黄芪水蛭及其不同比例配方含药血清对大鼠系膜细胞增殖和分泌Ⅳ型胶原影响的比较研究

目的:探讨黄芪(RA)、水蛭(H i)及其不同比例配方对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖和分泌Ⅳ型胶原含量的影响。方法:应用ELISA法测定GMCs增殖和Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的含量。结果:水蛭和黄芪均可抑制GMCs增殖和降低Col-Ⅳ的含量,但黄芪的作用弱于水蛭(P<0.01)。结论:水蛭和以水蛭为主的配方在抑制体外培养的大鼠GMCs增殖和Col-Ⅳ的分泌作用方面强于黄芪和以黄芪为主的配方。     

糖肾康含药血清对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞增殖及周期的影响

目的:观察糖肾康含药血清对高糖诱导小鼠肾小球系膜细胞(GMCs)增殖及周期的影响,阐明作用机制。方法:30只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖肾康4.6g/kg组、糖肾康13.8g/kg组、糖肾康41.4g/kg组和罗格列酮0.36mg/kg组5组,分别灌胃等体积生理盐水、糖肾康生药4.6g/kg、13.8g/kg、41.4g/kg和罗格列酮0.36mg/kg,1次/d,连续灌胃7d后腹主动脉取血制备含药血清;小鼠肾小球系膜细胞在高糖(30mmol/L葡萄糖)诱导下经含药血清治疗,分为正常血清组、高糖对照组、10%罗格列酮0.36mg/kg含药血清组、10%糖肾康4.6g/kg、13.8g/kg、41.4g/kg含药血清组,治疗24h、48h、72h和96h后,采用MTT法测定细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,划痕标记荧光染料示踪技术检测细胞间隙连接通讯功能(GJIC),RTq-PCR技术检测Cx43、DAG、IP3和PKC的mRNA的表达。结果:(1)与高糖对照组比较,10%糖肾康13.8g/kg、41.4g/kg含药血清组A值在24h、48h、72h和96h各时间段均明显下降,且糖肾康各剂量含药血清组A值从72h开始下降程度优于10%罗格列酮0.36mg/kg含药血清组。(2)与高糖对照组比较,含药血清治疗到72h时,G0/G1期细胞百分比升高,S期百分比降低,细胞增殖指数明显降低;与10%罗格列酮0.36mg/kg含药血清组比较,10%糖肾康41.4g/kg含药血清组效果更优。(3)与高糖对照组比较,10%罗格列酮0.36mg/kg含药血清组和10%糖肾康13.8g/kg、41.4g/kg含药血清组均能改善肾小球系膜细胞的细胞间隙连接通讯功能,10%糖肾康41.4g/kg含药血清组最优。(4)与高糖对照组比较,10%罗格列酮0.36mg/kg含药血清组和10%糖肾康13.8g/kg、41.4g/kg含药血清均能降低DAG、IP3、PKC的mRNA,升高CX43mRNA,10%糖肾康41.4g/kg含药血清组最优。结论:糖肾康能够抑制高糖环境下肾小球系膜细胞增生,调节细胞周期,改善细胞间隙连接通讯功能功能,促进增殖细胞凋亡,治疗早期糖尿病肾病,其可能机制是糖肾康阻断了DAG/PKC信号通路,增加了Cx43表达,改善了细胞间隙连接通讯功能。     

小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾小球系膜细胞 TGF-β1 与Ⅳ型胶原蛋白表达的影响

目的:探讨小檗碱对糖尿病肾病(DN)大鼠肾病变的保护作用及其机制.方法:以链脲佐菌素(STZ)复制DN大鼠模型,动物分为正常对照组、模型组、小檗碱低、中、高剂量治疗组(50,100,200mg·kg-1 ·d-1)、消渴丸治疗组( XKW,0.8g·kg-1·d-1),8周后检测空腹血糖(FBG)、肾重/体重比(KW/BW)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)及尿蛋白(Upro);免疫组织化学检测肾小球系膜细胞转化生长因子β1(TGF-β1)与Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)蛋白的表达.结果:ig给药,小檗碱可降低大鼠FBG,KW/BW,BUN,Cr及Upro水平,降低肾小球系膜细胞TGF-与Ⅳ-C蛋白的表达.结论:小檗碱对DN大鼠肾微循环病变具有保护作用,这种作用可能与其抑制肾组织TGF-β1与Ⅳ-C蛋白表达有关.     

