肉苁蓉多糖的巨噬细胞活化作用

目的观察肉苁蓉多糖(CDPS)对巨噬细胞的活化作用。方法采用中性红法测定吞噬活性;Griess试剂法测定NO释放量;L929细胞法及小鼠胸腺细胞法测定TNF-α及IL-1释放。结果CDPS在6.25～50mg.L-1剂量范围内可剂量依赖性地增强BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力和促进NO释放;在2.8～100mg.L-1剂量范围内可使正常和免疫抑制的RAW264.7细胞NO释放明显增加;在0.56～7.2mg.L-1或3.6～10mg.L-1范围促进RAW264.7细胞TNF-α或IL-1产生,均具有良好的量效关系。结论CDPS可明显提高巨噬细胞吞噬及分泌功能,活化巨噬细胞。肉苁蓉免疫增强作用可能与此有关。     

蛇六谷葡苷露聚糖对小鼠巨噬RAW264.7细胞免疫调节作用及机制研究

目的探讨蛇六谷葡苷露聚糖(KGM)对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用及机制。方法采用MTT法检测KGM对小鼠巨噬RAW264.7细胞存活率的影响,观察巨噬细胞形态的变化;采用吞噬中性红和流式细胞仪测FITC-dextran的方法检测KGM处理后小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性;采用Griess法测定NO,ELISA法检测细胞培养液中IL-6,IL-1β和TNF-α等细胞因子的含量;采用qRT-PCR法检测小鼠巨噬细胞RAW264.7相关基因iNOS,IL-6,TNF-α,IL-1β,TLR4,My D88,TRAF-6,TRAM和NF-κB等的表达。结果 KGM在50～400 mg·L~(-1)对小鼠巨噬细胞RAW264.7没有细胞毒性。KGM处理24 h后,RAW264.7细胞体积增大,胞内颗粒小泡增多,呈不规则多边形,部分细胞伸出伪足,表现为典型的激活态;中性红吞噬实验和流式测定FITC-dextran实验结果表明,KGM 50～200 mg·L~(-1)能显著提升小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性,与对照组相比,KGM 100 mg·L~(-1)分别使细胞吞噬活性提高101.4%和404.3%。Griess法检测表明,KGM能显著增加小鼠巨噬细胞RAW264.7合成和释放NO,其中KGM100 mg·L~(-1)处理组细胞NO含量与LPS 5 mg·L~(-1)作用相当,与对照组相比,NO含量提高318.1%。ELISA检测表明,KGM 50～200 mg·L~(-1)能诱导RAW264.7细胞分泌IL-6,TNF-α和IL-1β等细胞因子,与对照组相比,KGM 100 mg·L~(-1)明显使细胞因子分泌量分别增加415.5%,158.6%和458.0%(P<0.01)。qRT-PCR的结果显示,与对照组相比,KGM组IL-6,i NOS,TNF-α,IL-1β,TLR4,My D88,TRAF-6和NF-κB的mRNA表达水平升高(P<0.05),表明KGM可以激活小鼠巨噬细胞RAW264.7中的核转录因子NF-κB和TLR4。结论 KGM对小鼠巨噬RAW264.7细胞具有免疫调节活性,能够显著提升小鼠细胞RAW264.7的吞噬能力,促进分泌与释放NO和TNF-α等相关细胞因子,推测可能是通过激活TLR4/My D88/NF-κB信号通路发挥免疫调节作用。     

黑碳对RAW264.7细胞功能的影响及机制研究

目的 探究黑碳(Black Carbon)对小鼠巨噬细胞RAW264.7功能的影响及白细胞介素33(IL-33)产生的相关机制.方法 利用含有不同浓度黑碳的DMEM培养液对RAW264.7细胞染毒24 h,染毒结束后采用MTT法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞吞噬功能和CD54、CD86表达;实时荧光定量PCR检测I...     

