桃红四物汤对鼠血管吻合模型Notch3受体及VEC增殖影响的研究

目的:观察桃红四物汤对大鼠尾血管吻合模型Notch3受体及血管内皮细胞(Vascular Endothelial Cell,VEC)增殖的影响。方法:将40只实验大鼠适应性喂养1周后随机分为4组,即桃红四物汤组、生理盐水组、假手术组和空白对照组,每组10只。桃红四物汤组和生理盐水组造模后干预,假手术组切开显露血管后直接缝合,空白对照组不做处理,并于术后第2天和第5天两个时间点随机选取5只大鼠,采用脊椎脱臼法处死,切取血管吻合区血管,利用免疫组化检测Notch3的表达情况,并对大鼠外周血分离、获取单个核细胞,进行体外细胞培养,反复纯化后利用MTT法检测VEC增殖情况。结果:桃红四物汤组血管吻合区Notch3蛋白表达含量明显高于生理盐水组、假手术组和空白对照组,差异有统计学意义(P0.05);桃红四物汤组VEC增殖明显高于生理盐水组、假手术组和空白对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:桃红四物汤能上调血管吻合区血管新生相关因子Notch3受体的表达,能够促进血管内皮细胞的增殖,从而促进血管的成活。     

桃红四物汤对兔自体皮片移植模型Delta-like4表达的影响

目的:观察桃红四物汤对兔自体皮片移植模型Delta-like 4表达的影响。方法:将75只新西兰大白兔(10~12月龄)随机分为假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组15只。模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组动物进行自体皮片移植手术,假手术组仅在对应区域作切口,不进行皮下组织分离。造模术后假手术组和模型组动物以蒸馏水灌胃,低剂量组、中剂量组和高剂量组均以制备好的桃红四物汤汤剂灌胃(每次给药量分别为2.5 g·kg~(-1)、5 g·kg~(-1)、10 g·kg~(-1)),每天2次。分别在药物干预开始后2、5、8 d从每组随机选取5只动物,心脏采血后处死,切取移植皮片吻合区皮片组织。采用酶联免疫吸附实验测定血清Delta-like 4蛋白含量;所取皮片组织分成2份,一份制成石蜡切片,HE染色后测定血管密度,另一份采用逆转录聚合酶链式反应法测定Delta-like 4 mRNA含量。结果:1血清Delta-like 4蛋白含量。药物干预开始后2 d,5组动物血清Delta-like 4蛋白含量比较,差异无统计学意义[(30.58±3.56)ng·m L~(-1),(32.31±2.66)ng·m L~(-1),(33.53±1.75)ng·m L~(-1),(36.00±1.49)ng·m L~(-1),(35.63±1.87)ng·m L~(-1),F=2.669,P=0.062]。药物干预开始后5、8 d,5组动物血清Delta-like 4蛋白含量比较,组间差异均有统计学意义[(30.56±1.35)ng·m L~(-1),(33.52±2.50)ng·m L~(-1),(37.96±1.83)ng·m L~(-1),(48.74±2.34)ng·m L~(-1),(49.05±2.86)ng·m L~(-1),F=46.239,P=0.000;(29.26±2.20)ng·m L~(-1),(32.98±1.43)ng·m L~(-1),(35.24±1.97)ng·m L~(-1),(38.02±1.72)ng·m L~(-1),(36.06±2.50)ng·m L~(-1),F=8.394,P=0.000];模型组分别与假手术组和低剂量组比较,差异均无统计学意义(5 d:P=0.112,P=0.269;8 d:P=0.340,P=0.182);中、高剂量组血清Delta-like 4蛋白含量均高于模型组(5 d:P=0.000,P=0.000;8 d:P=0.020,P=0.006);中、高剂量组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.862,P=0.245)。药物干预后5 d,中、高剂量组血清Delta-like 4蛋白含量均高于低剂量组(P=0.000,P=0.000)。药物干预开始后8 d,中、高剂量组Delta-like4蛋白含量与低剂量组比较,差异均无统计学意义(P=0.105,P=0.623)。2移植皮片组织中Delta-like 4 mRNA含量。药物干预开始后2、5、8 d,5组动物移植皮片中Delta-like 4 mRNA含量比较,组间差异均有统计学意义(0.26±0.03,0.29±0.04,0.34±0.06,0.42±0.03,0.39±0.04,F=7.072,P=0.001;0.25±0.03,0.34±0.04,0.39±0.03,0.48±0.06,0.45±0.06,F=12.028,P=0.001;0.25±0.06,0.30±0.04,0.35±0.03,0.44±0.03,0.43±0.04,F=10.813,P=0.000);模型组分别与假手术组和低剂量组比较,差异均无统计学意义(2 d:P=0.452,P=0.162;5 d:P=0.320,P=0.158;8 d:P=0.171,P=0.219);模型组Delta-like4 mRNA含量低于中、高剂量组(2 d:P=0.000,P=0.001;5 d:P=0.001,P=0.009;8 d:P=0.001,P=0.002);中、高剂量组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.426,P=0.330,P=0.725)。药物干预开始后2 d,中、高剂量组与低剂量组比较,差异均无统计学意义(P=0.111,P=0.167);药物干预开始后5、8 d,中、高剂量组Delta-like 4 mRNA含量均高于低剂量组(5 d:P=0.024,P=0.025;8 d:P=0.013,P=0.028)。3移植皮片组织中血管密度。药物干预开始后2、5 d,5组动物移植皮片中每个视野(×400)中血管数量比较,组间差异均有统计学意义[(5.37±0.36)个,(2.55±0.41)个,(2.83±0.24)个,(3.31±0.26)个,(3.53±0.67)个,F=4.084,P=0.014;(5.62±0.56)个,(4.25±0.68)个,(4.80±0.74)个,(5.88±0.42)个,(5.92±0.48)个,F=4.600,P=0.009];模型组均低于假手术组(P=0.001,P=0.011),模型组与低剂量组比较,差异均无统计学意义(P=0.527,P=0.268);中、高剂量组比较,组间差异均无统计学意义(P=0.620,P=0.939)。药物干预开始后2 d,中、高剂量组与模型组比较,差异均无统计学意义(P=0.102,P=0.131);中、高剂量组与低剂量组比较,差异均无统计学意义(P=0.297,P=0.352)。药物干预开始后5 d,中、高剂量组高于模型组(P=0.003,P=0.003);中、高剂量组与低剂量组比较,差异均无统计学意义(P=0.038,P=0.033)。药物干预开始后8 d,5组动物移植皮片中每个视野中血管数量比较,差异无统计学意义[(6.18±0.33)个,(5.86±0.66)个,(6.03±0.40)个,(6.27±0.53)个,(6.27±0.59)个,F=0.334,P=0.852]。结论:桃红四物汤能上调兔自体皮片移植模型Delta-like 4的表达,促进血管新生。但本研究未能明确桃红四物汤的剂量及作用时间与其上调Delta-like 4表达作用的关系,需要在今后的研究中进一步探讨。     

