刺蒺藜对培养人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨刺蒺藜对培养的人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用MTT法测定刺蒺藜对人A375黑素瘤细胞活力的影响,NaOH裂解法测定黑素合成,并与8-MOP的结果进行比较。结果0．1、0．2和0．5mg／ml刺蒺藜对于人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量依赖性激活作用,0．2mg／ml及0．5mg／ml刺蒺藜与对照组相比有显著差异（P〈0．01）。结论刺蒺藜对于培养的人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量依赖性激活作用。     

疏风活血方通过自噬途径对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞黑素代谢起调节作用

目的观察自噬在疏风活血方对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素合成中的作用。方法体外培养鼠B16细胞,设 立空白对照组（C组）,0.12、0.25、0.49、0.98、1.96 mg/mL疏风活血方组（S组）,自噬诱导剂雷帕霉素组（R组）,自噬诱导+疏风活 血方组（RS组）,采用MTT法测定各组对B16细胞增殖的影响,酶标仪检测法测定各组酪氨酸酶活性及黑素含量,Western blot 法测定自噬相关蛋白P62、p-mTOR、LC3B、Beclin1含量,比较分析结果。结果与C组相比,S组及RS组对B16细胞增殖均起浓 度依赖的抑制作用（P<0.05）;对酪氨酸酶活性及黑素合成有促进作用（P<0.05）;0.98 mg/mL疏风活血方组（R0.98）、自噬诱导+ 0.98 mg/mL疏风活血方组（RS0.98）、50 nmol/L自噬诱导剂雷帕霉素组（Rap50）均能上调自噬相关蛋白LC3B-II、Beclin1,下调 P62、p-mTOR含量。结论疏风活血方能通过激活自噬途径对体外培养的鼠B16黑素瘤细胞黑素代谢起调节作用,对其细胞增 殖有抑制作用;对酪氨酸酶活性及黑素合成起促进作用。     

双花对人黑素细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨双花对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用MTT法测定双花对人A375黑素瘤细胞活力的影响，以NaOH裂解法测定黑素合成，并与氢醌的结果进行比较。结果100μmol／L、500μmol／L和1000μmoL／L双花对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成均有较强的剂量相关性抑制作用，500μmol／L及1000μmol／L双花与对照组相比有显著差异（P〈0．01）。结论双花对于共培养体系酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性抑制作用。     

黑素生成过程中黄芩的调节作用

目的 :观察中药黄芩对B16F小鼠黑素瘤细胞增殖、黑素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法 :采用体外培养的小鼠B16F黑素瘤细胞株 ,用MTT法测定细胞增殖情况 ;NaOH裂解法测定黑素合成 ;多巴氧化法测定酪氨酸酶活性。结果 :在浓度为 0 .0 1～ 1.0 g·L-1时 ,黄芩可浓度依赖性促进B16F细胞增殖 ,酪氨酸酶活性和黑素含量 ,以 1.0 g·L-1为最佳。结论 :黄芩可促进细胞增殖 ,激活酪氨酸酶活性 ,提高黑素含量 ,从而为黄芩治疗白癜风的临床应用提供了实验依据。     

细菌基序对黑素细胞及前列腺素E2的影响

目的：研究细菌基序（CpG-ODN）对黑素细胞形态、黑素生成及前列腺素E2（PGE2）的影响。方法：用CpG-ODN处理体外培养的B16黑素瘤细胞和melan-α黑素细胞,分别用MTT法、多巴氧化法、NaOH裂解法和ELISA法检测B16细胞活力、酪氨酸酶活性、黑素含量以及上清中PGE2的水平,另外,观察CpG-ODN干预后melan-α细胞形态的变化。结果：干预24h后,5μg/mlCpG-ODN促进B16细胞增殖,10μg/ml对细胞增殖的影响与空白对照组无差异,而15μg/mlCpG-ODN则抑制细胞增殖。48h后,不同浓度CpG-ODN组的细胞增殖率趋于稳定,与正常对照组间差异无统计学意义（P〉0.05）。10μg/mlCpG-ODN提高酪氨酸酶活性和黑素生成,作用近似于α-MSH（P〉0.05）。另外,此浓度CpG-ODN作用48h后的细胞上清液中PGE2含量也有所升高,但与对照组差异无统计学意义（P〉0.05）,推测为检测时间滞后所致。10μg/mlCpG-ODN作用于melan-α细胞24h后,细胞树突数目增加,并有二级以致三级树突出现。结论：CpG-ODN作用于鼠黑素细胞的适宜浓度为10μg/ml,此浓度对黑素细胞的作用有时间依赖性。该实验为CpG-ODN作用于正常人黑素细胞的研究奠定了基础。     

