria (PKU) in Henan province, in order to provide basic information for genetic counseling and prenatal diagnosis. Methods Mutations of the PAH gene were detected in exons 1-13 with flanking introns of PAH gene by PCR and DNA sequencing in 47 families with PKU. Results A total of 25 different mutations were detected in 83 out of 94 PAH alleles (88. 3%). Among them,E79fX13, H271R and D415Y have not been reported previously. It was the first time that IVS10-14C＞Gmutation was reported in Chinese PKU population. The mutations p. R243Q, EX6-96A＞G, p. Y356X,IVS4-1G＞A, p. R111X, p. V399V and p. R413P, were the prevalent mutations with relative frequencies of 20. 5 %, 12.0%, 9.6%, 9. 6%, 8. 4%, 8. 4% and 7.2% respectively. Conclusion The mutations of the PAH gene in patients with classical phenylketonuria in Henan province were similar to that in other areas of China. Prenatal gene diagnosis for PKU by PAH gene sequencing is efficient for most PKU families.     

河南地区苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变研究

目的 了解河南地区苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因突变情况,以便为苯丙酮尿症产前诊断和遗传咨询提供理论依据.方法 应用PCR产物直接测序对47例PKU患者及其父母PAH基因第1～13外显子及其两侧内含子进行序列分析.结果 在94条染色体中共检测到了83个PAH基因突变位点,检出率为88.3%(83/94),共发现了25种突变,其中突变E79fX13、H271R和D415Y国内外未见报道,突变VS10-14C＞G为国内首次报道.河南地区PKU患者的PAH基因突变集中在第6、7和11外显子,常见的7种突变是p.R243Q(20.5%)、EX6-96A＞G(12.0%)、p.Y356X(9.6%)、VS4-1G＞A(9.6%)、p.R111X(8.4%)、p.V399V(8.4%)、p.R413P(7.2%).结论 河南地区PKU患者PAH基因突变与中国其他地区相似,通过PAH基因直接测序可对大部分的PKU家系进行产前诊断.

Abstract：

Objective To study the characteristics of the phenylalanine hydroxylase gene (PAH)mutations in patients with phenylketonuria (PKU) in Henan province, in order to provide basic information for genetic counseling and prenatal diagnosis. Methods Mutations of the PAH gene were detected in exons 1-13 with flanking introns of PAH gene by PCR and DNA sequencing in 47 families with PKU. Results A total of 25 different mutations were detected in 83 out of 94 PAH alleles (88. 3%). Among them,E79fX13, H271R and D415Y have not been reported previously. It was the first time that IVS10-14C＞Gmutation was reported in Chinese PKU population. The mutations p. R243Q, EX6-96A＞G, p. Y356X,IVS4-1G＞A, p. R111X, p. V399V and p. R413P, were the prevalent mutations with relative frequencies of 20. 5 %, 12.0%, 9.6%, 9. 6%, 8. 4%, 8. 4% and 7.2% respectively. Conclusion The mutations of the PAH gene in patients with classical phenylketonuria in Henan province were similar to that in other areas of China. Prenatal gene diagnosis for PKU by PAH gene sequencing is efficient for most PKU families.     

应用等位基因特异性扩增检测经典型苯丙酮尿症PAH基因第6外显子基因突变

目的建立快速简便、特异灵敏的鉴定PAH基因第6外显子c.611A〉G突变热点的基因诊断方法。方法针对突变频率较高的PAH基因第6外显子的突变热点c.611A〉G,设计等位基因特异性扩增（amplification refractory mutationsystem,ARMS）的特异引物,对山西省已经临床确诊的70例经典型PKU患儿、c.611A〉G突变患儿的家长及50例正常儿童进行第6外显子扩增,扩增产物测序验证。结果在受检的山西省患儿中,PAH基因第6外显子c.611A〉G突变位点ARMS检测结果和测序结果完全相符。结论 ARMS技术操作简便,重复性和稳定性好,可作为PAH基因热点突变的快速灵敏检测方法。     

双胞胎同时罹患苯丙酮尿症二例

病例：男女双胞胎于2008年11月21日在当地一家卫生院出生，足月。出生时体重：男2300g，女2050g，生后双胞胎无任何临床症状。当体重满2500g后，于2008年12月4日在出生单位采足跟血进行新生儿疾病筛查。     

苯丙酮尿症饮食治疗二例报告

苯丙酮尿症(pheylketonurie,PKU)系常染色体隐性遗传病,是由于苯丙氨酸羟化酶缺乏所引起的苯丙氨酸代谢异常综合症。未经治疗控制的PKU患者体内会蓄积过量的苯丙氮酸及其中间代谢产物,对大脑及生理功能产生直接毒性作用,给智能发育造成不可逆损害,严重者危及生命。PKU的治疗目前主要是通过改变饮食结构来控制苯丙氨酸的摄入量,这对患者家属来说是一件漫长而又难以把握的工作。虽然在苯丙酮尿症的治疗中,已有了商品化的特殊营养品,但是由于其价格昂贵,一般家庭难以接受。为配合患者亲属经济、方便地选择、搭配食物,有效限制苯丙氨酸的摄入,我们根据各类食物中苯丙氨酸含量的高低顺序制定了食物量表,     