桃红四物汤对兔皮片移植模型Notch4受体表达的影响

目的:观察桃红四物汤对兔自体皮片移植模型Notch4受体表达的影响。方法:将60只新西兰大白兔随机分为4组,即桃红四物汤组、阻断剂组、模型组、假手术组,每组15只。造模后分组干预,并于术后第2,5,8天三个时限,从每组随机选取5只兔,行空气栓塞处死,切取移植皮片吻合区皮片组织,苏木精-伊红染色后在光镜下计算血管密度,采用免疫组化法测定Notch4受体蛋白表达情况。结果:桃红四物汤组移植区皮片的新生血管密度明显高于模型组、假手术组及阻断剂组(P0.05),差异有统计学意义。Notch4受体蛋白表达含量桃红四物汤组表达量高于模型组、假手术组及阻断剂组(P0.05),差异有统计学意义。结论:桃红四物汤能上调组织中血管新生相关因子Notch4受体的表达,促进移植皮片成活。     

小续命汤与桃红四物汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的干预研究

目的:观察小续命汤与桃红四物汤对大鼠脑缺血再灌注损伤的干预作用及疗效对比。方法:将120只健康雄性SD大鼠随机分为6组(n=20):正常组、假手术组、模型组、小续命汤组、桃红四物汤组以及小续命汤和桃红四物汤合用组,除正常组和假手术组不插栓线外,其余组采用线栓法制备大脑中动脉阻塞1.5 h再灌注模型,24 h后采用Garcia JH法进行大鼠神经功能评分,造模成功后分别以1 m L·100 g~(-1)小续命汤、桃红四物汤、小续命汤和桃红四物汤合用混合液进行灌胃治疗,正常组和假手术组予等容量生理盐水灌胃;术后治疗第7天时将各组大鼠神经功能评分后处死,取脑组织使用TTC染色法和Nissl染色法观察各组大鼠脑梗死体积和大鼠神经细胞形态和数量。结果:造模成功后,与模型组比较,小续命汤组、桃红四物汤组及两方合用组均能增加神经功能评分(P 0.05),降低大鼠脑梗死体积率(P 0.05),增加大鼠大脑皮质顶叶区尼氏体数量(P 0.05);且两方合用组神经功能评分,大鼠脑梗死体积率,大脑皮质缺血再灌注区正常存活尼氏体数量明显优于桃红四物汤组及小续命汤组(P 0.05),桃红四物汤组又显著于小续命汤组(P0.05)。结论:小续命汤和桃红四物汤对大鼠脑缺血再灌注损伤均具有一定保护作用,其中以桃红四物汤的疗效为优,而两方合用疗效较单用小续命汤和桃红四物汤更为显著。     