线粒体复合体Ⅲ抑制剂抗霉素A对巨噬细胞免疫功能的影响

目的研究线粒体复合体Ⅲ抑制剂抗霉素A(AMA)对巨噬细胞免疫功能的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 AMA 0.0005,0.05,0.5,5和10 mg·L-1与RAW264.7巨噬细胞分别作用2,24和48 h后,WST-1法检测巨噬细胞增殖;AMA 0.0005,0.05和0.5 mg·L-1与RAW264.7作用2 h后,定量荧光法检测巨噬细胞产生活性氧水平、线粒体膜电位和对白色念珠菌的吞噬作用;Western蛋白印迹法检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)P38蛋白磷酸化水平;Griess法检测细胞培养上清一氧化氮含量。结果 AMA作用2 h对RAW264.7巨噬细胞增殖无明显影响,当作用时间延长到24和48 h后,可显著抑制RAW264.7巨噬细胞增殖(P<0.01)。AMA作用2 h可显著诱导RAW264.7巨噬细胞产生活性氧(P<0.01),降低线粒体膜电位(P<0.01)。AMA可增强RAW264.7巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功能,显著降低脂多糖诱导的巨噬细胞炎症介质一氧化氮的产生(P<0.01)。AMA显著诱导MAPK P38磷酸化(P<0.01)。结论 AMA能够诱导RAW264.7巨噬细胞线粒体损伤,增强巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬功用,降低脂多糖诱导的炎症反应,可能与激活MAPK P38磷酸化,进而激活MAPK信号转导通路有关。     

尼曼-匹克C1型类似蛋白1介导依泽替米贝对RAW264.7细胞脂质蓄积的抑制作用

目的观察肠道胆固醇吸收抑制剂依泽替米贝(ezetimibe)对RAW264.7细胞源性荷脂细胞脂质蓄积的影响并对其机制进行初步探讨。方法采用油红O染色、高效液相色谱法检测细胞内脂滴数量和细胞内脂质含量,Western blot对NPC1L1(Niemann-Pick type C1Like-1)进行定性和半定量检测。结果RAW264.7细胞中有NPC1L1蛋白表达。不同浓度(0、0.003、0.01和0.03mol.L-1)依泽替米贝预先孵育RAW264.7细胞24h或最佳浓度(0.03mol.L-1)预先孵育不同时间(0、6、12和24h)后,换50mg.L-1oxLDL继续孵育24h,结果显示不同浓度ezetimibe预先孵育后,细胞内脂滴数量与面积随着浓度的增加而逐渐减少;Ezetimibe预先孵育可减少细胞内脂质蓄积,并呈浓度和时间依赖性。其中0.03mol.L-1ezetimibe预先孵育24h组作用最明显,CE百分比较oxLDL单独孵育组减少了约47%±0.1%。结论小鼠源性巨噬细胞RAW264.7中存在NPC1L1蛋白表达;依泽替米贝能够减少RAW264.7细胞中NPC1L1蛋白表达;依泽替米贝抑制RAW264.7细胞中脂质蓄积。     

不同分子量枸杞多糖对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

目的:研究不同分子量枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对小鼠巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用.方法:本研究通过水提醇沉及柱分离法以获得不同分子量的LBP成分.运用CCK8法检测不同给药浓度的LBP对RAW 264.7细胞增殖的影响;采用中性红吞噬实验测定LBP对细胞...     

双环醇对脂多糖诱导巨噬细胞iNOS蛋白的表达和NF-κB活化的抑制作用

目的炎症是肝炎病毒或其它因素所致的肝损伤的一个共同特征,该文目的系研究抗肝炎新药双环醇对与炎症反应相关分子的调节作用。方法以无毒性浓度双环醇预先与巨噬细胞株RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞温孵1h后,加入一定量脂多糖(LPS)共同培养适当时间以诱导上述细胞的活化,培养上清中NO2-的含量和TNF-α的水平分别用Griess试剂及L929细胞株生物法测定,用Westernblot方法测定iNOS蛋白的表达和NF-κB的活化。结果双环醇在0.1～0.5mmol.L-1剂量依赖性降低1mg.L-1LPS引起的RAW264.7和小鼠腹腔巨噬细胞NO的释放以及TNF-α的分泌,双环醇0.5mmol.L-1能够明显抑制1mg.L-1LPS引起的iNOS蛋白的表达和NF-κB的活化。结论双环醇对与炎症相关的调控因子iNOS蛋白的表达和NF-     