山西省经典型苯丙酮尿症患者苯丙氨酸羟化酶基因突变研究

目的 探讨山西省经典型苯丙酮尿症(phenylketonuria,PKU)患者苯丙氨酸羟化酶(phenylalanine hydroxylase,PAH)基因第3、6、7、11和12外显子的突变特征.方法 通过测序及序列比对的方法对山西省59例经典型PKU患者和100名正常儿童PAH基因进行序列分析,以确定其突变位点、性质和突变频率.结果 通过序列分析,发现在患儿和正常儿童中均出现Q232Q(CAA→CAG)、V245V(GTG→GTA)和L385L(CTG→CTC)3种单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphism,SNP),其中患儿cDNA 696位点的SNP发生率高达96.2%,正常儿童的SNP发生率为97.0%;患儿cDNA 735位点的SNP发生率为76.1%,正常儿童的SNP发生率为77.3%;患儿cDNA1155位点的SNP发生率仅为7.6%,正常儿童SNP发生率为8.3%.正常儿童的其它序列与GenBank中序列比较的无差异.在患儿的基因序列中还发现了16种共计72个突变基因,占全部PAH突变基因的61.0%.第3外显子发现3种突变R111X、H64＞TfsX9和S70 del,突变频率分别为5.1%、0.8%、0.8%;第6外显子仅发现1种突变EX6-96A＞G,突变频率达10.2%;第7外显子中R243Q的突变频率最高,占12.7%,其次是Ivs7+2T＞A,占5.1%,T278I占2.5%,G247V、R252Q、L255S、R261Q、E280K均占0.8%;第11外显子中,Y356 X占5.9%,V399V占5.1%;第12外显子中,R413P占5.9%,A434D占2.5%.在16种突变中,有9种错义突变、3种剪接位点突变、2种无义突变及2种缺失,其中,H64＞TfsX9为本次研究新发现.结论 明确了山西省经典型PKU患者PAH基因第3、6、7、11和12外显子的突变种类和分布等特征,EX6-96A＞G、R243Q可能属于山西人群中PAH基因突变的热点.     

三代测序技术在染色体变异检测中的应用初探

目的:应用纳米孔三代测序技术检测人类染色体非整倍体样本,并探讨其性能及应用前景。方法:使用MinION三代测序仪对从分别携带X染色体单体和7q11.23-q21.3区22.5 Mb缺失的两种人类细胞系样本中提取的DNA进行检测,并对测序结果进行数据统计和序列分析。结果:两例样本在24小时内分别获得了555 872和2 ...     

新生儿苯丙酮尿症筛查

目的我省自1997～2004年开展新生儿苯丙酮尿症筛查(PKU) .方法细菌抑制法和化学荧光分析法进行新生儿苯丙酮尿症的筛查.结果筛查新生儿188 760例,查出PKU阳性患儿11例,其中细菌抑制法筛查149 901例,检出PKU 8例;化学荧光分析法新生儿PKU筛查38859例,检出PKU3例.结论必须加强全社会的保健预防知识宣传,提高广大群众,特别是孕产妇对新生儿疾病筛查重要性的认识,动员全社会关心和支持这项工作.     

苯丙酮尿症与新生儿筛查

苯丙酮尿症 (ｐｈｅｎｙｌｋｅｔｏｎｕｒｉａ ,ＰＫＵ)是一种较常见的先天性氨基酸代谢病 ,属单基因常染色体隐性遗传病。患儿由于肝细胞中苯丙氨酸 (以下简称Ｐｈｅ)羟化酶缺乏而导致高浓度的苯丙氨酸代谢产物 ,对大脑造成不可逆的损伤 ,如不及时治疗 ,将造成不可挽回的严重后果。由于其遗传异质性所造成的个体差异 ,许多患儿临床表现不典型 ,常造成误诊、漏诊严重 ,使患儿失去治疗机会 ,本文就此症及新生儿筛查作简要概述。1 ＰＫＵ的临床表现患儿出生时大多正常 ,早期症状无特殊性 ,可有呕吐、皮肤湿疹、易激惹和活动过度等表现 ;3- 4月…     

苯丙酮尿症的新生儿筛查

目的 总结苯丙酮尿症新生儿筛查和治疗经验。方法 新生儿出生后72小时采足跟血，滴在规定的滤纸上，采用细菌抑制法或荧光法测定Phe浓度，Phe大于切割值(＞0.12mmol／L)，召回病人再次复查滤纸血Phe，仍高者，做确诊检查，确诊后以饮食治疗并随访。结果 1997～2000年对湖南省部分地区新生儿46323例筛查，确诊PKU患儿l例，结论 新生儿筛查是PKU患儿早期诊治的唯一方法。筛查出的PKU患儿经饮食治疗后体格智力发育可达正常，治疗越早效果越好。PKU患儿的母亲，再次妊娠必须通过产前诊断，选择正常儿出生。建立质量保征体系是对PKU筛查结果的准确性的有效保障。对初筛查阳性者，应了解其出生史和疾病史，排除假阳性可能，以免造成家长过分精神紧张。