参竹心康汤对慢性心衰大鼠心肌纤维化及TGF-β_1、CTGF表达的影响

目的:观察参竹心康汤对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化以及心肌TGF-β1、CTGF表达的影响,探讨该方抑制心肌纤维化,改善心室重构的可能作用机制。方法:SD大鼠72只随机分为6组:假手术组,模型组,卡托普利组,参竹心康汤低、中、高剂量组,每组12只。采用腹主动脉缩窄法制作心衰大鼠模型。于造模成功后,假手术组、模型组以蒸馏水10 m L/kg灌胃;卡托普利组以卡托普利混悬液7.8 mg/kg灌胃,低剂量组、中剂量组、高剂量组分别以中药煎液(含生药4.5 g/m L)11、22、44 g/kg灌胃,均为每日1次,连续给药8周。放射免疫法检测大鼠血浆血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)水平、碱水解法检测心肌组织羟脯氨酸(HYP)含量,以Masson染色后图像分析测量心肌胶原容积分数(CVF)、心肌血管周围胶原面积和管腔面积比例(PVCA),免疫组化法检测心肌TGF-β1、CTGF的表达。结果:模型组AngⅡ与HYP水平、CVF与PVCA、TGF-β1与CTGF蛋白光密度值明显高于假手术组;卡托普利组、中剂量组、高剂量组上述指标均明显低于模型组与低剂量组;而低剂量组上述指标亦低于模型组。结论:TGF-β1、CTGF参与心衰大鼠心肌纤维化的发病;参竹心康汤可抑制慢性心衰大鼠心肌纤维化、改善心室重构,与该方降低心肌TGF-β1及CTGF表达有关。     

麝香保心丸对糖尿病大鼠心肌纤维化的影响

目的:探讨麝香保心丸对糖尿病(DM)大鼠心肌纤维化的影响。方法 :40只SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组、麝香保心丸(50mg/kg、100mg/kg),每组10只,给药12周后称量体重及全心、左室重量,计算心体比(H/B)和左室重量指数(LVMI);Masson染色测量心肌间质胶原容积分数(CVF);电镜观察心肌细胞超微结构;放射免疫法测定心肌局部血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的浓度;免疫组化法测定转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果:糖尿病模型组H/B、LVMI增高;心肌间质CVF增高;心肌纤维排列紊乱,线粒体肿胀,堆积。TGF-β1的表达、AngⅡ的浓度明显上调。麝香保心丸(50mg/kg、100mg/kg)上述趋势均明显好转,并且具有剂量依赖性,高剂量组改变更明显。结论:麝香保心丸可以抑制糖尿病大鼠心肌纤维化,机制可能与降低TGF-β1、AngⅡ的表达有关。     

黄芪后处理对大鼠肝纤维化中的影响及TGF-β1/Smad2、p38MAPK 作用

目的：研究黄芪对CCl4 诱导的大鼠肝纤维化肝组织中TGF-β1、Smad2 和p38MAPK 表达的影响,探讨TGF-茁信号通路在黄芪后处理中可能的抗纤维化机制。方法：60 只Wistar 大鼠被随机分成对照组、模型组、黄芪后处理组及鳖甲软肝片组,其中黄芪后处理组又分为小剂量组、常规剂量组和大剂量组,大鼠背部皮下注射CCl4 构建肝纤维化模型,分别用HE 和VG 染色法染色,肝纤维化程度直接在光学显微镜下观测。同时采用SABC 免疫组化方法检测各实验组TGF-β1、Smad2 和p38MAPK 的表达情况。结果：与对照组比较,模型组TGF-β1、Smad2 表达明显增强（P < 0.05）,而p38MAPK 表达显著下降（P <0.05）。与模型组比较,黄芪后处理各组中大鼠肝组织中TGF-β1 表达均有减弱（P < 0.05）,且随着黄芪剂量的增加而减少;随着黄芪剂量增加逐步下调Smad2 的表达（P < 0.05）、上调p38MAPK 的表达（P <0.05）。此外,黄芪组大鼠肝脏病理变化显著改善。结论：黄芪后处理明显影响大鼠肝组织TGF-β1 信号表达,且对CCl4 诱导的大鼠肝纤维化的作用呈剂量依赖性增强,其可能的机制为负性调节TGF-β1,减少Smad2 及增强p38MAPK 的表达。     

