黄精地龙提取液对老年痴呆大鼠脑内烟碱型乙酰胆碱受体的影响

目的:探讨黄精地龙提取液(EPP)对老年痴呆大鼠脑内α3和α7烟碱型乙酰胆碱受体(α3,α7-nAChR)阳性神经元数量、蛋白及mRNA表达的影响。方法:SD大鼠40只,随机均分为正常组,模型组,脑复康(阳性药物,0.6 g·kg~(-1)·d~(-1))组,EPP(相当生药量4 g·kg~(-1)·d~(-1))组。给大鼠颈背部皮下注射1%D-半乳糖(5 m L·kg~(-1)·d~(-1),连续3周)后,腹腔注射东莨菪碱(2 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续后2周)复制大鼠老年痴呆模型;造模1周后同时对脑复康组及EPP组大鼠每天灌胃给相应实验药物,正常组及模型组大鼠灌胃给生理盐水1 mL。实验结束,处死各组大鼠,取出脑组织,一半置于10%中性甲醛液浸泡固定待组织切片检查,另一半置于冰上匀浆,进行mRNA及蛋白提取;运用尼氏染色、免疫组化观察各大鼠大脑皮层第一躯体感觉区(S1Tr)和海马CA1与CA3区的阳性神经元数量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各大鼠大脑内的α3和α7-nAChR mRNA及蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠大脑S1Tr区和海马CA1及CA3区神经元数量显著减少,大脑内α3和α7-n AChR mRNA和蛋白表达水平均降低(P0.01);EPP能增加痴呆大鼠大脑S1Tr区和海马CA1及CA3区神经元数量,能升高痴呆大鼠大脑内α3和α7-n AChR mRNA和蛋白的表达水平,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:EPP能保护大脑认知学习记忆有关重要区的神经细胞,同时触发α3和α7-n AChR受体效应,提高中枢乙酰胆碱(ACh)含量,进而升高老年痴呆大鼠中枢胆碱能系统活性。     

六味地黄丸对老年大鼠学习记忆及脑内M1胆碱受体阳性神经元的影响

目的:观察六味地黄丸对老年大鼠学习记忆及脑内M1胆碱受体(MI-AchR)阳性神经元的影响,探讨滋阴补肾法改善老年大鼠学习记忆能力的可能机制.方法:将雄性SD大鼠分为青年对照组(3月龄)、老年对照组(24月龄)和六味地黄丸组(24月龄).六味地黄丸组大鼠按3 g·kg-1 ig六味地黄丸液,老年对照组ig同体积生理盐水,各30 d;青年对照组ig同体积生理盐水7d.通过Morris水迷宫实验,比较其学习记忆能力,并运用免疫组织化学方法,检测大脑海马和皮质相关区域M1-AchR阳性神经元变化.结果:老年对照组各指标与青年对照组比,有极显著性差异(P＜0.01).六味地黄丸组平均逃避潜伏期自第3天起较老年对照组明显缩短,有极显著性差异(P＜0.01).目标象限游程占全部游程百分比方面,与老年对照组相比,六味地黄丸组有极显著性差异(P＜0.01);六味地黄丸组与老年对照组穿越平台次数相比,有极显著性差异(P＜0.01).与老年对照组相比,六味地黄丸组M1-AchR阳性细胞数目增多,在海马CA3区及第一躯体感觉区(S1Tr)内,有极显著性差异(P＜0.01).结论:六味地黄丸可以改善自然衰老大鼠的空间学习记忆能力,可能与其保护海马CA3区及S1Tr内胆碱能毒蕈碱M1-AchR阳性神经元,增强中枢胆碱能系统功能有关.     

