黑米花色苷抑制人乳腺癌细胞促血管生成因子表达的机制

目的探讨黑米花色苷抑制HER-2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453促血管生成因子表达的分子机制。方法以黑米花色苷和表皮细胞生长因子(EGF)单独或联合处理MDA-MB-453细胞株,Western blot检测HER-2/neu及MAPK信号通路关键蛋白ERK-1/-2的磷酸化水平改变,免疫荧光检测NF-κB p65的细胞内定位,RT-PCR检测肿瘤细胞促血管生成因子(包括VEGF、MMP-2/-9和uPA)在mRNA水平的表达变化。结果黑米花色苷能够显著抑制HER-2/neu和ERK-1/-2蛋白的磷酸化,阻止NF-Κb p65向细胞核内转位,并在mRNA水平抑制各促血管生成因子的表达。结论黑米花色苷可能通过对HER-2/neu及其下游EGFR/Ras/MAPK信号通路的阻断最终实现对肿瘤细胞促血管生成因子表达的抑制作用。     

木黄酮对MCF-7/HER-2细胞uPA表达影响

目的探讨植物化学物质染料木黄酮(genistein)抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法采用基因转染技术建立HER-2/neu高表达MCF-7乳腺癌细胞(命名为MCF-7/HER-2),5×10-5mol/L染料木黄酮处理MCF-7/HER-2细胞24,48,72 h后,应用western bolt、免疫沉淀、RT-PCR及激酶活性分析法检测genistein对MCF-7/HER-2乳腺癌细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)表达、HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平及蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性变化。结果MCF-7/HER-2细胞uPA的mRNA和蛋白表达量比MCF-7细胞uPA的mRNA和蛋白表达量高,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平和PTK活性增加,染料木黄酮处理MCF-7/HER-2细胞后,uPA的mRNA和蛋白表达量下调,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平降低,PTK活性下降,且这种作用具有时效性。结论染料木黄酮能下调MCF-7/HER-2细胞HER-2/neu受体的PTK活性和蛋白磷酸化水平,抑制uPA表达,这可能是染料木黄酮抗乳腺癌血管生成的分子机制之一。     

染料木黄酮对MDA-MB-453乳腺癌细胞uPA表达及PTK活性的影响研究

目的: 观察染料木黄酮(亦称三羟异黄酮,genistein,Gen)对MDA-MB-453乳腺癌细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)表达及蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性的影响,探讨Gen抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法: 5×10-5mol/L Gen处理MDA-MB-453细胞24、48、72 h后,应用Western blot、免疫沉淀、RT-PCR及激酶活性分析法检测Gen对MDA-MB-453乳腺癌细胞uPA表达、HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平及PTK活性变化。结果: Gen处理MDA-MB-453细胞后,uPA的mRNA和蛋白表达量下调,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平降低,PTK活性下降,且这种作用具有时效性。结论: Gen能有效抑制乳腺癌细胞HER-2/neu受体的PTK活性和蛋白磷酸化水平,在转录和翻译水平下调uPA的表达,从而抑制HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成。     

乳腺癌组织中基质金属蛋白酶-9和人表皮生长因子受体-2相关性分析

目的探讨乳腺癌患者的组织中金属蛋白酶-9(MMP-9)、人表皮生长因子受体-2(HER-2)与临床病理分期的相关性。方法选取2015年4月-2017年1月就诊吉林省肿瘤医院乳腺科的乳腺占位性病变,将经影像引导下活组织检查明确诊断为乳腺癌的132例患者设为观察组,50例乳腺良性肿瘤患者设为对照组,同时检查患者的MMP-9、HER-2,通过Spearman相关性分析MMP-9、HER-2水平与患者病理分期的相关性,同时,采用ROC曲线分析MMP-9、HER-2水平的灵敏度和特异度差异。结果 MMP-9表达不同TNM分期及淋巴结转移情况对比差异存在统计学意义(P0.05),HER-2表达淋巴结转移情况对比差异存在统计学意义(P0.05);MMP-9、HER-2的表达与乳腺癌患者的TNM分期及组织学分级(G分级)均存在正相关。MMP-9与患者的病理及组织学分级的相关系数显著高于HER-2(P0.05);MMP-9、HER-2与病理诊断结果 (乳腺癌为阳性,对照组为阴性)相比,MMP-9曲线下面积(AUC)显著大于HER-2(P0.05),HER-2 AUC显著低于MMP-9+HER-2联合检查(P0.05),MMP-9与MMP-9+HER-2相比差异无统计学意义(P0.05)。结论乳腺癌组织中MMP-9和HER-2无相关性,但MMP-9水平能够反映出不同TNM分期和淋巴结转移情况的差异,MMP-9、HER-2与乳腺癌患者的TNM分期和组织学分级均存在正相关性,MMP-9水平检查更能够体现乳腺癌患者的严重程度。     