五味子乙素对AngⅡ诱导心肌纤维化中AkT、mTOR、TGF-β1表达的影响

目的探讨五味子乙素对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌纤维化中AkT、mTOR、TGF-β1表达的影响。方法胶原酶与差速贴壁法分离培养乳鼠心肌成纤维细胞后,将细胞随机分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+五味子乙素低剂量组(2.5×10~(-5) mol/L)、AngⅡ+五味子乙素高剂量组(7.5×10~(-5) mol/L)、AngⅡ+雷帕霉素组。然后,Western blot检测蛋白激酶B(AkT)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)蛋白表达。结果与对照组比较,AngⅡ显著刺激心肌成纤维细胞下调p-AkT蛋白表达,上调p-mTOR、TGF-β1、CollagenⅠ蛋白表达(P0.05);与AngⅡ组比较,AngⅡ+五味子乙素组显著下调p-mTOR、TGF-β1、CollagenⅠ蛋白表达,上调p-AkT蛋白表达(P0.05)。结论五味子乙素可通过促进AkT磷酸化,抑制p-mTOR、TGF-β1蛋白表达,减少CollagenⅠ合成来改善AngⅡ诱导心肌纤维化。     

黄芪甲苷对复合水饮内停大鼠心脏功能的影响

目的:探讨黄芪甲苷对水饮内停大鼠心脏功能的改善作用。方法:SD大鼠采用肩胛区皮下注射异丙肾上腺素(ISO)加气管置管复合干预因素建立上焦水饮内停大鼠模型,建模成功后随机分为模型组、黄芪甲苷低、中、高剂量组及阳性药组(芪苈强心胶囊),另设立正常组作为对照,每组10只大鼠。分别给予等体积羧甲基纤维素钠(0.5%),黄芪甲苷(20,40,80 mg·kg~(-1)·d~(-1)),芪苈强心胶囊(1 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃,持续给药2周,通过大鼠体重(BW),心重指数(HWI),左心室质量指数(LVWI)观察心肌肥厚程度;苏木素-伊红(HE)染色法和胶原容积分数(CVF)观察心脏组织形态学改变;大鼠超声心动图检测左心室射血分数(LVEF)及左心室短轴缩短分数(LVFS)改变;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血浆肌酸激酶(CK)的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠BW显著降低(P0.01),HWI和LVWI显著增高(P0.01),心肌肥厚较为明显,LVEF,LVFS显著降低(P0.01),心肌CVF及血浆CK明显增高(P0.05,P0.01),心肌病理损伤较为明显;给药干预后,黄芪甲苷(40,80 mg·kg~(-1)·d~(-1))剂量组大鼠BW明显增高(P0.05),HWI,LVWI明显升高降低(P0.05,P0.01),可以有效缓解心肌肥厚,且升高模型大鼠的LVEF及LVFS(P0.05),改善心脏功能,模型大鼠的CK,CVF明显降低(P0.05),减轻心肌病理损伤。结论:黄芪甲苷可以通过抑制上焦水饮内停大鼠心肌纤维化、降低左室厚度、改善血流动力学等方面发挥保护心脏的作用。     

