丹参注射液对骨性关节炎模型兔膝关节软骨细胞p-IκBα表达影响的实验研究

目的:观察丹参注射液对体外培养骨性关节炎模型兔膝关节软骨细胞p-IκBα表达的影响。方法:取12只6月龄新西兰大白兔关节软骨作体外细胞培养,培养后软骨细胞随机分为正常组、模型组、玻璃酸钠组、丹参组4组。采用NO诱导凋亡,各组给予相应处理24 h,Western blot法检测各组软骨细胞p-IκBα的表达。结果:与正常组比较,模型组软骨细胞p-IκBα蛋白明显增强,差异有显著统计学意义(P0.01);玻璃酸钠组、丹参组p-IκBα蛋白相对表达量明显低于模型组,差异有显著统计学意义(P0.01);丹参组IκBα蛋白相对表达量明显低于玻璃酸钠组,差异有显著统计学意义(P0.01)。结论:丹参注射液可以通过抑制IκBα磷酸化,从而抑制NF-κB信号通路的激活,保护软骨下骨及软骨细胞,有效防治OA。     

膝痹康含药血清对兔软骨细胞中MMP-3的影响

目的：探讨膝痹康对IL-1诱导的兔软骨细胞中MMP-3蛋白含量及MMP-3mRNA表达的影响。方法：把软骨细胞随机分为空白组（A组）;模型组（B组）及低、中、高剂量组（C、D、E组）并加以培养、干预。用酶联接免疫吸附剂测定（ELISA）法检测细胞MMP-3蛋白含量,再用两步法RT-PCR法检测MMP-3mRNA的表达水平。结果：空白对照组正常关节软骨细胞MMP-3蛋白含量及MMP-3mRNA表达量低于模型对照组,低、中、高剂量组组MMP-3蛋白含量及MMP-3mRNA表达量相对于模型组明显降低（P〈0.01）。其中中剂量组MMP-3mRNA表达量最低（P〈0.01）。结论：膝痹康含药血清可以抑制MMP-3的蛋白含量和MMP-3mRNA的表达水平,这可能是膝痹康中药延缓膝OA软骨退变,防止骨性关节炎的重要作用机制之一。     

川芎嗪对鼠骨关节炎关节软骨MMP-1、TIMP-1表达的影响

目的:观察关节内注射川芎嗪对鼠骨关节炎(Osteoarthritis,OA)模型关节软骨退变及软骨中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)表达的影响,探讨川芎嗪对OA的修复作用。方法:50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、透明质酸钠组、丹参组和川芎嗪组5组:除空白对照组外,其余四组作左侧跟腱切除建立右膝OA模型。造模后第5周开始,川芎嗪组于右膝关节内注射盐酸川芎嗪注射液作为治疗,于第12周末处死动物,取股骨外髁软骨标本,进行HE染色,光镜下观察其病理改变,以免疫组织化学法检测关节软骨中的MMP-1、TIMP-1水平。结果:川芎嗪组关节软骨退变减缓,Mankin’s评分及软骨中MMP-1的水平非常显著低于模型组(P<0.01),TIMP-1水平较模型组显著上升(P<0.01)。结论:川芎嗪能明显降低OA软骨退变的程度,明显降低OA软骨中MMP-1的水平,增加TIMP-1的水平,具有保护和修复早期OA关节软骨的作用,可延缓OA的病理过程,有可能成为防治OA的良好药物。     

