知母总皂苷对阿尔茨海默病细胞模型的保护作用

[目的]探讨知母总皂苷对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的保护作用。[方法]用10～40μMAβ25-35分别刺激PC12细胞48h,MTT法测定细胞活力改变。分组:正常组,模型组,知母保护组。用0.5～40mg/L知母总皂苷和20μMAβ25-35共同作用PC12细胞48h,倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化,MTT测其活力改变。[结果]MTT法显示不同浓度Aβ25-35可引起不同程度凋亡,成剂量依赖关系。不同浓度知母总皂苷保护PC12细胞,可抑制这种凋亡,5～20mg/L效果显著(P<0.01)。[结论]Aβ25-35能诱导PC12细胞凋亡,知母总皂苷对其诱导的细胞凋亡有明显保护作用。     

知母皂苷及其苷元抗衰老作用的研究进展

中药知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge．的干燥根茎，具有清热泻火、生津润燥之功效，为中药常用的滋阴药之一。知母皂苷及其苷元为其有效成分之一，近年来药学工作者对知母皂苷及其苷元进行了多项药理研究，提示知母具有较好的抗衰老作用，用于治疗老年性痴呆具有很好的前景。现将研究进展作如下综述。     

知母皂苷及其苷元抗衰老作用的研究进展

中药知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根茎,具有清热泻火、生津润燥之功效,为中药常用的滋阴药之一.知母皂苷及其苷元为其有效成分之一,近年来药学工作者对知母皂苷及其苷元进行了多项药理研究,提示知母具有较好的抗衰老作用,用于治疗老年性痴呆具有很好的前景.现将研究进展作如下综述.     

知母皂苷的降脂及抗动脉粥样硬化作用

目的探讨知母皂苷对实验性高脂血症鹌鹑的降脂及抗动脉粥样硬化作用。方法采用高脂饲料喂养鹌鹑建立高脂血症和动脉粥样硬化模型。知母皂苷连续灌胃给药2周,测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)含量,计算HDL/TC比值;取主动脉,观察动脉斑块面积并进行病理学检查。结果知母皂苷可明显降低血清TC、TG、LDL、HDL含量,提高HDL/TC比值,缩小斑块面积,减轻动脉粥样硬化程度。结论知母皂苷对鹌鹑实验性高脂血症及动脉粥样硬化具有明显的抑制作用。     

β-葡萄糖苷酶转化知母皂苷制备知母皂苷AⅢ的研究

目的：研究知母皂苷AⅢ的制备工艺。方法：采用β-葡萄糖苷酶水解知母皂苷制备知母皂苷AⅢ,以转化率为指标,通过单因素考察反应温度、反应时间、pH值及酶用量对转化率的影响L16(45),正交试验优化制备工艺。结果：酶解反应的最适条件为55℃、pH5.0醋酸醋酸钠缓冲液、酶用量为600U/g、反应时间 3h。结论:β-葡萄糖苷酶水解知母皂苷制备知母皂苷AⅢ,工艺简单可靠,反应条件温和,适合工业化生产。     

知母皂苷元对谷氨酸诱导的皮层神经元损伤的保护作用及其机制

目的:观察知母皂苷元(Sarsasapogenin,SAR)对谷氨酸引起的皮层神经元损伤的保护作用及其机制研究。方法:大鼠乳鼠大脑皮层神经元,培养7 d后用于实验。倒置相差显微镜观察神经元树突生长情况;用MTT法测定细胞活力;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测神经元SYP、p-PDK1、p-Akt473、p-mTOR蛋白表达水平。结果:形态学观察结果显示谷氨酸(150μmol/L)可明显抑制神经元树突的生长发育。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L组可明显对抗谷氨酸的抑制作用。谷氨酸150μmol/L+SAR30μmol/L+各阻断剂组能够阻断SAR的作用。谷氨酸可降低神经元细胞活力及增加神经元细胞凋亡百分比。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L组能明显抑制谷氨酸引起的神经元细胞活力降低及细胞凋亡百分比增加。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L+各阻断剂组能够阻断SAR的保护作用。Western印迹结果显示谷氨酸可明显降低SYP、p-PDK1、p-Akt473、p-mTOR蛋白表达水平。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L组可明显增加SYP、p-PDK1、p-Akt473及p-mTOR蛋白表达水平。谷氨酸150μmol/L+SAR 30μmol/L+各阻断剂组能够明显降低神经元SYP、p-PDK1、p-Akt473及p-mTOR的蛋白表达水平。结论:SAR对谷氨酸引起的体外培养皮层神经元的损伤有保护作用,这种作用可能与PI3K/Akt/mTOR信号转导通路有关。     