桃红四物汤对兔皮片移植模型血管新生及MMP-2的影响

目的:观察桃红四物汤对兔自体皮片移植术后移植皮片的血管密度、血清中MMP-2含量的影响,探讨桃红四物汤对皮片移植术后血管新生的影响机制。方法:将健康新西兰兔75只,按随机数字表法分为5组:桃红四物汤低、中、高剂量组、模型组、假手术组,每组15只。假手术组不进行皮片移植,切开后直接缝合,术后予蒸馏水灌胃,桃红四物汤低、中、高剂量组造模后予以相应剂量的桃红四物汤灌胃,模型组造模后以蒸馏水灌胃,各组灌胃时间最长均为8 d。分别于造模后2 d、5 d、8 d从每组随机抽取5只,检测移植皮片血管密度及血清中MMP-2含量。结果:造模后2 d、5 d、8 d,桃红四物汤低、中、高剂量组血管密度、血清MMP-2浓度均高于模型组(P0.05);造模后2 d桃红四物汤低、中、高剂量组与模型组血管密度均低于假手术组(P0.05);造模后2 d、5 d桃红四物汤中、高剂量组血管密度均高于桃红四物汤低剂量组(P0.05)。造模后2 d、5 d、8 d桃红四物汤低、中、高剂量组血清MMP-2浓度均高于假手术组(P0.05);造模后2 d、5 d、8 d桃红四物汤中、高剂量组血清中MMP-2浓度均高于桃红四物汤低剂量组(P0.05);桃红四物汤高、中剂量组血管密度、血清MMP-2浓度比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:桃红四物汤能上调自体皮片移植模型兔血清中MMP-2含量,并能使血管密度值增加,具有促血管新生作用。     

桃红四物汤促进随意皮瓣血管再生机制的探讨

目的:探讨桃红四物汤对大鼠皮瓣移植后血管再生的作用机制.方法:将40只SD大鼠按随机排列表法分为A组(实验组)和B组(对照组),每组20只.制成8cm×3cm的背部随意皮瓣,A、B组分别予以桃红四物汤、生理盐水灌胃,于术后3d、7d两时相点,取吻合区皮片组织,免疫组化法染色光镜下观察bFGF及VEGF的含量.结果:术后3d、7d检测吻合区组织中bFGF及VEGF含量,A组各时相点均高于B组,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论:桃红四物汤可通过提高皮瓣组织中bFGF与VEGF含量,从而起到促进血管再生的作用.     

加味桃红四物汤对老年股骨转子间骨折股骨近端防旋髓内钉内固定术围手术期隐性失血的影响

目的:探讨围手术期应用加味桃红四物汤对老年股骨转子间骨折股骨近端防旋髓内钉(proximal femoral nail antirotation,PFNA)内固定术围手术期隐性失血的影响及其安全性。方法:将78例老年股骨转子间骨折患者随机分为加味桃红四物汤组(38例)和常规治疗组(40例)。所有患者均由同一组医生完成PFNA内固定手术,术后12 h开始皮下注射低分子量肝素注射液,每天1次,连用7 d。加味桃红四物汤组自入院2 h后即口服加味桃红四物汤,直至术后第7天,手术日停服1次。常规治疗组除不口服加味桃红四物汤外,其余治疗均与加味桃红四物汤组相同。测定2组患者的失血量,术后7 d时通过超声检查观察下肢静脉血栓形成情况。结果:加味桃红四物汤组的失血总量和术后隐性失血量均低于常规治疗组[(1 240.0±297.0)mL,(1 475.0±300.0)mL,t=-124.637,P=0.000;(797.0±290.0)mL,(988.0±288.0)mL,t=-80.898,P=0.000];2组患者显性失血量和术前隐性失血量比较,组间差异均无统计学意义[(359.0±65.0)mL,(357.0±58.0)mL,t=1.698,P=0.000;(157.0±41.3)mL,(159.0±40.4)mL,t=-1.829,P=0.068]。术后7 d时常规治疗组1例患者出现股静脉栓塞,加味桃红四物汤组未发现下肢静脉血栓。2组患者的下肢静脉血栓发生率比较,差异无统计学意义(P=1.000)。结论:围手术期应用加味桃红四物汤可有效减少老年股骨转子间骨折PFNA内固定术围手术期隐性失血,并且具有较高的安全性。     

桃红四物汤对大鼠心梗后心肌间质胶原重构的影响

目的:探讨桃红四物汤对大鼠心梗后左室非梗死区心肌间质胶原重构的影响。方法:雄性Wistar大鼠,结扎左冠状动脉主干造成心肌梗死模型,将造模成功的大鼠随机分成3组:模型对照组、桃红四物汤组、卡托普利组;加上假手术组,共4组,每组12只。桃红四物汤组4.86 g·kg-1ig;卡托普利组0.2 g·kg-1自由饮水给药。假手术组和模型组给予同等剂量生理盐水,连续给药12周,12周后处死大鼠。采用Masson染色法检测心肌间质胶原纤维的表达情况,采用免疫组化法检测左室非梗死区心肌间质中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达及Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白的比值。结果:桃红四物汤组大鼠心肌间质胶原纤维分布比较均匀、纤细,心肌间质纤维化程度较模型对照组明显减轻。模型组大鼠心肌间质胶原蛋白含量及Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比值较假手术组明显升高,桃红四物汤组及卡托普利组的心肌间质胶原蛋白含量及Ⅰ/Ⅲ型胶原蛋白比值较模型组明显降低。结论:桃红四物汤可抑制大鼠心梗后心肌间质胶原纤维增生、胶原蛋白表达,降低非梗死区心肌Ⅰ/Ⅲ胶原蛋白的比值,减轻心肌间质胶原重构。     