优化活血利水方对大鼠自体髓核移植后移植髓核MMP-3、TIMP-1表达的影响

目的:建立自体髓核移植致大鼠非压迫腰椎间盘髓核突出神经根性疼痛模型,探讨优化活血利水方对移植髓核MMP-3、TIMP-1表达的影响。方法:40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、阿斯匹林组,建立大鼠自体髓核移植致腰5神经根性痛模型,造模后1周起各组分别予生理盐水1.82mL、生理盐水1.82mL、中药汤剂1.82mL、阿斯匹林1.82mL(0.1g.kg-1.d-1),每日1次,连续用药4周。第31天取移植髓核检测MMP-3、TIMP-1mRNA及蛋白的表达。结果:正常髓核中MMP-3、TIMP-1mRNA及蛋白表达量很少,各实验组移植髓核中MMP-3、TIMP-1mRNA及蛋白表达量与对照组比较均显著增多(P<0.0l)。与模型组比较,中药组、西药组MMP-3mRNA及蛋白表达量显著减少(P<0.01),TIMP-1mRNA及蛋白相对表达量显著增多(P<0.01)。中、西药组比较,两组间存在显著性差异,中药组MMP-3mRNA及蛋白显著减少,TIMP-1mRNA及蛋白显著增多。结论:优化活血利水方可以显著下调移植髓核MMP-3mRNA及其蛋白表达,上调TIMP-1mRNA及其蛋白表达,减轻椎间盘的退变,促进椎间盘的修复。     

针刺对膝骨关节炎大鼠软骨基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的影响

目的:探讨针刺治疗骨关节炎(OA)的作用机制.方法:选用SD雌性大鼠40只,采用随机数字表随机分为正常组、模型组、针刺组和药物组,每组10只.单侧后肢跟腱切除建立OA动物模型,针刺组采用电针大鼠"膝前"穴和"后三里"穴,药物组采用膝关节处涂擦扶他林乳剂进行治疗,正常组与模型组不予干预.采用免疫组化技术,观察各组关节软骨中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)及组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的特点,并比较各组间的差异.结果:4组组间差异非常显著,模型组、针刺组和药物组的MMP-1、MMP-3和TIMP-1表达均较正常组显著上调(均P<0.01);针刺组和药物组与模型组比较,均下调MMP-1和MMP-3,上调TIMP-1,差异均有统计学意义(均P<0.01);但针刺组MMP-1和MMP-3的表达显著低于药物组(均P<0.01),而TIMP-1的表达则显著高于药物组(P<0.01)o结论:针刺对OA软骨细胞MMP-1、MMP-3、TIMP-1的表达具有影响作用,下调MMP-1、MMP-3,上调TIMP-1,作用优于扶他林乳剂,说明针刺对OA软骨具有一定的保护作用.     

平喘方对哮喘急性发作期小鼠MMP-9、TIMP-1、E-cadherin及CollagenⅠ的影响

目的通过检测小鼠肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的蛋白表达水平,探讨平喘方对哮喘急性发作期小鼠气道重塑的作用机制。方法将40只Balb/c雄性小鼠按随机数字表分为空白组、模型组、地塞米松组、平喘方组,每组10只。除空白组外,其余组均采用OVA"致敏+激发"建立哮喘模型。灌胃给药干预1周后,采用Masson染色观察肺组织病理变化,ELISA法检测血小板衍生生长因子(PDGF)水平,Western blot法检测MMP-9、TIMP-1、E-cadherin、CollagenⅠ蛋白含量。结果空白组可见少许淡蓝色胶原纤维,胶原容积分数(CVF)最小,与空白组比较,模型组胶原纤维面积明显增多(P0.01),颜色更深;与模型组比较,地塞米松组、平喘方组小鼠胶原纤维面积明显较少(P0.01)。与空白组比较,模型组小鼠PDGF因子水平、MMP-9、TIMP-1、CollagenⅠ蛋白表达水平显著上升(P0.01),E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P0.01);与模型组比较,地塞米松组及平喘方组小鼠PDGF因子水平、TIMP-1、CollagenⅠ均显著下降(P0.01,P0.05),E-cadherin蛋白表达水平均显著上升(P0.01),地塞米松组MMP-9蛋白表达水平显著升高(P0.01),平喘方组MMP-9蛋白水平升高,但不显著(P0.05)。结论在哮喘急性发作期,平喘方可通过抑制PDGF的释放,降低MMP-9、TIMP-1、CollagenⅠ的表达以及上调E-cadherin的表达来缓解气道重塑,从而发挥哮喘治疗作用,为化痰药与祛瘀药相配治疗哮喘提供了理论依据。     

