紫草素对人肝癌HepG2细胞顺铂增敏作用的研究

目的研究紫草素对人肝癌HepG2细胞顺铂增敏作用并初探其可能的作用机制。方法取对数生长期人肝癌HepG2细胞,设空白对照组、紫草素(0.5μg/ml)组、顺铂(40μg/ml)组和联合(紫草素0.5μg/ml+顺铂40μg/ml)组,均设10个复孔;检测细胞增殖抑制率,细胞周期和细胞凋亡状况,Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达,caspase-3蛋白表达。结果与顺铂组比较,联合干预组HepG2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G_0/G_1期显著延长,细胞凋亡率显著升高,Bax/bcl-2比值显著升高,caspase-3蛋白表达上调。结论紫草素具有提高人肝癌HepG2细胞顺铂敏感性的作用,其机制可能与紫草素阻滞细胞周期及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

番茄红素对人肝癌HepG2细胞生长的影响及其机制

目的:研究番茄红素(Lycopene,LP)对人肝癌Hep G2细胞生长的抑制作用及其机制。方法:体外培养并取对数生长期人肝癌Hep G2细胞,分别给予不同质量浓度LP(5、10、20μg·m L~(-1))和顺铂(40μg·mL~(-1))进行干预,48 h后通过MTT比色法测定细胞增殖抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用Western blotting技术检测Bax、bcl-2、Cleaved Caspase-3蛋白表达。结果:经LP或顺铂干预48 h能够有效提高人肝癌Hep G2细胞增殖抑制率,延长细胞周期G_0/G_1期并缩短G_2/M期,提高细胞凋亡率(Apoptosis Index,AI),上调Bax表达、下调bcl-2表达、提高Bax/bcl-2比值,上调Cleaved Caspase-3蛋白表达,LP上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:LP能够通过抑制细胞增殖并促进其凋亡而对人肝癌Hep G2细胞生长具有一定的抑制作用,其机制可能与LP能够影响细胞周期进程并调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

枸杞多糖对人肝癌细胞HepG2生长的影响及其分子机制

目的探讨枸杞多糖(Lycium barbarumpolysaccharides,LBP)对人肝癌细胞HepG2生长的影响及可能机制。方法人肝癌HepG2细胞用100~1 000 mg/L LBP处理1~5 d,分别用MTT方法、流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡。用Western blotting分析周期蛋白(cyclin)和周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependentkinase,CDK)表达的变化。结果 LBP以质量浓度依赖方式抑制肝癌细胞的生长,阻滞细胞在G0/G1期,并诱导细胞凋亡;其分子机制为引起cyclin Dc、yclin E和CDK2蛋白表达下降。结论 LBP抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制包括阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡。     

汉黄芩素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:探讨分析汉黄芩素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响。方法:以人肝癌HepG2细胞为研究对象,利用浓度为0、20、40、80、160μmol/L的汉黄芩素作用于人肝癌HepG2细胞,分析人肝癌HepG2细胞的存活情况。结果:汉黄芩素40、80、160浓度组的检测570 nm波长均高于黄芩素0μmol/L浓度组,差异具有统计学意义(P0.05);但汉黄芩素20浓度组与0浓度组对比,则无统计学意义(P0.05);汉黄芩素40、80、160μmol/L浓度组的抑制率均高于汉黄芩素0μmol/L浓度组,差异具有统计学意义(P0.05);但汉黄芩素20浓度组与0μmol/L浓度组对比,则无统计学意义(P0.05)。结论:汉黄芩素可有效抑制人肝癌HepG2细胞的增殖情况,具有明显的抗肿瘤效果。     