益智健脑颗粒对老年大鼠空间学习记忆及中枢胆碱能系统的影响

目的:观察益智健脑颗粒对老年大鼠空间学习记忆及中枢胆碱能系统的影响。方法:以自然衰老大鼠为研究对象,通过Morris水迷宫实验、尼氏染色及免疫组织化学等方法的检测,观察益智健脑颗粒对老年大鼠空间学习记忆、基底前脑胆碱能神经元及海马CA1与CA3区和第一躯体感觉区(S1Tr)M1受体阳性神经元的影响。结果:与老年对照组相比,益智健脑颗粒(10g/kg)治疗组平均逃避潜伏期至第四天两者有极显著差异,其空间探索实验中穿越平台次数及潜伏期呈极显著性差异;在内侧隔核(MSN)与斜角带核(VDB)内,胆碱能神经元数目增多,两者有显著性差异,在Meynert核(NBM)内有极显著性差异;海马区与大脑皮质神经元、M1受体阳性神经元数目有所增加,且在CA1与CA3区和S1Tr内有极显著性差异。结论:益智健脑颗粒能改善自然衰老大鼠空间学习记忆能力,机制可能是通过增强基底前脑胆碱能神经元Ch AT的表达水平,提高乙酰胆碱合成量,海马及大脑皮质胆碱能毒蕈碱M1受体表达水平上调则可接受更多来自基底前脑的投射,触发受体后效应,进而对衰老大鼠中枢胆碱能系统具有一定的保护作用。     

人参-知母-赤芍提取物对血管性痴呆大鼠海马神经元的保护作用及机制

目的:观察人参-知母-赤芍提取物对血管性痴呆大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1)的影响,探讨其保护海马神经元的作用机制。方法:60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组,假手术组,模型组,人参-知母-赤芍提取物组(0. 20 g·kg-1)和美金刚组(2. 1 mg·kg-1),每组12只。采用双侧颈总动脉反复夹闭合并腹腔注射硝普钠的方法建立血管性痴呆大鼠模型,造模后,正常组,假手术组,模型组给予同等体积生理盐水,每日1次,连续14 d。采用Morris水迷宫评价各组大鼠学习记忆能力;苏木素-伊红(HE)染色观察海马CA1区病理改变;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马神经元胞膜NMDAR1的蛋白表达水平;免疫组化法(IHC)检测海马NMDAR1的表达情况;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测海马组织中NMDAR1 mRNA的表达水平。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期显著延长(P 0. 01),在平台所在象限停留时间及穿越平台的次数显著减少(P 0. 01),海马CA1区神经细胞层次减少,排列紊乱、出现核固缩、神经元丢失,NMDAR1蛋白及mRNA表达显著升高(P 0. 01);与模型组比较,人参-知母-赤芍提取物组,美金刚组逃避潜伏期明显缩短(P 0. 05,P 0. 01),在平台所在象限停留时间及穿越平台的次数明显增加(P 0. 05,P 0. 01),海马CA1区神经元数目与形态有明显改善,海马神经元NMDAR1蛋白及NMDAR1 mRNA表达明显降低(P 0. 05)。结论:人参-知母-赤芍提取物能够改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力,减轻海马CA1区神经元的损伤,其机制可能与下调海马神经元NMDAR1的表达有关。     

耳针改善血管性痴呆大鼠记忆障碍及其与bcl-2表达的关系

目的 :探讨耳针对血管性痴呆大鼠 (VD)学习记忆障碍的改善与bcl 2凋亡蛋白表达的关系。方法 :采用 4 血管阻断制备VD大鼠模型 ,针刺脑、肾耳穴后 ,作免疫组化、Nissl染色、行为学测试及图像分析。结果 :与正常对照比较 ,VD大鼠海马CA1 区神经元严重丢失 ,而bcl 2蛋白表达增加 ,大鼠学习记忆产生明显障碍 ;耳针治疗后海马CA1 区神经元丢失减轻 ,但bcl 2增加更为明显 ,此时大鼠学习记忆障碍得到明显改善。结论 :耳针改善VD大鼠学习记忆 ,可能是通过针刺调控细胞凋亡 ,达到对VD大鼠海马神经元的保护作用     