针刺对膝骨关节炎大鼠MMP-3、TIMP-1及TGF-β1的影响

目的:研究针刺对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨组织中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨针刺治疗KOA的作用机制。方法:选用SD大鼠30只,随机分成空白组、模型组和治疗组,模型组和治疗组采用木瓜蛋白酶右后膝关节注射的方法制备大鼠KOA模型,针刺治疗2周后测定各组大鼠滑膜MMP-3、TIMP-1及TGF-β1的含量。结果:模型组软骨组织中MMP-3和TIMP-1含量较空白组显著增多(P0.01),治疗组MMP-3和TIMP-1含量较模型组显著降低(P0.05),但仍然略高于空白组;模型组软骨组织中TGF-β1含量较空白组显著降低(P0.01),治疗组TGF-β1含量较模型组增多(P0.05),但仍略低于空白组。结论:针刺能有效平衡KOA模型大鼠中MMP-3和TIMP-1的异常表达,并且对TGF-β1具有一定的上调功能,这可能是针刺治疗KOA有效的机制之一。     

槲皮素对关节软骨中MMP-13、TIMP-1表达的影响

目的探讨槲皮素对关节软骨中MMP-13及TIMP-1表达的影响。方法通过制备大鼠OA模型,研究槲皮素在体内对关节滑液中MMP-13及TIMP-1表达的影响。通过体外培养软骨细胞,以IL-1β为诱导刺激,研究槲皮素对MMP-13及TIMP-1在mRNA及蛋白水平表达的影响。结果槲皮素可显著降低关节滑液中MMP-13的含量,提高TIMP-1的表达水平;同时在体外细胞培养中,槲皮素也显著抑制了MMP-13的基因及蛋白表达水平,提高了TIMP-1在基因及蛋白水平上的表达。结论槲皮素可显著降低MMP-13/TIMP-1的比例,促进抑制软骨细胞外基质的降解,促进对关节软骨的保护。     

益气逐瘀解毒颗粒调控 MMPs/TIMPs 平衡抗大鼠肝纤维化作用研究

目的:探讨益气逐瘀解毒颗粒对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的治疗作用及机制。方法:将SD雄性大鼠给予CCl4橄榄油混合液进行皮下注射7周,制备肝纤维化大鼠模型,随机分为益气逐瘀解毒颗粒高、中、低剂量组、阳性对照组、模型组、空白组,给予相应治疗,5周后处死大鼠,检测外周血生化指标,逆转录-定量PCR法和蛋白印迹法分别检测大鼠肝组织中基质蛋白酶1 (Matrix metalloproteinase1, MMP-1)、MMP-2、MMP-9、MMP-13及基质蛋白酶抑制因子1 (tissue Inhibitor of metalloproteinases1,TIMP-1)表达水平,肝组织苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin staining, HE染色)、MASSON染色检测肝纤维化程度。结果:治疗后与空白组比较,模型组的ALT、AST无显著性差异(P 0.05),MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13基因表达显著降低(P 0.05),TIMP-1基因表达显著升高(P 0.05),肝纤维化半定量计分(SSS)评分显著升高(P 0.01);与模型组比较,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组ALT、AST无显著性差异(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒高剂量组MMP-1、MMP-2、MMP-9、MMP-13基因表达明显升高(P 0.05),中剂量组MMP-9、MMP-13基因表达明显增高(P 0.05),低剂量组MMP-13基因表达明显增高(P 0.05),高、中剂量组TIMP-1基因表达明显降低(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒各剂量组MMP-2、MMP-9蛋白表达量无显著性差异(P 0.05),高、中剂量组MMP-13蛋白表达量显著升高(P 0.05),各剂量组TIMP-1蛋白表达量均显著下降(P 0.05),以低剂量组下降尤为显著,优于高、中剂量组(P 0.05),各药物干预组SSS评分显著降低(P 0.01);与阳性对照组比较,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组ALT、AST无显著性差异(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒高剂量组MMP-2基因表达明显升高(P 0.05),高、中剂量组TIMP-1基因表达明显降低(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒高、中剂量组MMP-13蛋白表达显著升高(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒各剂量组TIMP-1蛋白表达显著降低(P 0.05),低剂量组下降尤为显著,优于高、中剂量组(P 0.05),益气逐瘀解毒颗粒高、中、低剂量组SSS评分显著降低(P 0.01)。结论:调控MMPs/TIMPs平衡可能是益气逐瘀解毒颗粒抗肝维化的作用机制之一,其通过升高MMP-13、降低TIMP-1表达水平,调控MMPs/TIMPs平衡,促进过度沉积的细胞外基质(Extracelluar matrix,ECM)降解,改善CCl4诱导肝纤维化大鼠模型的肝脏功能,从而改善其肝纤维化程度。     

芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺组织基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶抑制剂1表达的影响

目的观察芪蛭皱肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠肺组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)及金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)表达的影响,探讨其干预气道炎症及气道重塑的作用机制。方法 60只实验大鼠采用气管内滴注脂多糖联合烟熏法复制大鼠COPD模型,第29日开始药物干预,随机分为空白组、模型组、阳性对照组和芪蛭皱肺颗粒高、中、低剂量组,每组10只。第58日,HE染色观察大鼠肺组织形态学变化,ELISA检测大鼠血清MMP-9、TIMP-1含量,Q-PCR和Western blot分别检测大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1基因和蛋白表达。结果芪蛭皱肺颗粒各剂量组均可改善COPD大鼠肺组织病理损害。ELISA显示:与空白组比较,模型组大鼠血清MMP-9、TIMP-1含量及MMP-9/TIMP-1比值均显著升高(P0.05);与模型组比较,芪蛭皱肺颗粒高、中剂量组大鼠血清MMP-9、TIMP-1含量及MMP-9/TIMP-1比值均显著降低(P0.05)。Q-PCR显示:与空白组比较,模型组大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1m RNA表达均显著升高(P0.05);与模型组比较,芪蛭皱肺颗粒高、中剂量组大鼠肺组织MMP-9 mRNA表达显著降低(P0.05),芪蛭皱肺颗粒各剂量组大鼠肺组织TIMP-1m RNA表达显著降低(P0.05)。Westernblot显示,与空白组比较,模型组大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1蛋白表达显著升高(P0.05);与模型组比较,芪蛭皱肺颗粒高、中剂量组MMP-9、TIMP-1蛋白表达显著降低(P0.05)。结论芪蛭皱肺颗粒可调节大鼠血清和肺组织MMP-9、TIMP-1的表达,纠正MMP-9/TIMP-1状态失衡,抑制肺组织炎症反应,从而干预气道重塑的发生,这可能是其防治COPD的机制之一。     

健骨胶囊对免骨性关节炎软骨及滑膜影响的实验研究

目的:探讨健骨胶囊对实验性骨性关节炎(OA)家兔软骨及滑膜病变的影响.方法:通过兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶建立OA模型,8周后光镜及扫描电镜下观察软骨、滑膜组织学改变,Mankin法评分;采用免疫组化方法检测金属蛋白酶-1、3(MMP-1、3)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的分布和阳性程度.结果:与模型组比较,健骨胶囊组病理学改变明显减轻(P＜0.01),加MMP-1、加MMp-3、IL-1β表达显著减少(P＜0.01),TIMP-1表达增加(P＜0.05);健骨胶囊较维固力能明显降低IL-1β的表达(P＜0.05).结论:健骨胶囊能够减轻OA软骨退行性变和滑膜炎症,机理可能与下调IL-1β、调节MMP-1、MMP-3、TIMP-1表达有关.     

青蒿琥酯对糖尿病大鼠视网膜MMP-9表达的影响

目的检测大鼠视网膜基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制因子基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达量的变化,探讨青蒿琥酯在糖尿病视网膜病变过程中的作用。方法将24只大鼠随机分为对照组(n=6)、模型组(n=9)和青蒿琥酯组(n=9),采用链脲佐菌素(STZ)制备糖尿病大鼠模型,3个月后,给予青蒿琥酯ip 10 d后,摘除眼球,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测视网膜MMP-9及TIMP-1 mRNA相对表达量,免疫组化法检测MMP-9蛋白在视网膜组织中的表达情况。结果青蒿琥酯组大鼠视网膜MMP-9 mRNA的相对表达量明显低于模型组,而TIMP-1的相对表达量高于模型组,差异显著(P0.05),免疫组化检测发现,青蒿琥酯组大鼠视网膜MMP-9的阳性表达率低于模型组(P0.05)。结论青蒿琥酯具有抑制糖尿病视网膜病变MMP-9表达的作用。     

