preS2反义寡核苷酸降低端粒酶活性及诱导肝癌细胞凋亡的作用

反义核酸技术从分子水平破坏靶基因 ,已用于多种抗病毒的试验。我们以人工合成的硫代反义寡核苷酸研究针对ＨＢＶ不同区段反义寡核苷酸ＨＢＶ的抑制作用 ,从中筛选了效果最好的针对ＨＢＶｐｒｅＳ2的反义序列 (ａｓ ｐｒｅＳ2 )。为进一步探讨ａｓ ｐｒｅＳ2在肝癌治疗中的应用价值 ,以ＨＢＶＤＮＡ整合的肝母细胞瘤细胞ＨｅｐＧ2 .2 .15为研究对象 ,采用ＦＡＣ ＳＣＡＮ流式仪检测细胞凋亡率 ,ＴＲＡＰ银染测定细胞端粒酶活性 ,同时以ＲＩＡ法检测培养上清中的血清铁蛋白浓度。设计合成针对ｐｒｅ Ｓ2基因 (ｐｅｒ Ｓ2 )翻译起始区 (32 0 3…     

修饰的反义寡脱氧核苷酸对胰腺癌细胞生长和靶基因表达的抑制作用

目的观察修饰过的反义寡脱氧核苷酸（ＡＳＯＮＤ）对人胰腺癌细胞生长和靶基因表达的抑制作用。方法用人工合成与ｃ－ｍｙｃ和Ｋｉ－ｒａｓ帽区互补的修饰的反义寡脱氧核苷酸，即反义硫代正磷酸寡脱氧核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅｐｈｏｓｏｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ，ＡＳＰＯＤＮ）处理人胰腺癌细胞系ＰＣ－２和ＰＣ－３。多次小剂量（１０μｇ）或一次性剂量（１５μｇ）ＡＳＰＯＤＮ处理细胞后计数细胞生长率和３Ｈ掺入率，并用逆转录聚合酶链反应检测靶基因表达。结果多次小剂量ＡＳＰＯＤＮ处理后，细胞生长、３Ｈ掺入和靶基因表达的抑制可长达２周以上，到第１４天时实验组的细胞生长率仅为对照组的３８％～４３％，３Ｈ掺入率为对照组的１８％～３３％；靶基因表达明显受抑或下调，经一次性１５μｇＡＳＰＯＤＮ处理后，细胞生长、３Ｈ掺入和靶基因表达的抑制可达４天。结论与以往的研究比较，表明ＡＳＰＯＤＮ较ＡＳＯＤＮ有更强的抑制细胞生长、３Ｈ掺入、靶基因表达的作用。     

c—myc反义寡核苷酸对PDGF所致肺血管平滑肌细胞增殖的影响

ｃ－ｍｙｃ原癌基因是细胞增殖调控中的一种关键基因。文中报道了硫代磷酸修饰的ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸（ＯＤＮＳ）对血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）刺激的肺动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）增殖及ｃ－ｍｙｃ基因表达的影响。Ｎｏｒｔｈｅｍ杂交结果表明：反义ＯＤＮＳ能显著下调ＰＤＧＦ刺激的ｃ－ｍｙｃ基因表达：３Ｈ－ＴｄＲ试验及细胞生长分析表明：反义ＯＤＮｓ能显著抑制ＰＤＧＦ刺激的ＳＭＣ增殖。同义００Ｎｓ无上述作用。     

热应激蛋白70及其抗体在中暑病人血浆中水平改变的观察研究

探讨中暑发生的病理过程中热应激蛋白７０（ＨＳＰ７０）水平及其抗体滴度水平的变化和相互关系。应用Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ法测定血浆ＨＳＰ７０水平；应用免包被的酶联免疫吸附分析法经倍比稀释测定血浆ＨＳＰ７０抗体滴度。     

