不同年龄大鼠坐骨神经损伤后睫状神经营养因子对脊髓组织中Caspase3表达的影响

目的　观察睫状神经营养因子 (CNTF)对天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶 (Caspase3)在坐骨神经损伤后不同年龄大鼠脊髓组织中表达的影响。方法　幼年、成年、老年Wistar大鼠各 2 70只 ,随机分为正常组 (1 8只 )、CNTF组 (1 2 6只 )和生理盐水组 (1 2 6只 )。CNTF组和生理盐水组切出长 2mm右侧坐骨神经 ,用硅胶管连接近、远侧神经残端制作神经再生小室 ,CNTF组再生小室内注入 2 5 μg/ml重组CNTF1 5 μl,生理盐水组再生小室内注入生理盐水 1 5 μl,CNTF组和生理盐水组分为术后 1、3天和 1、2、4、8、1 2周组。利用免疫组织化学、Westernblotting检测脊髓Caspase3的分布与表达强度变化 ,进行Caspase3活性测定。结果　损伤后各年龄组伤侧脊髓Caspase3蛋白表达增强 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,以前角运动神经元变化最为明显 ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3表达较生理盐水组减弱 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ;各组对侧未伤侧与正常组比较 ,差异无显著性意义 (P >0 .0 5 )。幼年、老年及成年生理盐水组于损伤侧脊髓Caspase3活性升高 ,各时相点幼年大鼠Caspase3活性高于老年及成年 (P <0 .0 5或 0 .0 1 ) ,幼年、成年、老年CNTF组Caspase3活性低于生理盐水组 (P <0 .0 5或 0 .0 1 )。生理盐水组及CNTF组对侧未伤侧Ca     

SD大鼠视神经不同程度损伤的闪光视觉诱发电位动态监测

目的　探索大鼠视神经不同程度损伤后闪光视觉诱发电位 (F VEP)的变化特征 ,为进一步研究间接性视神经损伤的修复提供实验基础和依据。方法　利用压力恒定的反向镊分别夹持大鼠视神经 6、30、6 0s,建立轻、中、重度视神经不完全损伤模型 ,记录正常及损伤后F VEP潜伏期和振幅的变化。结果　正常大鼠F VEP波形稳定 ,主波潜伏期 (L5b)为 5 3 6 7± 3 12ms,振幅 (A5 )为 17 83±5 91μV。视神经损伤后的大鼠F VEP与正常大鼠比较差异有统计学意义 (P <0 0 1)。损伤程度不同 ,F VEP的改变不同 ,损伤程度越重 ,伤后时间越长 ,潜伏期延迟越显著 ,波幅降低程度越大 ,F VEP的熄灭越早。结论　大鼠视神经损伤后F VEP的变化规律与神经的损伤程度一致 ,F VEP是客观反映其视神经功能的一项可靠指标     

睫状神经营养因子对大鼠视网膜神经节细胞bcl-2表达的影响

目的 观察睫状神经营养因子（CNTF）对培养的大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）bcl-2表达的影响。方法 取出生后2～3d Wistar大鼠视网膜组织行RGCs培养，Thy-1单克隆抗体免疫细胞化学鉴定RGCs。实验分2组，对照组单纯加入DMEM，CNTF组加入浓度为20ng/ml的CNTF。RGCs培养3d后CNTF组和对照组分别行Westernblot检测RGCs内bcl-2蛋白的表达。结果 Thy-1单克隆抗体免疫细胞化学检查显示，培养3d的RGCs胞膜和轴突呈棕黄色，且90％以上为免疫阳性细胞。CNTF组RGCs内bcl-2蛋白表达高于对照组（P〈0．05）。结论 CNTF对神经节细胞的营养作用可能与bcl-2基因表达增高有关。     

低强度810nm半导体激光照射对大鼠视神经损伤后视网膜脑源性神经营养因子的影响

目的观察低强度810 nm半导体激光照射对大鼠视神经钳夹伤后视神经再生的影响。方法健康成年Wistar大鼠44只,体重180～220 g,分成激光治疗组20只、单纯损伤组16只、正常对照组8只,每组按治疗时间又分成1、3、6和9周4个时间点。标准的视神经钳夹伤模型制备成功后,激光治疗组行激光照射,照射参数：光斑直径5 mm,照射功率60 mW,时间3 min,经皮至视神经损伤处,每日照射1次。单纯损伤组及正常对照组在进行激光照射时,激光器无功率输出。激光治疗1、3、6和9周后测量视网膜中脑源性神经营养因子（BDNF）mRNA的含量。结果激光治疗组大鼠视神经损伤后1周视网膜中的BDNFmRNA的含量达到最高,随后降低;治疗后1、3、6和9周与同一时间单纯损伤组视网膜中的BDNFmRNA表达相比有所提高（P〈0.05）。结论低强度810 nm半导体激光照射能促进视神经钳夹伤后视神经再生,增加视网膜中BDNF mRNA的表达。     

