EB病毒DNA检测在鼻咽癌中的应用及研究进展

鼻咽癌是一种发生于鼻咽部黏膜上皮的恶性肿瘤,以我国南方及东南亚地区最为常见。研究证实EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV)感染与鼻咽癌的发生发展密切相关,并且EB病毒DNA（Epstein-Barr virus DNA,EBV-DNA）定量水平在鼻咽癌疾病进程、治疗及转归的过程中均会发生相应的规律性改变。因此,EBV-DNA检测在鼻咽癌筛查、早期诊断、个体化治疗及预后评估等方面具有较大的价值。本文就EBV-DNA检测在鼻咽癌中的应用价值及研究进展作简要综述。     

外周血和鼻咽组织EB病毒DNA检测对鼻咽癌诊断和防控的临床观察

目的探讨外周血和鼻咽组织EB病毒DNA检测对鼻咽癌诊断和防控的临床意义以及鼻咽腔冲洗对防控鼻咽癌的价值。方法选取2010年12月至2012年4月55例鼻咽癌患者为观察组,抽取同期55例健康者为对照组,采用EB病毒DNA PCR荧光定量检测技术检测外周血和鼻咽组织EB病毒DNA,比较鼻咽癌患者与健康者外周血和鼻咽组织EB病毒DNA检测结果。对另外1组67例EB病毒抗体阳性而鼻咽活检结果为阴性者进行鼻咽腔冲洗,比较治疗前、后EB病毒抗体检测结果。结果观察组患者外周血、鼻咽组织中EB病毒DNA阳性检出率均高于对照组健康者,差异均有统计学意义(均P<0.01)。经鼻咽腔冲洗治疗后,EB病毒抗体阳性者检测转阴率为19.4%,患者临床症状明显改善。结论鼻咽组织EB病毒DNA检测有助于鼻咽癌的临床诊断,对EB病毒抗体阳性者进行鼻咽腔冲洗治疗对于鼻咽癌的防控具有重要意义。     

鼻咽癌组织中EB病毒定量检测的临床意义

目的:探讨鼻咽癌组织中EB病毒(EBV)定量检测的意义。方法:应用荧光定量PCR(real-timePCR)技术定量检测30例鼻咽低分化鳞癌患者癌组织、癌旁组织及15例正常健康人鼻咽黏膜组织中的EBV拷贝数,并比较三者检测结果。结果:正常人鼻咽黏膜EBV检出率为73.3%(11/15),平均拷贝数为6.5×102μg-1;鼻咽癌和癌旁组织EBV检出率为100%(30/30)和76.7%(23/30),平均拷贝数分别为6.7×105μg-1DNA和1.3×105μg-1DNA。正常人鼻咽黏膜、鼻咽癌患者癌旁组织感染EBV的概率差异无统计学意义(P>0.05);鼻咽癌组织、癌旁和正常黏膜组织3者之间,鼻咽癌与癌旁组织之间,癌旁和正常黏膜组织之间EBV拷贝数差异有统计学意义(P<0.01)。结论:鼻咽癌与癌旁组织感染EBV的数量明显高于正常鼻咽黏膜,EBV感染量是鼻咽癌致病的重要因素,定量检测鼻咽癌组织中EB病毒有助于临床判断病情。     

