熊果酸对卵巢癌细胞转移的抑制作用

目的 熊果酸(UA)对人卵巢癌细胞株HO-8910PM黏附、侵袭及趋化运动的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用MTT法方法检测熊果酸对HO-8910PM细胞黏附能力的影响;Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭实验检测熊果酸对HO-8910PM细胞侵袭及运动的影响;采用RT-PCR和Western blot方法检测熊果酸对HO-8910PM细胞中MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA和蛋白的表达的影响。结果 在黏附试验中,不同浓度熊果酸作用细胞24h后,抑制率分别为44.03%、46.62%和55.11%,与对照组比较具有统计学意义(P＜0.05)。不同浓度的熊果酸在体外作用24h后可以显著抑制HO-8910PM细胞的侵袭能力,穿膜细胞数与对照组比较具有统计学意义(P＜0.01)。熊果酸处理后细胞趋化运动能力降低与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。不同浓度熊果酸作用24小时后,HO-8910PM细胞MMP-2 mRNA、MMP-9 mRNA表达量明显低于正常对照组(P＜0.05),Western blot结果显示:HO-8910PM细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达量受到明显抑制(P＜0.05)。结论 熊果酸抑制人卵巢癌细胞株HO-8910PM黏附、侵袭和转移的生物学行为,其作用机制可能与熊果酸显著抑制MMP-2、MMP-9表达水平有密切关系。     

山萘黄素对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响

目的研究山萘黄素(kaempferol)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用的机制。方法以台盼蓝拒染法检测山萘黄素对高转移卵巢癌细胞HO-8910PM细胞增殖的影响;采用Transwell小室法检测山萘黄素对HO-8910PM细胞的侵袭能力、趋化运动能力和黏附能力的影响。结果50μmol/L的山萘黄素作用细胞6h后能抑制HO-8910PM细胞体外侵袭人工基膜和趋化运动能力,抑制率分别为(10.53±2.71)%和(10.84±1.45)%,但与对照组相比,对黏附能力的影响无显著性差异。结论山萘菌素能抑制高转移卵巢癌细胞HO-8910PM的侵袭和运动能力,对黏附能力无显著影响。     

αvβ6整合素siRNA抑制人卵巢癌细胞体外及体内侵袭作用的研究

目的:研究整合素αvβ6小干扰RNA对人卵巢癌HO-8910PM细胞侵袭生长的抑制作用.方法:以脂质体法将整合素αvβ6-siRNA(siRNA组)及无义寡核苷酸质粒(Neo组)转染人卵巢癌HO-8910PM细胞,通过实时定量PCR及蛋白质印迹试验,分别测定siRNA组、Neo组和空白时照组αvβ6整合素mRNA和蛋白的表达,MTT法和Transwell小室法分别测定其体外增殖能力和侵袭力.将各组细胞接种于裸小鼠皮下,观察移植瘤生长速度,并用免疫组化法检测整合素αvβ6的表达.结果:与Neo组和空白对照组相比较,siRNA组中αvβ6整合素mRNA和蛋白表达强度明显降低;转染的卵巢癌HO-8910PM细胞侵袭力明显下降(P<0.01);各组细胞体外增殖能力差异无统计学意义(P>0.05),但siRNA组细胞裸鼠皮下移植瘤生长速度明显低于其他两组,免疫组化显示,转染整合素αvβ6-siRNA的移植瘤中整合素αvβ6为阴性表达.结论:αvβ6整合素siRNA转染HO-8910PM细胞后.通过降低αvβ6整合素mRNA和蛋白表达水平,抑制其对细胞外基质的侵袭,进而抑制裸鼠移植瘤的生长.     

米非司酮对高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM蛋白水解作用的影响

目的研究高转移卵巢癌细胞株HO-8910PM基质金属蛋白酶的表达情况及米非司酮对HO-8910PM细胞水解基质蛋白作用的影响.方法应用免疫组化染色法,检测H0-8910PM卵巢癌细胞基质金属蛋白酶的表达情况;采用水解空斑法检测不同浓度米非司酮对HO-8910PM细胞的体外水解人血浆基质蛋白空斑的变化.结果HO-8910PM细胞MMP-10及MMP-9表达较高,MMP-2表达较低;10 μmol/L、20μmol/L米非司酮培养48小时可显著降低具有蛋白水解作用的HO-8910PM细胞的百分比(P＜0.01),而5 μmol/L米非司酮组无明显变化(P＞0.05);不同浓度的米非司酮(5 μmol/L、10 μmol/L、20μmol/L)明显缩小HO-8910PM细胞的平均水解空斑面积.结论HO-8910PM细胞可表达MMP-10、MMP-9、MMP-2;米非司酮可抑制HO-8910PM细胞体外水解基质蛋白的能力.     