知母总皂苷对慢性温和应激小鼠的保护作用及机制研究

目的 探讨知母总皂苷(total timosaponin,TT)对慢性温和应激模型小鼠的保护作用并分析其可能的作用机制。方法 建立小鼠慢性温和应激模型,测量小鼠对蔗糖水的摄取量,采用避暗实验考察小鼠学习记忆能力,放射免疫法测定小鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇含量,酶联免疫法测定海马脑源性神经生长因子(BDNF)含量。结果 TI (25、50 mg·kg-1,qd×21 d)可显著增加慢性温和应激模型动物的蔗糖水消耗量,延长动物逃避潜伏时间、减少逃避错误次数。生化结果显示,TT能够降低血浆ACTH和皮质醇的含量,提高海马组织内BDNF含量。结论 TT能够改善慢性温和应激模型小鼠的抑郁状态和学习记忆能力,其机制与抑制下丘脑-垂体-肾上腺轴功能亢进以及提高模型动物海马BDNF含量有关。     

知母皂苷的降脂与及抗动脉粥样硬化作用

目的 探讨知母皂苷对实验性高脂血症鹌鹑的降脂及抗动脉粥样硬化作用.方法 采用高脂饲料喂养鹌鹑建立高脂血症和动脉粥样硬化模型.知母皂苷连续灌胃给药2周,测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)含量,计算HDL/TC比值;取主动脉,观察动脉斑块面积并进行病理学检查.结果 知母皂苷可明显降低血清TC、TG、LDL、HDL含量,提高HDL/TC比值,缩小斑块面积,减轻动脉粥样硬化程度.结论 知母皂苷对鹌鹑实验性高脂血症及动脉粥样硬化具有明显的抑制作用.     

知母须根总皂苷提取工艺的优化及其对糖氧剥夺损伤的PC12细胞保护作用研究

目的优化知母须根总皂苷提取工艺,探讨其对糖氧剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)损伤的PC12细胞的保护作用。方法在单因素实验基础上,利用响应面法优化知母须根总皂苷提取工艺;建立OGD损伤的PC12细胞模型,采用终质量浓度为20、40、80 mg/L的知母须根总皂苷进行干预。分别用倒置显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率,荧光探针二氯荧光素-双乙酸盐(DCF-DA)法测定细胞内活性氧(ROS)含量,Annexin V/PI双染法测定细胞凋亡率,蛋白免疫印记法检测凋亡信号蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果知母须根总皂苷提取的最优条件为乙醇体积分数72.22%,料液比1∶11,提取时间73.33 min,在此条件下,理论提取率为8.38%,实测提取率为8.33%。PC12细胞经OGD损伤4 h后细胞活力显著降低,知母须根总皂苷对其呈现保护作用,并随着知母须根总皂苷质量浓度的升高而增强;流式细胞术分析结果表明知母须根总皂苷能明显减少OGD损伤PC12细胞中ROS含量及凋亡率,免疫印迹实验结果表明知母须根总皂苷可上调PC12细胞Bcl-2表达并下调Bax表达。结论通过响应面法优化的工艺得率高、提取效果好。知母须根总皂苷对OGD损伤的PC12细胞具有一定的保护作用,其机制可能与减少OGD诱导PC12细胞ROS含量、抑制线粒体凋亡通路有关。     

