汉防己甲素逆转肺癌化疗耐药和凋亡抗性的实验研究

目的：研究中药汉防己提取的生物碱汉防己甲素逆转肺癌化疗耐药产生与凋亡发生的机理。方法：实验分对照组（只加培养基）和阿霉素组（ADR组）、汉防己甲素合阿霉素组（Tet／ADR组），后2组采用不同浓度汉防己甲素和阿霉素作用于人肺癌敏感株GLC-82和阿霉素耐药株GLC-82／ADR细胞，通过MTT法检测抗肿瘤药物的细胞毒作用，流武细胞仪检测多药耐药相关蛋白（MRP）表达，碘化丙啶（PI）染色检测细胞凋亡。结果：GLC-82／ADR耐药肺癌细胞株耐药指数（RF）为5．43，说明耐药株肺癌细胞对阿霉素明显耐药；汉防己甲素作用耐药肺癌细胞后其RF降至1．89，说明汉防己甲素可毗逆转GLC-82／ADR耐药肺癌细胞对阿霉素的耐药。化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达在12h、24h、36h、48h，ADR组与Tet／ADR组比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01），说明汉防己甲素可以下调化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达。化疗耐药肺癌细胞凋亡在6h、12h、18h、24h，Tet／ADR组与ADR组、对照组比较，差异有非常显著性意义（P〈0．01），说明汉防己甲素协同阿霉素增强对化疗耐药肺癌细胞凋亡作用。结论：汉防己甲素可以逆转GLC-82／ADR耐药肺癌细胞对阿霉素的耐药，下调化疗耐药肺癌细胞MRP蛋白表达，协同阿霉素增强对化疗耐药肺癌细胞凋亡作用。     

丹参对人胃癌阿霉素耐药细胞SGC7901/ADR蛋白表达的影响

目的应用蛋白质组学技术寻找丹参逆转人胃癌阿霉素耐药细胞SGC7901/ADR相关蛋白分子,探讨丹参逆转胃癌多药耐药机制。方法以人胃癌阿霉素耐药细胞SGC7901/ADR和丹参逆转后的SGC7901/ADR细胞为研究对象,用固相pH梯度等电聚焦二维聚丙烯酰胺电泳技术展示2种细胞表达的全蛋白,凝胶考马斯亮蓝染色,Image Master 2DMelanie 5.0图像分析软件分析并比较差异表达的蛋白分子。结果 SGC7901/ADR中检测到549个蛋白点,丹参逆转后SGC7901/ADR中检测到469个蛋白点,差异点87个,SGC7901/ADR细胞经丹参逆转后表达下调蛋白36个,上调蛋白51个。结论丹参逆转后SGC7901/ADR细胞中差异表达的蛋白质分子可能与丹参对胃癌多药耐药逆转机制相关。     

川芎嗪对人胃癌细胞株SGC-7901/ADR增殖、凋亡和MDR1、GST-π表达的影响

目的:探讨川芎嗪诱导人胃癌细胞株SGC-7901/ADR凋亡及对MDR1、GST-π表达的调控作用。方法:不同剂量(0~120μM)川芎嗪内酯与人胃癌细胞株SGC-7901/ADR同培养不同时间(24、48及72 h),50μM 5-氟尿嘧啶(5-FU)作为阳性对照组,采用CCK8法测定细胞的增殖,流式细胞术测定细胞凋亡率。用不同剂量的川芎嗪与细胞培养48 h后,采用Western blot测定MDR1、GST-π蛋白的表达情况,用半定量RT-PCR测定MDR1、GST-πmRNA表达。结果:不同浓度川芎嗪处理人胃癌细胞株SGC-7901,川芎嗪抑制SGC-7901细胞增殖呈浓度及作用时间依赖性且120μM川芎嗪的抑制率与阳性对照组相当;而且应用流式细胞仪检测发现川芎嗪作用于人胃癌细胞株SGC-7901 48 h后,细胞出现凋亡。Western blot及半定量RT-PCR检测细胞中MDR1、GST-π及其mRNA的表达,结果显示,川芎嗪可下调MDR1、GST-π表达,下调作用与TMZ相当甚至更具优势。结论:川芎嗪能够抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖,诱导其凋亡,且能抑制细胞中MDR1、GST-π的表达,其表达量与川芎嗪剂量呈现明显的时间-浓度效应关系。     

圣和散对胃癌SGC-7901／VCR耐药细胞P-糖蛋白表达的影响

胃癌多药耐药(multidrug resistance，MDR)是胃癌化疗失败的主要原因之一，P-糖蛋白(P-glucoprotein，P-gp)是与胃癌MDR相关的主要分子，其表达水平与细胞膜通透性、细脾内药物浓度以及细胞耐药程度密切相关。本实验主要观察中药圣和散逆转胃癌SGC7901／VCR耐药细胞MDR的作用。     

