人C_1q:迅速分膏和免疫扩散定量测定

从人血清或血浆中分离C_1q的方法很多,但这些方法难以获得纯C_1q。本文介绍一种简单,快速的两步法,从人血浆中分离C_1q,纯度好,产量高。另外还用单向免疫扩散法测定了混合人血浆中C_1q的浓度。其方法是:(1)过时的O型人枸橼酸血浆1000ml,用2M NaOH调pH到8.8,加入55ml 0.2M EDTA,再调pH到8.8。用5mM1.3-二氨基丙烷(PH8.8)透析后形成沉淀物,离心(6000g,10分钟)分离之,并用40ml透析缓冲液洗3次。悬浮再用含10mMEDTA3×25ml 5mM磷酸盐缓冲液(PBSE)(pH7.4,μ=0.15)离心取沉淀物,获得富含     

NO合成酶神经元在大鼠大脑皮质顶叶的形态特点及分布

<正>本实验选用成年雄性SD大鼠15只,经多聚甲醛灌注固定.通过顶叶,冠状切取2mm厚的脑组织块,冰冻切片20～30μm厚,用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH)脱氢酶组织化学染色,采用0.1M磷酸缓冲液pH7.4洗切片3次,入Triton—1000.3%室温下(20℃左右)5’～10’酶组织化学处理,Nitroblue Te-trazc lium 0.1mg/ml+1.0mg/ml NADPH(SIGMA公司),稀释液为0.1M Tris—HCl pH 8.0,37℃孵育60’,效果较好.观察结果:NO合成酶神经元各层均有,以Ⅴ—Ⅵ层最多,其次是Ⅱ—Ⅲ层,最少是Ⅰ怪.通过     

纯化小鼠IgM腹水单克隆抗体方法的探索

本文选用IgM的杂交瘤细胞系(PS-1)在BALB/c小鼠腹腔产生的腹水单克隆抗体,摸索并比较了三种提纯方案的效果。 抗体经低速离心去除纤维蛋白后,分别用盐析、低渗透析和腹水二次过柱三种方案提纯,盐析后的沉淀、低渗透析后的上清和沉淀物以及原腹水,四种样品分别经Sephacryl S-200柱层析(床体积-1.7×ll5cm;洗脱液-0.001MEDTA,0.01M Tris,0.5M NaCl pH=7.4;     

5-HT_2受体-磷脂酶C的激活易化大鼠基底外侧杏仁核突触可塑性的研究

为了探讨5-HT2受体激动剂盐酸2,5-二甲氧基-4-碘苯基丙烷(DOI)对杏仁核突触可塑性的调节作用,本研究在杏仁核脑片上记录基底外侧杏仁核(BLA)场电位,应用单串的θ频率波刺激(TBS)诱导突触可塑性,观察DOI对TBS诱导的突触可塑性的影响,及5-HT2受体拮抗剂、磷脂酶C抑制剂能否抑制DOI的作用。结果显示:单串的TBS刺激外囊,在BLA仅诱导约为10min的短时程增强。灌流液中加入100μmol/L DOI 20min,对基础的场电位没有作用。但在DOI存在的情况下,单串的TBS即可诱导长时程增强,强直刺激30min后,增强的场电位斜率仍维持在基础值的(162.5±9.7)%(n=9,P<0.01)。DOI对TBS诱导的突触可塑性的易化作用可被5-HT2A/2C受体拮抗剂ketanserin和PLC抑制剂U73122所抑制。以上结果提示5-HT2A/2C受体的激活可通过磷脂酶C通路易化杏仁核的突触可塑性。     

抗原免疫对外周淋巴器官中细胞凋亡的影响

日的 :观察抗原免疫刺激后外周淋巴器官中细胞凋亡的情况。方法 :用完全佛氏佐剂免疫 B1 0 .A小鼠 ,2 1天后解剖 ,取出腹部淋巴结 ,制成冰冻切片。采用 TUNEL原位染色法 ,步骤如下 :1 .制备冰切片 ,过夜 ;2 .用 4%多聚甲醛 ( PBS,p H7.4)固定1 0分钟 ,然后 PBS洗 30分钟 ;3.用 3% H2 O2 (甲醇稀释 )封闭 ,室温下1 0分钟 ,然后 PBS洗 30遍 ;4.用 0 .1 % Triton X- 1 0 0 ( 0 .1 %柠檬酸钠 )在冰上 ( 4℃ )作用 2分钟 ,然后 PBS洗2遍 ;5 .擦干切片 ,每张加 5 0μl TUNEL反应混合液 ,置于湿盒中放于 37℃反应 30分钟 ,然后 PBS洗 …     