反义脱氧寡核苷酸抑制人卵巢癌HO-8910细胞株中ILK基因的表达

目的:探讨整合素连接激酶 (integirn-linked kinase,ILK) 反义寡核苷酸 (antisense oligonucleotide,ASODN) 对卵巢癌HO-8910细胞株中ILK基因表达的抑制作用.方法: 将ILK反义寡核苷酸(ILK-ASODN) 导入卵巢癌细胞株,阻断ILK的表达.转染后72h,用RT-PCR和Western-bllot法检测各组卵巢癌细胞ILK mRNA和蛋白表达量的变化.结果: ILK-ASODN处理后,各组卵巢癌细胞mRNA表达量明显下降,与两对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),且mRNA表达量随转染浓度的增高而减低;各组蛋白表达量均显著下降,各组与两对照组比较差异有极显著意义(P＜0.01),且蛋白表达量随转染浓度增高而减低.结论: ILK-ASODN导入卵巢癌细胞株后可以明显抑制卵巢癌HO-8910细胞株中ILK基因的mRNA表达和蛋白表达.     

hPTTG1基因沉默下调bFGF表达并抑制A2780细胞侵袭的研究

目的：探讨RNAi技术沉默卵巢癌细胞A2780细胞内hPTFG1表达对其侵袭性的影响及调控机制。方法：利用阳离子转染试剂将hPTTG1siRNA转染A2780细胞．荧光实时定量PCR检测hPTTG1及bFGF表达水平;MTT基质黏附实验检测细胞黏附能力;细胞侵袭重建基底膜实验测定细胞体外侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测bFGF蛋白表达水平。结果：hPTTG1siRNA转染组hPTTG1mRNA表达下降,抑制率为（76．8±4．1）％;转染hPTTG1siRNA后细胞黏附、侵袭和迁移能力降低;hPTTG1干扰后bFGFmRNA及蛋白表达下降。结论：hPTTG1siRNA能够抑制A2780细胞侵袭,可能是通过下调bFGF表达实现的。     

苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖影响

目的 探讨苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞增殖的影响。方法 不同浓度苏拉明作用于人卵巢癌细胞株HO-8910PM，用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测HO-8910PM增殖情况。结果 MTT结果显示50、100,200、300,400、500、600ug／mL浓度的苏拉明作用于HO-8910PM细胞96h的生长抑制率（GI）分别是13．1％、22．6％,35．1％、43．7％、54．3％、64．8％、70．9％，不同时间及不同浓度组吸光光度值A差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 苏拉明以时间及剂量效应方式抑制体外培养的HO-8910PM增殖；提示苏拉明作为HPA抑制剂有望成为转移性卵巢癌联合化疗用药。     

TGF-β1促进卵巢癌细胞转移机制的研究

目的探讨转化生长因子-β1促进卵巢癌细胞转移的机制。方法应用RT—PCR、WesternBlot和明胶酶实验等方法检测了卵巢癌细胞HO-8910和HO-8910PM中TGF—B1对MMP-2、MMP-9表达及分泌的调节作用;通过免疫组化方法检测了121例标本（包括31例正常卵巢组织、45例卵巢癌卵巢原发灶组织和45例卵巢癌转移灶组织）中TGF—B1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。结果结果显示TGF-β1主要上调了低转移细胞系HO-8910中MMP-2和MMP-9的表达和分泌;免疫组化结果表明卵巢癌原发灶组织中MMP-2的表达高于正常卵巢组织（P〈0．05）;TGF-β1、MMP-2和MMP-9在卵巢癌转移灶中的表达均明显高于原发灶（P〈0．01）;且TGF-β1与MMP-2和MMP-9的表达均存在相关性（P〈0．05）。结论TGF-β1主要通过上调MMP-2和MMP-9的表达和分泌促进了卵巢癌细胞的转移。     