恒古骨伤愈合剂在胫骨中下段骨折术后的应用及作用机制

目的:探讨恒古骨伤愈合剂在胫骨中下段骨折术后的应用价值及作用机制。方法:胫骨中下段骨折患者65例,随机分为2组,恒古骨伤愈合剂组32例、桃红四物汤组33例。2组患者均采用微创经皮锁定加压钢板内固定手术治疗,手术均由同一组医生完成。术后第1天开始,恒古骨伤愈合剂组患者予以恒古骨伤愈合剂口服,每次25 mL,每2日1次;桃红四物汤组患者予以桃红四物汤口服,每日1剂,每日早晚各1次;共服用4周。记录术后患肢肿胀消退时间、瘀斑消失时间及骨折愈合时间。分别于服药前和服药4周后,采用疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)对患肢疼痛情况进行评分;检测患者血清中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(bone gla-protein,BGP)及Ⅰ型前胶原羧基末端前肽(carboxy terminal propeptide of typeⅠprocollagen,PⅠCP)含量。术后12个月,参照Johner-Wruhs胫骨骨折疗效评价标准评价综合疗效。结果:65例患者均顺利完成手术和术后治疗;均获随访,随访时间12～26个月,中位数18个月。恒古骨伤愈合剂组,术后患肢肿胀消退时间、瘀斑消失时间及骨折愈合时间均短于桃红四物汤组[(15.03±2.29)d,(18.52±3.51)d,t=-4.722,P=0.000;(19.09±2.96)d,(24.09±3.23)d,t=-6.497,P=0.000;(22.47±3.32)周,(26.79±2.89)周,t=-5.597,P=0.000]。服药前,2组患者患肢疼痛VAS评分比较,差异无统计学意义(t=0.995,P=0.324);服药4周后,2组患者患肢疼痛VAS评分均较服药前降低[(7.28±0.77)分,(2.75±0.76)分,t=26.070,P=0.000;(7.06±0.99)分,(3.18±0.85)分,t=17.913,P=0.000],且恒古骨伤愈合剂组患肢疼痛VAS评分低于桃红四物汤组(t=-2.160,P=0.035)。服药前,2组患者血清ALP、BGP、PⅠCP含量比较,组间差异均无统计学意义(t=-0.344,P=0.732;t=0.653,P=0.561;t=0.283,P=0.778);服药4周后,2组患者血清ALP、BGP含量较服药前增加、PⅠCP含量较服药前降低[恒古骨伤愈合剂组:(74.88±6.43)单位·L~(-1),(128.91±10.10)单位·L~(-1),t=-26.581,P=0.000;(2.26±0.39)μg·L~(-1),(3.76±0.50)μg·L~(-1),t=-11.789,P=0.000;(121.06±10.49)μg·L~(-1),(67.13±6.23)μg·L~(-1),t=23.366,P=0.000;桃红四物汤组:(75.45±7.12)单位·L~(-1),(112.33±7.86)单位·L~(-1),t=-20.542,P=0.000;(2.20±0.37)μg·L~(-1),(3.15±0.49)μg·L~(-1),t=-9.010,P=0.000;(120.27±11.90)μg·L~(-1),(77.33±7.74)μg·L~(-1),t=16.951,P=0.000],且恒古骨伤愈合剂组血清ALP、BGP含量高于桃红四物汤组(t=7.395,P=0.000;t=4.987,P=0.000)、PⅠCP含量低于桃红四物汤组(t=-5.844,P=0.000)。术后12个月参照上述疗效评价标准,恒古骨伤愈合剂组优19例、良11例、可2例,桃红四物汤组优16例、良9例、可8例,恒古骨伤愈合剂组的综合疗效优于桃红四物汤组(Z=-6.377,P=0.000)。结论:恒古骨伤愈合剂用于胫骨中下段骨折的术后治疗,可缓解患肢疼痛,促进术后患肢肿胀消退、瘀斑消失及骨折愈合,综合疗效优于桃红四物汤;其作用机制可能与提高患者血清中ALP、BGP含量、降低血清中PⅠCP含量,调节骨代谢有关。     