显示ACPase和AKPase的简便方法

ACPase和AKPase是组织化学上最常研究的酶,因此Gomori硫化铅、钙钴法及其改良法,有关书刊上介绍各异。但在配孵育液时较繁琐,易沉淀,重复性差,要现配现用。经改良后的方法简便,省时省试剂,不沉淀,重复性好。单液分别配制,4℃下7-15天仍可用,一、ACPase的显示:冰冻切片。配孵育液:①0.3％硝酸铅0.1(pH4.6-4.7)醋酸缓冲液。②0.3％β-甘油磷酸钠水溶液。临用时取①10ml②30ml温合。37℃下孵育10-20分钟(石蜡切片时间要长)。蒸馏水快洗2-3次。入1％硫化铵数秒到1分。入此     

正常人粒细胞内铁蛋白的定位观察

本文采用正常人外周血2～4m1,1000～1500r/min离心10分钟,4%戊二醛固定后按常规电镜标本制作。半薄切片定位白细胞,制超薄切片收集于无膜镍网上。超薄切片先经H_2O_2蚀刻,继之用1%卵蛋白处理15分钟,然后切片依次孵育于抗人铁蛋白抗体(一种为兔抗人铁蛋白多克隆抗体,另一种为鼠抗人铁蛋白单克隆抗体)、10nm葡萄球菌A蛋白-胶体金探针(PAG)中,最后经醋酸铀和柠檬酸铅复染,JEM-1200EX透射电镜观察。结果如下:各种血细胞的超微结构均清晰可见,两种抗体在白细胞内的反应显著不同。经心脏铁蛋白单克隆抗体染色后,发现阳性胶体金颗粒只存在于嗜酸性粒细胞内的颗粒上,细     

男性精神分裂症患者5-HT2A受体基因T102C多态性与迟发性运动障碍的关联

目的探讨5-羟色胺2A(5-HT2A)受体基因T102C多态性与精神分裂症伴迟发性运动障碍(TD)的相关性.方法用异常不自主运动量表(AIMS)评定男性精神分裂症患者;对42例符合TD(AIMS总分≥3分)者和与TD组严格相匹配的51例非TD者,采用简明精神病评定量表(BPRS)评定精神症状;应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法分析5-HT2A受体基因T102C多态性的分布频率.结果(1)经吻合度检验,TD组、非TD组的5-HT2A受体基因T102C多态性位点的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡法则(χ2分别为0.06、0.02,ν均=2,P均＞0.05)(2)TD组与非TD组的基因型总体分布的差异无显著性(χ2=4.37,ν=2,P＞0.05),等位基因频率分布的差异有显著性(χ2=4.36,ν=1,P＜0.05).(3)TD组的AIMS和BPRS的评分分别为(6.5±1.8)分和(51.2±7.8)分,非TD组分别为0分和(50.3±7.4)分,差异无显著性(P＞0.05).结论5-HT2A受体基因的T102C多态性可能与男性精神分裂症患者的TD相关联.     

心得安对体外牛精子活动力的抑制作用

实验用牛精力活力测定法将18例牛精标本分为2×10~(-3)M心得安解冻牛精组(9例)及4×10~(-3)M心得安新鲜牛精组(9例),每组分别另用只加生理盐水的牛精标本作为对照。此结果表明,一定浓度的心得安在几分钟内即可使游动的精子完全丧失其前向运动的能     

猕猴黄体生成素放射免疫分析方法的建立

目的 :在生殖医学的动物实验中 ,需要检测猕猴血清中黄体生成素 (MLH)的含量 ,为此建立了猕猴血清黄体生成素 (MLH)的放射免疫分析方法。方法 :用氯胺T法制备12 5I-MLH ,兔抗MLH为第一抗体 ,羊抗兔IgG为分离剂 ,采用液相竞争法建立放射免疫分析方法。结果 :标记抗原比放射性为 6 7μg/mCi,抗体亲和常数为Ka=3 5 5× 10 -9mol/L ,标准曲线形态良好 ,r=0 991,批内误差CV =3 49% ,批间误差CV =4 6 5 % ,最小可测浓度为 0 42 μg/ml,30例正常猕猴血清检测结果为 1 17± 0 6 75 μg/ml。 结论 :MLHRIA的建立对避孕药和性生理药品的动物监测及医学研究均有重要意义。     