定量和定位检测EB病毒在鼻咽癌组织中的感染状态

背景与目的EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)与鼻咽癌密切相关,但EBV是鼻咽癌的致瘤因素还是仅仅是伴随关系有待进一步研究,而且EBV在鼻咽癌发生过程中的潜伏状态也不明确,本研究通过检测EBV在不同鼻咽组织中的表达变化,为进一步阐明EBV与鼻咽癌发生的关系提供线索。方法应用荧光定量PCR(real-timePCR)技术定量检测47例鼻咽低分化鳞癌患者癌、癌旁及相对正常鼻咽粘膜组织中的平均EBV拷贝数;并采用原位杂交技术(地高辛标记的EBER-1探针)对鼻咽癌、癌旁、对侧正常鼻咽粘膜中的EBV进行定位检测。以10例正常人鼻咽粘膜组织作对照。结果正常人鼻咽粘膜EBV检出率为80%(8/10),平均拷贝数为6.7×102/滋gDNA;100%(47/47)鼻咽癌和癌旁组织以及72.3%(34/47)的对侧正常鼻咽粘膜组织检出EBV,平均拷贝数分别为6.9×105/滋gDNA、1.5×105/滋gDNA、9.8×103/滋gDNA。正常人鼻咽粘膜、鼻咽癌患者对侧正常鼻咽粘膜之间感染EBV的几率、潜伏感染EBV的数量没有显著性差异(P>0.05);鼻咽癌及其癌旁、对侧正常粘膜组织三者之间,鼻咽癌与癌旁组织之间,癌旁和对侧正常粘膜组织之间EBV拷贝数存在显著性差异(P<0.01)。EBER-1原位分子杂交发现,对侧正常粘膜上皮细胞未检测到EBER-1的表达信号,癌旁靠近癌一侧的部分不典型增生细胞检测到EBER-1弱阳性信号,而在癌组织中的所有癌细胞均有EBER-1强阳性信号。结论无论是鼻咽癌患者还是健康人,EBV在鼻咽组织中的潜伏感染是一种普遍现象,但从鼻咽癌患者对侧正常鼻咽粘膜到癌旁再到癌组织EBV感染的量发生了改变,说明鼻咽上皮细胞中EBV感染量和表达信号的改变很可能是EBV致鼻咽癌的重要环节。     

鼻咽癌变过程生物学特性研究的进展

作者总结所在研究小组近5年来在鼻咽癌变过程生物学特性研究方面的主要成果。结合国内外这一领域的进展,提出作者对鼻咽癌变机理的看法,为了研究鼻咽癌变,本课题组对20000多例鼻咽癌活检和600多例EB病毒血清学阳性并已随访12年以上的鼻咽活检材料,进行了除组织病理学染色外,还采用动物实验,分子生物学方法（如原位杂交和PCR等）的研究,至今,完成论文26篇,并正式发表在国内外医学生物学杂志上,综合得到的结论是：（1）鼻咽癌变过程中所见的形态发生学顺序为鳞状化生,上皮异型性变,原位癌和微小浸润癌。（2）这种形态发生学顺序常可见于鼻咽粘膜上皮的一定范围,因此鼻咽癌变是一种区域性癌变。（3）EB病毒DNA和小RNAs在上皮呈异型性变时即可被检测到,且若干病毒基因编码产物,特别是LMP1,可在异型上皮,原位癌和微小浸润癌中表达,因此EB病毒在鼻咽癌变过程中可能起着关键的作用。（4）EB病毒基因编码产物与上皮细胞内,由逐步变异的调节细胞周期相关基因异常表达产物间的相互作用,构成了鼻咽癌变过程中的一系列分子 事件。（5）由于EB病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞不但可在癌巢中观察到,且可在周围血液中检测到,因此个体的细胞免疫状态也是影响鼻咽癌变的重要因素。     

HHV-6感染在鼻咽癌发病中的意义

目的：探计鼻咽癌组织中人疱疹病毒6型(HHV—6)在鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)发病中的意义。方法：PCR检测27例正常鼻咽组织、21例异型增生及42例鼻咽癌组织中HHV一6DNA和EB病毒(Epstein—barr vims，EBV)DNA存在状况，用免疫组化检测36例NPC组织中EBVLMPl蛋白的表达及40例NPC组织中p53基因的表达。结果：异型增生和NPC组织中HHV一6 DNA的阳性率分别为4．7％和26．2％，EBV DNA分别为4．6％和95．2％；正常鼻咽组织不存在HHV一6DNA，EBVDNA为25．9％。NPC组织中EBV—LMPl蛋白阳性率为47．2％，HHV一6阳性NPC中LMN表达阳性率(81．8％)显著高于HHV一6阴性者(32．0％)。HHV一6阳性与阴性的NPC中p53表达的阳性率无显著性差异，但HHV—6阳性的NPC中p53表达强度显著性增高。结论：NPC组织中存在HHV—6的感染，与EBV—LMP1蛋白表达上调呈正相关。提示在NPC的发生中HHV—6可能直接参与和(或)通过上调EBV—LMP1的表达而起作用，并可能参与鼻咽癌发病中p53过表达的调控。     