桃红四物汤对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌三磷酸肌醇受体表达的影响

目的观察桃红四物汤对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌三磷酸肌醇受体(IP3R)表达的影响,从Wnt/Ca~(2+)信号通路角度探讨其作用机制。方法取2月龄雄性SD大鼠80只,随机分为正常组、模型组、桃红四物汤组和阻滞剂组,每组20只,除正常组外,其余各组均阻断血流制备大鼠右后肢缺血-再灌注损伤模型,桃红四物汤组、阻滞剂组造模前分别给予桃红四物汤灌胃、阻滞剂腹腔注射预处理,HE染色和DAPI荧光染色观察再灌后8 h腓肠肌细胞凋亡,免疫组化检测再灌后8 h腓肠肌IP3R蛋白的表达,RT-PCR检测再灌后0、2、4、8 h腓肠肌IP3R mRNA的表达。结果 HE染色和DAPI荧光染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显升高(P0.05);与模型组比较,桃红四物汤组和阻滞剂组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显降低(P0.05),桃红四物汤组低于阻滞剂组(P0.05)。免疫组化及RT-PCR检测结果显示,与正常组比较,模型组大鼠腓肠肌IP3R蛋白和m RNA表达明显上调(P0.05);与模型组比较,桃红四物汤组、阻滞剂组大鼠腓肠肌IP3R蛋白和m RNA表达明显下调(P0.05)。结论桃红四物汤通过下调Wnt5a/Ca~(2+)信号通路IP3R的表达减轻肢体缺血-再灌注损伤。     

桃红四物汤对大鼠创伤性股骨头缺血性坏死进程中GPR48表达的影响

目的:观察桃红四物汤对大鼠创伤性股骨头缺血性坏死进程中GPR48表达的影响,探讨桃红四物汤改善坏死股骨头血运及坏死骨新生的作用效果。方法:大鼠造模成功后随机分为桃红四物汤低、中、高剂量组、模型组。桃红四物汤组采用低、中、高剂量灌胃,正常对照组、模型组采用等量的生理盐水灌胃,灌胃8周后收集样本,观察样本大体外观、组织形态学、空骨陷窝率;RT-PCR检测大鼠股骨头坏死过程中GPR48的表达情况。结果:(1)大体样本观察:模型组大鼠股骨头呈暗红色,粗糙,有不同程度的关节软骨面塌陷。桃红四物汤组与模型组基本一致,但塌陷程度较轻。(2)X线结果:模型组、桃红四物汤组出现密度减低区,骨小梁排列紊乱,有不同程度的关节软骨面塌陷。(3)HE染色:模型组、桃红四物汤组股骨头髓腔空虚,造血组织、骨小梁骨细胞大量减少,空骨陷窝大量形成。(4)RT-PCR分析结果:正常对照组、桃红四物汤组、模型组的GPR48表达量逐渐减少,但桃红四物汤组不同剂量之间,随着剂量增高GPR48表达量逐渐升高,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:桃红四物汤可促进大鼠创伤性股骨头缺血性坏死进程中GPR48的表达。     