加味升降散调控HIF-1α/NOX4信号通路对膜性肾病大鼠氧化应激和凋亡的影响

目的 探讨加味升降散对膜性肾病（MN）大鼠血清缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4（NOX4）信号通路的干预作用,研究其减轻肾组织氧化应激和凋亡的相关机制。方法 采用阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）尾静脉注射方法复制MN模型,将成功造模的大鼠随机分为模型组,加味升降散组和贝那普利组。各组根据相应的药物剂量灌胃（ig）,每日1次。在给药的第4周末检测相关指标,检测24 h尿蛋白（UTP）,尿素氮（BUN）,肌酐（SCr）的变化情况,采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠肾脏中超氧化物歧化酶（SOD）,丙二醛（MDA）,活性氧（ROS）水平,原位末端标记法（TUNEL）检测大鼠肾组织细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠肾脏中HIF-1α,NOX4的mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肾脏HIF-1α,NOX4蛋白表达水平,免疫组化（IHC）检测大鼠肾脏相关凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,B细胞淋巴瘤-xl（Bcl-xl）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）,Bcl-2细胞死亡调节子抗体（Bim）蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠UTP明显上升（P<0.05）,SOD水平明显减少,MDA,ROS明显增多（P<0.05）,HIF-1α,NOX4的mRNA及蛋白表达水平明显上升（P<0.05）,Bax,Bim蛋白表达水平明显增高,Bcl-xl,Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.05）,肾组织细胞凋亡显著增多;与模型组比较,各给药组大鼠UTP水平均有不同程度下降（P<0.05）,SOD水平明显上调,MDA,ROS含量显著下降（P<0.05）,HIF-1α,NOX4的mRNA及蛋白表达量明显下降（P<0.05）,Bax,Bim蛋白表达水平下降,Bcl-xl,Bcl-2蛋白表达水平明显上升（P<0.05）,肾组织细胞凋亡显著减少。结论 加味升降散的保肾作用可能与其通过抑制HIF-1α/NOX4通路,缓解MN大鼠肾组织氧化应激状态,减少肾组织细胞凋亡有关。     

附子理中汤灌肠对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠 NF-κB,TNF-α,IL-1β表达的影响

目的:观察附子理中汤灌肠对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜核因子-κB(NF-κB),血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法:48只SPF级Wistar大鼠共分为6组,分别为正常组、模型组、附子理中汤低、中、高剂量组及柳氮磺胺吡啶(SASP)组,每组8只:附子理中汤高、中、低剂量组分别为14.06,7.03,3.51 g·kg-1,柳氮磺吡啶组予柳氮磺吡啶0.46 g·kg-1;空白组及模型组以等体积生理盐水,每天给药1次,从造模后第3天开始用药,持续灌肠给药15 d。观察附子理中汤灌肠对脾肾阳虚型UC大鼠NF-κB,TNF-α及IL-1β表达的影响。结果:与正常组相比,模型组大鼠肠黏膜炎症面积和损伤评分明显升高,较模型组而言不同剂量附子理中汤组大鼠肠黏膜炎症面积和损伤评分明显下降(P0.05);与正常组相比,模型组大鼠肠黏膜NF-κB的含量以及血清TNF-α,IL-1β的含量明显增多(P0.05);与模型组比较不同剂量的附子理中汤均能不同程度降低大鼠肠黏膜NF-κB的含量以及血清TNF-α,IL-1β的含量(P0.05)。结论:附子理中汤灌肠对脾肾阳虚型UC大鼠肠黏膜具有抗炎和修复作用,其机制可能与其抑制NF-κB的激活,下调TNF-α,IL-1β的表达有关。     