石上柏和蒲葵子对蛋白激酶C活性的影响

采用DE52柱层析法部分纯化大鼠中的蛋白激酶C，研究了石上柏和蒲葵子醇提物对蛋白激酶C活性的影响。为了证明测定系统的可靠性，观察了多粘菌素B（已知蛋白激酶C抑制剂）对蛋白激酶C活性的影响。表明：石上柏醇提物对蛋白激酶C有强烈的抑制作用，IC502．2μg／ml；100μg／ml的蒲葵子醇提物对蛋白激酶C的抑制率为66．6％，降低药物浓度抑制作用减弱；多粘菌素B对蛋白激酶C有抑制作用，IC5017．7U／ml。     

蝉蜕的抗惊厥作用

目的：研究蝉蜕的抗惊厥活性。方法：依次采用95％乙醇和水对蝉蜕进行提取，分别制备蝉蜕醇提物和水提物；然后采用戊四唑（PTZ）致小鼠惊厥模型对蝉蜕醇提物和水提物的抗惊厥活性进行考察。结果：蝉蜕醇提物对小鼠的惊厥发生率无影响，在4、8g／kg时可明显延长小鼠发生惊厥的潜伏期，并延长惊厥小鼠的死亡时间，降低死亡率。蝉蜕水提物4、8g／kg能显著降低小鼠惊厥发生率，且明显延长小鼠发生惊厥的潜伏期，延长惊厥小鼠的死亡时间．降低死亡率，作用强于蝉蜕醇提物实验组，但弱于苯巴比妥钠实验组。结论：蝉蜕醇提物和水提物均有抗惊厥作用，其中水提物的直接抑制作用显著，且抗惊厥作用强度明显强于醇提物。     

高良姜提取物促进黑素生成的谱效关系分析

目的 建立高良姜提取物指纹图谱,考察其对B16鼠黑素瘤细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素量的影响,并分析其谱效关系。方法 HPLC法建立高良姜醇提物（G1）、G1水沉物（G2）、G2大孔树脂纯化物（G3）、G3聚酰胺精制物（G4）指纹图谱;MTT法检测各提取物对B16细胞增殖的影响;比色法检测其对酪氨酸酶活性和黑素量的影响;灰关联度分析法研究其谱效关系。结果 与对照组相比,G1浓度为1.00～5.00 μmol/L、G2浓度为 0.50～5.00 μmol/L、G3浓度为0.25～5.00 μmol/L,G4浓度为0.25～10.00 μmol/L,能显著促进B16细胞增殖（P＜0.01）;G1、G2浓度为0.50 μmol/L,G3、G4浓度为0.50～1.00 μmol/L,能显著增强酪氨酸酶的活性（P＜0.05、0.01）;G1浓度为0.50、5.00 μmol/L,G2、G4浓度为0.50～5.00 μmol/L,G3浓度为0.25～5.00 μmol/L时,促黑素合成作用显著（P＜0.05）;在相同浓度下,G4促B16细胞增殖和增强酪氨酸酶活性的作用最强。谱效关系分析表明,与药效关联度最高的是高良姜素（7号峰）。G1、G2、G3、G4含高良姜素分别为27.61、88.72、348.53、693.35 mg/g,验证实验结果表明高良姜素在0.25～10.00 μmol/L均有显著的促B16细胞增殖、增强酪氨酸酶活性和促进黑素量升高的作用。结论 随着高良姜素量的增加,高良姜各提取物对B16细胞增殖、酪氨酸酶活性及黑素量的作用逐渐增强,表明高良姜素是高良姜治疗白癜风的有效物质之一。     