滋肾活血方对2-VO模型大鼠海马CA1区线粒体自噬的调节及神经元再生的影响

目的：探讨滋肾活血方通过调节线粒体自噬促进双侧颈总动脉永久性结扎(2-VO)模型大鼠海马CA1区神经元新生的作用机制。方法：2-VO法建立血管性痴呆大鼠模型,随机将60只SD大鼠分为假手术组、2-VO模型组、盐酸多奈哌齐组、滋肾活血方低、中、高剂量组(8.9、17.8、35.6 g·kg^-1)。Morris水迷宫实验检测各组逃避潜伏期、跨越平台次数;透射电镜观察海马CA1区线粒体自噬情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测海马CA1区PTEN诱导激酶1(Pink1)、帕金蛋白(Parkin)mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马CA1区线粒体自噬信号通路相关蛋白Parkin、抗增殖蛋白2(PHB2)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、动力学相关蛋白1(Drp1)蛋白的表达;Brdu法检测CA1区神经元再生情况。结果：与假手术组比较,2-VO模型组大鼠学习、空间记忆能力明显下降(P<0.05),海马CA1区见线粒体结构受损,自噬溶酶体形成,Parkin、Pink1 mRNA及Parkin、PHB2、Drp1蛋白...     

黄精多糖对慢性脑缺血大鼠学习记忆及脑组织PS-1蛋白表达的影响

目的通过观察黄精多糖对慢性脑缺血大鼠学习记忆及脑组织早老素-1(PS-1)蛋白表达的影响,以评价黄精的抗衰老作用及其机制。方法雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组、模型组、黄精多糖组、尼莫地平组,每组6只。采用二血管闭塞(2VO)建立慢性脑缺血大鼠模型,给予0.9%氯化钠注射液、黄精多糖、尼莫地平灌胃8周。Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力;尼氏染色检测海马神经元损伤;免疫组织化学法测定前额皮质和海马区PS-1蛋白表达。结果 1)Morris水迷宫实验:黄精多糖组较模型组平均逃避潜伏期缩短(P0.05),穿台次数增多(P0.05),黄精多糖组和尼莫地平组之间无显著差异(P0.05)。2)尼氏染色检测:模型组前额皮质和海马区神经元内尼氏体阳性神经元明显减少,染色较浅,黄精多糖组较模型组尼氏体阳性神经元数目明显增多,与尼莫地平组比较无显著性差异(P0.05)。3)免疫组化检测:黄精多糖组较模型组大鼠前额皮层、海马区PS-1的蛋白表达减少(P0.05),黄精多糖组与尼莫地平组比较无显著性差异(P0.05)。结论黄精多糖能改善慢性脑缺血大鼠的一般行为学评价及组织学变化,减轻细胞结构紊乱,降低慢性脑缺血大鼠前额皮质和海马区PS-1的蛋白表达。     

夏天无对血管性痴呆模型大鼠神经行为学及海马CA1区MVD、VEGF蛋白表达的影响

目的:观察夏天无对血管性痴呆模型大鼠学习记忆及海马CA1区MVD、VEGF蛋白表达的影响。方法:大鼠随机分为假手术组、模型组及夏天无组。血管性痴呆模型建立后连续给药30d。免疫组织化学法检测微血管密度及VEGF蛋白表达的变化。结果:夏天无组较模型组自第3天起平均逃避潜伏期缩短(P 0.05),后2天其平均逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数明显增加(P 0.01);夏天无组海马CA1区血管数量有所增加,VEGF阳性细胞数量有所增加(P 0.05)。结论:夏天无对血管性痴呆学习记忆障碍有一定改善作用,其机制可能是通过增强VEGF表达,一方面对海马CA1区神经元直接起保护作用,另一方面诱导缺血区侧枝新血管形成,改善血液循环,对神经元起间接保护作用。     