4种归肺经中药对肺热证小鼠TNF-α,IL-1β表达的影响

目的：探讨麻黄、干姜、黄芩、桑白皮4味归肺经中药对小鼠肺热证的影响,并初步揭示其作用机制。方法：将100只昆明种小鼠随机分为正常对照组,模型组,麻黄、干姜、黄芩、桑白皮组（20,10 g·kg^-1）,每组10只,灌胃给药7 d,每天1次,于实验第4,5,6天鼻腔滴入肺炎链球菌菌液建立小鼠肺热证模型,病理学观察肺组织形态变化,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量,免疫组化法测定肺组织TNF-α,白介素-1β（IL-1β）蛋白表达。结果：与正常组比较,模型组肺组织实变（P<0.001）,血清TNF-α含量升高（P<0.01）,肺组织TNF-α,IL-1β蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较,麻黄低剂量组,干姜高、低剂量组,黄芩高剂量组肺组织病理有明显改善（P<0.01,P<0.05）;血清TNF-α含量降低,除干姜高剂量组、黄芩低剂量组,其余各组差异均有统计学意义（P<0.01或P<0.05）;肺组织TNF-α,IL-1β蛋白表达降低,其中,TNF-α表达除干姜低剂量组、桑白皮高剂量组,其余各组差异均有统计学意义（P<0.01或P<0.05）,IL-1β表达除麻黄低剂量组、桑白皮低剂量组,其余各组差异均有统计学意义（P<0.01或P<0.05）。结论：麻黄、干姜、黄芩、桑白皮可以干预肺热证,抑制TNF-α,IL-1β炎症因子表达可能是其减轻小鼠肺热证肺组织损伤的主要途径。     

痛风宁对急性痛风性关节炎模型大鼠IL-1β,TNF-α及NALP3炎性体的影响

目的:从核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NALP3)炎性体角度探讨痛风宁的抗炎作用机制。方法:将48只SD大鼠随机分为造模大鼠36只、正常大鼠12只。造模大鼠采用踝关节局部注射0.2 mL尿酸钠(monosodium urate,MSU)混悬液建立急性痛风性关节炎(acute gouty arthritis,AGA)模型,正常大鼠予相同部位注射生理盐水。造模成功后,随机分为模型组、痛风宁组、秋水仙碱组,分别用生理盐水、痛风宁药液、秋水仙碱混悬液灌胃,每天2次,共3 d。正常大鼠为正常组,同时予等量生理盐水灌胃。造模成功后72 h,行腹腔注射麻醉后取踝关节液及滑膜组织。采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠踝关节液白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测滑膜组织NALP3炎性体相关蛋白与mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量显著升高,滑膜组织NALP3,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1),凋亡相关斑点样蛋白(ASC)蛋白及mRNA表达均显著增加(P0.01);与模型组比较,痛风宁组与秋水仙碱组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量显著下降,且滑膜组织中NALP3,Caspase-1,ASC蛋白及mRNA表达均显著降低(P0.01);与秋水仙碱组比较,痛风宁组大鼠踝关节液IL-1β,TNF-α含量仍较高(P0.05),但滑膜组织中NALP3,Caspase-1,ASC蛋白及mRNA表达均较低(P0.05,P0.01)。结论:痛风宁对AGA的抗炎作用机制可能是通过抑制NALP3炎性体相关蛋白及mRNA表达,从而减少IL-1β,TNF-α的生成,减轻关节炎症反应。     

肾络通对大鼠系膜细胞外基质分泌及转化生长因子β1表达的影响

目的探讨肾络通药物血清对大鼠系膜细胞外基质不同成分的抑制作用及对转化生长因子β₁(TGFβ₁)表达的调节作用。方法以体外培养大鼠肾小球系膜细胞及血清药理学方法为基础,采用酶联免疫吸附试验检测细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量;采用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)检测TGFβ₁mRNA的表达。结果细胞外基质FN,ColⅣ的含量与TGFβ₁mRNA的表达呈正相关关系,肾络通对二者均有抑制作用。结论肾络通能够减少细胞外基质的积聚,抑制TGF-β₁的分泌与表达,从而进一步明确了其防治多种肾小球疾病,延缓肾小球硬化的作用机制。     