黄芪醇提物对小鼠吗啡条件性位置偏爱的影响

目的 观察黄芪醇提物对吗啡诱导的小鼠条件性位置偏爱（CPP）效应的影响。方法 吗啡6mg／kg连续给药适应训练6d，建立小鼠吗啡CPP模型，观察黄芪醇提物对CPP的影响。结果 吗啡可诱导小鼠对伴药箱产生显著的CPP；训练阶段于每次给予吗啡前30min给予黄芪醇提物200，400和800mg／kg可拮抗小鼠对吗啡的CPP效应（与吗啡对照组比较P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01）；测试前30min一次给予黄芪醇提物800mg／kg可抑制小鼠已形成的CPP（P〈0.01），但黄芪醇提物200和400mg／kg不影响其效应（P〉0．05）；且黄芪醇提物自身不会使小鼠产生CPP。结论 黄芪醇提物能在一定程度上抑制吗啡诱导的小鼠CPP效应的形成和表达，其自身无潜在精神依赖性。     

地锦草提取物抗口腔病原菌作用的体外研究

目的探讨地锦草乙醇提取物（AE）和石油醚提取物（PEE）对口腔病原菌的体外抗菌作用。方法用试管倍比稀释法测定两种提取物对常见口腔病原的最小抑菌浓度（MIC）及最小杀菌浓度（MBC）,判断其抗菌活性。结果AE对变异链球菌、粘性放线菌和牙银卟啉单孢菌等3种常见口腔病原菌的MIC分剐为25mg／ml、50mg／ml、12．5mg／ml。MBC分别为50mg／ml、〉100mg／ml、25mg／ml,PEE的MIC分别为5％、10％、2．5％,MBC分别为10％、〉20％、10％。结论两种提取均有一定抗菌作用,但醇提物抗菌作用较强。     

李氏膈食散体外抗肿瘤实验研 究简

目的 研究李氏膈食散体外抗肿瘤作用.方法 采用水提和醇提的方法提取李氏膈食散的复方中的水溶和醇溶性成分.MTT法测定水提物和醇提物对肝癌细胞（HpeG-2）、胃癌细胞（MKN-45）、食道癌细胞（EC-109）的抑制作用.结果 两种提取物对三种肿瘤细胞株均有体外抗肿瘤作用,且以乙醇提取物效果更好.乙醇提取物对HpeG-2、MKN-45、EC-109三种肿瘤细胞株的半数抑制浓度分别为：622.89、173.41和210.17 μg/mL,最大抑制率在90％左右.结论 李氏膈食散提取物在体外具有抑制HpeG-2、MKN-45、EC-109生长的作用.     

白芨水提物对黑素瘤与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响

目的：利用人表皮黑素瘤细胞（A375细胞）与人永生化角质形成细胞（HaCat细胞）共培养模型,观察白芨水提物对该模型中黑素合成的影响.方法：构建A375细胞与HaCat细胞共培养模型,采用氢氧化钠裂解法、MTT法和多巴氧化法分别检测白芨水提物对黑素含量、细胞增殖和酪氨酸酶（TYR）活性的影响.结果：与阴性对照组比较,2 g/L、1 g/L、0.5 g/L、0.25 g/L白芨水提物对黑素合成有显著抑制作用（P＜0.01）,2g/L、1 g/L组对黑素合成的抑制作用与阳性对照药物熊果苷组相当;白芨水提物对TYR活性有显著抑制作用（P＜0.01）,其中0.5 g/L、0.25 g/L和0.125 g/L组与阳性对照药物熊果苷组的作用相当.结论：白芨水提取物可以通过抑制TYR活性抑制A375细胞与Hacat细胞共培养体系的黑素合成,为临床使用白芨治疗黄褐斑提供了实验依据.     

Effects of Curcuma Longa on proliferation of cultured bovine smooth muscle cells and on expression of low density lipoprotein receptor in cells

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｓｏｆａｑｕｅｏｕｓｔｕｒｍｅｒｉｃｅｘｔｒａｃｔ（ＡｑＴ）ａｎｄｓｅｒｕｍｏｆｒａｔｓｏｒａｌｙｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆｔｕｒｍｅｒｉｃ（...     