检测过敏性疾病的蛋白芯片制作及临床应用的初步研究

目的优化蛋白芯片的制作条件,并探讨其在过敏性疾病诊断中的应用价值。方法收集患者血清标本103例,年龄9～76岁,平均年龄41岁。具有明显Ⅰ型变态反应性疾病临床指征,其中荨麻疹41例,过敏性皮炎31例,湿疹9例,皮炎23例。采用晶芯-48点样仪在不同的膜性载体(NC、PVDF)上制备阳性对照、阴性对照、屋尘、粉尘螨、豚草花粉、蒿属花粉6×4蛋白芯片。并与德国Allergyscrean过敏原检测系统比较诊断准确性。结果最佳实验条件:以PVDF膜为载体,点样后4℃冰箱48h固定,2%～3%BSA室温封闭2h,TBST(pH=7.4,含吐温0.05%)洗3次,每次3min。加待检血清,室温孵育40min,TBST(pH=7.4)洗3次,每次3min,抗人IgE质量浓度为144ng/ml。与德国Allergyscreen过敏原检测系统比较总体符合率为83.31%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论过敏性疾病检测蛋白芯片操作简单,成本低,血清用量少,可同时检测多项指标,相互无干扰,是一种很有发展前景的过敏性疾病体外检测的新方法。     

单克隆抗体对霍乱弧菌抗原性的研究——Ⅰ.12株McAb对50株霍乱弧菌菌体抗原的初步研究

本文是用12株单克隆抗体对50株El Tor生物型霍乱弧菌的菌体抗原的研究结果。采用的方法是ELlSA间接法:于酶联板中加入经鉴定的待检测的菌体抗原50ul/孔(1亿/ml),过夜蒸干包被,洗3次,加入1％BSA100ul/孔,37℃经1小时封闭,洗3次:加入McAb(1:80)50ul/孔,37℃1小时,洗3次,加兔抗鼠酶标抗体50ul/孔,37℃作用2小时,洗3次后,加底物20分钟后,用2M硫酸终止反应,于酶联免疫检测仪中测定OD值,以P/N>     

小鼠胸腺皮质酸性对硝基酚磷酸酶的细胞化学定位

用6周BALB/c小鼠,取胸腺皮质切成1mm~3小块,固定于含5％蔗糖的2％(戊二醛二甲胂酸(pH 7.2)中。经0.1 mol/L二甲胂酸缓冲液洗后,用振动切片机切成40 μm厚片。再经0.2 mol/L醋酸缓冲液(pH5.0)漂洗,入孵育液;3.0 mmol/L对硝基酚磷酸钠,2.0 mmol/L氯化亚铈,0.1mmol/L醋酸缓冲液(pH5.5),含5％蔗糖     

与植物多糖硫酸酯结合的HIV-1ⅢB灭活病毒免疫小鼠的研究

目的:为了探讨植物多糖硫酸酯(M33A)与gp120结合后,能否诱导H IV-1ⅢB的gp120暴露出中和抗体的表位,用它作为灭活疫苗以便诱导产生中和抗体。方法:用M33A结合的灭活H IV-1ⅢB作为免疫原,与佐剂混和后,免疫BALB/c小鼠,制备出免疫血浆。用ELISA检测血浆内抗H IV-1特异性IgG抗体的滴度,用改良的活细胞染色法中和试验检测免疫血浆的抗H IV-1ⅢB的中和活性。结果:从与M33A结合的H IV-1ⅢB免疫组的动物获得的免疫血浆内抗H IV-1抗体的滴度(C组:1.5×106;D组:1.5×106)比未结合M33A的H IV-1ⅢB免疫组(4.9×105)高,雌性小鼠的免疫血浆的特异性抗体滴度比雄性的高3倍。所有免疫组获得的免疫血浆均没有抗H IV-1中和活性。结论:M33A与gp120相互作用不能诱导暴露出gp120的中和抗体表位,但M33A可以增强机体免疫原的抗体反应强度,提示它可以作为免疫增强剂用于疫苗研究。     

5-羟色胺诱导冠状动脉收缩的机制研究

目的:探讨5-羟色胺(5-HT)诱导冠状动脉收缩的机制。方法:取雄性Wistar成年大鼠,制备离体冠状动脉环,经血管张力测定仪测定动脉环的张力变化,并探讨给予不同信号通路抑制剂对5-HT诱导的冠状动脉收缩的影响。结果:首先发现给予5-HT_(2A)受体阻断剂沙格雷酯(sarpogrelate,1μmol/L)可完全消除5-HT引起的冠状动脉浓度依赖性收缩;磷脂酶C_β(PLC_β)抑制剂U73122(10μmol/L和50μmol/L)、Rho相关蛋白激酶抑制剂Y-27632(3μmol/L和10μmol/L)和蛋白激酶Cδ亚基(PKCδ)抑制剂rottlerin(3μmol/L和10μmol/L)孵育后,均可明显抑制5-HT引起的冠状动脉环收缩(P0.05);此外,L-型钙通道(Cav1.2)阻断剂硝苯地平(1μmol/L)及细胞内钙池操纵性钙内流(SOCE)抑制剂SKF96365(10μmol/L和30μmol/L)和2-氨基乙氧基苯硼酸(2-APB,50μmol/L和100μmol/L)孵育后,5-HT诱导的血管收缩张力较未处理组明显下降(P0.05);另外,在含硝苯地平(1μmol/L)的无钙Kerbs-Henseleit(K-H)液中,发现5-HT仍可诱导血管收缩。结论:5-HT通过激活5-HT_(2A)受体诱导冠状动脉收缩,其机制可能与PKC和Rho激酶信号通路,以及钙调控有关。     