黄芪、水蛭及其配方含药血清对大鼠肾小球系膜细胞NF-кB、MMP-2、Fas、FasLmRNA表达的影响

目的 研究黄芪、水蛭及其配方含药血清干预系膜增生性肾小球肾炎的可能作用机制。方法 20只SD大鼠随机分为黄芪高血清组、水蛭高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组,每组5只。大鼠给药量5 g/(kg·d)为低浓度,2倍剂量为高浓度,各组均配成0.5 g/ml混悬液,每天早晚各灌胃1次,连续灌胃5天,末次灌胃1.5 h后制备含药血清。检测各组不同浓度(10%、20%、40%、80%)的含药血清对大鼠系膜细胞增殖的影响,计算细胞存活率,筛选出各组最佳浓度。系膜细胞以1×105个/孔接种于6孔板中,每孔2 ml,分为正常组、模型组、黄芪高血清组、水蛭高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组,除正常组外其余各组加入脂多糖诱导大鼠肾小球系膜细胞增殖,再分别加入筛选出的不同浓度的含药血清进行干预,检测各组系膜细胞中核转录因子(NF-кB)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、Fas、Fas L mRNA转录水平。结果 黄芪高血清组、水蛭高血清组、黄芪高水蛭高血清组、黄芪低水蛭高血清组含药血清最佳浓度分别为10%、20%、40%、20%。与正常组比较,模型组系膜细胞中NF-кB、MMP-2、Fas、Fas L mRNA表达明显升高(P<0.05),而各含药血清组NF-кB、MMP-2、Fas、Fas L mRNA表达较模型组显著降低(P<0.01)。结论 黄芪、水蛭及其配方含药血清可抑制大鼠系膜细胞增殖,其作用机制可能与下调NF-кB、MMP-2、Fas、Fas L mRNA表达水平有关。     

基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨加味三仁汤对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的 观察加味三仁汤对脂多糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的干预作用,探讨其改善免疫球蛋白A肾病（IgAN）大鼠炎症病变的相关机制。方法 采用血清药理学方法,将18只大鼠分为3组,正常组,加味三仁汤高、低剂量（20.70,10.35 g·kg^-1·d^-1）组,每组6只,加味三仁汤高、低剂量组给予加味三仁汤相应溶液灌胃,正常组灌胃等体积蒸馏水。分别灌胃5 d后,采血制取含药血清。采用大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）,分为正常组,模型组,贝那普利组（50 μmol·L^-1）,加味三仁汤高、低剂量组。釆用噻唑蓝（MTT）比色法检测各组细胞增殖情况,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞培养上清液中Ⅳ型胶原（ColⅣ）的含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）分别检测PI3K/Akt/NF-κB通路相关蛋白表达量和mRNA表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠肾小球系膜细胞增殖显著（P<0.01）,ColⅣ分泌显著增多（P<0.01）,磷酸化（p）-Akt,p-p65蛋白表达显著增加（P<0.01）;与模型组比较,加味三仁汤高剂量组显著抑制细胞增殖（P<0.01）和ColⅣ分泌（P<0.01）,降低Akt磷酸化水平（P<0.01）,降低NF-κB p65阳性表达（P<0.01）。结论 加味三仁汤能够抑制脂多糖诱导的HBZY-1细胞增殖,降低ColⅣ蛋白含量,可能与其抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路激活密切相关。     