循环肿瘤细胞(CTC)在乳腺癌预后与化疗评估中的应用

目的通过检测乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞(CTC)的数目变化,探讨CTC在评估患者病情及评估化疗效果中的应用。方法选取于本院进行治疗的女性乳腺癌患者共135例,于化疗前后抽取患者健侧上肢静脉血5 mL,利用膜滤过法(ISET)检测外周血CTC。比较CTC检测结果与肿瘤分期、ER/PR、HER-2、Ki-67的相关性;比较CTC阳性率与乳腺癌患者生存分析及化疗前后变化。结果CTC阳性率与肿瘤TNM分期显著相关(P<0.05),TNM分期为Ⅰ期的患者CTC阳性率为7.7%,而在TNM分期为Ⅳ期患者中CTC阳性率为73.8%(P<0.05);HER-2与Ki-67表达亦与CTC阳性率明显相关,在HER-2阳性与Ki-67高表达的患者中CTC阳性率分别为71.2%和68.8%,远高于HER-2阴性与Ki-67低表达患者的34.8%和29.1%(P<0.05)。而乳腺癌患者CTC阳性率与患者绝经状态、ER和PR表达无显著相关性(P>0.05)。CTC阳性组总生存率为36.73%,CTC阴性组总生存率为59.37%,CTC阳性组总生存率低于CTC阴性组总生存率(P<0.05)。化疗前乳腺癌患者CTC阳性率为52.5%(71/135),而化疗后乳腺癌患者的CTC阳性率显著降低至20.0%(27/135),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论乳腺癌患者外周血CTC的阳性率与临床TNM分期、HER-2和Ki-67指数相关;CTC可以用于估计乳腺癌患者预后生存率。乳腺癌患者化疗前后CTC的变化情况与化疗疗效有一定关系。     

染料木黄酮对MDA-MB-453乳腺癌细胞VEGF表达的影响

目的:观察染料木黄酮(genistein,Gen)对MDA-MB-453乳腺癌细胞血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)表达的影响,探讨Gen抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法:5×10-5mol/LGen处理MDA-MB-453细胞24、48、72h后,应用免疫组织化学、Westernblot及RT-PCR法检测MDA-MB-453乳腺癌细胞VEGF的表达变化。结果:Gen处理MDA-MB-453细胞24、48、72h后,VEGF的mRNA和蛋白表达量随着处理时间的延长逐渐下降。结论:Gen能在转录和翻译水平下调HER-2/neu高表达乳腺癌细胞VEGF的表达,这可能是Gen抑制HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的机制之一。     

HER-2/neu在卵巢癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究HER-2/neu在卵巢肿瘤组织及正常卵巢组织中的表达,探讨其与卵巢癌发病的关系及其与临床病理参数的关系及临床意义。方法:收集60例卵巢病理标本。卵巢癌30例,卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织各15例,采用组织芯片技术及免疫组织化学法(SP)检测卵巢癌中HER-2/neu的表达情况。结果:HER-2/neu在卵巢癌组织中的表达率为93.3%,与正常卵巢组织(6.7%)及卵巢良性肿瘤组织(26.7%)比较,差异有统计学意义(P<0.05);HER-2/neu在手术-病理分期为Ⅲ、Ⅳ期的卵巢癌组织中阳性表达率显著高于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05);不同组织学类型及组织学分级中卵巢癌组织中HER-2/neu蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HER-2/neu在卵巢癌组织中呈高表达,HER-2/neu的阳性表达与卵巢癌的手术-病理分期有关联,与组织学类型及分级无关。     