五味子甲素对脂多糖诱导的小鼠RAW264.7细胞的抗炎作用

目的：探讨五味子甲素对脂多糖诱导的小鼠RAW264.7细胞的抗炎作用。方法：检测五味子甲素对于脂多糖诱导的RAW264.7细胞的增殖、凋亡、吞噬及细胞内白细胞介素-lβ（IL-lβ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、前列腺素E2（PGE2）和环氧合酶-2（COX-2）水平的影响。脂多糖诱导后加入不同浓度五味子甲素,CCK8法测定RAW264.7细胞增殖,中性红试剂检测诱导后RAW264.7细胞的吞噬能力。经酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定细胞培养血清中IL-lβ、TNF-α、PGE2和COX-2水平的表达。Annexin V-FITC/PI双染检测五味子甲素对诱导后RAW264.7细胞凋亡的影响。结果：五味子甲素可明显抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞的增殖、吞噬能力及诱导刺激的细胞凋亡;ELISA结果显示,五味子甲素可以抑制细胞IL-lβ、TNF-α、PGE2和COX-2的水平。结论：五味子甲素对脂多糖诱导的小鼠RAW264.7细胞炎症具有明显的抑制作用,其机制可能与抑制炎症细胞的增殖、吞噬,减少炎症因子释放,减轻脂多糖诱导引起的细胞凋亡有关。     

褐藻糖胶促进小鼠巨噬细胞免疫活性及机制初探

目的 探讨褐藻糖胶(Fucoidan)对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响及初步探讨作用机制。方法 采用体外细胞培养方法,比色分析检测不同浓度Fucoidan(0、100、200、300、400、500 μg/mL)作用下RAW264.7吞噬中性红的能力,噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度Fucoidan(0、50、250、500 μg/mL)作用下RAW264.7增殖,Western Blotting检测Fucoidan诱导的RAW264.7的MAPK/ERK1/2的磷酸化。结果 Fucoidan剂量依赖性地促进RAW264.7吞噬功能和增殖功能。200 μg/mL Fucoidan作用10min即使ERK1/2发生磷酸化,30min时ERK1/2磷酸化达到最大值。结论 Fucoidan可提高小鼠巨噬细胞的吞噬活性和增殖能力,其机制可能与Fucoidan直接激活RAW264.7的MAPK/ERK1/2信号转导通路有关。     

载脂蛋白嵌合模拟肽对低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡的影响

目的观察模拟肽Ac-hE-18A-NH2对氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的RAW264.7巨噬细胞凋亡的影响。方法50 mg.L-1oxLDL处理RAW 264.7细胞48 h后加入不同浓度的Ac-hE-18A-NH2(1、10、50、100 mg.L-1)和β-环糊精(β-CD)或布雷菲得菌素(BFA)共同孵育24 h。通过流式细胞仪检测细胞凋亡,试剂盒检测caspase-3活性及细胞内胆固醇含量,Western blot检测细胞bcl-2蛋白的表达,液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出。结果 oxLDL诱导的RAW 264.7巨噬细胞的凋亡率随着oxLDL浓度的增加和处理时间的延长而明显提高。Ac-hE-18A-NH2(1、10、50、100mg.L-1)干预后细胞凋亡率以浓度依赖的方式减少。Ac-hE-18A-NH2呈浓度依赖性的促进细胞内胆固醇流出和降低细胞内的胆固醇含量,降低caspase-3的活性,上调bcl-2的蛋白表达。β-CD与Ac-hE-18A-NH2共同作用后胆固醇流出明显增加,细胞凋亡率相应减少。而BFA作用相反。结论Ac-hE-18A-NH2明显抑制oxLDL诱导的巨噬细胞凋亡,其作用可能与促进细胞胆固醇流出、减少细胞内胆固醇蓄积有关。     

Oxidative stress and pro-inflammatory responses induced by silica nanoparticles in vivo and in vitro

Oxidative stress and inflammatory responses induced by silica nanoparticles were evaluated both in mice and in RAW264.7 cell line. Single treatment of silica nanoparticles (50 mg/kg, i.p.) led to the activation of peritoneal macrophages, the increased blood level of IL-1β and TNF-α, and the increased level of nitric oxide released from the peritoneal macrophages. mRNA expressions of inflammation-related genes such as IL-1, IL-6, TNF-α, iNOS, and COX-2 were also elevated in the cultured peritoneal macrophages harvested from the treated mice. When the viability of splenocytes from the mice treated with silica nanoparticles (50 mg/kg, 100 mg/kg, and 250 mg/kg, i.p.) was measured, the viability of splenocytes was significantly decreased in the higher dose-treated groups (100 mg/kg, 200 mg/kg i.p.). However, cell proliferation without cytotoxicity was shown in group treated with relatively low dose of 50 mg/kg i.p. When leukocyte subtypes of mouse spleen were evaluated using flow cytometry analysis, it was found that the distributions of NK cells and T cells were increased to 184.8% and 115.1% of control, respectively, while that of B cells was decreased to 87.7%. To elucidate the pro-inflammatory mechanism of silica nanoparticles in vivo, in vitro study using RAW 264.7 cell line which is derived from mouse peritoneal macrophage was done. Treatment of silica nanoparticles to the cultured RAW264.7 cells led to the reactive oxygen species (ROS) generation with a decreased intracellular GSH. In accordance with ROS generation, silica nanoparticles increased the level of nitric oxide released from the cultured macrophage cell line. These results suggested that silica nanoparticles generate ROS and the generated ROS may trigger the pro-inflammatory responses both in vivo and in vitro.     