hPTTG1基因沉默下调bFGF表达并抑制A2780细胞侵袭的研究

目的:探讨RNAi技术沉默卵巢癌细胞A2780细胞内hPTTG1表达对其侵袭性的影响及调控机制。方法:利用阳离子转染试剂将hPTTG1 siRNA转染A2780细胞,荧光实时定量PCR检测hPTTG1及bFGF表达水平;MTT基质黏附实验检测细胞黏附能力;细胞侵袭重建基底膜实验测定细胞体外侵袭能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Western blot检测bFGF蛋白表达水平。结果:hPTTG1siRNA转染组hPTTG1mRNA表达下降,抑制率为(76.8±4.1)%;转染hPTTG1siRNA后细胞黏附、侵袭和迁移能力降低;hPTTG1干扰后bFGFmRNA及蛋白表达下降。结论:hPTTG1siRNA能够抑制A2780细胞侵袭,可能是通过下调bFGF表达实现的。     

小干扰RNA沉默基质金属蛋白酶-2基因对卵巢癌细胞恶性行为的影响

 目的　探讨靶向基质全属蛋白酶-2（MMP-2）基因的RNA干扰（RNAi）技术对卵巢癌OVCAR-3细胞MMP-2的沉默作用,以及沉默MMP-2基因对OVCAR-3细胞生长、黏附、侵袭和迁移能力的影响。方法　合成特异性靶向MMP-2基因的小干扰RNA（siRNA）并转染卵巢癌OVCAR-3细胞,以非特异性序列转染细胞作为阴性对照组,以培养液代替siRNA转染细胞作为空白对照组,采用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测转染后24 、48 和72 h MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法绘制细胞生长曲线,利用Transwell、划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果　与阴性对照组相比,OVCAR-3细胞在转染siRNA-MMP-2后24 、48 和72 h MMP-2 mRNA表达量分别下降了73.8 %、78.8 %和78.4 %（均P＜0.05）,蛋白表达量分别下降了72.6 %、81.2 %和76.4 %（均P＜0.05）,以48 h作用最强;细胞生长曲线显示细胞生长无明显变化（P＞0.05）;60 min和90 min时的黏附抑制率分别为55.0 %和44.8 %（均P＜0.05）;细胞的侵袭和迁移能力分别下降29.7 %和35.8 %（均P＜0.05）。结论　siRNA介导的MMP-2基因沉默能明显抑制OVCAR-3细胞的黏附、侵袭和迁移能力,而对其生长无明显影响,MMP-2基因有可能成为卵巢癌基因治疗的重要靶点。     

去甲斑蝥酸钠注射液对人肝癌HepG2细胞侵袭迁移、黏附的影响

 目的 研究去甲斑蝥酸钠注射液对人肝癌HepG2细胞侵袭迁移、黏附的影响及相关的机制。方法 采用MTT法及Transwell实验检测去甲斑蝥酸钠注射液对HepG2细胞迁移、黏附及侵袭力的影响,及采用免疫组织化学法分析去甲斑蝥酸钠注射液处理HepG2细胞后MMP-9蛋白的表达情况。结果 与空白组对比药物作用后HepG2细胞黏附率、侵袭及侵袭细胞数较对照组明显下降(P<0.05)。0.25μg/ml药物浓度作用细胞30、60、90和120min后的黏附抑制率分别为48.11%、33.81%、28.97%和16.83%。HepG2细胞的迁移及侵袭细胞数明显减少,迁移、侵袭抑制率分别为64.19%和58.19%。MMP-9蛋白表达量随药物浓度的增加而逐渐减少。结论 去甲斑蝥酸钠注射液可明显抑制HepG2细胞细胞黏附、迁移和侵袭的能力;其机制可能与MMP-9蛋白的表达有关。     