低剂量过氧化氢预处理导致牛肺血管内皮细胞耐受过氧化氢损伤

小量过氧化氢（Ｈ２Ｏ２）预处理，能诱导牛肺动脉内皮细胞（ＢＰＡＥＣｓ）中热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）及ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ增多，同时使ＢＰＡＥＣｓ获得了对大量Ｈ２Ｏ２损伤的耐受性，表现为大量Ｈ２Ｏ２所致乳酸脱氢酶释放和硫代巴比妥酸反应物含量增加及过氧化氢酶、超氧化歧化酶活性降低等变化减轻。用放线菌酮和放线菌素Ｄ分别抑制ＨＳＰ７０和ＨＳＰ７０ｍＲＮＡ的增多后，此种耐受性消失，说明小量Ｈ２Ｏ２预处理使Ｂ     

WT1反义寡核苷酸对卵巢癌细胞的抑制作用

目的观察WT1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用。方法以人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,应用ASODN技术,将WT1-ASODN转染到SKOV3细胞中,利用MTT法检测WT1寡核苷酸的最适作用浓度和作用时间及WT1反义寡核苷酸对SKOV3细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测分析WT1反义寡核苷酸对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的影响。结果脂质体介导的WT1反义寡核苷酸在体外能够明显抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导细胞凋亡。结论 WT1反义寡核苷酸能诱导卵巢癌细胞凋亡,从而抑制卵巢癌细胞的增殖,可望成为一种卵巢癌临床有效的治疗方法。     

Bcl-XL反义寡核苷酸转染对食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的抑制作用

目的探讨Bcl-XL反义寡核苷酸转染后,对食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的影响。方法采用阳离子脂质体介导的反义寡核苷酸转染、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western蛋白印迹杂交、四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT法)、流式细胞术及凋亡的原位末端标记(TUNEL)检测等方法观察了Bcl-XL反义寡核苷酸转染对食管癌细胞增殖、凋亡的影响及裸鼠体内人食管癌移植瘤生长的影响。结果MTT法检测显示,Bcl-XL反义寡核苷酸可显著抑制食管癌细胞的增殖(P<0.05);对Bcl-XLmRNA表达抑制率为57.3%,可显著下调Bcl-XL的蛋白表达;应用流式细胞术和TUNEL检测技术,反义寡核苷酸组的凋亡率分别为(31.1±5.8)%和35.0%,与相关对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。反义寡核苷酸组裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长受到显著抑制(P<0.05)。Bcl-XLmRNA及蛋白表达亦受到明显抑制,并且移植瘤组织中凋亡细胞明显增加。结论Bcl-XL反义寡核苷酸可有效抑制食管癌细胞增殖及裸鼠体内人食管癌移植瘤的生长。通过反义寡核苷酸下调Bcl-XL的表达,达到治疗食管癌的目的,为食管癌的基因治疗提供实验依据。     

抗HBV最佳反义寡核苷酸片段的体外筛选

目的 寻找抗ＨＢＶ最佳反义寡核苷酸区段。方法 合成４种互补于ＨＢＶ不同区段的反义硫代寡核酸（ａｓＯＮ）,加入ＨＢＶ基因转染的肝癌细胞模型ＨｅｐＧ２２．２．１５,以ＥＬＳＡ法测定ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ含量。结果 互补于ｐｒｅ－Ｓ２翻译起始区的ａｓＯＮ（序列Ⅰ）抗ＨＢＶ基因表达作用最强（Ｐ〈０．０２）,对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ的最高表达抑制率分别为６６％和９１％,针对增强Ⅱ（ＥＮⅡ）的序列Ⅲ也有较强的     