HER-2蛋白表达和基因扩增状态在乳腺癌中的一致性研究

目的探讨乳腺癌HER-2蛋白表达和基因扩增状态的一致性关系。方法采用免疫组化法和荧光原位杂交法检测120例乳腺癌组织中HER-2蛋白表达和HER-2基因扩增情况,分析乳腺癌中2种监测方法的一致性及与临床病理参数的关系。结果乳腺癌组织中HER-2蛋白表达阳性率为70.83%,而基因扩增率为19.16%,在85例HER-2蛋白表达阳性组织中有21例HER-2基因扩增阳性,而在23例HER-2基因扩增阳性的乳腺癌组织中仅2例无HER-2蛋白的过表达,HER-2蛋白表达和基因扩增间具有显著相关性(P0.01)。HER-2蛋白的表达和HER-2基因扩增均与乳腺癌病灶大小和组织学分级密切相关(P0.05),而与患者年龄、肿瘤的临床分期、腋窝淋巴结转移及ER和PR的状态无明显相关性(P0.05)。结论乳腺癌组织中HER-2蛋白表达和基因扩增与肿瘤分化程度密切相关,两者具有较好的一致性。     

乳腺癌淋巴结转移时人表皮生长因子-2、血管内皮生长因子及葡萄糖转运蛋白-1表达分析

目的 探讨乳腺癌淋巴结转移及未转移时人表皮生长因子-2(HER-2)、血管内皮生长因子(VEGF)、葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)在乳腺癌中的表达.方法 分析乳腺癌手术切除标本80例,其中无淋巴结转移者46例(无淋巴结转移组),有淋巴结转移者34例(有淋巴结转移组),应用免疫组织化学SP法分析两组HER-2、VEGF、GLUT-1表达情况,以及在不同TNM分期的乳腺癌中的表达情况.结果 HER-2、VEGF、GLUT-1在无淋巴结转移组阳性表达率分别为3.0％(6/46)、45.7％(21/46)、17.4％(8/46),淋巴结转移组阳性表达率分别为88.2％(30/34)、88.2％(30/34)、88.2％(30/34),两组阳性表达率比较差异有统计学意义(P＜0.01或＜0.05).HER-2、GLUT-1及VEGF表达TNM Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期两组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 HER-2、GLUT-1及VEGF在乳腺癌淋巴结转移中为高表达,不同肿瘤分期表达不同.     

老年女性乳腺浸润性导管癌患者ER等生物标志物对预后的影响

目的探讨老年女性乳腺浸润性导管癌患者雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER-2)的表达及其对患者预后的影响。方法对85例老年女性浸润性导管癌(年龄≥65岁)患者标本,分析ER、PR、HER-2的表达情况与TNM组织学分期、临床分期和肿瘤大小等临床指标的相关性以及患者生存率的关系。结果 ER、PR和HER-2的阳性表达率分别为75.3%、61.2%、16.5%;ER、PR的表达与组织学分级呈负相关(P0.05),HER-2阳性表达与组织学分级呈正相关(P0.05);ER、PR、HER-2阳性表达与患者肿瘤大小均无明显相关(P0.05);乳腺癌中ER阳性表达与患者临床分期呈负相关(P0.05)。ER、PR阳性对患者无病生存率无影响(P0.05)。HER-2阳性患者的生存率和无病生存率低于阴性患者(P0.05)。结论乳腺癌中HER-2表达提示患者预后不良。     

HER-2、hTERC在子宫颈上皮脱落细胞的表达及临床意义

目的:研究癌基因HER-2、端粒酶(the human telomerase gene,hTERC)在不同程度子宫颈病变脱落细胞中的表达,以探讨其在子宫颈癌发生、发展中的作用及临床意义。方法:采用荧光原位杂交(fluorescent in situ-hybridization,FISH)方法,检测15例正常、76例子宫颈上皮内瘤变(CIN)及24例浸润性子宫颈癌脱落细胞中HER-2、hTERC的表达情况。结果:HER-2在正常子宫颈脱落细胞、CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ及浸润性子宫颈癌中的阳性表达率分别为0.0%、6.3%、16.6%及58.3%,hTERC基因阳性表达率为6.7%、18.8%、65.0%及100.0%。②HER-2、hTERC基因在CINⅠ、CINⅡ~Ⅲ中阳性表达率比较,差异无显著性(P>0.05);在CINⅡ~Ⅲ及子宫颈癌组阳性表达率均显著高于正常组(P<0.05),同时子宫颈癌组明显高于CIN组(P<0.05)。③HER-2高表达与细胞分级有明显相关性(P<0.05),与临床分期、病理类型无关。结论:HER-2、hTERC基因高表达在子宫颈癌发生、发展中可能起重要作用,在子宫颈病变脱落细胞中检测HER-2、hTERC基因可以作为子宫颈癌早期筛查、病情监测和评估预后的辅助指标。     