基于纤溶酶途径介导的软骨细胞外基质损伤机制研究温针灸治疗膝骨性关节炎的作用机理

目的通过观察温针灸干预后膝骨性关节炎(KOA)兔关节软骨尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)因子表达的变化,探索温针灸治疗KOA的作用机制。方法将40只新西兰兔随机分为空白组、模型组、温针灸组、u PA抑制剂组,每组10只,采用右后肢石膏管型固定法制备KOA模型,空白组不予处理,模型组每天于兔架上固定15 min,温针灸组予以温针灸治疗,u PA抑制组每两日于关节腔注射u PA抑制剂稀释液1 m L/kg,干预结束后取兔关节软骨行TUNEL、RT-PCR、Western blot检测。结果 TUNEL细胞凋亡检测发现:较空白组,模型组软骨细胞凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组及u PA抑制剂组软骨细胞凋亡率明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。RT-PCR检测结果发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13 mRNA表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);Western blot检测发现:较空白组,模型组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P <0. 05);较模型组,温针灸组u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05) u PA抑制剂组软骨中u PA、MMP-1、MMP-13蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P <0. 05);相关性分析显示u PA与MMP-1、MMP-13均由相关关系。结论 (1)温针灸可抑制软骨细胞的过度凋亡;(2)温针灸可有效抑制软骨细胞中u PA、MMP-1、MMP-13的表达,且可通过抑制u PA的生成进而阻断MMP-1、MMP-13的活化,发挥保护关节软骨最终达到治疗KOA的作用。     

针刺结合雷火灸对膝骨关节炎大鼠MMP-3、TIMP-1及TGF-β1的影响（英文）

目的:观察针刺结合雷火灸对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨组织中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨针刺结合雷火灸治疗KOA的作用机制。方法:Sprague-Dawley(SD)大鼠30只,根据随机数字表法随机分成空白组、模型组和针灸组,每组10只大鼠。模型组和针灸组予木瓜蛋白酶右后膝关节注射造模。治疗2星期后,采用酶联免疫吸附法测定各组大鼠滑膜MMP-3、TIMP-1的含量,采用Motic B5显微摄像系统测定TGF-β1的含量。结果:模型组软骨组织中MMP-3和TIMP-1的含量较空白组显著增加(均P0.01);针灸组MMP-3和TIMP-1含量低于模型组,组间差异有统计学意义(均P0.05);针灸组MMP-3和TIMP-1含量高于空白组,组间差异有统计学意义(均P0.05)。模型组软骨组织中TGF-β1的含量较空白组显著降低(P0.01),针灸组TGF-β1含量较模型组升高(P0.05),但低于空白组,组间差异有统计学意义(P0.05)。结论:针刺结合雷火灸能有效平衡KOA模型大鼠中MMP-3和TIMP-1的异常表达,并且对TGF-β1具有一定的上调功能,这可能是针刺结合雷火灸治疗KOA的作用机制之一。     