家族性热性惊厥的染色单体型相对风险和传递不平衡分析

目的　确认家族性热性惊厥是否与染色体６ｑ 或８ｑ 连锁。方法　对核心家系为主的５０ 个家族性热性惊厥家系的热休克蛋白（ ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ , Ｈ Ｓ Ｐ）７０ 编码区 Ｐｓｔ Ⅰ位点、 Ｈ Ｓ Ｐ７０１ ５′非翻译区、 Ｈ Ｓ Ｐ７０２ ３′非翻译区、微卫星 Ｄ８ Ｓ８４ 和 Ｄ８ Ｓ８５ 等５ 个遗传标志的分型结果,用计算机群体与家系遗传分析系统 Ｐ Ｐ Ａ Ｐ 进行单体型相对风险（ｇｅｎｏｔｙｐｅｂａｓｅｄ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｉｓｋ , Ｇ Ｈ Ｒ Ｒ） 和传递不平衡（ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕ ｍ ｔｅｓｔ , Ｔ Ｄ Ｔ） 分析。结果　 Ｇ Ｈ Ｒ Ｒ 显示标志 Ｄ８ Ｓ８５ 、 Ｔ Ｄ Ｔ 分析显示 Ｄ８ Ｓ８４ 与家族性热性惊厥有一定关联或存在连锁不平衡。结论　提示家族性热性惊厥可能与染色体８ｑ 连锁。     

小鼠肝癌细胞膜上HSP70的表达及检测分析

应用流式细胞仪和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 检测了６１５ 系小鼠肝癌细胞系Ｈｃａｆ 细胞膜上ＨＳＰ７０ 的表达。结果表明Ｈｃａｆ 细胞膜上有较高的ＨＳＰ７０ 表达且具有可诱导性,推测肿瘤细胞ＨＳＰ７０ 的高表达与其生物学行为相关。应用亲合层析技术对ＨＳＰ７０ 进行了分离,对其进一步研究和应用有重要的意义。     

热休克蛋白70在人食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达与定位变化

目的 探讨姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用,热休克蛋白70(HSP70)在肿瘤细胞凋亡过程中在核基质上的变化及其与凋亡调控相关蛋白的关系.方法 用细胞计数和流式细胞仪检测姜黄素对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用,以光学显微镜和透射电镜观察姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡前后的细胞结构变化,琼脂糖凝胶电泳观察人食管癌EC9706细胞凋亡前后的DNA结构变化.双向凝胶电泳和质谱鉴定分析HSP70在核基质中的存在与变化;并以Western blotting进行确证;激光扫描共焦显微镜观察HSP70在EC9706细胞凋亡过程中的定位及其与Bax、Bcl-2等基因产物的共定位关系.结果 姜黄素能显著抑制人食管癌EC9706细胞增殖并诱导人食管癌EC9706细胞凋亡,双向凝胶电泳、质谱鉴定和结果 发现并证实,HSP70在姜黄素处理前后的EC9706细胞核基质蛋白中的存在及其表达下调变化.激光扫描共焦显微镜观察结果 显示,HSP70在EC9706细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2等基因产物具有共定位关系,且其共定位区域发生了变化.结论 姜黄素对人食管癌EC9706细胞具有显著的凋亡诱导作用;HSP70作为一种新发现的核基质蛋白,在姜黄素诱导人食管癌EC9706凋亡过程中的表达与分布发生了显著变化.HSP70与凋亡相关基因的关系对EC9706细胞凋亡具有重要影响.     

三氧化二砷诱导卵巢癌HO8910细胞凋亡

目的探讨三氧化二砷对卵巢癌细胞株HO8910的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法用三氧化二砷处理HO8910细胞,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变,琼脂糖凝胶电泳观察DNA降解,以及应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中细胞周期的变化。结果在三氧化二砷作用下,HO8910细胞呈凋亡改变,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征。细胞凋亡的同时,细胞周期发生特定的改变,亚G1峰出现,S+G2~M期细胞所占比例组明显增高。结论三氧化二砷能诱导卵巢癌细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞增殖。     