乳癌的CEA抗原标记

已证实CEA是乳癌患者的一个瘤标记,但用间接免疫酶技术测乳癌组织切片中的CEA标记,各家结果不一致,阳性率在1.6%～88%之间。本文报道用PAP法检测乳癌组织内CEA分布情况,以探讨良性乳腺肿物与乳癌以及乳癌组织亚型等的关系。材料与方法选天津市人民医院乳腺科收治可手术病人的乳癌标本31例和腺瘤标本13例进行PAP染色。方法:石蜡切片6μm厚,在二甲苯中脱蜡,依次酒精脱水。先把切片放3.0%H_2O_2中5分钟,以去掉因内源酶活性出现的背景着色,用0.05MpH7.6Tris—HCl缓冲液洗15分钟,然后与用0.5MpH7.6Tris—HCl缓冲液依1:20稀释的非免疫羊血清共同孵育30分钟以封闭非特异性抗体。在组织切片上加兔抗人CEA抗     

巨细胞病毒特异性淋巴细胞转化试验的研究

为探讨巨细胞病毒(CMV)的致病机理,本文采用CMV特异性淋巴细胞转化试验(CMV-LTT)。比较CMV甘氨酸提取抗原和CMV细胞结合抗原(CMV-FF抗原)对致敏淋巴细胞刺激的结果,发现后者转化值明显高于前者(0.02>P>0.01),CMV-FF抗原最适工作浓度为1×10~5细胞/ml;在培养液中以自身血浆代替小牛血清对提高敏感淋巴细胞体外增殖效果显著(0.02>P>0.01)。结果提示:CMV-LTT特异性高,与其它疱疹病毒(HSV、VZV)抗原无交叉反应性;用本法检测94名健康成人外周血标本,其平均转化值血清抗体阳性者(77例)17.21±9.25,血清抗体阴性者(17例)1.60±1.20。     

细胞色素氧化酶的DAB法与Nadi反应的比较

过去常用经典的 Nadi反应显示细胞色素氧化酶以定位线立体的存在部位 ,现在广泛使用 DAB法。我们对这两种方法进行了比较。方法如下 :取 Wistar大鼠的心、肝、肾组织 ,用液氮骤冷 ,恒冷箱切片 (厚 7μm) ,进行以下实验 :Nadi反应 :切片入孵育液 ( N-苯基 -对 -苯二胺 3mg、1 -羟基 - 2 -萘酸 3mg溶于二甲基亚砜 0 .1 ml,0 .0 5 M的磷酸缓冲液 p H7.21 0 ml,混匀后过滤 )室温 30 min。入 Lugol碘液 2 min,入 5 %硫代硫酸钠 4min,入 1 %醋酸钴 6 0 min,蒸馏水洗 ,甘油明胶封固。DAB法 :切片入孵育液 ( 0 .0 5 M磷酸缓冲液 p H7.2 1 0 ml…     

甲胎蛋白放射免疫快速测定

<正> 本文报道甲胎蛋白(AFP)放射免疫快速测定法,对于实验的方法学作了初步探讨,并用本法和原法(卫生部上海生物制品研究所:甲胎蛋白放射免疫分析(双抗体法)试剂盒使用说明书,1982)对50例血清标本进行了对比,获得满意的结果,现报告如下。 一、材料和方法: (一)试剂:抗AFP血清、~(125)I-AFP及AFP标准品、羊抗马第二抗体均由卫生部上海生物制品研究所提供。 1.~(125)I-AFP:以0.05M pH7.4PBS稀释成10,000cpm/0.1ml; 2.AFP标准品:每瓶冻干品以0.6ml小牛     

应用微囊法培养高密度的人TIL和其它免疫反应性T细胞

作者所用肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)来自黑色素瘤患者,用含1000U/ml rIL-2的无血清AIM-V 培养基培养。从正常人外周血分离其它T 细胞,以用EB 病毒转化及丝裂霉素C 处理过的B 细胞作为刺激细胞,也用AIM-V 培养,内含25-100U/ml rIL-2。微囊的制作采用Damon 生物技术公司的专利技术(专利号4,352,883)。基本过程如下:离心(350×g)5分钟收集细胞,以150mM 的NaCl 液洗一次,重新悬浮于用150mM NaCl 液配制的含1.2%(W/V)藻酸钠的溶液中,再通过一球形微滴形成装置