无患子皂苷对大鼠心肌缺血的保护作用

目的:观察无患子皂苷对大鼠实验性心肌缺血损伤的保护作用。方法:采用结扎冠脉左前降支的方法复制大鼠心肌缺血模型,将造模成功的大鼠随机均分为模型组、阳性对照组(三七总皂苷0.081 g·kg-1)、无患子皂苷低、中、高剂量组(0.054,0.162,0.486 g·kg-1),每组10只,另取假手术组10只,连续ig给药28 d。分别监测各组大鼠手术前及手术后即刻,1,3,7,10,14,21,28 d的心电图,并测定给药28 d后的心肌梗死率及血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)的含量。结果:无患子皂苷各剂量组大鼠心电图S-T段的抬高程度均显著下降,心肌梗死范围明显缩小,血清SOD和GSH-Px的活性显著增强,MDA含量显著降低。结论:无患子皂苷能有效保护大鼠实验性心肌缺血损伤,其作用可能与清除氧自由基,提高抗氧化酶活性及抗脂质过氧化有关。     

迷迭香酸对大鼠心肌缺血损伤保护作用机制的探讨

目的 通过对迷迭香酸作用于结扎大鼠左冠状动脉前降支所致心肌缺血模型相关指标的影响,初步探讨迷迭香酸对心肌缺血保护作用的可能机制.方法 取120只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血模型组、硝酸异山梨酯组、迷迭香酸小剂量组、迷迭香酸中剂量组、迷迭香酸高剂量组.结扎冠状动脉前降支造成大鼠急性心肌缺血模型,检测细胞内SOD、MDA量,免疫组织化学法检测心肌细胞bcl-2和bax基因的蛋白表达.结果 与假手术组比较,缺血模型组细胞MDA值升高,SOD值减小;与迷迭香酸组比较,缺血模型组MDA值增加,SOD值降低,bcl-2,bax蛋白表达量增加,bax 表达尤其明显.迷迭香酸各给药组bcl-2,bax蛋白的表达量比假手术组有所增加,但b积明显较缺血模型组低(P＜0.05或P＜0.01).结论 迷迭香酸对大鼠冠脉结扎后引起的心肌缺血损伤的保护作用机制可能与提高氧化酶活性、增强清除自由基能力以及抑制心肌缺血后心肌细胞凋亡的发生有关.     

知母皂苷AⅢ对白血病细胞HL-60增殖、凋亡和细胞周期的影响及机制探讨

目的探讨知母皂苷AⅢ对人白血病细胞HL-60增殖、凋亡和细胞周期的影响及可能机制。方法对照组应用未加药的完全培养基培养,实验组分别采用10、50、100 nmol/L知母皂苷AⅢ处理,分别采用水溶性四氮唑(WST-1)法、流式细胞术双标法、分光光度法、流式细胞术单标法及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞存活率、凋亡率、半胱天冬酶-3(Caspase-3)活化水平、细胞周期分布及相关通路蛋白表达情况。结果知母皂苷AⅢ在10~100 nmol/L范围内可抑制HL-60细胞的增殖,且与对照组相比,实验组HL-60细胞的存活率均降低(P0.05);与对照组相比,实验组处理24、48 h后的凋亡率及Caspase-3活化率均升高,处理48 h后的G0/G1期细胞比例升高,S期细胞比例降低(P0.05);与对照组相比,100 nmol/L知母皂苷AⅢ处理后磷酸酶基因(PTEN)蛋白水平升高,而蛋白激酶B(Akt)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和原癌基因(C-myc)水平均降低(P0.05)。结论知母皂苷AⅢ对人白血病细胞HL-60有细胞毒性作用,主要体现在抑制增殖、诱导凋亡和细胞周期阻滞方面,其机制可能与该药物抑制磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/Akt和Wnt/β-catenin通路有关。     