β-榄香烯抑制HepG2细胞侵袭及转移的作用机制

目的:研究β-榄香烯（β-elemene）对体外培养的人肝癌细胞HepG2迁移与侵袭能力的影响及可能的作用机制。方法:细胞分为试验组和对照组,试验组细胞给予β-榄香烯处理,对照组细胞不添加任何药物。采用MTT法检测HepG2细胞的活力;分别采用划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验、细胞-基质黏附实验测定HepG2细胞的体外迁移、侵袭和黏附能力;采用明胶酶谱法及western blot检测HepG2细胞MMP-9酶活性及蛋白表达;采用免疫荧光染色及western blot检测HepG2细胞NF-κB p65核转位的情况。结果:划痕实验、Transwell小室迁移及侵袭实验、细胞-基质黏附实验表明试验组细胞的迁移、侵袭和黏附能力均明显低于对照组（P＜0.05）,呈浓度依赖性;明胶酶谱法及western blot表明β-榄香烯能明显降低MMP-9的酶活性及其蛋白表达,呈浓度依赖性;免疫荧光染色及western blot表明与对照组相比,β-榄香烯可以明显抑制HepG2细胞NF-κB p65的核转位,从而抑制其活化,呈浓度依赖性。结论:一定量的β-榄香烯在体外可以抑制HepG2细胞迁移、侵袭和黏附,其机制可能与其通过抑制NF-κB p65活化从而抑制MMP-9的表达有关。     

Integrin alpha v beta 6 mediates the potential for colon cancer cells to colonize in and metastasize to the liver

Integrin alpha v beta 6 (alpha v beta 6) is correlated with colon cancer progression. To detect the effects of alpha v beta 6 on liver metastasis, the specificity of alpha v beta 6 against the monoclonal antibody (mAb) 2G2 was examined by immunoprecipitation. Integrin alpha v beta 6-immunoreactivity (IR) in liver metastasis tissues (63 cases) and colon carcinoma (358 cases) were examined. These results showed that alpha v beta 6 was specifically recognized by the mAb 2G2, and that rates of alpha v beta 6 positivity in liver metastatic tissues (71.4%, 45/63) were higher than that for primary colon cancer (34.0%, 122/358) (P < 0.01). Patients who were alpha v beta 6-positive had higher liver metastasis rates (17%, 21/122) than those who were alpha v beta 6-negative (only 3%, 7/236) (P < 0.01). To examine the underlying mechanisms associated with alpha v beta 6 regulating colonic metastasis in the liver, experimental liver metastasis (intrasplenic injection of HT29 transfectants) and liver colonization assays (direct injection of WiDr transfectants into the liver) in nude mice were performed; these demonstrated that alpha v beta 6 contributed to the promotion of the metastatic potential and the survival of cancer cells in the liver. Matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) levels in the cultures of both HT29 and WiDr cells were detected by the Biotrak MMP-9 activity assay system and gelatin zymography assay, and showed that suppression of alpha v beta 6-IR inhibited MMP-9 activity and secretion. Transwell migration assay in vitro also showed that alpha v beta 6 promoted migration on fibronectin for HT29/WiDr mock compared with HT29/WiDr antisense beta 6 transfects (P < 0.01). We concluded that alpha v beta 6 may mediate the potential for colon cancer cells to colonize in and metastasize to the liver. The mechanisms that alpha v beta 6 may be involved in include the promotion of MMP-9 secretion, the enhancement of migration on fibronectin, and the survival of cancer cells in the liver.     

Angelica sinensis suppresses human lung adenocarcinoma A549 cell metastasis by regulating MMPs/TIMPs and TGF-β1

In this study we investigated the potential effects of Angelica sinensis on the growth and metastasis in human lung adenocarcinoma A549 cells. In?vitro the Cck-8 assays showed that Angelica sinensis had weak antiproliferative effect on A549 cells only at high concentration. The cell adhesion assay showed that Angelica sinensis decreased the adhesive ability of A549 cells in a dose- and time-dependent manner. Transwell invasion and migration assay showed that Angelica sinensis reduced the invasive and migratory abilities of A549 cells in a dose-dependent manner. In?vivo the animal experiments showed that Angelica sinensis suppressed lung metastasis of nude mice at high concentration. Then, we attempted to clarify the mechanisms of anti-metastatic activities of Angelica sinensis. The results showed Angelica sinensis inhibited the enzymatic activity of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), it involved the down-regulation of the expressions of MMP-2 and MMP-9 at both the protein and mRNA levels, which may be associated with Angelica sinensis suppressing the expression of TGF-β1. It also involved the increase of the tissue inhibitors of metalloproteinases TIMP-2, but TIMP-1 decreased upon incubation of A549 cells with Angelica sinensis. The results suggest that Angelica sinensis might exert anti-growth and anti-metastasis activity against lung cancer cells through the decrease of MMP-2, MMP-9, TGF-β1 and TIMP-1 and increase of TIMP-2.     