黄芪甲苷通过AMPK/mTOR信号通路改善STZ诱导的糖尿病大鼠的心肌损害

目的:通过在体实验的研究,探讨黄芪甲苷通过AMPK/mTOR通路对STZ诱导的糖尿病大鼠的影响。方法:48只雄性SD大鼠随机分为六组,每组8只:正常对照组、糖尿病模型组、厄贝沙坦组(50 mg/kg)、黄芪甲苷20 mg/kg、40 mg/kg、80 mg/kg组。模型组、厄贝沙坦及黄芪甲苷各组一次性大剂量腹腔注射链脲佐菌素50 mg/kg,随机血糖≥15 mmol/L视为造模成功。各组灌胃给药12周,葡萄糖氧化酶法测定血清中血糖浓度;试剂盒测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;称重法检测全心重量指数(HWI)和左心重量指数(LVWI);苏木精-伊红(HE)染色观察心肌细胞排列及形态;免疫组化法观察心肌中pmTOR的表达;取左心室组织提取蛋白,Western Blot测AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、ANP、BNP蛋白的表达;RT-PCR测定ANP mRNA的表达。结果:在糖尿病模型组中,血糖、心肌酶学指标、HWI、LVWI明显增加,心肌细胞排列紊乱,细胞表面积明显增大,pAMPK/AMPK明显减低,p-mTOR/mTOR明显增加,ANP及BNP的蛋白表达以及ANP mRNA表达都明显升高;与模型组相比,厄贝沙坦组及黄芪甲苷各组的血糖、天门冬氨酸氨基转移酶活性明显减低,厄贝沙坦组、黄芪甲苷40 mg/kg、80 mg/kg组的乳酸脱氢酶活性、HWI、LVWI减低,厄贝沙坦及黄芪甲苷各组的细胞排列整齐,细胞表面积减低,p-AMPK/AMPK明显增加,p-mTOR/mTOR明显降低,ANP及BNP的蛋白表达以及ANP mRNA表达明显减低,黄芪甲苷不同剂量组呈剂量依赖性。结论:黄芪甲苷可以明显改善STZ诱导的糖尿病大鼠的心肌肥厚,其机制可能与AMPK/mTOR通路的介导有关。     

参附芎泽方对压力超负荷大鼠心肌TGF-β1、CTGF表达的影响

目的探讨参附芎泽方对压力超负荷大鼠心肌纤维化的干预作用。方法 SD大鼠随机分成假手术组、模型组、方药组,每组10只。采用腹主动脉缩窄术建立压力超负荷大鼠心肌纤维化模型。假手术组和模型组给予纯净水,方药组给予参附芎泽方(含生药量6.4g/kg)相应的等体积药液。以20ml/kg的容积灌胃,一日1次,连续8周。ELISA法检测血清TNF-α、AngⅡ含量;Western blot检测转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达;HE染色观察心肌组织的病理变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清TNF-α、AngⅡ含量增高,心肌组织中TGF-β1与CTGF表达增多,差异有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,参附芎泽方药组血清TNF-α、AngⅡ含量降低,心肌组织TGF-β1与CTGF表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。HE染色模型组心肌纤维可见明显断裂、部分溶解,排列紊乱,大量结缔组织增生。而方药组心肌纤维排列较为整齐,心肌细胞轻度肿大。结论参附芎泽方可通过降低血清TNF-α、AngⅡ含量,抑制心肌组织TGF-β1和CTGF的表达等途径干预心肌纤维化进程。     

丹参酮ⅡA 对压力负荷增加大鼠心室胶原重构的影响

目的：观察丹参酮ⅡA对压力负荷增加大鼠心室胶原重构的影响。方法采用腹主动脉缩窄术制备压力负荷增加大鼠模型,动脉夹闭（其中8只大鼠不结扎腹主动脉,为假手术组）4周后,分为5组：假手术组、模型组、丹参酮ⅡA低剂量组[10 mg／（kg· d）]、丹参酮ⅡA高剂量组[20 mg／（kg· d）]及卡托普利组[100 mg／（kg· d）]组,每组各8只,各组均予相应药液腹腔注射（卡托普利组为灌胃给药）,连续给药4周后检测各组大鼠心脏质量指数（HWI）和左心室质量指数（LVWI）,苏木精—伊红（HE）染色法观察左心室心肌病理学改变,Masson染色法观察左心室心肌胶原形态,化学比色法测定心肌羟脯氨酸（ HYP）含量。结果与假手术组比较,模型组大鼠HWI、LVWI、心肌组织HYP含量均明显升高（P＜0．05,P＜0．01）,心肌有不同程度的损害;与模型组比较,卡托普利组、丹参酮ⅡA高剂量组及丹参酮ⅡA低剂量组HWI、LVWI及HYP均明显下降（P＜0．01,P＜0．05）,心肌损害均有不同程度改善。结论丹参酮ⅡA能够抑制压力负荷增加大鼠心肌胶原沉积和心肌HYP的表达,在一定程度可改善心室胶原重构。     