蟾酥不同溶剂萃取物对小鼠免疫细胞功能的影响

目的对蟾酥不同溶剂萃取物进行初步免疫活性筛选。方法用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞(M)能量代谢水平,中性红吞噬法测定腹腔M的吞噬功能,流式细胞术检测T淋巴细胞亚群和S期细胞的百分率。结果蟾酥各萃取层中的水层(VB2)、乙酸乙酯层(VB4)及总水提蛋白层(VB6)分别在1.25～30、10～20和10～40mg.L-1浓度范围内增强刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应;其他3组(VB1,VB3和VB5)蟾酥提取物单独作用或与ConA联合作用对小鼠脾淋巴细胞增殖反应无明显影响;VB2,VB4和VB6在1.25～40mg.L-1浓度范围内可增强ConA诱导的小鼠腹腔M能量代谢水平和吞噬中性红的能力。在10mg.L-1时,VB2,VB4和VB6可协同ConA增加脾淋巴细胞中S期细胞百分率,并降低CD4+CD8-和CD4-CD8+、增加CD4+CD8+T淋巴细胞亚群百分率。结论蟾酥不同溶剂萃取物VB2,VB4和VB6体外可协同ConA促进脾淋巴细胞和腹腔M的免疫功能,其机制可能与协同ConA促进DNA合成并活化CD4+CD8-T细胞表达CD8a抗原、增加兼具辅助和细胞毒作用的CD4+CD8+T淋巴细胞亚群的数量有关。     

氧化还原蛋白1对RAW264.7巨噬细胞炎症反应的刺激作用

目的 研究过氧化还原蛋白1(PORD1)对RAW264.7细胞炎性介质一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子α(TNFα)释放量的影响.方法 用MTT法检测重组蛋白PORD1对RAW264.7细胞的毒性,一步法检测RAW264.7细胞上清液中NO的含量;ELISA法检测RAW264.7细胞上清中TNFα的含量.结果 与空白组比较,50 nmol· L-1PORD1对细胞有显著毒性,20、10、5 nmol·L-1均无细胞毒性;PORD1可以诱导RAW264.7细胞中NO和TNFα大量表达.结论 外源性重组蛋白PORD1可以促进炎症反应的发生,其机制可能与增强炎症介质的释放有关.     

合用C-Raf和PKC-α mRNA为靶点的反义寡核苷酸增强对肺腺癌A549细胞体外生长的抑制作用

观察了靶向C-raf mRNA（ISIS5132）和PKC-α mRNA（ISIS3521）的反义硫代寡核苷酸合用对肺腺癌A549细胞体外增殖的抑制作用(MTT法). 单用药组药物浓度为500,200和80 nmol·L^-1;合用组A两药浓度分别为250,100及40 nmol·L^-1,即两药药量减半,药物摩尔浓度之和与单用药相同. 合用组B两药浓度分别为500,200及80 nmol·L^-1,但作用时间减半（各3 h）,两药作用时间之和与单用药相同. 结果表明,在合用组A,两药浓度水平为100 nmol·L^-1时,对A549细胞生长的抑制作用大于ISIS3521单用药组的200 nmol·L^-1水平(P<0.01);在合用组B,两药浓度水平为200和80 nmol·L^-1时,对A549细胞生长的抑制作用分别大于ISIS3521单用药组的200 nmol·L^-1和ISIS5132单用药组的80 nmol·L^-1水平（P<0.01）;其余合用组各个药物浓度水平的效应,与相应的单用药组的效应相近. 提示靶向不同癌基因的反义药物合用,可能增强对肿瘤细胞的抑制作用.     