跳骨片含药血清抑制脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应的作用机制研究

目的:探讨跳骨片含药血清抑制脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应的作用机制。方法:将10只8周龄雄性SD大鼠随机分为跳骨片组和空白组,跳骨片组以0.32 g·kg-1剂量的跳骨片灌胃,空白组给予等量生理盐水灌胃;每天灌胃1次,连续7 d;末次灌胃1 h后,经腹主动脉取血,分别制备跳骨片含药血清和空白血清,低温保存备用。从10只4周龄SD大鼠膝关节软骨中分离软骨细胞并培养,光学显微镜下观察软骨细胞形态,并用Ⅱ型胶原酶免疫组化鉴定。将培养好的第2代软骨细胞随机分为空白血清组、模型组、跳骨片含药血清组,其中空白血清组以含10%空白血清的培养基(dulbecco modified eagle medium,DMEM)培养;模型组以浓度为10 ng·mL-1的脂多糖和含10%空白血清的DMEM培养;跳骨片含药血清组以浓度为10 ng·mL-1的脂多糖和含10%跳骨片含药血清的DMEM培养;3组均连续干预培养8 h,采用酶联免疫吸附法检测软骨细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)3、MMP9含量,采用荧光定量RT-PCR法检测软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达水平,采用Western blot法检测软骨细胞中β-链蛋白(β-catenin)、卷曲蛋白-2(Frizzled-2)的蛋白表达量,采用免疫荧光检测法检测软骨细胞中β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthasc kinase-3β,GSK-3β)、蛋白多糖1(proteoglycans 1,PGS1)的蛋白表达量。结果:(1)软骨细胞免疫组化鉴定结果。第2代软骨细胞胞浆及细胞膜呈棕黄色阳性染色,具有典型的软骨细胞生物学特征。(2)软骨细胞MMP3、MMP9含量。脂多糖干预8 h后,空白血清组、模型组和跳骨片含药血清组的软骨细胞MMP3、MMP9含量比较,组间差异均有统计学意义[(34.019±1.036)ng·mL-1,(44.645±2.473)ng·mL-1,(32.941±1.792)ng·mL-1,F=36.060,P=0.000;(1.348±0.038)ng·mL-1,(1.562±0.112)ng·mL-1,(1.331±0.015)ng·mL-1,F=11.319,P=0.000];模型组软骨细胞MMP3、MMP9含量均高于空白血清组(LSD-t=-7.016,P=0.000;LSD-t=-3.768,P=0.003);跳骨片含药血清组软骨细胞MMP3、MMP9含量均低于模型组(LSD-t=7.652,P=0.000;LSD-t=4.066,P=0.002);空白血清组软骨细胞MMP3、MMP9含量与跳骨片含药血清组比较,差异均无统计意义(LSD-t=0.635,P=0.549;LSD-t=0.299,P=0.770)。(3)软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关基因的表达。脂多糖干预8 h后,空白血清组、模型组和跳骨片含药血清组软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、Frizzled-2、Wnt-4、CKI-ε基因表达量比较,组间差异均有统计学意义(1.000±0.275,2.258±0.206,1.431±0.304,F=36.709,P=0.000;1.000±0.133,0.417±0.104,0.842±0.094,F=29.259,P=0.000;1.000±0.191,1.737±0.238,1.445±0.337,F=7.027,P=0.015;1.000±0.341,3.801±0.579,1.876±0.388,F=71.903,P=0.000;1.000±0.309,2.208±0.708,1.441±0.421,F=64.178,P=0.000);模型组软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2、Wnt-4、CKI-ε基因表达量均高于空白血清组(LSD-t=-8.431,P=0.000;LSD-t=-3.723,P=0.005;LSD-t=8.062,P=0.000;LSD-t=-11.235,P=0.000),GSK-3β基因表达量低于空白血清组(LSD-t=7.397,P=0.000);跳骨片含药血清组软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2、Wnt-4、CKI-ε基因表达量均低于模型组(LSD-t=5.541,P=0.000;LSD-t=1.477,P=0.017;LSD-t=8.062,P=0.000;LSD-t=6.882,P=0.000),GSK-3β基因表达量高于模型组(LSD-t=-5.387,P=0.000);空白血清组软骨细胞中β-catenin、Wnt-4、CKI-ε基因表达量均低于跳骨片含药血清组(LSD-t=-2.289,P=0.018;LSD-t=-3.658,P=0.005;LSD-t=-4.352,P=0.002);空白血清组软骨细胞中GSK-3β、Frizzled-2基因表达量与跳骨片含药血清组比较,差异均无统计学意义(LSD-t=2.009,P=0.075;LSD-t=-3.658,P=0.051)。(4)软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2的蛋白表达。脂多糖干预8 h后,空白血清组、模型组和跳骨片含药血清组软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2蛋白表达量比较,组间差异均有统计学意义(0.449±0.063,0.746±0.156,0.549±0.056,F=5.323,P=0.026;1.348±0.038,1.562±0.112,1.331±0.015,F=6.291,P=0.034);模型组软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2蛋白表达量高于空白血清组(LSD-t=-11.235,P=0.005;LSD-t=-3.104,P=0.021);跳骨片含药血清组软骨细胞中β-catenin、Frizzled-2蛋白表达量低于模型组(LSD-t=6.883,P=0.037;LSD-t=3.039,P=0.023);空白血清组软骨细胞中β-catenin蛋白表达量低于跳骨片含药血清组(LSD-t=-4.352,P=0.002);空白血清组软骨细胞中Frizzled-2蛋白表达量与跳骨片含药血清组比较,差异无统计学意义(LSD-t=-0.065,P=0.950)。(5)软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、PGS1的蛋白表达。脂多糖干预8 h后,软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、PGS1蛋白染色明显,呈绿色;空白血清组、模型组和跳骨片含药血清组软骨细胞中β-catenin、GSK-3β、PGS1蛋白表达量比较,组间差异均有统计学意义(0.014±0.002,0.029±0.006,0.018±0.002,F=9.910,P=0.013;0.380±0.011,0.237±0.015,0.287±0.002,F=56.639,P=0.000;0.034±0.003,0.022±0.002,0.029±0.003,F=27.232,P=0.001);模型组软骨细胞β-catenin蛋白表达量高于空白血清组(LSD-t=-4.103,P=0.006),GSK-3β、PGS1蛋白表达量低于空白血清组(LSD-t=1.048,P=0.000;t=7.365,P=0.000);跳骨片含药血清组软骨细胞β-catenin蛋白表达量低于模型组(LSD-t=-3.548,P=0.012),GSK-3β、PGS1蛋白表达量高于模型组(LSD-t=-3.657,P=0.011;LSD-t=-3.273,P=0.017);空白血清组软骨细胞中β-catenin蛋白表达量与跳骨片含药血清组比较,差异无统计学意义(LSD-t=-0.554,P=0.599);空白血清组软骨细胞中GSK-3β、PGS1蛋白表达量高于跳骨片含药血清组(LSD-t=6.827,P=0.000;LSD-t=4.092,P=0.010)。结论:跳骨片含药血清可以抑制脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应,延缓关节软骨退变。其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路的调控有关,其中β-catenin、Frizzled-2、GSK-3β、Wnt-4、CKI-ε基因可能是该信号通路的重要靶点。但是由于引起OA的因素众多且跳骨片含药血清成分多且复杂,有待于进一步研究证实。     