野金柴抗炎、镇痛和免疫调节作用的研究

目的研究野金柴的抗炎、镇痛、免疫调节作用。方法采用小鼠耳郭肿胀法、腹腔毛细血管通透性观察法、扭体法、碳粒廓清法和迟发型超敏反应法研究野金柴水提物和醇提物的抗炎、镇痛、免疫调节作用。将小鼠随机分8组,分别为空白、阳性对照、野金柴水提取物（低、中、高剂量）、野金柴醇提取物（低、中、高剂量）组。实验结束时测定相应指标。结果野金柴水提物高剂量和醇提物中剂量均能显著减轻二甲苯致炎小鼠的耳肿胀度（P〈0.05或P〈0.01）;水提物低、中、高3个剂量均能显著抑制对乙酸所致腹腔毛细血管通透性的增大（P〈0.05或P〈0.01）;水提物及醇提物均能显著抑制乙酸所致扭体次数（P〈0.01）;水提物高剂量和醇提物中剂量能显著提高小鼠吞噬细胞的吞噬功能（P〈0.05或P〈0.01）;除醇提物低剂量外,水提物及醇提物各剂量均能显著抑制过敏反应引起的耳肿胀（P〈0.05或P〈0.01）。结论野金柴具有一定的抗炎、镇痛作用,对免疫功能有一定的双向调节作用。     

红腺忍冬叶不同溶剂提取物中葡萄糖和果糖的含量变化研究

[目的]建立用HPLC-ELSD法测定红腺忍冬叶提取物中葡萄糖和果糖含量的方法,并应用此方法研究红腺忍冬叶不同溶剂提取物中葡萄糖和果糖含量的变化。[方法]采用Lichrospher NH2色谱柱,乙腈-水（90：10）为流动相,柱温25℃,流速0.8mL/min;ELSD漂移管温度70℃,载气为氮气,流速1.6L/min。[结果]红腺忍冬叶提取物中的葡萄糖和果糖能够得到较好地分离,葡萄糖和果糖的线性范围分别为0.5840~1.168mg·mL-1、0.8256~1.8576mg·mL-1,r分别为0.9994、0.9991;平均加样回收率分别为96.88%、97.55%,RSD分别为1.11%、1.15%;葡萄糖和果糖的稳定性（RSD）分别为2.12%、0.38%,重复性（RSD）分别为1.31%、0.24%。其中,水提物中葡萄糖和果糖的含量最高（分别为2.19mg·mL-1、4.10mg·mL-1）,50%醇提物次之（含量分别为1.13mg·mL-1、2.12mg·mL-1）,95%醇提物中含量最低（分别为0.45mg·mL-1、0.65mg·mL-1）。[结论]该方法简单、准确、重复性好,可用于测定红腺忍冬叶提取物中葡萄糖和果糖的含量。该批次红腺忍冬叶中,葡萄糖和果糖含量为水提液〉50%乙醇提取物〉95%乙醇提取物。     