归芪聪志汤及其拆方对VD模型大鼠海马神经元HIF-1α,VEGF和HO-1表达的影响

目的:研究归芪聪志汤及其拆方对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠海马组织缺氧诱导因子~(-1)α(HIF-1α),血管内皮生长因子(VEGF),及血红素加氧酶~(-1)(HO~(-1))表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法:Wistar大鼠称体质量后,按随机原则选出10只作为假手术组,将其余90只大鼠采用改良后的双侧颈动脉永久性结扎法制备VD大鼠模型,造模后,筛选成功模型大鼠54只随机分为6组,分别为模型组,阳性药组(吡拉西坦,3.6 g·kg~(-1)),归芪聪志汤组(9.9 g·kg~(-1)),活血通络组(拆方1组,9.9 g·kg~(-1)),化痰解毒组(拆方2组,9.9 g·kg~(-1)),补气养血组(拆方2组,9.9 g·kg~(-1)),每组9只。连续灌胃28 d后,Morris水迷宫予以行为学检测,苏木素-伊红(HE)染色观察海马神经元的形态改变,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测大鼠海马HIF-1α,VEGF及HO~(-1) mRNA和蛋白的表达。结果:治疗4周后,与假手术组比较,VD模型组大鼠的平均逃避潜伏期明显延长、跨原平台次数明显减少(P0.05),大鼠海马的HIF-1α,VEGF,HO~(-1) mRNA及蛋白表达水平明显升高(P0.05),HE染色显示VD模型大鼠海马神经细胞损伤严重;与模型组比较,归芪聪志汤组与吡拉西坦组大鼠的逃避潜伏期均显著缩短、跨原平台次数均显著增加(P0.05),大鼠海马的HIF-1α,VEGF,HO~(-1) mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P0.05),HE染色显示归芪聪志汤与吡拉西坦组大鼠海马神经细胞损伤减轻。结论:归芪聪志汤组改善VD模型大鼠的学习记忆能力优于各拆方组,其作用机制可能与上调HIF-1α,VEGF及HO~(-1)因子的表达,减轻氧化应激损伤,激发脑内的损伤修复有关。     

五味消毒饮对脂多糖诱导大鼠肾系膜细胞NF-κB信号通路的影响

目的 观察五味消毒饮对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾系膜细胞（HBZY-1）核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的影响,并探讨其作用机制。方法 将大鼠肾系膜细胞随机分为正常组、模型组、贝那普利组（50 μmol·L^-1）、五味消毒饮高、低剂量组（2.75、0.69 g·kg^-1）。正常组、模型组、贝那普利组使用10%正常大鼠血清,五味消毒饮高、低剂量组使用10%含药血清。除正常组外,其余4组给予LPS（100 μg·L^-1）以体外干预。倒置显微镜观察细胞形态的变化;免疫荧光法（IF）检测NF-κB p65的表达;噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、层粘连蛋白（LN）和纤连蛋白（FN）的含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测细胞中IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中磷酸化NF-κB抑制蛋白激酶β（p-IKKβ）、磷酸化NF-κB抑制蛋白α（p-IκBα）、NF-κB p65蛋白的表达。结果 与正常组比较,模型组细胞增殖显著增多（P<0.01）,细胞上清中IL-1β、ICAM-1、LN、FN的含量显著增多（P<0.01）,IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA表达显著升高（P<0.01）,p-IKKβ、p-IκBα、NF-κB p65蛋白表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,各给药组细胞增殖明显降低（P<0.05,P<0.01）,细胞上清中IL-1β、ICAM-1、LN、FN的含量明显减少（P<0.05,P<0.01）,IL-1β、FN、NF-κB p65 mRNA的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,p-IKKβ、p-IκBα、NF-κB p65蛋白的表达显著降低（P<0.05,P<0.01）。结论 五味消毒饮可减轻由LPS诱导的肾系膜细胞损伤,其作用机制可能与抑制NF-κB信号通路的启动有关。     

加味芪黄饮对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质成纤维连接蛋白（FN）及p12MAPK信号通路的影响

目的：观察加味芪黄饮对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞细胞外基质成分纤维连接蛋白（FN）及p38MAPK信号通路的影响,探讨加味芪黄饮对糖尿病肾病的作用机理。方法：购置体外培养大鼠肾小球系膜细胞系,培养3—5代用于实验。实验分为6组：正常对照组、甘露醇组、高糖组、高糖＋SB203580组、高糖＋加味芪黄饮低剂量组、高糖＋加味芪黄饮高剂量组,细胞生长近融合时,无血清培养24h同步化,然后给予高糖（甘露醇）和药物刺激24h,再收集细胞用于Westernblot检测。结果：与高糖组相比,加味芪黄饮含药血清可抑制大鼠肾小球系膜细胞纤维连接蛋白的蛋白表达水平,抑制p38MAPK及其下游核转录因子CREB的磷酸化水平。结论．加味芪黄饮可能是通过下调p38MAPK信号通路的表达及减少细胞外基质成分FN的积聚,从而达到对糖尿病肾病的治疗作用．     