基于PI3K/Akt/Bad信号通路探讨益髓解毒方对血管性痴呆大鼠海马神经元凋亡的影响

目的:探讨益髓解毒方对血管性痴呆(VD)大鼠海马神经元损伤及调控细胞凋亡信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)关联死亡启动子重组蛋白(Bad)的作用机制。方法:40只SD大鼠分为假手术组、模型组、盐酸多奈哌齐组、益髓解毒方组,每组10只。双侧颈总动脉永久结扎(2-VO)法制备VD动物模型,假手术组和模型组灌胃生理盐水;盐酸多奈哌齐组灌胃盐酸多奈哌齐原药0.52 mg·kg~(-1);益髓解毒方组灌胃益髓解毒方颗粒(11.11 g·kg~(-1));1次/d。30 d后,以Morris水迷宫测试大鼠学习、记忆能力;苏木素-伊红(HE)染色观察海马CA1区组织形态结构;透射电镜(TEM)观察大鼠海马CA1区神经元超微结构;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测Akt,Bad mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织Akt,磷酸化(p)-Akt,Bad蛋白表达情况。结果:与假手术组比较,模型组大鼠学习、记忆能力下降明显(P0.05),海马组织病理结构及神经元超微结构病变明显,海马组织Akt mRNA和Akt,p-Akt蛋白表达水平明显下降(P0.05),Bad mRNA和Bad蛋白表达水平明显升高(P0.05);与模型组比较,益髓解毒方组可明显提高大鼠的学习记忆能力,改善海马CA1区神经元细胞及超微结构变化,上调海马组织Akt mRNA和Akt,p-Akt蛋白表达水平,降低Bad mRNA和Bad蛋白表达水平(P0.05)。结论:益髓解毒方可明显提高VD大鼠学习、记忆能力,改善海马组织及神经元超微结构病理变化,修复神经元受损细胞,这可能与促进Akt磷酸化,激活PI3K/Akt/Bad信号通路,发挥抗细胞凋亡保护神经元有关。     

地黄寡糖对血管性痴呆大鼠海马区神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:探讨中药提取物地黄寡糖(rehmannia glutinosa oligosaccharides,ROS)对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经细胞凋亡及相关蛋白表达的影响.方法:选用SD成年大鼠,随机分为伪手术组、模型组和地黄寡糖高、低剂量组(9.0,45 g·kg-1·d-1).采用双侧颈总动脉缺血再灌注法制作血管性痴呆大鼠模型,采用行为学评分法评价大鼠的行为学障碍程度,HE染色法观察大鼠海马CA1区病理组织形态学变化,TUNEL法检测大鼠海马CA1区的神经元细胞凋亡情况,免疫组化法检测大鼠海马区凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-相关x蛋白(Bax)的表达含量的变化,并检测大鼠海马组织匀浆中神经毒性氨基酸谷氨酸及海马组织和血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量.结果:ROS能够显著改善缺血再灌注型血管性痴呆的大鼠的行为学障碍,降低其行为学评分(P＜0.01),减轻海马CA1区神经组织的病理性改变,降低神经元凋亡细胞比例(P＜0.01),并显著升高血管性痴呆大鼠海马CA1区神经元细胞中Bcl-2蛋白表达(P＜0.01)、降低Bax蛋白表达(P＜0.01),Bcl-2/Bax显著升高,从而抑制了该区域神经元细胞的凋亡.此外,ROS给药能够显著减少血管性痴呆大鼠血清及海马组织中MDA的积累(P＜0.01),提高SOD的活性(P＜0.01),降低海马组织中谷氨酸的水平(P＜0.01).结论:ROS能够显著减少脑缺血再灌注损伤所致的大鼠海马CA1区神经元凋亡,其作用机制可能是通过调控Bcl-2/Bax相关蛋白的表达来实现的.此外与ROS减少组织中谷氨酸的水平和MDA的含量,提高SOD活性等,也提示ROS对血管性痴呆有一定的治疗作用.