基质金属蛋白酶抑制剂LY52对人卵巢上皮癌细胞SKOV3中MMP-2,MMP-9表达及其侵袭转移能力的抑制作用

背景与目的：研究表明,肿瘤细胞MMP-2,MMP-9表达升高与其侵袭和转移能力有密切关系。因而,研究设计新的MMPs特异性抑制剂得到广泛重视。根据MMP-2,MMP-9结构特点,本实验设计合成全新结构的N1-取代咖啡酰吡咯烷类MMPs抑制剂——LY52,并观察该化合物对MMP-2,MMP-9表达的抑制作用及对人卵巢粘液囊腺上皮癌细胞SKOV3侵袭转移能力的影响。方法：MTT和细胞克隆法检测LY52对细胞生长抑制作用;明胶酶直接降解琥珀酰明胶法测定LY52抑酶作用活性：SDS-PAGE zymography分析对SKOV3细胞MMP-2,MMP-9表达的抑制作用;MTT法测定细胞与FN,LN和matfigel的粘附能力：Transwell小室法观察化合物对SKOV3细胞侵袭人工基底膜的抑制作用。结果：直接与细胞接触,LY52具有较弱的肿瘤细胞生长抑制作用。LY52直接抑制明胶酶活性,抑制作用IC50为11．9μg／ml。同时,LY52抑制SKOV3细胞MMP-2,MMP-9表达。以0．1、1、10、100、1000μg／ml剂量与SKOV3细胞孵育24h．对培养上清液MMP-2表达的抑制率为10．66％-31．47％：对MMP-9表达的抑制率为22．56％-56．71％。按上述剂量孵育1h。对SKOV3细胞与FN,LN和matfigel粘附能力的最大抑制率分别为29．79％,48．94％,50．92％。LY52显著抑制SKOV3细胞穿过人工基底膜能力,按上述剂量,LY52与细胞孵育24h,抑制率分别为7．5％,42．07％,66．54％,72．15％。82．84％。结论：LY52通过抑制SKOV3细胞MMP-2,MMP-9的表达．降低癌细胞侵袭转移能力。     

浆细胞瘤多样异位基因1 在卵巢癌组织中的表达及其对SKOV3 细胞恶性生物学行为的影响

目的：研究人浆细胞瘤多样异位基因1（plasma-cytoma variant translocation gene 1, PVT1）对卵巢癌SKOV3 细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法：选取2015年11 月至2017 年4 月郑州大学第三附属医院妇产科收治的卵巢癌患者32例。利用实时荧光定量PCR检测PVT1 在32例卵巢癌组织及癌旁组织的表达。通过CCK-8法、划痕法及Transwell法检测PVT1 对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果：PVT1在SKOV3细胞和卵巢癌组织表达水平均明显升高（均P<0.01）;PVT1表达水平与卵巢癌者组织学分级、FIGO分期及淋巴结转移具有相关性（P<0.05或P<0.01）。转染PVT1 siRNA36、48 h 后,SKOV3细胞中PVT1 表达水平明显下降（P<0.05）;敲减PVT1的表达能够降低SKOV3细胞的增殖能力（P<0.05）,抑制SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）。结论：PVT1 在卵巢癌中高表达,抑制PVT1表达能够抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

MT1-MMP反义核酸抑制高转移人卵巢癌SW626细胞的侵袭效应

背景与目的:MT1-MMP(MMP-14)是新发现的一种膜型基质金属蛋白酶,研究表明MT1-MMP在肿瘤转移中发挥关键性作用。本研究应用反义核酸技术,观察了MT1-MMP反义核酸对高转移人卵巢癌SW626细胞体外生长和侵袭的抑制效应。方法:应用自行设计的引物,借助RT-PCR技术获得两端含不同限制酶位点的MT1-MMPcDNA片段,反向插入pcDNA3.1中,并应用脂质体介导的基因转染技术,将重组质粒导入SW626细胞中,应用MTT、Westernblot、明胶酶谱和体外侵袭实验等方法观察了SW626细胞转染前后,细胞生长、MT1-MMP蛋白表达、MMP-2和MMP-9酶活性及细胞体外侵袭能力等指标的变化。结果:成功构建了反义MT1-MMP真核表达载体(pMMP14as),将其转染入SW626细胞后,与空质粒转染组相比,MT1-MMP反义核酸转染组细胞MT1-MMP表达显著降低,抑制率为65.8%;MMP-2酶原的活化受到明显抑制;pMMP14as转染组的穿膜细胞百分数为(63.3±5.8)%,明显低于空质粒转染组(97.6±7.5)(P<0.05)%。结论:MT1-MMP反义核酸可明显抑制高转移SW626细胞体外生长和侵袭效应,提示MT1-MMP可作为人卵巢癌抗侵袭治疗的分子靶点。     