葱白提取物对非酒精性脂肪肝模型大鼠PGC-1α和PEPCK,G6Pase表达的影响

目的:观察葱白提取物对非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子-1α(PGC-1α),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK),葡萄糖6磷酸酶(G6Pase)表达的影响,并探讨其作用机制。方法:采用高脂饲料复制非酒精性脂肪肝大鼠模型,并应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制PGC-1α的表达,将60只大鼠随机分为正常组、模型组、葱白组(50 mg·kg~(-1))、转染组、空转组、葱白加转染组。苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织组织结构;检测血液流变学及血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝脏PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏出现明显脂肪变性;大鼠血浆黏度(低切、中切、高切)、全血黏度均不同程度升高(P 0. 05,P 0. 01);血清ALT,AST,TC,TG水平明显增高(P 0. 05); PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达水平明显降低(P 0. 05);给予葱白提取物干预后,葱白组大鼠肝脂肪变性明显减轻;血清ALT,AST,TC,TG水平均降低(P 0. 05),PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA和蛋白表达水平升高(P 0. 05)。PGC-1α转染的大鼠,即使给予同等剂量葱白提取物,与模型组比较,葱白加转染组肝脂肪变性未见明显改善;葱白加转染组PGC-1α,PEPCK,G6Pase mRNA表达无明显差异。结论:葱白提取物能够改善NAFLD模型大鼠肝脂肪变性,其机制可能与增加PGC-1α的转录活性,促进PEPCK,G6Pase的表达进而增加线粒体合成有关。     

夏枯草硫酸多糖对CCl4致大鼠肝纤维化及TGF-β1诱导的大鼠肝星状细胞活化的影响

目的:观察夏枯草硫酸多糖(PSSP)对四氯化碳(CCl4)所致的大鼠肝纤维化及转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导活化大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6)的影响,从而初步探讨PSSP抗纤维化的机制。方法:采用CCl4-橄榄油溶液腹腔注射诱导大鼠肝纤维化造模,随机分为5组,分别为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.25 mg·kg-1),PSSP高剂量组(300 mg·kg-1)和PSSP低剂量组(100 mg·kg-1)。分别测定各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),层粘连蛋白(LN),透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PCⅢ)和Ⅳ胶原(C-Ⅳ)的含量;采用苏木素-伊红(HE)及天狼猩红染色观察大鼠肝组织病理学改变;体外培养HSC-T6细胞;采用细胞增殖与活性法(CCK-8)测定PSSP对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞增殖的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HSC-T6细胞中Ⅰ型胶原(Col-I),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白的表达。结果:与模型组比较,PSSP可明显降低大鼠ALT,AST,HA,LN,PC-Ⅲ和C-Ⅳ的含量,并减轻大鼠肝纤维化程度(P0.01);PSSP可抑制TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的增殖,减少HSC-T6细胞Col-I,α-SMA mRNA和蛋白的相对表达量(P0.01)。结论:PSSP具有很好的抗纤维化作用,其机制可能与抑制肝星状细胞活化及抑制胶原合成与沉积,减少细胞外基质(ECM)的生成并促进其降解有关。     