低氧诱导因子1α在大鼠脊髓损伤中的表达

目的　了解低氧诱导因子 1α(hypoxiainduciblefactor- 1α ,HIF - 1α)在实验性脊髓损伤中的表达规律并探讨其在脊髓损伤中的作用。　方法　通过逆转录聚合酶链式反应 (RT -PR)、原位杂交和免疫组化方法 ,分别从mRNA和蛋白水平研究HIF - 1α在脊髓损伤后不同时段的表达情况。结果　HIF - 1α的mRNA和蛋白在损伤脊髓中的各种细胞类型中广泛表达 ,而且表达较正常脊髓明显增高 (P <0 .0 5 ) ,其中蛋白表达高峰 (伤后 1d)较mRNA表达高峰 (伤后 3d)提前。　结论　脊髓损伤中存在缺血缺氧损害 ,缺氧环境可通过诱导转录和增强蛋白稳定性来增加HIF - 1α蛋白量 ,这可能与HIF - 1α的下游基因激活和脊髓组织细胞耐受缺氧环境有关。     

视神经损伤后睫状神经营养因子受体的表达变化

视神经创伤、青光眼等疾患主要影响视网膜神经节细胞 (RGCs) ,RGCs的死亡是视功能发生不可逆性改变的直接原因 ,因此 ,关于RGCs存活和再生的研究一直倍受眼科界关注。近十年来的研究发现 ,睫状神经营养因子 (CNTF)能明显促进RGCs的存活和再生[1,2 ] 。睫状神经营养因子受体 (CNTFR )是CNTF的特异性结合蛋白 ,它的表达变化与CNTF的作用密切相关。为进一步了解CNTFRmRNA在视神经损伤及修复过程中的表达情况 ,笔者应用逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)方法对其进行了半定量研究。1　材料与方法1.1　实验动物和材料由上海西普尔 -…     

α晶体蛋白对LPS刺激及视神经损伤后大鼠视网膜小胶质细胞增殖及数量的影响

目的 研究α晶体蛋白对大鼠视网膜小胶质细胞增殖能力及视神经损伤后小胶质细胞数量的影响.方法 脂多糖激活离体培养视网膜小胶质细胞,模拟视神经损伤,采用MTF分析α晶体蛋白对激活的小胶质细胞增殖能力的影响;建立大鼠视神经不全损伤模型,损伤后玻璃体腔注射α晶体蛋白,采用视网膜铺片及免疫荧光标记小胶质细胞并计数,比较不同组小胶质细胞的数量.结果 10-g/L～10-2 g/L浓度的脂多糖均可激活小胶质细胞(P＜0.05),10-6g/L和10-4g/L浓度的α晶体蛋白可明显抑制10-6g/L浓度的脂多糖激活的小胶质细胞的增殖;视神经损伤1～3周,α晶体蛋白注射组小胶质细胞的数量明显少于损伤组(P＜0.05).结论 α晶体蛋白可抑制视网膜上小胶质细胞的增殖和活化,减轻小胶质细胞对RGCs的过度吞噬和继发性损害,可能是视神经损伤后α晶体蛋白问接保护RGCs存活的另一机制.     

大鼠视神经损伤一氧化氮合酶的分布及其意义

目的观察视神经损伤前后一氧化氮合酶（NOS）的分布,探讨一氧化氮（NO）在视神经损伤中的变化。方法采用大鼠球后视神经横断伤及钳夹伤模型,利用组化NADPH-黄递酶法,于术后1、3、7、14天检测视神经NOS的分布。结果NOS正常情况分布于视神经鞘膜、神经胶质细胞、血管内皮细胞,损伤后神经胶质细胞NOS活性增加,同时局部浸润的炎性细胞也表现出NOS活性。结论视神经损伤NOS的活性增高,提示NO在视神经损伤的病理生理过程中起一定的作用,可能介导了视神经损伤的继发性损害。     

玻璃体注射α-晶体蛋白对视神经损伤后视网膜神经节细胞的保护作用

目的在体观察α-晶体蛋白对LongEvens大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞（RGCs）存活的保护作用。方法于视神经损伤前7d经上丘及外侧膝状体逆行标记RGCs。成年LongEvens大鼠35只，其中10只用于提取α-晶体蛋白，另外25只分成5组，分别为正常对照组和伤后1，2，3，4周组，每组5只。右眼经玻璃体腔注射浓度为1×10^-5g／L的α-晶体蛋白5μl，左眼注射牛血清白蛋白5μl，分别于伤后1，2，3，4周对实验大鼠行RGCs计数。结果视神经夹伤后1周RGCs数明显下降，牛血清白蛋白组下降为正常值的33％；视神经夹伤后2周下降为正常值的4％，3周时下降为正常值的3％，4周时下降为正常值的1％。玻璃体腔注射α-晶体蛋白组在视神经夹伤后1周RGCs数下降为正常值的51％；2周时RGCs数下降为正常值的11％；3周时RGCs数下降为正常值的7％，4周时下降为正常值的3％，均显著高于对照组（P〈0．01）。结论视神经损伤后玻璃体腔注射可溶性α-晶体蛋白能够延缓RGCs死亡，具有一定的保护作用。     