Adhesion induces matrix metalloproteinase-9 gene expression in ovarian cancer cells

The processes of cell invasion includes adhesion, proteolysis of extracellular matrix (ECM) and migration. It is not only related to cancer cells metastasis, but also involved in infiltration of immune effector cells,embryogenesis and angiogenesis. During the invasioncells attach and spread on the ECM, secrete proteinase to hydrolyze ECM, and then move through interstitial stroma. Matrix metalloproteinases (MMP), especially MMP-2 and MMP-9, play an important role in this processe[1,2].…     

低强度超声对肝癌细胞MHCC97H迁移与侵袭能力影响的体外研究

背景与目的：低强度超声(low intensity ultrasound, LIUS)能杀伤肿瘤细胞,促进肿瘤细胞的凋亡,但对肿瘤细胞迁移侵袭作用的影响仍不清楚。该研究旨在探讨LIUS对肝癌细胞MHCC97H迁移侵袭的影响及可能的机制。方法：实验根据超声照射强度的不同分为对照组(0 W/cm²)、0.5 W/cm²组、1.0 W/cm²组和1.5 W/cm²组;LIUS处理后划痕实验和Transwell小室体外迁移和侵袭实验检测肿瘤细胞的迁移和侵袭能力;显微镜及F-actin细胞骨架荧光染色观察处理后细胞骨架的变化;实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)及蛋白质［印］迹法(Western blot)检测各组MMP-2、MMP-9的表达变化。结果：LIUS(小于等于1.5 W/cm²)能促进肝癌细胞MHCC97H的迁移侵袭,划痕实验及Transwell迁移和侵袭实验都表明LIUS处理后肿瘤细胞迁移侵袭数量增加;光学显微镜及荧光显微镜发现LIUS处理后肝癌细胞的形态发生变化;RTFQ-PCR及Western blot的结果表明超声处理后MMP-2 mRNA 及蛋白表达水平上升,MMP-9的mRNA 表达水平上升。结论：LIUS可能通过改变肿瘤细胞的骨架及增加MMP-2的表达促进肝癌细胞MHCC97H的迁移及侵袭能力。     

A novel antisense inhibitor of MMP-9 attenuates angiogenesis, human prostate cancer cell invasion and tumorigenicity

Androgen deprivation therapy causes a paradoxical elevation of matrix metalloproteinases (MMPs) including MMP-9 resulting in aggressive tumor phenotype in many patients with prostate cancer. In this study, we have evaluated a novel antisense phosphorodiamidate Morpholino oligomer (PMO) targeted against MMP-9 in models of angiogenesis and in human prostate xenograft in athymic mice. The treatment of androgen-independent DU145 human prostate cells with a 21-mer MMP-9 antisense PMO caused a dose-dependent inhibition of cell proliferation compared to scrambled or MMP-2 antisense PMO at similar concentrations. This was associated with decreases in MMP-9 expression, gelatinolytic activity and increased stability of the insulin-like growth factor-binding protein (IGFBP-3), a proapoptotic factor and MMP-9 substrate. In vitro invasion assays revealed a 40-60% inhibition of DU145 cell invasion in the presence of 25 microM MMP-9 antisense PMO. A significant decrease in endothelial cell migration and vascularization was observed in the Matrigel plug assay in mice when treated intraperitoneally with 300 microg/day MMP-9 antisense for 21 days. In the highly vascular DU145 tumor xenografts, MMP-9 inhibition caused decreased tumor growth with regression in 50% of the animals. Histological analysis revealed increased apoptosis and fibrous tissue deposits in the MMP-9 antisense-treated tumors compared to the scrambled and saline controls. No apparent toxicity or mortality was associated with the MMP-9 PMO treatment. In summary, the MMP-9 antisense PMO inhibited in vitro prostate cancer cell proliferation, invasion and in vivo angiogenesis. These data establish the feasibility of developing a site-directed, nontoxic antisense therapeutic agent for inhibiting local invasion and metastasis.