鼻咽癌患者外周血及肿瘤原发部位的病毒检测及意义

鼻咽癌是我国常见的恶性肿瘤,EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）感染是鼻咽癌发生的重要因素.鼻咽上皮细胞的EBV感染是癌变过程中侵袭前的变化,几乎在100％的鼻咽癌活检组织中存在EBV的基因.目前,利用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）技术检测鼻咽癌患者血浆中EBV-DNA已应用于临床,检出率达96％,而传统的原位杂交方法在鼻咽癌组织中EBV编码的小RNA（EBV-encoded small RNA,EBER）仍有显著表达.本文在鼻咽癌患者外周血及鼻咽部活检组织石蜡标本中联合检测鼻咽癌患者外周血中EBV-DNA载量与鼻咽癌组织中EBER表达的差异,探讨EBV感染在鼻咽癌变过程中的变化,并对同一患者的标本进行两种方法的研究.     

鼻咽癌前期病变中的EB病毒感染

背景与目的：鼻咽癌中的浸润性癌细胞均感染了EB病毒（Epstein-Barr virus．EBV）。前期病变可见于早期鼻咽癌癌旁上皮。本研究旨在通过检测前期病变中的EB病毒,探讨EB病毒感染存鼻咽癌变过程中的作用,及其基因型在鼻咽癌变过程中发生的宿主内演变。方法：采用核酸原位杂交检测15例早期鼻咽癌活检组织中的EB病毒编码RNA（EBV—encoded RNA,EBER）。采用巢式PCR法检测前期病变和癌巢中的EB病毒类型和潜伏膜蛋白1（latent membrane protein 1,LMPI）EB病毒株。具有代表性的LMPI基因羧基末端PCR产物采用四色荧光终止序列技术进行DNA序列分析。结果：所有15例早期鼻咽癌中的绝大多数浸润性癌细胞均呈EBER阳性。在15例的期病变中．14例可检测到EBER阳性的异常上皮细胞和／或浸润性淋巴细胞。单个A型EB病毒可在9例癌巢（11例适用）及9例前期病变（10例通用）的DNA样本中检测到。EB病毒LMP1基因羧基末端在15例癌巢DNA样本中均可检测到,其中14例是30bp缺失型LMP1 EB病毒株,1例是野生型和30bp缺失型LMP1株的混合感染。在11例适合做EB病毒LMP1基因羧基末端扩增的前期病变的DNA样本中,5例呈野生型和30bp缺失型LMP1 EB病毒株的混合感染,4例是单个缺大型LMP1 EB病毒株感染,1例呈单个野生型LMP1 EB病毒株感染,1例呈阴性反应。野生型LMP1基因羧基末端的DNA序列与B95—8细胞的DNA序列完全一致;30bp缺大型LMP1基因羧基末端的DNA序列却其有30bp缺失（密码子：346～355）和4个错义点突变（密码子：334、335、338和366）。结论：鼻咽上皮细胞的EB病毒感染是癌变过程中侵袭前的事件;而在鼻咽癌变过程中,EB病毒基因型会产生宿主内的演变。     

聚合酶链反应检测鼻咽癌EB病毒DNA

杭州市四院应用聚合酶链反应（peR）检测叨例鼻咽癌患者的活检组织中EB病毒DNA，以17例慢性扁桃体炎、鼻咽炎、颈淋巴结核患者的组织作为对照。全部病例均行病理切片检查。结果表明，对例鼻咽癌活检组织中，EB病毒DNA阳性28例，占对．33％；阴性2例6．cd％。对照组17例均呈阴性。说明应用鼻咽部活检组织进行PCR检测EB病毒DNA，是一种特异性强、灵敏度高的检测方法，对该病的早期诊断有较好的临床意义。同时发现，5份高分化程度鼻咽癌组织中3份检出EB病毒DNA，6份中分化程度和19份未分化鼻咽癌阳性率达100％，而且未分化的鼻咽癌细…     