大鼠轴索损伤后视网膜神经节细胞和少突胶质细胞内Tau蛋白的表达

目的 观察大鼠轴索损伤后视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells,RGCs)及少突胶质细胞(oligodendrocytes,OLs)内Tau蛋白表达的变化,探讨Tau蛋白与轴索损伤后病理变化的关系. 方法 光镜下观察正常对照组、单纯视神经牵拉伤组、单纯热应激处理组和热应激预处理牵拉伤组大鼠视神经、RGCs、OLs的形态学变化,免疫组化染色检测各组大鼠RGCs及OLs中Tau蛋白的表达情况. 结果 牵拉伤后视神经轴索、RGCs及OLs的形态发生明显的病理变化,热应激预处理再致伤后上述病理改变有显著改善.单纯牵拉伤可使RGCs及OLs中Tan蛋白的表达增加,单纯热应激处理后Tau蛋白的表达不受影响,热应激预处理后再致伤使Tau蛋白的表达明显减弱. 结论 神经元及神经胶质细胞共同参与了轴索损伤后的病理过程.Tau蛋白表达变化可能与迟发性轴索断裂及迟发性神经元凋亡有关.热应激能使Tau蛋白表达减弱和延后,减轻细胞骨架的损害.     

人睫状神经营养因子的克隆与原核表达

目的：克隆人睫状神经营养因子基因ｃＤＮＡ，并探索其在大肠杆菌中高效表达。方法：提取总ＲＮＡ，逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），序列测定正确后原核表达并用制备电泳纯化。结果：克隆了人睫状神经营养因子基因ｃＤＮＡ，实现了其在大肠杆菌中的高效表达，表达量至少达到２６％，制备电泳纯化后，重组蛋白纯度达到９５％。结论：从胎儿坐骨神经组织中克隆到人睫状神经营养因子基因ｃＤＮＡ，制备电泳纯化出高纯度的重组蛋白     

脑源性神经营养因子与外伤性脑损伤

脑损伤（BI）后，大脑神经元具有一定再生能力，但需要有神经营养因子（NTFs）的参与。脑源性神经营养因子（BDNF）在大脑神经元以及胶质细胞中均可合成，不仅具有神经元保护和促进神经细胞的分化和再生功能，还对大脑损伤后脑功能的恢复起重要作用。进一步研究BDNF在脑损伤后的含量变化与损伤时间、损伤程度是否具有相关性，有可能为临床脑损伤的治疗、损伤时间、损伤程度的判断、以及判断预后提供新的方法。     

脑源性神经营养因子与外伤性脑损伤

脑损伤(BI)后,大脑神经元具有一定再生能力,但需要有神经营养因子(NTFs)的参与.脑源性神经营养因子 (BDNF)在大脑神经元以及胶质细胞中均可合成,不仅具有神经元保护和促进神经细胞的分化和再生功能,还对大脑损伤后脑功能的恢复起重要作用.进一步研究BDNF在脑损伤后的含量变化与损伤时间、损伤程度是否具有相关性,有可能为临床脑损伤的治疗、损伤时间、损伤程度的判断、以及判断预后提供新的方法.     

慢性染铅大鼠海马脑源性神经营养因子的改变

 目的探讨慢性染铅大鼠海马脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor,BDNF)的变化.方法Wistar大鼠分别饮用0.02%、0.2%的醋酸铅(PbAc)溶液,染铅3个月后,通过Y-迷宫实验检测各组动物学习记忆行为变化,采用免疫组织化学ABC法观察各组大鼠海马CA1区、CA3区和齿状回BDNF阳性神经元数目的改变.结果在正常情况下,BDNF样免疫阳性神经元在海马各区及齿状回均有分布.与对照组相比,饮用0.02%和0.2%PbAc两组染铅大鼠学习记忆能力明显降低(P＜0.05),同时两组染铅大鼠海马CA1区、CA3区和齿状回的BDNF阳性神经元数均明显减少(P＜0.05).结论海马各区BDNF阳性神经元数目的减少可能是大鼠染铅后学习记忆功能受损的机制之一.     