三羟异黄酮对乳腺癌异种移植瘤血管生成影响

目的 探讨三羟异黄酮(genlstein)对原癌基因(HER-2／neu)高表达乳腺癌血管形成的影响及其与血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法 应用基因转染技术建立HER—2／neu高表达的乳腺癌细胞(MCF—7／HER—2)。免疫缺陷裸鼠(BALB／c)皮下接种乳腺癌(MCF—7和MCF—7／HER—2)细胞，其中接种MCF—7／HER—2细胞的裸鼠随机分为3组：对照组；genistein处理组：HER—2／neu抗体处理组。应用免疫组化法观察移植瘤内微血管密度(microvessel density，MVD)和VEGF的表达变化。结果 MCF—7／HER—2移植瘤与MCF—7移植瘤相比血管密度较大。VEGF表达增强；MCF—7／HER—2移植瘤经genistein和HER—2／neu抗体处理后。移植瘤的血管密度减少，VEGF表达降低。结论 HER—2／neu高表达能促进乳腺癌的血管生成，genistein可能通过下调VEGF的表达从而抑制HER—2／neu高表达乳腺癌的血管生成。     

ERK5MAPK在genistein对MDA-MB-231细胞增殖抑制中的作用

目的探讨ERK5(extracellular-regulated kinase5)MAPK(mitogen-activated protein kinase)信号转导通路与genistein对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制作用的关系。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测genistein对MDA-MB-231增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;应用western blot分别检测ERK5总蛋白和凋亡相关蛋白Bax、Caspase3的表达。结果genistein对MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测到细胞产生凋亡;western blot分析提示genistein抑制ERK5总蛋白的表达,促进Bax和Caspase3蛋白表达。结论genistein可以影响ERK5MAPK信号转导通路,使凋亡相关蛋白表达增加,抑制MDA-MB-231细胞增殖。     

类胡萝卜素对人乳腺癌细胞增殖及bcl-2基因表达的影响

目的 观察类胡萝卜素对人乳腺癌MCF－7细胞存活率、细胞周期和凋亡,以及对凋亡相关基因bcl－2的影响。方法 用MTT检测类胡萝卜素对MCF－7细胞作用的时间效应和剂量效应;流式细胞仪观察类胡萝卜素处理人乳腺癌细胞后细胞周期以及细胞凋亡的改变。用RT－PCR检测凋亡相关基因bcl－2的变化。结果 6种结构不同的类胡萝卜素对MCF－7乳腺癌细胞展现出不同的增殖抑制效果,60μmol／L的β－胡萝卡素和番茄红素在第4天的抑制率分别为88．4％和87．8％,而玉米黄素、角黄素、虾青素和玉米黄素双棕榈酸酯的抑制作用较弱。类胡萝卜素并不诱导87．8％,而玉米黄素、角黄素、虾青素和玉米黄毒素双棕榈酸酯的抑制作用较弱。类胡萝卜素并不诱导MCF－7细胞凋亡,番茄红素可阻滞细胞周期于G1／M,玉米黄素双棕榈酸酯可阻滞细胞周期于G0／G1期,而其他类胡萝卡素并不影响细胞周期。类胡萝卜素可不同程度地下调凋亡相关基因bcl－2mRNA的表达,bcl－2基因的下调与类胡萝卜素的抑制作用呈较明显的相关性。结论 类胡萝卜素可直接抑制人乳腺癌细胞MCF－7的增殖,不同结构的类胡萝卜素可能具有不同的抑制机制。     