针刀对膝骨性关节炎兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原、聚集蛋白聚糖相关蛋白表达的影响

目的:观察针刀对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)兔软骨细胞外基质Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)相关蛋白表达的影响,探讨针刀治疗KOA的相关机制。方法:新西兰兔随机分为空白组、模型组、针刀组和电针组,每组10只,以左后肢伸直位固定制动法制备KOA模型。针刀组以膝关节内、外侧副韧带及髌韧带为松解对象,以纵疏横剥法进行针刀松解,每周1次,共治疗3周;电针组电针左后肢"阴陵泉""阳陵泉""内膝眼""外膝眼",每次20min,每周治疗3次,共3周。X线观察膝关节影像学改变,光镜观察关节软骨形态学改变,Western blot法分别检测膝关节整合素β1(Integrinβ1)、Col-Ⅱ、基质金属蛋白酶3(MMP-3)及Aggrecan的蛋白表达水平。结果:X线结果显示,造模后,模型制备成功,关节病损情况属于早中期膝骨关节炎。光镜结果显示,模型组关节软骨层表面粗糙不平,表层软骨细胞稀少,细胞排列紊乱,部分软骨细胞坏死,潮线模糊或扭曲不完整,部分软骨有血管通过或血管翳生成,电针组及针刀组关节软骨组织结构均较模型组明显改善,针刀组较电针组改善更明显。Mankin评分比较,模型组较空白组明显升高(P0.01),针刀组较模型组明显降低(P0.01)。Western blot结果显示,模型组膝关节组织中Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较空白组显著降低(P0.01),MMP-3蛋白表达显著升高(P0.01);针刀组Integrinβ1、Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达较模型组显著升高(P0.01,P0.05),MMP-3蛋白表达较模型组显著降低(P0.01);电针组Integrinβ1蛋白表达较模型组明显升高(P0.05),其它指标与模型组的差异均无统计学意义(P0.05)。结论:针刀可能通过对软骨力学环境的影响,激活整合素力学信号转导通路,促进细胞外基质Col-Ⅱ、Aggrecan蛋白表达,下调MMP-3的蛋白表达水平,阻抑软骨细胞外基质的降解,延缓软骨损伤与关节退变程度,达到治疗KOA的目的。     

三联疗法对兔膝骨性关节炎软骨MMP-1,MMP-13及TIMP-1 mRNA的影响

目的:观察模型兔膝骨性关节炎软骨中MMP-1、MMP-13及TIMP-1 mRNA表达水平及"三联疗法"对它的影响.方法:将56只大耳白兔随机取8只作正常对照组,48只进行手术方法制作兔膝OA模型.8周后待兔膝骨性关节炎模型建立后,随机将48只追模动物分为模型组、中药薰洗组、功能锻炼组、手法弹拨组、扶他林组、三联疗法组.各治疗组分别进行4周治疗后,取股骨内髁内侧退变软骨用反转录-多聚酶链反应的方法检测各治疗组对软骨中MMP-1、-13及TIMP-1 mRNA表达的影响.结果:正常组软骨中MMP-1、MMP-13及TIMP-1 mRNA表达较低,模型组软骨中MMP-1、MMP-13的mRNA表达明显增高,TIMP-1的mRNA检测为阴性表达.各治疗组软骨中MMP-1、MMP-13的mRNA表达降低,三联疗法组比其它治疗组降低显著(P<0.05),各治疗组软骨中TIMP-1的mRNA表达极低,且各治疗组比较差异无统计学意义.结论:各治疗组均能抑制软骨中MMP-1、-13的mRNA表达,不同程度减轻兔膝骨性关节炎软骨的退变,各治疗组对软骨中TIMP-1的mRNA表达无影响.三联疗法组与其它治疗组在抑制MMP-1、MMP-13在兔膝骨性关节炎软骨中比较差异有统计学意义(P<0.05),说明"三联疗法组"在治疗兔膝骨性关节炎抑制基质胶原溶解破坏减轻软骨退变优于其它治疗组,它对兔膝骨性关节炎的治疗作用机制之一可能与抑制MMP-1、-13表达有关.     

复方黄芪当归汤对MS大鼠肾损害的干预作用及其机制研究

目的:观察复方黄芪当归汤对MS大鼠肾损害的干预作用,论证其在诊治MS方面的药用价值。方法:制备大鼠代谢综合征模型,观察正常对照组、模型组、预防组、中药治疗组以及西药对照组,各组用药前后肾脏组织形态学病理改变,并观察对肾小管组织中MMPs及TIMPs的水平表达的影响。结果:(1)干预4周后,除预防组外各组大鼠的体质量均较正常对照组明显增加,差异显著(P0.05);(2)与正常对照组相比,各组大鼠MMP-2、TIMP-2、MMP-9、TIMP-1的mRNA相对表达量均显著增加,MMP-2/TIMP-2,MMP-9/TIMP-1比值均低于正常对照组(P0.05);(3)各组大鼠MMP-2、TIMP-2、MMP-9、TIMP-1的mRNA相对表达量均低于模型组,MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2比值均高于模型组,具有统计学差异(P0.05)。结论:(1)复方黄芪当归汤预防和治疗组能减少MS模型大鼠肾组织MMP-2、TIMP-2、MMP-9、TIMP-1的mRNA表达,并升高MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值,改善MMPs/TIMPs平衡。(2)复方黄芪当归汤预防和治疗组能减轻MS模型大鼠的肾脏损伤。     