8-硝基白杨素对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察8-硝基白杨素(8-NOChR)抑制体外培养人宫颈癌Hela细胞增殖和诱导凋亡作用。方法：体外培养人宫颈癌Hela细胞系细胞。MTT比色法测定Hela细胞增殖活性。软琼脂培养克隆形成法检测Hela细胞集落形成能力。AO/EB染色荧光显微镜观察Hela细胞凋亡形态学改变。DNA凝胶电泳观察梯形DNA条带。结果：MTT比色测定显示,8-NOChR抑制Hela细胞增殖,呈剂量依赖性。软琼脂培养克隆形成法检测表明,8-NOChR显著抑制Hela细胞集落形成,呈剂量依赖性。AO/EB染色荧光显微镜观察发现,8-NOChR诱导Hela细胞呈现典型凋亡细胞形态特征。8-NOChR（30μmol/L）处理Hela细胞72h,琼脂糖凝胶电泳出现“梯形”DNA条带。结论：8-NOChR具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖和诱导细胞凋亡作用     

褐藻糖胶对人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的：研究褐藻糖胶对体外培养的人乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响，并探讨其凋亡机制。方法:不同浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)褐藻糖胶处理MCF-7细胞48h后，应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖；Hoechst 33258染色、琼脂糖凝胶电泳法观察细胞的凋亡的形态学及生化改变；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白印迹分别测定细胞〖STBX〗bcl-2〖STBZ〗和bax mRNA及其蛋白的表达。结果:不同实验浓度(100 mg/L、300 mg/L、500 mg/L、1 000 mg/L)的褐藻糖胶均能抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.01），抑制率呈浓度依赖性增大；褐藻糖胶诱导MCF-7细胞凋亡数增加，且可见明显的、凋亡特有的DNA梯形条带；在褐藻糖胶存在下，〖STBX〗 bcl-2〖STBZ〗 mRNA和蛋白表达减少，而bax mRNA和蛋白表达增加，Bcl-2/Bax比值下降（P<0.05）。结论:褐藻糖胶可抑制MCF-7细胞增殖，且诱导其凋亡，其凋亡机制是下调Bcl-2和上调Bax蛋白的表达。     

人endostatin体外诱导血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的 探讨人endostatin抑制血管内皮细胞增殖的作用机制。方法 在含重组人endostatin蛋白和10%小牛血清的DMEM培养基中，培养人脐静脉内皮细胞ECV304。72h后，采用透射电镜，流式细胞术细胞周期分析和细胞核DNA的1.5%琼脂糖凝胶电泳，检测重组人endostatin蛋白作用后，血管内皮细胞的凋亡。结果 透射电镜下可见实验组ECV304细胞核染色质浓缩，边集，核碎裂及胞浆浓缩等，呈典型的凋亡细胞的形态学表现，流式细胞术细胞周期分析显示，在G1期峰前存在1个凋亡峰（20.6%)，1.5%琼脂糖凝胶电泳显示，细胞核DNA呈梯状，对照组ECV304细胞表达正常。结论 重组人endostatin蛋白可诱导血管内皮细胞凋亡，是其抑制血管内皮细胞增殖的原因之一。     

survivin反义寡核苷酸在体外诱导胰癌细胞凋亡

目的：探讨survivin反义核酸对胰腺癌细胞株Panc-1细胞凋亡的影响.方法：用脂质体瞬时转染法介导survivin反义核苷酸处理胰腺癌Panc-1细胞后,MTT试验测定转染细胞的相对存活率,RT-PCR检测survivin mRNA表达,琼脂糖凝胶电泳分析其对Panc-1细胞的凋亡诱导作用.结果：转染survivin反义核酸的Panc-1细胞增殖明显受抑制,与对照进行比较,具有显著性差异（P＜0.05）;经琼脂糖凝胶电泳,转染survivin反义核酸的Panc-1细胞可见到DNA梯形条带,而对照细胞未见到.结论：survivin反义核酸能够诱导Panc-1细胞凋亡.     