两种方法对乳腺癌人类表皮生长因子受体2检测的一致性评价

  目的  对比分析免疫组织化学法（immunohistochemistry，IHC）和荧光原位杂交法（fluorescence in situ hybridization，FISH）对乳腺癌人类表皮生长因子受体2（human epidermal growth factor receptor-2，HER-2）检测的一致性评价。  方法  选取2013―2018年入住安徽省某三级甲等医院并确诊患乳腺癌的患者组织，分别采用IHC及FISH两种方法检测HER-2，对比其结果的差异及联系。  结果  在选取的276例乳腺癌患者体内发现FISH法检测HER-2扩增与乳腺癌组织学分级相关。IHC法检测HER-2结果为3+的病例与同时做FISH检测结果为阳性扩增的符合率可以达到90%以上。当IHC为-/+和3+时，2种方法检测结果的一致性最好。而HER-2检测为2+的病人，与FISH检测方法相比，两者的符合率仅为67.9%。  结论  HER-2基因扩增与乳腺癌的恶性程度增高有关，IHC筛查HER-2检测结果为2+乳腺癌需加做FISH检测，对于乳腺癌患者的进一步诊疗具有指导意义。     

S100A11在乳腺癌和癌旁组织中的表达及其与临床特征的关系

目的:探讨S100A11在乳腺癌和癌旁乳腺组织中的表达及其与患者临床特征之间的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测S100A11在55例女性乳腺癌及癌旁乳腺组织中的表达,分析S100A11与患者年龄、肿块大小、病理类型、临床TNM分期、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、HER-2、腋窝淋巴结转移及是否绝经的关系。结果:S100A11蛋白在乳腺癌细胞的胞浆中表达阳性率为73.73%,在癌旁乳腺组织中表达阳性率为42.31%,乳腺癌细胞表达阳性率与乳腺癌旁乳腺组织中表达的阳性率比较差异有统计学意义(χ2=7.005,P=0.008,P<0.05)。S100A11在乳腺癌组织中的表达与病理浸润情况有关(P=0.041,P<0.05),而与患者年龄、肿块大小、临床TNM分期、ER、PR、HER-2、腋窝淋巴结转移情况及是否绝经无关(P>0.05)。结论:乳腺癌组织S100A11蛋白表达增高与肿瘤的浸润有关,是判断乳腺癌生物学行为的有价值的参考指标。     

Sema4D和HER-2在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Sema4D和人类表皮生长因子受体2（HER-2）在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学sP法检测110例乳腺癌组织中Sema4D和HER-2的表达,并检测肿瘤微淋巴管密度（Microlymphtic vessel density,MLVD）。结果乳腺癌组织中Sema4D和HER-2蛋白的阳性表达率分别为71．82％（79／110）和33．64％（37／110）,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）：淋巴结转移阳性组的Sema4D阳性表达率和MLVD值显著高于淋巴结转移阴性组（P〈0．01）;Sema4D和HER-2阳性表达与组织学分级、TNM分期、淋巴结转移及ER表达状态显著相关（P〈0．05）,而与肿瘤大小及PR表达状态无关（P〉0．05）。相关分析结果显示Sema4D与HER-2表达呈正相关（r=0．535,P〈0．01）;单因素生存分析显示,Sema4D高表达组的5年生存率（74．19％）高于低表达组（53．16％）,其差异有统计学意义（P〈0．05）。结论Sema4D可能对乳腺癌的发生、发展起重要作用。     

Nexrutine Inhibits Survival and Induces G1 Cell Cycle Arrest,Which Is Associated with Apoptosis or Autophagy Depending on the Breast Cancer Cell Line

Breast cancers that are estrogen receptor (ER) negative or are ER negative with ErbB2/HER-2 overexpression have a poor prognosis, which emphasizes the importance of developing compounds for preventing breast cancer. Nexrutine, an herbal extract from the plant Phellodendron amurense, has been used for centuries in Asian medicine to treat inflammation, gastroenteritis, abdominal pain, and diarrhea. In this study we investigated the anticancer effects of Nexrutine on ER negative breast cancer cell lines that are positive or negative for HER-2. Nexrutine decreased the activities of 2 potential targets of breast cancer, cyclooxygenase (COX)-2, and peroxisome proliferators activated receptor gamma (PPARγ). The antiinflammatory effects of Nexrutine were evident with decreased prostaglandin (PG)E₂ production, protein expression of microsomal PGE₂ synthase (mPGES), and PPARγ. Nexrutine decreased cell survival and induced a G1 cell cycle arrest in SkBr3 and MDA-MB 231 cells, which were associated with reduced protein expression of Cyclin D1 and cdk2 along with increased protein expression of p21 and p27. The growth-inhibitory effect of Nexrutine was associated with apoptosis in SkBr3 cells and autophagy in MDA-MB231 cells. Based on these findings, we propose that Nexrutine may provide a novel approach for protection against breast cancer.