芹菜素对人肝癌HepG2细胞糖酵解的影响及体内实验研究

目的:探究芹菜素对人肝癌细胞(HepG2)体内、外糖酵解的影响及其作用机制。方法:体外采用溴脱氧尿苷(BrdU)掺入免疫荧光实验检测芹菜素对HepG2细胞增殖的影响;检测芹菜素对肿瘤细胞葡糖糖摄取和乳酸生成的影响;Western blot检测芹菜素对糖酵解相关蛋白-丙酮酸脱氢酶激酶1(PDHK1)、己糖激酶II(HKII)和乳酸脱氢酶A(LDHA)表达的影响;EMSA检测芹菜素对HepG2细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与DNA结合活性的影响;体内利用HepG2细胞裸鼠模型研究芹菜素对瘤体积、瘤重及瘤组织内糖酵解相关蛋白的影响。结果:在体外,芹菜素在20～80μmol/L可以浓度依赖性地抑制HepG2BrdU阳性细胞的比例(P0.01),抑制HepG2细胞葡糖糖摄取和乳酸生成(P0.01),同时降低糖酵解相关蛋白(PDHK1,HKII,LDHA)的表达(P0.01),并抑制HIF-1α与DNA结合活性(P0.01)。在体内,芹菜素在100、200、400 mg/kg可以抑制裸小鼠移植瘤的生长,抑瘤率分别为22.33%、37.32%和53.67%;芹菜素还可以降低瘤组织内糖酵解相关蛋白的表达。结论:芹菜素在体内外均可以抑制肝癌细胞的增殖和糖酵解,其机制可能是通过抑制HIF-1α与DNA结合活性而起作用的。     

白蔹药效成分没食子酸抑制人肝癌HepG2细胞生长及作用机制研究

目的:探讨从白蔹抗肿瘤活性部位分离得到的没食子酸对人肝癌HepG2细胞生长的影响及其作用机制。方法:用不同浓度的没食子酸处理HepG2细胞,MTT法测定没食子酸对HepG2细胞生长增殖的抑制活性;采用Hochest染色、荧光显微镜、Annexin V-FITC/PI双标记法和流式细胞术观察凋亡细胞的形态结构变化以及定性、定量检测细胞凋亡;采用JC-1染色检测HepG2细胞线粒体膜电位变化情况。结果:没食子酸在12.5～200 mg·L-1对HepG2细胞生长有明显抑制作用,且呈一定的浓度依赖性;没食子酸能诱导HepG2细胞凋亡,降低细胞线粒体的膜电位。结论:没食子酸为白蔹抗肿瘤主要活性成分之一,通过降低细胞线粒体的膜电位而诱导细胞凋亡为其抗肿瘤作用机制之一。     

田基黄对人肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的:探讨田基黄对人肝癌细胞增殖的影响。方法:体外培养人肝癌细胞株HepG2,用MTT法和流式细胞术(FCM)检测田基黄提取物及其含药血清作用于HepG2 24h后的细胞增殖情况。结果:MTT法结果表明,田基黄对HepG2增殖有抑制作用;FCM检测表明,田基黄阻止增殖中的HepG2进入S期。结论:田基黄能有效地抑制HepG2细胞增殖,提示阻滞细胞周期、抑制细胞增殖可能是田基黄治疗肝癌的一个机制。     

冬凌草甲素诱导HepG2肝癌细胞凋亡机制的研究

目的:研究冬凌草甲素(oridonin)诱导HepG2凋亡的分子机制。方法:MTT法、Hoechst33258荧光染色、流式细胞分析法和Western blot分析法。结果:冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生死亡呈时间和浓度依赖性,其作用24h的半数有效抑制浓度IC50=(29.7±1.5)μmol.L-1。Hoechst33258荧光染色证明冬凌草甲素诱导HepG2细胞发生了凋亡;30μmol.L-1冬凌草甲素作用于HepG2细胞使之产生大量的活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),p53抑制剂PFTα显著地抑制了ROS的产生,从而抑制了细胞凋亡的发生;在HepG2细胞中,30μmol.L-1冬凌草甲素促进了Bax的表达,抑制了Bcl-2的表达,同时线粒体下游蛋白caspase-9,-3的抑制剂明显地抑制了30μmol.L-1冬凌草甲素诱导的HepG2细胞凋亡。结论:冬凌草甲素通过p53蛋白诱导ROS的产生,从而导致HepG2细胞凋亡,除此之外冬凌草甲素还通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。     