脂质体转染细胞周期素B1反义脱氧寡核苷酸对HL60细胞增殖调控的影响

目的:探讨脂质体转染细胞周期素B1(cyclinB1)反义脱氧寡核苷酸(ASON)对HL60细胞增殖调控的作用。方法:用针对cyclinB1mRNA5’端编码区起始密码子(ATG/AUG)的ASON,通过脂质体导入HL60细胞共培养后,用流式细胞术(FCM)和RT-PCR分别检测cyclinB1蛋白和mRNA的表达水平,电镜和原位细胞凋亡检测法(POD)、FCM及DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果:CyclinB1ASON组与SON及空白对照组相比,ASON能特异地抑制cyclinB1蛋白及mRNA水平的表达,当ASON的浓度达到一定程度时,HL60细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制,出现细胞凋亡,并且此作用随ASON浓度的升高而增强。结论:CyclinB1的特异ASON能封闭其蛋白及mRNA的表达水平,可剂量依赖性地抑制白血病细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

槲皮素对U937细胞系抑制增殖和诱导凋亡作用的研究

目的 探讨黄酮类化合物槲皮素（Que）对人类单核细胞白血病U937细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用。方法 应用MTT法检测不同浓度槲皮素对U937细胞的增殖抑制作用；AO／PI荧光染色后倒置荧光显微镜下观察细胞形态学变化；琼脂糖凝胶电泳测定细胞DNA的片段化；应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布。结果槲皮素能明显抑制U937细胞增殖，并存在剂量-效应关系和时间-效应关系；诱导U937细胞出现凋亡所具有的形态学和生化特征；随着槲皮素浓度升高，凋亡细胞和坏死细胞比例增加；将细胞特异性地阻滞在S期，出现凋亡峰。结论 槲皮素能抑制U937细胞增殖，诱导细胞凋亡，并具有细胞周期特异性。     

DMSO诱导MCF-7细胞凋亡的研究

目的研究二甲基亚砜(DMSO)对MCF-7细胞凋亡的诱导作用。方法用不同浓度DMSO处理体外培养的MCF-7细胞,应用倒置光显微镜观察细胞形态学变化,用MTT比色法检测细胞存活率;Hoechst33258/PI荧光染色,用荧光显微镜分析凋亡细胞比率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA梯状条带。结果在倒置光学显微镜下观察1%DMSO处理细胞12h后细胞形态发生变化。约有50%以上的细胞变圆,细胞内有多泡小体形成。随DMSO浓度增加和作用时间的延长,细胞存活率明显下降,经MTT检测其IC_(50)值为1%;荧光显微镜下可见60%以上细胞核染色质凝集,核碎裂等凋亡细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳呈现梯状条带(DNA ladder)。结论适当浓度的DMSO能够抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

碱性成纤维细胞生长因子对卵巢癌CAOV3细胞cyclin D1及GADDl53表达的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人卵巢癌CAOV3细胞细胞周期调节蛋白cyclinD1及GADD153表达的影响,探讨bFGF促进人卵巢癌CAOV3细胞增殖、抑制凋亡的信号机制。方法:利用无血清饥饿诱导卵巢癌CAOV3细胞凋亡。分为对照组、bFGF组。分别应用MTT、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳观察25、50、75μg/L bFGF对CAOV3细胞增殖率、细胞周期及细胞凋亡的影响。利用Western blotting检测bFGF对CA-OV3细胞cyclin D1、GADD153以及转录因子(c-Fos、c-Jun)表达的影响。结果:与对照组相比,bFGF呈剂量依赖性加速CAOV3细胞细胞周期进程,促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的凋亡(P<0.01);呈时间依赖性促进cyclinD1、c-Fos、c-Jun,抑制GADD153蛋白表达(P<0.01)。结论:bFGF可能通过上调cyclin D1、c-Fos、c-Jun,下调GADD153表达促进细胞增殖,抑制饥饿诱导的卵巢癌CAOV3细胞凋亡。