双蓣调脂汤对高胆固醇血症模型大鼠肝组织HNF1α/PCSK9/LDLR信号通路的影响

目的 观察高胆固醇血症大鼠肝组织中肝细胞核因子1α（HNF1α）,前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶kexin 9型（PCSK9）,低密度脂蛋白胆固醇受体（LDLR）的表达水平,探讨双蓣调脂汤调节胆固醇代谢、缓解高胆固醇血症的作用机制。方法 40只雄性SD大鼠随机抽取8只为正常组予普通饲料喂养,其余32只予高脂饲料喂养,高胆固醇血症模型造模成功后,分为模型组,双蓣调脂汤低剂量组（7.8 g·kg^-1）,双蓣调脂汤高剂量组（15.6 g·kg^-1）,辛伐他汀组（4 mg·kg^-1）,每组8只,连续灌胃给药8周。生化法检测血清总胆固醇（TC）,甘油三酯（TG）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）含量;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肝组织病理形态学变化;免疫组化检测大鼠肝组织中PCSK9和LDLR的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠肝组织HNF1α,PCSK9和LDLR mRNA与蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清TC,TG,LDL-C水平显著升高（P<0.01）,肝脂肪变性明显,HNF1α,PCSK9 mRNA与蛋白表达水平明显上升（P<0.05）,LDLR mRNA与蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,双蓣调脂汤高剂量组大鼠血清TC,TG,LDL-C水平显著降低（P<0.01）,双蓣调脂汤低剂量组和辛伐他汀组大鼠血清TC,LDL-C水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,各给药组HDL-C水平没有明显变化,各治疗组肝脂肪变性明显改善,各治疗组大鼠肝脏HNF1α mRNA和蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,双蓣调脂汤低、高剂量组大鼠肝脏PCSK9 mRNA与蛋白表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,辛伐他汀组大鼠肝脏PCSK9 mRNA水平显著升高（P<0.01）,蛋白表达水平呈降低趋势,各治疗组大鼠肝脏LDLR mRNA水平显著升高（P<0.01）,双蓣调脂汤高剂量组大鼠肝脏LDLR蛋白表达水平显著升高（P<0.01）,双蓣调脂汤低剂量组和辛伐他汀组大鼠肝脏LDLR蛋白表达量呈升高的趋势,免疫组化结果显示各治疗组PCSK9阳性表达减弱,LDLR阳性表达增强。双蓣调脂汤高剂量组的治疗效果略优于辛伐他汀组,双蓣调脂汤低剂量组的治疗效果与辛伐他汀组比较,差异无统计学意义。结论 双蓣调脂汤可能通过HNF1α/PCSK9/LDLR信号通路降低血脂水平,在调节胆固醇代谢和减轻大鼠高胆固醇血症中发挥积极作用。     

藏族药五味甘露药浴散加减方对佐剂关节炎大鼠药效及血清NF-κB,TNF-α,IL-1,EGF的影响

目的:观察藏族药五味甘露药浴散加减方对佐剂关节炎大鼠的药效及其对大鼠血清核因子-κB(NF-κB),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-1(IL~(-1)),表皮生长因子(EGF)水平的影响。方法:SD健康大鼠60只,随机选取10只作为正常组,除正常组外,采用弗氏完全佐剂关节炎(AA)大鼠模型,随机分为模型组,地塞米松组(0.150 mg·kg~(-1),ig),五味甘露药浴散加减方高、中、低剂量组(104.00,52.00,26.00 g·L~(-1)),药浴组每天40℃药浴30 min,模型组和正常组每天40℃温水浴30 min,给药4周,用致炎后足跖肿胀度,苏木素-伊红(HE)染色法观察致炎侧足踝关节滑膜病理改变评价藏族药五味甘露药浴散加减方对AA大鼠的治疗效果,测定大鼠胸腺、脾脏脏器系数,酶联免疫吸附测定(ELISA)测定血清NF-κB,TNF-α,IL~(-1),EGF水平。结果:与正常组比较,模型组AA大鼠致炎侧足跖肿胀度明显增大,滑膜细胞增厚、巨噬细胞增生和炎细胞浸润,血清中NF-κB,TNF-α,IL~(-1),EGF水平明显升高,脾脏系数、胸腺系数明显降低(P0.05,P0.01);与模型组比较,地塞米松组和五味甘露药浴散加减方高剂量组能明显减小AA大鼠致炎侧足跖肿胀度,能改善滑膜细胞增厚、巨噬细胞增生和炎细胞浸润,血清中NF-κB,TNF-α,IL~(-1)水平明显降低(P0.05,P0.01),五味甘露药浴散加减方中剂量组NF-κB水平也明显降低(P0.05,P0.01),五味甘露药浴散加减方各剂量组大鼠血清中EGF水平无明显变化,脾脏系数明显增大(P0.05),高、中剂量组胸腺系数明显增大(P0.05)。结论:藏族药五味甘露药浴散加减方能有效的减小佐剂性关节炎大鼠致炎侧足跖肿胀度,改善AA大鼠踝关节滑膜炎病变,高剂量效果最好,其机制可能与降低血清中NF-κB,TNF-α,IL~(-1)的水平、调节脾脏和胸腺的功能有关。     