紫花牡荆素对肝癌HepG2细胞侵袭迁移的影响及作用机制的实验研究

目的观察紫花牡荆素(Casticin)对肝癌HepG2细胞侵袭迁移的影响及作用机制。方法配置不同浓度Casticin,体外培养肝癌HepG2细胞系。通过CCK-8实验检测细胞活性,Transwell法检测细胞侵袭迁移能力,蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测细胞肿瘤转移相关基因MTA1、nm23-H1、ARHGAP9的蛋白表达水平。结果 Casticin可以显著抑制HepG2细胞的活性,并且呈剂量和时间依赖性;Casticin能够在不影响细胞活力的前提下显著抑制肝癌HepG2细胞的侵袭和迁移能力,并且呈剂量依赖性;Casticin能够显著减少促转移基因MTA1的蛋白表达水平,并且能增加抑转移基因nm23-H1和ARHGAP9的蛋白表达水平。结论 Casticin显著抑制肝癌HepG 2细胞的侵袭迁移,其作用机制可能与其能够抑制促转移基因MTA1蛋白的表达和促进抑转移基因nm23-H1、ARHGAP9蛋白的表达有关。     

松果菊苷对人肝癌细胞HepG2生长和缝隙连接细胞通讯的影响

目的观察松果菊苷(ECH)对人肝癌细胞Hep G2生长和缝隙连接细胞通讯(GJIC)的影响。方法 Alamar Blue法绘制Hep G2细胞生长曲线,并检测ECH的细胞毒作用;划痕标记染料示踪技术(SL/DT)法观察空白对照组、API阳性对照组、AGA阴性对照组和ECH组对GJIC的影响;异硫氰酸荧光素(FITC)间接免疫荧光法观察ECH对缝隙连接蛋白Cx43表达的影响。结果 Hep G2细胞在20 000个/m L的细胞密度Alamar Blue还原率与时间有线性关系。ECH(5、10、20、40和80μM)处理Hep G2细胞24 h,细胞存活率分别为(92.69±3.35)%、(88.33±2.12)%、(80.97±2.50)%、(76.95±1.40)%和(69.09±1.11)%(P0.01)。抑制率最高(80μM浓度下)为30.91%。IC50为467.8μM(368.3μg/m L)。SL/DT显示阳性对照芹黄素和ECH处理24 h后,荧光染料在划痕外4列细胞出现了明显荧光(++++),说明细胞出现染料传输的现象。间接免疫荧光法对Cx43表达进行计分,空白对照组细胞得分为(1.40±0.55)分,ECH组得分为(1.60±0.55)分。结果表明ECH组的Cx43表达增强不明显。结论 ECH对Hep G2细胞有细胞毒作用,同时可增强GJIC功能,但Cx43表达不明显,为ECH抗肿瘤机制提供依据。     

竹节香附素A对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用

目的探讨竹节香附素A对人肝癌细胞HepGz增殖的影响。方法将不同质量浓度的竹节香附素A与HepG。细胞共同培养,采用MTT比色法及细胞集落形成法检测竹节香附素A对HepG。细胞生长、增殖的影响。结果竹节香附素A对HepG2细胞生长的IC50为8．94μg／mL。与未处理组相比,5、10、20、40μg／mL的竹节香附素A分别与HepG2细胞共同培养72h,在培养24h时的细胞增殖抑制率分别为：（24．81±0．55）％、（39．17±1．30）％、（62．45±7．56）％、（79．93±5．48）％,在培养48h时的抑制率为（35．67±0．81）%、（49．73土9．18）％、（71．62±1．03）％、（87．06±1．84）%,在培养72h时的抑制率为（42．52±1．31）％、（59．75±7．47）％、（78．85土3．15）％、（91．36±0．84）％;顺铂对照组在细胞培养24、48、72h的抑制率分别为（2．60±0．53）％、（60．55±5．66）％、（82．61±8．95）％。竹节香附素A各剂量的作用与未处理组相比,在各时间点均有显著差异（P〈0．001）;与顺铂相比,竹节香附索A起效更快,24h检测具有显著差异（P〈0．001）;5、10、20μg／mL剂量在24h以外的时间点与顺铂相比无差异,40μg／mL剂量在各时间点对HepG2细胞的抑制作用仍较顺铂的作用强（P〈0．01）。集落形成实验显示,对照组的集落形成率为45．47％;而竹节香附素A1．25、2．5、5μg／mL3个剂量组仅分别为15．73％、7．2％、3．33％,即集落形成抑制率分别为（66．75±1．66）%、（84．25土3．11）％、（92．55±2．33）％,与对照组相比有显著差异（P〈0．001）。结论竹节香附素A对HepG：细胞增殖有明显抑制作用,在一定范围内随着试药质量浓度的升高和作用时间的延长而增强。     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制研究