知母总皂苷对大鼠脑缺血及再灌注损伤的保护作用

 目的观察知母总皂苷(SAaB)对于大鼠脑缺血及再灌注损伤的保护作用。方法大鼠灌胃给药7d,采用双侧颈总动脉结扎法制备大鼠急性全脑缺血模型,测定脑组织含水量,制备脑匀浆测定脑超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量；采用大脑中动脉栓塞法制作大鼠急性局灶缺血模型(MCAO),观察大鼠神经功能损害改变并评分,脑组织用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定脑梗死容积。结果SAaB低、高剂量组(50,100 mg·kg^-1)均能降低缺血损伤后脑组织含水量、增加缺血组织SOD活性,降低异常MDA含量；同时MCAO模型中SAaB各剂量组大鼠缺血再灌注后神经功能损害评分均低于对照组,其缺血侧脑组织梗死体积占半侧脑组织的百分比亦较对照模型组降低。所有组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论SAaB对于脑缺血再灌注后引起的脑损伤具有一定的保护作用。     

拟人参皂苷元对急性心肌缺血损伤的保护作用

目的研究拟人参皂苷元对急性心肌缺血损伤的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉造成急性心肌缺血模型,观察拟人参皂苷元对大鼠心肌缺血后梗死范围和血清乳酸脱氢酶(LDH)的影响;用玻片法测定小鼠的凝血时间。结果拟人参皂苷元5、10、20mg/kg,可显著减小心肌缺血坏死面积,降低血清LDH的活性;5、10mg/kg拟人参皂苷元可显著延长小鼠的凝血时间。结论拟人参皂苷元对心肌缺血性损伤具有一定的保护作用。     

复方丹参方与穿山龙总皂苷配伍对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:观察复方丹参方所含成分丹参提取物、三七总皂苷、冰片与穿山龙总皂苷配伍对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法:SD大鼠70只,随机分为10组:假手术组、模型组、丹参提取物300 mg· kg-1、三七总皂苷100 mg·kg-1、穿山龙总皂苷100 mg·kg-1、配伍(丹参提取物+三七总皂苷+冰片+穿山龙总皂苷)3个剂量组(300 +100 +10 +50),(300+ 100+ 10+ 100),(300+100+10+200) mg·kg-1、复方丹参片组300 mg·kg-1、阳性药组(通心络胶囊)300 mg·kg-1,各组ig给药,连续7d,末次给药1h后,结扎冠状动脉左前降支复制心肌缺血再灌注损伤模型,试剂盒测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性,TTC染色法测定心肌梗死面积,TUNEL染色法检测细胞凋亡.结果:配伍(300+ 100+ 10+ 100) mg·kg-1与模型组比较,可显著增强SOD的活性(P＜0.01),降低大鼠心肌中LDH和CK-MB的活性(P＜0.01);与各成分和原方相比,心肌梗死范围为20.78％,明显低于丹参提取物34.04％ (P＜0.05)、三七总皂苷34.62％ (P ＜0.05)、穿山龙总皂苷36.19％ (P ＜0.05)、复方丹参片26.47％;细胞凋亡指数为16.53％,明显低于丹参提取物25.08％(P＜0.05)、三七总皂苷22.12％ (P ＜0.05)、穿山龙总皂苷24.45％ (P ＜0.05)、复方丹参片18.14％.结论:复方丹参方与穿山龙总皂苷配伍后可对心肌缺血再灌注损伤起到保护作用,且效果优于各组分及复方丹参方.此种配伍的方式可以作为研究中药新复方的一种方法.     