芪蓟肾康汤对AngⅡ诱导的人肾小球系膜细胞增殖及ERK1/2、p-ERK1/2的影响

目的:观察芪蓟肾康汤含药血清对人肾小球系膜细胞的增殖及胞外信号调节激酶(ERK)通路的影响,探讨芪蓟肾康汤延缓肾小球硬化的作用机制。方法:采用血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导人肾小球系膜细胞增殖,采用血清药理学方法制备芪蓟肾康汤和替米沙坦含药血清。将人肾小球系膜细胞分为正常组、模型组、西药组、中药低剂量组、中药中剂量组和中药高剂量组六组,培养24、48、72 h后用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;培养48、72 h后用ELISA法检测的ERK1/2、pERK1/2含量。结果:与正常组相比,AngⅡ组能显著促进系膜细胞增殖,替米沙坦组和各浓度中药含药血清组均可不同程度抑制AngⅡ引起的系膜细胞增殖。AngⅡ刺激后系膜细胞中ERK1/2蛋白表达明显降低,pERK1/2蛋白的表达明显增高,替米沙坦和不同浓度中药含药血清干预后,ERK1/2蛋白水平显著升高、pERK1/2蛋白水平显著下降,其中中药高剂量组最为显著。结论:芪蓟肾汤可能通过抑制人肾小球系膜细胞增殖和ERK通路的磷酸化,从而达到延缓肾小球硬化的目的。     

“调肝肾,祛痰瘀”复方血压峰值前给药对自发性高血压大鼠肾脏TGF-β1,CTGF和FN的影响

目的:探讨"调肝肾,祛痰瘀"复方血压峰值前给药对自发性高血压大鼠肾脏转化生长因子-β1(TGF-β1),结缔组织生长因子(CTGF)和糖蛋白纤维连接蛋白(FN)的影响。方法:将30只SHR(12周龄),随机分为复方组(4 g·kg-1),氯沙坦组(30 mg·kg-1)和模型组,设SD大鼠10只为正常组,治疗12周后,采用RT-PCR和Western blot法分别检测肾组织中TGF-β1,CTGF和FN的m RNA和蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组TGF-β1,CTGF和FN m RNA表达均明显上调(P0.01),CTGF,FN蛋白表达均明显上调(P0.01);与模型组比较,复方组TGF-β1,CTGF,FN的m RNA的表达均明显下调(P0.01,P0.05),TGF-β1,CTGF,FN蛋白表达均明显下调(P0.01);氯沙坦组TGF-β1,FN m RNA表达均明显下调(P0.01),TGF-β1和FN蛋白表达均明显下调(P0.01,P0.05)。与氯沙坦组比较,复方组TGF-β1的m RNA表达较明显下调(P0.05),CTGF和FN的蛋白表达亦下调(P0.05)。结论:"调肝肾,祛痰瘀"复方血压峰值前给药能够明显减少ECM聚积而改善SHR肾损害。其作用机制应是在中医阴阳升降机制协同下,通过降低肾组织TGF-β1,CTGF,FN的表达而达致。     

黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方含药血清对大鼠肾小球系膜细胞生长周期及凋亡的影响

目的:比较黄芪、水蛭、水蛭素及水蛭黄芪配方对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)生长周期、凋亡的影响及凋亡的形态学观察。方法:应用流式细胞仪检测GMCs生长周期与凋亡;用瑞氏染色,显微镜观察凋亡细胞的形态。结果:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能使大量GMCs处于G0/G1期,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);均能提高GMCs凋亡率,水蛭、水蛭黄芪配方与对照组比较有显著性差异(P<0.01)。结论:水蛭、水蛭素、黄芪、水蛭黄芪配方含药血清均能阻止GMCs进入S期从而达到抑制增生的目的,且能提高GMCs的凋亡率,水蛭黄芪配方效果最优,水蛭次之。