鼻咽癌研究进展

1鼻咽癌病因学的研究1．1EB病毒自从国外学者首先报告EB病毒与鼻咽癌发病可能有关后,我国学者证实了鼻咽癌组织中有EBVDNA和EB病毒基因产物的表达,而具有转化活性的EB病毒潜伏膜蛋白1在不同分化程度的鼻咽癌组织中其基因结构与功能存在一定的差异。同时建立了携带EB病毒的鼻咽癌细胞系SUNE－1和裸鼠移植瘤株SUNT－1。近年来有研究显示：人胚鼻咽粘膜在EBV、TPA和正丁酸盐的协同作用下可诱发淋巴瘤和未分化癌。但EBV在人鼻咽癌发生发展中的确切作用机理仍未彻底阐明。1．2遗传易感性我国自70年代的死亡回顾调查、肿瘤登记、…     

鼻咽癌发生发展过程中EBER1表达的研究

目的：探讨ＥＢＶ与鼻咽癌发生发展的关系及其病理学意义。方法：应用原位杂交技术检测５０例鼻咽癌石蜡切片组织中ＥＢＥＲ１的表达及分布状况。结果：正常鼻咽粘膜上皮及其单纯性增生、鳞状化生上皮ＥＢＥＲ１表达均阴性,鼻咽癌组织中表达率为９８％（４９／５０）,且在转移灶中不丢失。鼻咽异型增生上皮亦可表达ＥＢＥＲ１阳性信号（１６／２０）,结论：ＥＢＶ与鼻咽癌关系密切,ＥＢＶ可能在鼻咽上皮的恶性转化过程中起重要作用,鼻咽上皮的异型性改变尤其是ＥＢＥＲ１阳性者可认为是癌前病变,随访监测可能有利于早期发现鼻咽癌。     

联合检测EB病毒不同抗体及EB病毒DNA在鼻咽癌血清学诊断中的价值

目的:评价EB病毒(EBV)抗衣壳抗原VCA-IgA抗体、抗早期抗原EA-IgA抗体、抗立即早期抗原Rta-IgG抗体和EBV-DNA检测在鼻咽癌诊断中的价值。方法:收集160例初治鼻咽癌,133例症状相似的非鼻咽癌患者和163名健康体检者的血清和血浆。采用酶联免疫法检测血清VCA-IgA、EA-IgA和Rta-IgG抗体的水平,用实时荧光定量PCR检测血浆EBV-DNA的相对含量。按鼻咽癌2008临床TNM分期法进行分期,计算不同分组、各临床分期以及鼻咽癌治疗前后的各抗体阳性率、抗体水平以及EB-DNA的检测结果并进行数据分析。结果:鼻咽癌组VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG和EBV-DNA阳性率均高于鼻咽相关疾病组及健康对照组（均P<0.05）。血清VCA-IgA和EA-IgA结果相对A值（即rA或S/CO值）在Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ、Ⅳ期,差异有统计学意义(P<0.05),但阳性率在各期间比较差异无统计学意义(P>0.05);Ⅰ、Ⅱ期患者Rta-IgG的rA值和阳性率明显低于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<0.05);血浆中EBV-DNA阳性率及EBV-DNA中位数水平随着临床分期的升高而增高,Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期比较差异有统计学意义（P<0.05）。治疗有效（CR+ PR）患者的EBV-DNA含量明显低于治疗前水平（P<0.05）。结论:VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG、EBV-DNA检测有助于鼻咽癌的辅助诊断、临床分期预测及疗效评估。     

EB病毒基因BARF1在鼻咽癌细胞中的表达及意义

目的：探讨EB(Epstein—Barr)病毒新基因BARF1(BamHI A rightward open reading frame1)在人鼻咽癌组织中的表达及意义，为深入阐明EB病毒致癌机制提供实验依据。方法：提取RNA后，采用RT—PCR方法扩增标本中的EBNA1(EB virus associated nuclear antigen 1)和BARF1 mRNA，PCR产物经2％琼脂糖凝胶电泳观察并照相。结果：11例RNA合格的标本均表达EBNA1，提示病例均为EB病毒阳性病例；其中9例表达BARF1，占82％：而且9例中的7例为强阳性。结论：EB病毒新基因BARF1 mRNA在鼻咽癌细胞中高表达，这提示除了已经明确的潜伏性膜蛋白1(LMP1)以外，BARF1可能在鼻咽癌细胞恶性增殖中发挥重要作用，具体机制有待深入研究。     

Presence of EBNA in nasopharyngeal carcinoma and control patient tissues related to EBV serology.