基于VEGF/DLL4信号研究桃红四物汤对创伤性股骨头坏死大鼠的作用及机制

目的 通过观察桃红四物汤对创伤性股骨头坏死大鼠的VEGFA、DLL4蛋白表达的影响，探究其防治创伤性股骨头坏死的作用机制。方法 将40只SPF级健康雄性SD大鼠，采用随机数字表分为正常组、模型组、桃红四物汤低剂量组、桃红四物汤中剂量组和桃红四物汤高剂量组，每组8只，共5组。正常组大鼠予以常规喂养加生理盐水灌胃；模型组手术造模成功后予以常规饲料喂养加生理盐水灌胃；桃红四物汤低、中、高剂量组分别予以正常喂养并分别予以桃红四物汤9 g/kg、18 g/kg、36 g/kg的标准进行灌胃。持续干预4周后，采集股骨头标本，观察股骨头组织形态学、Micro CT、股骨头血管微密度、VEGFA和DLL4蛋白表达的情况。结果 Micro CT可见：桃红四物汤能有效改善创伤性股骨头坏死大鼠股骨头关节面塌陷，以中高剂量组改善明显。病理学形态可见，经桃红四物汤灌胃干预后，大鼠股骨头的骨小梁结构、局部血液供应及空骨陷窝较模型组均出现不同程度的改善，并以桃红四物汤中高剂量组为佳。股骨头微血管密度，与模型组相比，其余4组大鼠股骨头微血管密度都要高，差异有统计学意义（P <0.05）；与桃红四物汤高剂量组股骨...     

桃红四物汤对糖尿病视网膜病变引起的细胞损伤及HIF-1α表达的影响

目的 探究桃红四物汤对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)的保护作用及潜在的分子机制。方法 (1)取hRMECs,设置5组：空白对照组加5 mmol/L葡萄糖培养,高糖模型组加30 mmol/L葡萄糖培养,桃红四物汤低、中、高剂量组分别加30 mmol/L葡萄糖和相应浓度桃红四物汤含药血清培养,通过Transwell和划痕实验检测细胞的侵袭和迁移能力,血管生成实验检测细胞的成管能力,ELISA试剂盒检测细胞中血管内皮生长因子(VEGF)水平,Western blot法检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达情况。(2)另外设置4组：空白对照组加5 mmol/L葡萄糖培养,高糖模型组加30 mmol/L葡萄糖培养,桃红四物汤组加30 mmol/L葡萄糖和高剂量桃红四物汤含药血清培养,桃红四物汤+HIF-1α过表达组采用HIF-1α过表达的hRMECs细胞加30 mmol/L葡萄糖和高剂量桃红四物汤含药血清培养,考察HIF-1α过表达对桃红四物汤的功能回复作用。结果 (1)与空白对照组比较,高糖模型组细胞侵袭和迁移能力均明显增强(P均<0.05),成管数量明显...     

桃红四物汤联合诱导膜治疗大鼠骨缺损

【目的】 探讨桃红四物汤联合诱导膜治疗大鼠骨缺损的疗效。【方法】 将30只SD大鼠随机分为诱导膜+桃红四物汤组、诱导膜组、对照组等3组,每组10只。骨缺损模型是在大鼠股骨放置内固定钢板后截除4 mm的骨段形成骨缺损。对照组建立骨缺损模型,其余2组复制股骨骨缺损诱导膜模型。诱导膜组和诱导膜+桃红四物组模型建立后4周取出骨水泥并在骨缺损区植骨。从术后第2天开始,诱导膜+桃红四物汤组采用桃红四物汤剂灌胃治疗8周,诱导膜组及对照组组给予等体积生理盐水灌胃8周,术后12周取材,采用X射线摄片、苏木素-伊红（HE）染色法观察骨缺损区成骨情况,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测缺损植骨区血管内皮生长因子（VEGF）、骨形态发生蛋白2（BMP-2）、转化生长因子β1（TGF-β1）mRNA 表达。【结果】 诱导膜+桃红四物组Lane-Sandhu X射线评分,VEGF、BMP-2、TGF-β1 mRNA 表达水平均高于诱导膜组及对照组（P < 0.001）。【结论】 桃红四物汤+诱导膜对骨缺损区的骨修复具有一定促进作用。     

桃红内异散对大鼠子宫内膜异位病灶MicroRNA-126的影响

目的探讨活血化瘀软坚散结法对大鼠子宫内膜异位病灶microRNA-126的影响。方法选择SD雌性大鼠作为实验动物并分为假手术组、模型组、桃红内异散组、孕三烯酮组,建立子宫内膜异位症模型后,假手术组及EMs模型组给予生理盐水干预、桃红内异散组给予中药75 g~(-1)·kg~(-1)·d~(-1)干预;孕三烯酮组给予孕三烯酮0.25 g~(-1)·kg~(-1)·w~(-1)干预。连续干预4周后,采用RT-PCR技术检测EMs模型大鼠异位病灶组织中microRNA-126水平。结果与模型组比较,桃红内异散能够显著升高EMs模型大鼠microRNA-126水平(P0.01)。结论桃红内异散可显著升高microRNA-126从而抑制异位子宫内膜的微血管生长,这是桃红内异散治疗子宫内膜异位症的分子机理之一。     