Immunostimulating activity of the polysaccharides isolated from Cordyceps militaris

In this study, the signaling mechanism of the polysaccharides isolated from fruiting body of Cordyceps militaris (CM) was investigated in macrophages to evaluate its immuno-stimulating properties. We found that CM was capable of upregulation of NO, ROS, TNF-α and phagocytic uptake in mouse peritoneal macrophages and RAW264.7 macrophages. Macrophages activation by CM seemed to occur via activation of NF-κB and all three MAPKs pathways through dectin-1 and TLR2 macrophage receptors. Additionally, we showed that CM suppressed in vivo growth of melanoma in an experimental mouse model. Based on these data, we suggested that CM may potentially regulate the immune response.     

灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞活性氧自由基的影响

为进一步探讨灵芝多糖 ( GLP)免疫调节作用机理 ,采用激光扫描共聚焦显微镜技术 ,动态监测灵芝多糖均一体 GLB7对小鼠腹腔巨噬细胞 ( M )活性氧自由基含量的影响 .以 GLB7( 2 0 mg· L-1)刺激 M ,发现探针 DCHF- DA的荧光强度明显下降 ,与静息水平相比 ,平均下降 ( 36± 6) % ( n=6,P<0 .0 5) ;同时还能拮抗 PMA引起的 M 呼吸爆发 ,荧光强度下降幅度为 ( 1 9± 4) % ( n=6,P<0 .0 5) .结果证明 :GLB7能减少 M 内活性氧自由基的生成 ,具有清除活性氧的作用 ,这也是 GLB7产生免疫增强和抗衰老作用的重要途径 .     

穿琥宁抗炎作用的血红素加氧酶-1的信号转导机制

目的初步探讨穿琥宁抗炎作用的信号转导机制。方法用WST-8细胞计数试剂盒检测穿琥宁的细胞毒性;用IN Cell Analyzer 2000活细胞成像系统及组成型增强表达绿色荧光蛋白偶联NF-κBP65(EGFP-NF-κBP65)融合蛋白的CHO细胞和EGFP偶联促分裂原活化蛋白激酶APk2(EGFP-MAPK-APk2)融合蛋白的BHK细胞观察穿琥宁对白细胞介素1β(IL-1β)或肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导NF-κBP65核转位及脂多糖(LPS)诱导的P38MAPK下游分子MAPK-APk2核转位的影响;Western印迹法检测穿琥宁和血红素加氧酶-1(HO-1)特异性抑制剂锌原卟啉(ZnPP)对RAW264.7细胞HO-1、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶2(COX-2)表达的影响;Griess反应和ELISA法测定穿琥宁对RAW264.7细胞一氧化氮(NO)和前列腺素E2(PGE2)生成的影响。结果穿琥宁3～100μmol·L-1作用24 h对RAW264.7细胞无细胞毒性。穿琥宁不能抑制由IL-1β诱导的NF-κBP65核转位和LPS诱导的MAPK-APk2核转位,对TNF-α诱导的NF-κBP65核转位有较弱的抑制作用,抑制率为20%,无明显浓度效应关系。穿琥宁3,10,30和100μmol·L-1作用4 h能诱导RAW264.7细胞HO-1表达,穿琥宁100μmol· L-1作用6 h显著抑制IL-1β诱导的COX-2表达和PGE2产生,作用12 h抑制iNOS表达和NO产生。HO-1活性抑制剂ZnPP能部分逆转穿琥宁的上述作用。结论穿琥宁的抗炎作用可能主要通过HO-1信号转导,继而抑制iNOS和COX-2的表达及NO和PGE2的产生。对NF-κB信号传导系统的调节作用尚不清楚。     

杂色曲霉素对体外小鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素12表达与分泌的影响

目的　探讨杂色曲霉素(ST)对巨噬细胞免疫功能的影响。方法　分别采用半定量逆转录聚合酶链反应及酶联免疫吸附法,研究0 .12 5 ,0 .2 5 ,0 .5 ,1.0和2 .0mg·L- 1ST预处理对小鼠腹腔巨噬细胞白细胞介素(IL) 12mRNA表达及其蛋白分泌的影响。结果　在0 .12 5～1.0mg·L- 1范围内,ST处理对小鼠腹腔巨噬细胞IL 12p4 0和IL 12p35mRNA的表达均有一定的抑制作用。但在蛋白水平,对IL 12分泌的影响不明显。当ST浓度达到2 .0mg·L- 1时,可明显抑制IL 12p4 0mRNA的表达及IL 12的分泌。结论　ST可抑制巨噬细胞IL 12的表达或分泌,提示ST可能在一定程度上对机体的细胞免疫功能产生不利影响。