自拟黄芪通络强心汤对冠心病血瘀证再灌注损伤模型大鼠实验研究

目的:分析自拟黄芪通络强心汤对冠心病血瘀证再灌注损伤模型大鼠心肌保护作用及相关机制。方法:选取SPF级Wistar雄性大鼠60只,随机数字表法将大鼠分成4组,分别是模型组、正常组、阳性对照组与自拟黄芪通络强心汤组,每组各15只,除正常组外,其他3组大鼠制备心肌缺血血瘀证再灌注损伤模型,成功造模后阳性对照组大鼠灌胃0.10g/kg的复发丹参滴丸,自拟黄芪通络强心汤组灌胃6.8g/kg的自拟黄芪通络强心汤药液,模型组和正常组大鼠灌胃等剂量生理盐水,1次/d,持续给药14d。观察各组大鼠心律失常出现情况,检测心脏组织缝隙连接蛋白(Cx43)、血管紧张素Ⅱ1型受体(AT-1R)及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) mRNA相对表达量和心肌组织Cx43、AT-1R蛋白表达状况。结果:和模型组相比,阳性对照组、自拟黄芪通络强心汤组大鼠心律率降低,差异有统计学意义(P0.05);和正常组相比,模型组大鼠心脏组织内AT-1R、AngⅡmRNA相对表达量升高,Cx43mRNA相对表达量降低;和模型组相比,阳性对照组、自拟黄芪通络强心汤组大鼠心脏组织内AT-1R、AngⅡmRNA相对表达量降低,Cx43mRNA相对表达量升高,差异均有统计学意义(P0.05);和正常组相比,模型组大鼠心肌组织内Cx43蛋白表达升高,AT-1R蛋白表达降低;和模型组相比,阳性对照组、自拟黄芪通络强心汤组大鼠心肌组织内Cx43蛋白表达降低,AT-1R蛋白表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论:自拟黄芪通络强心汤可经过提高大鼠心肌细胞内Cx43含量,降低AT-1R、AngⅡ含量,降低心律失常发生率,起到保护心肌作用。     

参竹心康汤对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化及心肌MMP-9、TIMP-1的影响

目的:观察参竹心康汤对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌纤维化以及心肌基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶抑制剂-1的影响,探讨该方抑制心肌纤维化,改善心室重构的可能作用机制。方法:从70只SD大鼠中随机取14只为假手术组,其余大鼠均为手术组,手术组大鼠采用腹主动脉缩窄法复制慢性心力衰竭大鼠模型,再将手术组大鼠按随机排列表法随机分为模型组7只、卡托普利组8只、参竹心康汤小剂量组7只、中剂量组8只、大剂量组8只,假手术组及模型组均予蒸馏水(10 m L/kg)灌胃,卡托普利组予卡托普利混悬液(7.8 mg/kg)灌胃,参竹心康汤小、中、大剂量组分别予参竹心康汤中药煎液(含生药4.5 g/m L)11 g/kg、22 g/kg、44 g/kg灌胃,1次/d,连续给药8周。用Masson染色后图像分析测量心肌胶原容积分数(CVF),ELISA法检测心肌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)水平。结果:与模型组比较,参竹心康汤小、中、大剂量组大鼠心肌CVF和MMP-9水平明显下降,TIMP-1水平升高,差异均有统计学意义(P0.01),且在一定剂量范围内,随着剂量的增加,心肌MMP-9水平及CVF逐渐下降,TIMP-1水平逐渐升高。结论:参竹心康汤有抗CHF心肌纤维化的作用,其机制可能与抑制MMP-9表达,促进TIMP-1表达有关。