血管内皮生长因子和骨形态发生蛋白2在非创伤性股骨头坏死不同区域的表达

目的:探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)在非创伤性股骨头坏死不同区域的表达情况。方法:将从单侧人工髋关节置换术中取得的40个非创伤性坏死股骨头沿冠状面自正中用摆锯剖开,分别在坏死区、交界区和正常区各凿取1块约1 cm×1 cm×0.4 cm的骨块,制成石蜡切片,采用免疫组织化学法测定不同区域VEGF和BMP-2的表达情况。结果:1VEGF表达结果。3个区域VEGF阳性面积百分比比较,差异有统计学意义[(6.25±2.61)%,(19.30±4.56)%,(11.63±4.12)%;χ2=81.100,P=0.000];坏死区阳性面积百分比小于交界区和正常区(χ2=81.040,P=0.000;χ2=22.200,P=0.000),交界区大于正常区(χ2=18.410,P=0.000)。3个区域VEGF表达平均灰度比较,差异有统计学意义(86.30±6.84,31.85±4.89,73.93±5.78;F=939.984,P=0.000);坏死区平均灰度大于交界区和正常区(P=0.000;P=0.000),交界区小于正常区(P=0.000)。2BMP-2的表达结果。3个区域的BMP-2阳性面积百分比比较,差异有统计学意义[(5.20±2.46)%,(17.43±4.77)%,(10.03±4.32)%;χ2=76.450,P=0.000];坏死区阳性面积百分比小于交界区和正常区(χ2=76.320,P=0.000;χ2=21.950,P=0.000),交界区大于正常区(χ2=27.400,P=0.000)。3个区域BMP-2表达平均灰度比较,差异有统计学意义(88.65±6.61,41.25±5.00,76.80±5.33;F=751.985,P=0.000);坏死区BMP-2表达平均灰度大于交界区和正常区(P=0.000;P=0.000),交界区小于正常区(P=0.000)。结论:VEGF和BMP-2在非创伤性股骨头坏死交界区表达强度高于坏死区和正常区,交界区可能是影响股骨头坏死预后的关键区域。     

桃红四物汤对实验性脑缺血大鼠血清中ET-1,Ang-1,VEGF的影响

目的:观察实验性脑缺血损伤大鼠血清中内皮素1(ET-1),血管形成素1(Ang-1)和血管内皮生长因子(VEGF)水平的变化及桃红四物汤(TSD)对其的干预作用。方法:健康SD大鼠48只,以线栓法构建大鼠大脑中动脉栓塞致局灶性缺血损伤模型,实验动物随机分为6组,分别为假手术组、模型组、桃红四物汤3个剂量组(18,9,4.5 g·kg~(-1))和尼莫地平组(0.02 g·kg~(-1))。连续ig 7 d,采用TTC染色法对脑梗死体积进行检测,通过测定全血黏度和血浆黏度,观察桃红四物汤对脑缺血损伤大鼠血液流变学的影响,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清中ET-1,Ang-1和VEGF水平。结果:桃红四物汤高剂量组能显著减小脑缺血梗死体积。与假手术组比较,模型组全血黏度高、中、低切及血浆黏度均升高,差异具有统计学意义;与模型组比较,桃红四物汤高、中剂量组可显著降低高、中、低3个切变率下的全血黏度及血浆黏度,桃红四物汤低剂量组可显著降低脑缺血大鼠的血浆黏度;与模型组比较,桃红四物汤能显著降低血清中ET-1含量,显著升高血清中Ang-1和VEGF含量。结论:桃红四物汤可以明显改善脑梗死情况以及促进实验性脑缺血大鼠缺血区的血管新生,其作用机制可能与调控脑缺血大鼠血清中ET-1,Ang-1,VEGF含量有关。     

前列安通片对精索静脉曲张大鼠附睾α-糖苷酶、L-肉毒碱的影响

目的观察α-糖苷酶、L-肉毒碱在精索静脉曲张大鼠附睾的表达情况,探讨前列安通片提高生育力可能的作用机制。方法将SD大鼠通过缩窄左肾静脉制备精索静脉曲张大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、前列安通片组、桃红四物汤组。连续药物干预4周后,观察精子密度、活力,检测附睾α-糖苷酶、L-肉毒碱的含量。结果模型组大鼠精子活力与密度低下,附睾α-糖苷酶、L-肉毒碱呈弱表达;前列安通片组、桃红四物汤组大鼠精子活力与密度明显增高,前列安通片组较桃红四物汤组增高明显(P均<0.05)。结论前列安通片可提高精索静脉曲张大鼠精子密度和活力,提高附睾α-糖苷酶、L-肉毒碱含量,并可能通过此作用而达到提高生育力的目的。