A search was made for Epstein-BARR virus (EBV) associated nuclear antigen (EBNA) in touch preparations of fresh biopsy material from 26 carcinomas of the nasopharynx, 39 other tumours of the head and neck, the nasopharyngeal mucosa of 32 patients in whom nasopharyngeal neoplasm had been excluded, and the mucosa from enlarged but non-neoplastic tonsils removed from 12 patients. EBNA-positive cells were uniformly detected in the preparations from the undifferentiated and poorly differentiated squamous-cell carcinomas of the nasopharynx, provided they contained tumour-cell aggregates. Such cells were not detected in the preparations from the single case of well-differentiated papillary adenocarcinoma in the nasopharyngeal carcinoma group. There were no moderately or well-differentiated squamous-cell carcinomas among the nasopharyngeal carcinoma group. Among other tumours of the head and neck, only three undifferentiated carcinomas of the nasal fossa were found to contain EBNA-positive cells. None of the nasopharyngeal or tonsillar mucosal preparations contained such cells. These findings confirm the unique regular association of EBNA with nasopharyngeal carcinoma of undifferentiated and poorly differentiated squamous-cell types (NPC). The EBV-related serological findings support the value of tests for IgG and IgA antibodies to VCA and EA(D) in the exclusion of NPC in patients with suspicious symptoms and the differentiation between NPC and other tumours of the head and neck. Examination of biopsy specimens for the presence of EBNA-positive cells or EBV-DNA is essential, however, for confirmation of the diagnosis.     

鼻咽癌高危人群血浆EBV-DNA定量分析

目的：探讨鼻咽癌高危人群E病毒DNA（Epstein-Barr virusDNA,EBV—DNA）的存在情况及其在鼻咽癌早期诊断中的应用价值。方法：2009-08-13—2010-07-27在广东省中山市小榄镇开展鼻咽癌筛查,ELISA法检测16712名EBV抗体,确定鼻咽癌高危人群386名,同时收集鼻咽癌低危人群273名。收集同期中山市人民医院初诊鼻咽癌患者62例。荧光定量PCR方法检测高危人群血浆EBV-DNA,并随访1年,比较分析高危人群EBv_DNA定量检测的应用价值。结果：初筛鼻咽癌高危人群EBV—DNA阳性率为12．2％（47／386）,高于鼻咽癌低危人群的3．3％（9／273）,而低于初诊鼻咽癌患者的91．9％（57／62）,3组差异有统计学意义,P〈0．001。随访复查时,血清学持续高危人群EBV—DNA阳性率为9．7％（18／186）,而血清学转变为非高危人群的EBV-DNA阳性率为3．1％（3／97）,差异有统计学意义,P=0．045。筛查人群中血清学诊断鼻咽癌的阳性预测值为5．6％（32／572）,而在鼻咽癌高危人群中增加EBV—DNA检测,其阳性预测值提高到44．6％（29／65）。结论：鼻咽癌高危人群血浆EBV-DNA定量检测能对血清学EBV抗体检测进行有效的补充,可大大提高筛查准确性,对鼻咽癌高危人群的监测具有重要作用。     

Frequent chromosome 9p losses in histologically normal nasopharyngeal epithelia from southern Chinese

Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is a common cancer among the Chinese population in the southern part of China. The incidence of this cancer drops markedly in northern China. A 6- to 24-fold difference exists between southern and northern Chinese. To investigate the early genetic events involved in the development of this cancer, we have examined loss of heterozygosity (LOH) on chromosome 9p, being one of the most frequent genetic alterations in NPC, in nasopharyngeal tissues including normal epithelia (NP), dysplastic lesions (DNP) and invasive carcinoma (NPC) from high-risk and low-risk regions. We found similar frequencies of 9p LOH in NPC from high-risk (77.8%) and low-risk (63.6%) regions (p = 0.43). In contrast, 45% of normal nasopharyngeal epithelia from the high-risk region showed 9p LOH, while none of the NP from the low-risk region showed such abnormalities (p = 0.002). Deletions of chromosome 9p were found in 66.7% dysplastic nasopharyngeal lesions. These findings suggest that LOH of chromosome 9p is an early event in the tumorigenesis of NPC. The increased risk of NPC in southern Chinese may be related to early loss of genetic materials as indicated by 9p LOH in the NP from high- and low-risk regions. We also reported previously that Epstein-Barr virus (EBV) latent infection was present in all high-grade DNP and NPC but not in any NP from fetuses or normal adults. Thus, early genetic alterations such as 9p LOH may take place prior to EBV latent infection and expand clonally thereafter.     

鼻咽癌癌前及其高危人群鼻咽上皮组织EB病毒DNA酶基因检测

目的探讨非癌鼻咽上皮细胞发展为鼻咽癌（ＮＰＣ）的过程中,ＥＢ病毒在什么阶段进入鼻咽上皮。方法利用广州中山医科大学肿瘤防治中心四会县防癌基地１９９４年度复查工作及肿瘤医院门诊,收集鼻咽癌及各类“癌前状态”及“癌前病变”患者蜡块４５０余例,应用改进后的多聚酶链反应（ＰＣＲ）方法进行ＥＢＶＤＮＡ酶基因片段扩增检测。结果ＮＰＣ浸润癌组织ＥＢＶＤＮＡ酶基因片段扩增阳性率为９７．３％（１４５／１４９）,ＮＰＣ原位癌４例中,基因阳性者２例,而防癌基地“癌前状态”人群１５５例中阳性者２例,阳性率为１．３％（２／１５５）。临床癌前病变组阳性率为零（０／４７）。结论ＥＢ病毒在非癌鼻咽组织中出现频率十分低,ＥＢ病毒可能在鼻咽上皮癌变后才进入鼻咽上皮,提示ＥＢ病毒可能不是ＮＰＣ的病因。     

梅州地区鼻咽癌高癌家系人群监测研究

 目的　研究梅州籍鼻咽癌高癌家系成员中EB病毒与鼻咽癌发病的价值。方法　对 11个鼻咽癌高癌家系患者的一级亲属成员 14 0人行EB病毒相关抗体检测 ,与同期正常体检人员 373例EB病毒检测结果进行对比。结果　高癌家系成员VCA/IgA阳性 5 7例 ,阳性率 4 0 .7% ;检出鼻咽癌 2例 (3.5 % ,2 / 5 7)。正常体检人员 ,VCA/IgA阳性 75例 ,阳性率 2 0 .1% ,未发现恶性肿瘤 (P <0 .0 0 1)。 结论　在鼻咽癌高癌家系成员中EB病毒阳性率明显高发 ,高滴度EB病毒与鼻咽癌的发生密切相关。     

鼻咽癌患者EBV、HPV共感染状况真实世界初步研究

目的:初步分析四川南充地区鼻咽癌患者EB病毒（EBV）与人乳头瘤病毒（HPV）共感染状况及其临床意义。方法:收集经鼻咽镜活检证实的初诊鼻咽癌患者的石蜡包埋组织,采用分子杂交技术以及PCR荧光定量行EBV核酸定量（EBV-DNA）检测及HPV分型检测,分析EBV、HPV共感染状况与人口学特征、分期、治疗相关副反应、近期疗效等指标的相关性。结果:鼻咽癌患者总体EBV感染率为81.7%,HPV感染率为40%,28.3%的鼻咽癌患者存在HPV和EBV共感染;中晚期患者EBV感染高于HPV感染,EBV单感染患者CR率为29.4%,HPV感染（HPV单感染+EBV/HPV共感染）患者CR率为63.6%,差异接近有统计学差异（P=0.074）,四种感染状态在性别、年龄、吸烟状况、T分期等方面无差异。结论:鼻咽癌EBV感染率高于HPV,中晚期患者EBV感染率更高,<60岁患者HPV感染更常见;鼻咽癌患者存在一定比例EBV/HPV共感染状态;鼻咽癌EBV感染背景下,合并HPV感染可能是预后良好的一个分子标记物。