目的 研究氯化两面针碱(NC)在体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用与机制.方法 通过MTT法测定NC细胞毒作用,光镜及吖啶橙染色观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳法、流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期.结果 NC作用于细胞后,呈浓度依赖性抑制HepG2细胞的生长,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为(3.52±0.23) μmol/L;吖啶橙荧光染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA lader NC各剂量组(0.75,1.5,3 μmol/L)对细胞周期的影响表现为G2/M期阻滞,作用肝癌HepG2细胞24 h后的凋亡指数分别为(17±1.23)％、(25.2±3.52)％、(35.9±3.19)％,明显高于生理盐水(NS)对照组(0.29±0.1 1)％.结论 NC对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,NC抗肿瘤作用的机理可能是:阻滞细胞于G2/M期,诱导肿瘤细胞凋亡.     

去甲斑蝥素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的：探讨去甲斑蝥素对HepG2细胞凋亡的影响。方法：采用形态学观察和流式细胞分析技术。结果：去甲斑蝥素作用HepG2细胞后,凋亡小体形成,凋亡率增加。结论：去甲斑蝥素诱导HepG2细胞凋亡。     

南蛇藤对人肝癌HepG2细胞侵袭能力的影响

目的:研究南蛇藤乙酸乙酯提取物(Celastrus orbiculatus extracts,COE)对人肝癌HepG2细胞侵袭能力的影响。方法:不同浓度COE(20、40、80、160、320μg/ml)处理人肝癌HepG2细胞24 h后,用MTT法检测细胞毒作用;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力;Western blot法检测人肝癌HepG2细胞蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,又名Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)、NF-κBp65、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinases2,MMP-2)、MMP-9蛋白的表达水平。结果:COE(20、40、80、160、320μg/ml)能显著抑制人肝癌HepG2细胞的增殖能力,呈明显的剂量依赖性;COE(20、40、80μg/ml)能降低人肝癌HepG2细胞的穿膜细胞数;COE(20、40、80、160μg/ml)下调人肝癌HepG2细胞中p-Akt、NF-κBp65、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平。结论:COE能抑制人肝癌HepG2细胞侵袭能力,其机制可能与下调p-AKT、NF-κBp65、MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。     

半枝莲对人肝癌细胞株HepG2细胞黏附的影响

目的观察半枝莲对人肝癌细胞株HepG2细胞黏附的影响,探讨其抑瘤机制。方法 40只Wistar大鼠随机分为空白组及半枝莲小、中、大剂量组,分别早晚灌胃给药,半枝莲小、中、大剂量组给药量分别为0.75、1.50、3.00 g/mL,空白组给予等量生理盐水,连续4 d,第5日取血,分离血清,分别作用于等量HepG2细胞,MTT法检测各组细胞黏附情况。结果半枝莲组与空白组相比,能明显抑制HepG2细胞的黏附（P〈0.05）,呈明显的量效关系。结论半枝莲可能通过抑制肿瘤细胞的黏附来发挥抗肿瘤的作用。     

仙鹤草对人肝癌HepG2细胞凋亡作用研究

目的：探讨仙鹤草丙酮提取物正丁醇层对肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法：以不同浓度的仙鹤草丙酮提取物正丁醇层作用于体外培养的HepG2细胞,MTY法检测细胞生长抑制率,应用FCM检测细胞凋亡率。应用FCM检测细胞内活性氧的变化。结果：仙鹤草可显著抑制HepG2细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。结论：仙鹤草丙酮提取物正丁醇层能诱导细胞发生凋亡;细胞内活性氧的增加可能是其作用机制。     