联合应用神经生长因子和睫状神经营养因子治疗大鼠坐骨神经损伤

目的 探讨联合应用神经生长因子(NGF)和睫状神经营养因子(CNTF)对大鼠坐骨神经损伤后再生及功能恢复的影响。方法 切除120只大鼠左侧6mm长坐骨神经，随机分为4组，每组30只，分别行NGF CNTF、CNTF、NGF、等渗盐水(NS)靶肌肉注射。伤后行坐骨神经功能指数(SFI)、形态学和S—100α、神经中丝200(NF200)免疫组化检查。结果 联合应用NGF和CNTF组SFI有髓神经纤维直径、数目和S—100α、NF200阳性轴突计数均明显优于单独用药组。结论 联合应用NGF和CNTF可明显促进大鼠坐骨神经损伤后的再生与功能恢复。     

周围神经损伤对脊髓运动神经元睫状神经营养因子表达的影响

目的 探讨周围神经损伤后脊髓运动神经元素达睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）水平的变化规律及其与神经元病理变化的相关性。方法 选用出生后３ｄ和成年大鼠各３０只,均分为对照组、伤后３,７,１４,２１,２８ｄ６组。切断不同鼠龄Ｗｉｓｔａｒ大鼠坐骨神经复制周围神经损伤模型,行免疫组织化学染色ＣＮＴＦ阳性脊髓运动神经元,利用图像分析系统计算脊髓ＣＮＴＦ阳性运动神经元的吸光度值,从而间接反映脊髓运动神经元ＣＮＴＦ     

人脑源性神经营养因子序列的获得及鉴定

 目的 获得人脑源性神经营养因子(hBDNF)基因并进行序列分析,为基因治疗提供参考.方法 提取胚胎脑组织基因组mRNA,应用RT-PCR技术获得hBDNF基因序列酶切鉴定,并进行序列测定和分析.结果 DNA序列测定的结果与GenBank提供的已知序列(AY054406)比较,所克隆的hBDNF基因从起始密码子ATG到终止密码子TAG全长共744 bp,序列完全相同.结论 hBDNF基因序列的获得,为进一步开展面神经损伤的基因治疗积累了资料.     

不同制备工艺对胶质细胞源性神经营养因子微球理化性质及生物活性的影响

目的 评价不同制备工艺对胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)缓释微球的影响及微球所包裹的GDNF生物学活性.方法 以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(polylactide-co-glycolide,PLGA)为包裹材料,采用复乳法(W1/O/W2)制备GDNF-PLGA微球,通过两因素析因设计方差分析,研究PLGA中乳酸(LA)与羟基乙酸(GA)单体组成比例和复乳搅拌速度对GDNF微球的粒径、包封率、突释率和体外释放行为的影响,并用PC-12细胞检测微球所释放的GDNF生物学活性,确定最佳制备工艺.结果 PLGA的单体组成比例可影响微球的突释率(P＜0.05),对粒径和包封率的影响无统计学意义,随着GA比例的增加,微球中GDNF释放速度加快.复乳搅拌速度由1 000 r/min增加到3 000 r/min后,微球的粒径显著减小(P＜0.01),突释率显著增加(P＜0.01),体外释放更为快速.微球中的GDNF在37℃下活性有效期可达20 d左右,较单独存放的GDNF活性有效期延长10 d以上.结论 复乳法可制备具有较高包封率和适宜体外释放时间的GDNF缓释微球,且活性有效期延长.

Abstract：

Objective To evaluate the effect of different preparation processes on preparation of the glial cell line-derived neurotrophic factor(GDNF)loaded microspheres and observe the biological activity of GDNF.Methods With polylactide-co-glycolide(PLGA)as the coating material,the GDNF-loaded microspheres were prepared by using double emulsion(W1/O/W2).Two-factor factorial design variance analysis was done to analyze the effects of the composition proportion of lactic acid(LA)and glycolic acid(GA)in PLGA and the stirring speed of multiple emulsion on particle size,entrapment efficiency,burst release and in vitro release characteristics of the GDNF-loaded microspheres.PC-12 bioassay was employed to detect the biological activity of the released GDNF so as to determine the optimal preparation process.Results The composition proportion of PLGA could affect the microspheres'burst release(P ＜ 0.05),with no effect on particle size and entrapment efficiency.with the higher.With higher proportion of GA,the release speed of GDNF in the microspheres was increased.When the stirring speed of multiple emulsion was increased from 1 000 r/min to 3 000 r/min,the particle size of the microspheres was decrease significantly(P ＜ 0.01),the burst release was increased markedly(P ＜ 0.01)and the in vitro release rate was accelerated.The activity of GDNF in the microspheres could last for about 20 days at 37℃,which was 10 days longer than that of single GDNF.Conclusions Double emulsioncan prepare the GDNF-loaded microspheres with high entrapment efficiency and suitable in vitro release time.In the meantime,the microspheres can extend the validity of GDNF.