温阳利水方水提物缓解脾肾阳虚特发性膜性肾病患者血清致小鼠足细胞损伤的机制研究

目的　探索温阳利水方水提物对脾肾阳虚特发性膜性肾病（IMN）患者血清致小鼠足细胞损伤的保护作用机制。方法　2015年2—3月,选取在广州中医药大学第一附属医院肾病科住院,首次肾穿刺活检确诊为IMN、血清抗M型磷脂酶A2受体（anti-PLA2R）阳性、脾肾阳虚的患者28例,采集清晨空腹静脉血。同时间段,采集健康志愿者30例清晨空腹静脉血。CCK-8试剂盒检测不同浓度（5%、7.5%、10%）脾肾阳虚IMN患者血清对体外培养小鼠永生化足细胞增殖能力的影响,构建脾肾阳虚IMN血清损伤足细胞体外模型。根据CCK-8检测结果,设置正常对照组、模型组、2 mg/ml温阳利水方水提物组、4 mg/ml温阳利水方水提物组和8 mg/ml温阳利水方水提物组共5组,依次予10%健康志愿者血清+RPMI-1640培养基、10%脾肾阳虚IMN患者血清+RPMI-1640培养基、10%脾肾阳虚IMN患者血清+RPMI-1640培养基+2 mg/ml温阳利水方水提物、10%脾肾阳虚IMN患者血清+RPMI-1640培养基+4 mg/ml温阳利水方水提物、10%脾肾阳虚IMN患者血清+RPMI-1640培养基+8 mg/ml温阳利水方水提物,分别孵育24 h和48 h。通过细胞免疫荧光观察足细胞骨架蛋白F-actin、qRT-PCR检测Caspase-3 mRNA。结果　RPMI-1640培养基组和RPMI-1640培养基加温阳利水方水提物组OD值比较,差异无统计学意义（t=1.937,P>0.05）。20、40、60、80、100 mg/ml温阳利水方水提物组OD值低于0 mg/ml温阳利水方水提物组（P<0.05）。10% IMN血清组OD值低于对照组、5% IMN血清组、7.5% IMN血清组（P<0.05）。10% IMN患者血清,可破坏足细胞骨架蛋白结构,F-actin表达减少,与细胞轴方向不一致,部分断裂,排列紊乱,细胞回缩。孵育24 h和48 h后,与模型组相比,温阳利水方水提物组F-actin表达增多,纤维断裂和排列紊乱情况均有所改善。孵育24 h,模型组Caspase-3 mRNA高于正常对照组（P<0.05）。孵育48 h,模型组Caspase-3 mRNA高于正常对照组、2 mg/ml温阳利水方水提物组、8 mg/ml温阳利水方水提物组（P<0.05）;孵育48 h,8 mg/ml温阳利水方水提物组Caspase-3 mRNA低于2、4 mg/ml温阳利水方水提物组（P<0.05）。结论　温阳利水方水提物可改善脾肾阳虚IMN患者血清致小鼠足细胞骨架蛋白F-actin重排,可能通过抑制Caspase-3 mRNA的表达,发挥抗凋亡效应。     

壮药苦丁茶和罗汉茶提取物的体外抗肿瘤活性实验

目的考察苦丁茶叶和罗汉茶叶两种壮药70%乙醇提取物的体外抗肿瘤活性,为这两种壮药的综合应用研究提供实验依据。方法采用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测苦丁茶叶和罗汉茶叶的提取物对SGC-7901、SK-OV-3、7404、CNE-1及H460 5种肿瘤细胞株的抗肿瘤增殖作用,计算抑制率。结果苦丁茶叶和罗汉茶叶提取物对5种肿瘤细胞株均无明显的抑制作用,其抑制率均低于50%。结论此研究结果为苦丁茶叶和罗汉茶叶的应用评价提供活性研究基础方面的依据。     

塞隆骨提取物对体外大鼠成骨样细胞ROS17/2.8的影响

目的研究塞隆骨提取物对体外培养大鼠成骨样细胞ROS17/2.8代谢功能的调节作用,从而在细胞水平上阐述塞隆骨防治骨质疏松的作用机制及药效成分的筛选。方法采用超临界萃取法制备塞隆骨的脂、醇、水提液及水煎提取液,用MTT法测定塞隆骨脂、醇、水提液及水煎液对成骨样细胞的增殖作用;测定碱性磷酸酶(ALP)活性,观察上述提取液对细胞分化的影响。结果10mg/mL塞隆骨脂提液和水提液对大鼠成骨样细胞ROS17/2.8有显著的增殖作用(P<0.01);ALP检测结果显示,10mg/mL脂提液能极显著增强成骨样细胞内ALP活性(P<0.01),1.0、0.1mg/mL能提高ALP活性(P<0.05);10mg/mL水提液能使ALP活性升高(P<0.05)。结论塞隆骨脂和水提取液中分别存在有较高活性的促成骨样细胞增殖、分化的物质,可作为虎骨的替代中药。     

元参组方对小鼠造血干细胞的增殖作用

目的研究元参组方对正常或受射线照射小鼠造血系统的作用。方法分别给正常和受致死剂量γ射线照射小鼠皮下注射,按Till的方法进行脾集落形成单位造血干细胞（CFU-S）测定,观察外周血细胞和骨髓、脾脏中的CFU-S的变化。结果该元参组方不仅对正常小鼠和受7.0Gy照射小鼠外周血细胞、血小板、脾脏中的CFU-S有持续升高作用,而且受照射小鼠存活率提高30%。结论元参组方能促使造血干细胞的增殖与分化,对急性放射性损伤有治疗作用。