知母总皂苷抗实验性抑郁作用的研究

目的研究知母总皂苷(total timosaponin,TT)的抗抑郁作用及其机制。方法采用小鼠强迫游泳实验,获得性无助实验,慢性温和应激模型,育亨宾毒性增强实验以及5-羟色胺酸诱导甩头实验等多种动物模型考察TT的抗实验性抑郁作用及其可能的机制。结果在小鼠强迫游泳实验中,TT(25,50mg·kg-1,qd×14d)可明显缩短小鼠的不动时间,且对自主活动无明显影响;TT(12.5,25,50mg·kg-1,qd×14d)可显著减少获得性无助小鼠的逃避错误次数;TT(25,50mg·kg-1,qd×21d)可显著增加慢性温和应激模型动物的活动次数以及蔗糖水消耗量;TT(50mg·kg-1,qd×14d)可提高育亨宾给药后4h的小鼠死亡率;并且显著增加5-羟色胺酸诱导小鼠的甩头次数。结论TT在多种抑郁模型上具有一定的抗抑郁作用,可能与增强去甲肾上腺素能及5-羟色胺能神经系统有关。     

人参皂苷Rg1对豚鼠急性心肌缺血的保护作用

目的 观察人参皂苷Rg1对豚鼠急性心肌缺血的保护作用。方法 建立垂体后叶素致豚鼠急性心肌缺血模型,观察人参皂苷Rg1对垂体后叶素诱发心肌缺血豚鼠心电图T波和ST段的影响,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量的变化。结果 人参皂苷Rg1能抵抗对垂体后叶素诱发豚鼠心电图T波和ST段的抬高(P＜0.05,P＜0.01),降低血清中AST、CK和LDH活性(P＜0.05,P＜0.01),升高血清中SOD和GSH-Px活性和明显降低MDA含量(P＜0.05,P＜0.01)。结论 人参皂苷Rg1对垂体后叶素致豚鼠急性心肌缺血具有明显的保护作用。     

不同部位人参皂苷对犬急性心肌缺血保护作用的比较研究

目的研究比较人参不同部位(全草、根及茎叶)提取的人参皂苷对犬急性心肌缺血的保护作用。方法采用结扎冠状动脉前降支的方法,造成犬急性实验性心肌缺血模型;描记心外膜电图,计算心肌缺血程度;用硝基蓝四唑(N-BT)进行心肌组织化学染色测定心肌梗死面积;用放射免疫法测定6-酮前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)与血栓素B2(TXB2)的比值;同时测定冠脉血流量。结果3种部位人参皂苷均具有显著改善犬急性心肌缺血的作用,在减轻心肌缺血程度,增加冠脉血流量等方面,作用强度基本相当。但人参全草提取的皂苷在减小心肌梗死面积,增加6-Keto-PGF1α/TXB2的比值方面较人参根提取皂苷、人参茎叶提取皂苷作用强。根和茎叶提取的皂苷作用无显著性差异。结论3种不同部位的人参皂苷均有明显对抗犬急性心肌缺血的作用,但药物作用强度有所不同。     

人参皂苷及其衍生物抗结肠癌作用及机制的研究进展

人参皂苷及其衍生物已被证明具有显著的抗结肠癌作用。它们可通过抑制癌细胞增殖、减少癌细胞侵袭和转移、影响细胞周期、诱导癌细胞自噬并促细胞凋亡等方面发挥抑癌功效。近年来研究发现人参皂苷及其衍生物能协同增强抗结肠癌药物的疗效。对近10余年人参皂苷及其衍生物抗结肠癌的作用机制研究的文献进行查阅、分析和综述,为从人参皂苷及衍生物中发现和研发靶向抗结肠癌新药提供科学参考。     

知母甾体总皂苷中知母皂苷BⅡ的鉴别及含量测定

目的建立知母甾体总皂苷提取物中知母皂苷BⅡ的TLC鉴别及HPLC含量测定的方法。方法 TLC法:展开剂:正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)的上层溶液,显色剂:香草醛硫酸试液,105℃加热至斑点清晰。HPLC-ELSD法:采用Agilent HC-C18(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相:甲醇-水梯度洗脱,流速:1 ml.min-1,漂移管温度40℃,载气压力3.5 bar。结果知母皂苷BII成分的TLC分离效果较好;HPLC法测得知母皂苷BII进样量在0.506～10.12μg范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)为97.44%,RSD为1.67%。结论该方法简便准确,可用于知母甾体总皂苷提取物的质量控制。