心痛方对急性心肌梗死大鼠MMP-9 mRNA及TIMP-1 mRNA表达的影响

目的通过观察心痛方对大鼠急性心肌梗死(AMI)后基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)mRNA表达及对心肌形态学的影响,探讨心痛方治疗AMI的疗效机制。方法 80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、心痛方组、双抗组(阿司匹林+氯吡格雷),冠脉结扎法制备AMI模型,灌胃给药7 d后处死大鼠,运用RT-PCR法测定心肌组织MMP-9 mRNA、TIMP-1 mRNA表达,心肌细胞HE染色观察形态学改变。结果心痛方能使AMI大鼠心肌内MMP-9 mRNA表达减少(P0.01);TIMP-1mRNA表达升高(P0.01);MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值降低(P0.01);心肌损伤程度及心梗面积与MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA比值呈正直线相关。结论心痛方对AMI缺血心肌具有保护作用,其作用机制可能与增加TIMP-1 mRNA表达,降低MMP-9 mRNA表达,从而调节MMP-9 mRNA/TIMP-1 mRNA的平衡有关。     

基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响

目的基于NF-κB信号通路探讨散寒化痰方外敷对兔模型膝骨关节炎的影响。方法以改良Hulth法制备兔KOA模型。将36只新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性对照组(扶他林软膏)及散寒化痰方低、中、高剂量组,每组6只,外敷给药6周。HE染色、MASSON染色法及电镜分别观察家兔膝关节软骨组织形态学及软骨细胞超微结构变化;ELISA法测兔血清IL-1β、TNF-α水平;Western blot及RT-PCR检测MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5、CollagenⅡ蛋白及mRNA表达;免疫组化法检测NF-κB p65入核表达。结果与正常组比较,模型组兔膝关节软骨细胞结构破坏严重;血清IL-1β、TNF-α水平上升(P0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达上调(P0.05,P0.01),CollagenⅡ蛋白及mRNA表达下调(P0.01),NF-κB p65入核表达升高(P0.05)。与模型组比较,散寒化痰方各剂量组兔膝关节软骨细胞结构仅轻度损伤,血清IL-1β、TNF-α水平降低(P0.01),MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5蛋白及mRNA表达下调(P0.05,P0.01),NF-κB p65入核表达降低(P0.05,P0.01);散寒化痰方低、高剂量组兔膝关节软骨组织中CollagenⅡ蛋白及mRNA表达均上调(P0.05,P0.01)。结论散寒化痰方可能通过抑制膝关节软骨细胞NF-κB p65入核表达,阻止NF-κB信号通路激活,下调MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5及上调CollagenⅡ表达,抑制兔血清IL-1β、TNF-α水平升高,进而保护膝骨关节软组织,延缓KOA发生与发展。     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病细支气管壁细胞外基质重塑的影响

目的:观察二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠细支气管结构重塑的作用及其机制。方法:50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、二陈汤加味低、中、高剂量组(5,10,20 g·kg-1),共5组,每组10只。以香烟烟熏加内毒素脂多糖(LPS)制备大鼠COPD模型。造模成功后,各观察组灌胃给药,检测肺功能,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织中基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinases,MMP-1),MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissueinhibitor of metalloproteinase,TIMP-1)mRNA表达,免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)检测MMP-1,MMP-9,TIMP-1以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原在细支气管中的表达。结果:与正常组比较,模型组肺组织匀浆MMP-1,MMP-9,TIMP-1 mRNA表达均显著增强(P0.01),细支气管壁MMP-1,MMP-9,TIMP-1,Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的表达均显著增强(P0.05)。与模型组比较,中、高剂量组肺组织匀浆MMP-1,MMP-9,TIMP-1 mRNA表达显著减弱(P0.01),细支气管壁中、高剂量组Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达明显减弱(P0.05)。结论:二陈汤加味对细支气管管壁细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中的胶原有抑制作用。其机制可能与抑制MMP-1,MMP-9,并协调性抑制TIMP-1的表达,阻止细支气管ECM胶原的沉积有关。