青蒿琥酯抑制人肝癌细胞株HepG2细胞生长及其机制的初步研究

目的：研究青蒿琥酯对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖和survivin表达的影响,探讨青蒿琥酯影响肝癌细胞增殖的可能机制.方法：常规培养人肝癌细胞株HepG2,设立空白对照组;青蒿琥酯不同浓度组（3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、50μg/ml）,作用不同时间后用MTT法检测青蒿琥酯对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响,应用RT-PCR检测细胞survivin在mRNA水平的表达.结果：青蒿琥酯作用人肝癌细胞株HepG2后,与对照组比较细胞生长明显受到抑制（P〈0.05）,当青蒿琥酯浓度在12.5μg/ml时,survivin的表达（相对表达量为（0.75＋0.01）显著降低（P〈0.05）.结论：青蒿琥酯可通过下调survivin的表达来抑制肝癌细胞HepG2的生长.     

紫草素对荷肝癌裸小鼠移植瘤生长的影响及其机制研究

目的:研究紫草素(Shikonin)对荷肝癌裸小鼠移植瘤生长的影响,并探讨其机制。方法:采用皮下注射接种肝癌HepG2细胞的方法建立荷肝癌裸小鼠模型,分别腹腔注射给予不同剂量紫草素(0.5、1、2 mg/kg)和顺铂(2 mg/kg)进行干预治疗,隔天一次,共给药6次。治疗完成后,观察各组裸小鼠一般生存状态及肿瘤生长状况,称取瘤体质量并计算抑瘤率;通过苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤组织形态结构改变,末端标记法(TUNEL)检测肿瘤组织细胞凋亡状况,免疫组织化学法(IHC)观察肿瘤组织凋亡相关蛋白(caspase-3、Bax、bcl-2)表达。结果:经紫草素治疗后荷肝癌裸小鼠饮食状况和精神状态明显改善,瘤体减小、活动度和硬度降低,肿瘤组织呈现细胞皱缩、片状坏死等病理性改变、凋亡细胞数量明显增多;瘤体质量显著减轻、抑瘤率显著升高;肿瘤组织中caspase-3和Bax表达显著上调而bcl-2显著下调,Bax/bcl-2比值显著升高;紫草素上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:紫草素对荷肝癌裸小鼠移植瘤生长具有一定的抑制作用,其机制可能与紫草素调节凋亡相关基因蛋白表达而促进肿瘤组织细胞凋亡有关。     

莪术醇抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制

目的:探讨莪术醇在体外对人肝癌HepG2细胞的增殖和细胞周期的影响及其分子机制.方法:体外培养HepG2细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察莪术醇对HepG2细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析莪术醇处理后HepG2细胞的周期分布,TaqMan探针实时荧光定量PCR法及Western印迹检测细胞周期调控相关基因的表达水平.结果:莪术醇对HepG2细胞的增殖具有明显抑制作用,且在一定范围内(2.5～10mg·L-1)呈浓度和时间依赖性;莪术醇诱导HepG2细胞发生G1期阻滞,伴随cyclin D1,CDK2,CDK8,pRB1,p27KIPl mRNA表达水平增高,而cyclin A1的水平则下调,cyclin E1和CDK4的表达不受影响,p53及其下游调控蛋白p21WAF1和Wip1表达水平增高.结论:莪术醇诱导人肝癌HepG2细胞G1期阻滞、抑制细胞增殖,其作用可能通过激活p53与pRB通路,抑制cyclin A1基因的表达和上调p21 WAF1,p27KIP1以及CDK8基因的表达而实现的.     

水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞体外抑制作用研究

目的研究水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用。方法以液氮快速冻融法制备水蛭提取物,以常规水提醇沉法水蛭提取物作对照,不同浓度体外干预人肝癌HepG2细胞,MTT法检测两种水蛭提取物对HepG2细胞增殖的抑制作用,并进行细胞计数,吖啶橙荧光染色法检测细胞凋亡情况。结果水蛭液氮快速冻融法提取物药物浓度为6-15mg／mL时,对人肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,细胞数目明显下降,并呈剂量依赖性,与水提醇沉法提取物比较,差异有统计学意义（P〈0．01）。吖啶橙染色可见典型的凋亡细胞形态学特征。结论水蛭液氮快速冻融法提取物可体外抑制HepG2细胞的增殖并诱导凋亡,其作用明显优于水蛭水提醇沉法提取物。