葛根素对胃癌多药耐药的逆转实验研究

目的观察葛根素注射液对人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR的影响。方法采用MTT法进行药敏实验,并通过流式细胞仪检测细胞周期变化、胞浆内药物浓度,荧光显微镜显示荧光强度,免疫细胞化学染色法显示耐药细胞中多药耐药相关蛋白(MRP)和P-糖蛋白(P-gp)的分布,观察化疗药(包括5-FU、VCR、DDP、ADM)和/或葛根素对胃癌裸鼠原位移植瘤的抑瘤率。结果葛根素注射液能够逆转SGC7901/ VCR对5-FU的耐药性,与SGC7901/VCR比较S期和G_2+M期增加,G_1期减少,细胞内的阿霉素荧光强度明显增强,MRP和P-gp的表达明显减弱,葛根素和5-FU联合应用对裸鼠胃癌的抑瘤率明显高于单纯应用5-FU组。结论葛根素注射液能够逆转SGC7901/VCR的多药耐药性,其机理可能是促使MRP和P-gp蛋白表达减少。     

泽漆乙酸乙酯提取物对SGC7901/DDP多药耐药性的逆转及机制

目的探索泽漆乙酸乙酯提取物(EAE)对人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP是否具有逆转作用,并探索其机制。方法实验共分4组,胃癌细胞SGC7901作为阴性对照组;胃癌耐药细胞SGC7901/DDP为空白对照组;耐药细胞SGC-7901/DDP加入终质量浓度为10μg/mL的EAE为EAE低剂量组,耐药细胞SGC-7901/DDP加入终质量浓度为20μg/mL的EAE为EAE高剂量组。MTT法分别检测4组细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂的敏感性;PCR和Western blot分别检测4组细胞耐药相关基因MDR1和LRP基因与对应蛋白P-gp和LRP蛋白的表达情况。结果 SGC-7901/DDP对5-FU和顺铂(DDP)表现出耐药性,其中对顺铂(DDP)耐药更为明显;阴性对照组中检测到耐药基因MDR1和LRP及对应蛋白P-gp和LRP蛋白的极低表达量,空白对照组表达量最高,与空白对照组相比较,EAE低剂、高剂量组细胞中的MDR1和LRP的基因与对应蛋白P-gp和LRP蛋白的表达均下降,且EAE高剂量组下降更为明显。结论 EAE可以逆转人胃癌耐药细胞SGC7901/DDP多药耐药,其机制可能与MDR1和LRP基因的下调有关。     

丹参逆转胃癌耐药细胞的作用及其机制分析

目的探讨丹参对人胃癌耐药细胞系SGC7901/ADR耐药性的逆转作用及其机制。方法以不同浓度的丹参(SAL)处理耐药系SGC7901/ADR及敏感系SGC7901细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测丹参对两种细胞系的毒性及半数抑制率(IC50),流式细胞仪(FCM)检测丹参对两种细胞内ADM浓度和细胞周期的影响,SP法免疫组化染色检测两种细胞P-糖蛋白(P-gp)和DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)的表达。结果丹参的非细胞毒性药物剂量为500 mg/L以下;丹参可逆转SGC7901/ADR细胞对ADM的耐药性,逆转倍数为1.89(P<0.01);提高细胞内ADM浓度,ADM增加1.55倍(P<0.05);丹参使细胞周期阻滞于G1、G2期;对细胞膜P-gp的表达轻度下降、TopoⅡ的表达略有增加,但无显著性差异(P均>0.05)。结论丹参对SGC7901和SGC7901/ADR细胞无杀伤作用。其机制是丹参能增加耐药细胞内化疗药物浓度,使DNA合成期(S期)细胞含量下降。     

人参皂苷Rh_2对胃癌细胞SGC7901/ADR耐药敏感性的影响

目的观察人参皂苷Rh_2(G-Rh_2)对人胃癌SGC7901/ADR耐药细胞增殖、细胞周期及化疗敏感性的影响。方法 MTT法检测G-Rh_2与阿霉素(ADR)联用对SGC7901/ADR细胞增殖的影响,并计算逆转倍数(RF);流式细胞术检测G-Rh_2对SGC7901/ADR细胞周期的影响;蛋白印迹法检测G-Rh_2对SGC7901/ADR细胞P-糖蛋白(P-gp)、Bcl-2蛋白表达水平的影响。结果与ADR单药处理后细胞的半数抑制浓度(IC50)值(54.52μmol/L)比较,G-Rh_2与ADR联用时SGC7901/ADR细胞IC50值(30.14μmol/L)明显下降,RF为1.81;G-Rh_2与ADR联用能够将SGC7901/ADR细胞周期阻滞在G2/M期,与ADR单药处理比较,联用组细胞P-gp、Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P0.05)。结论 G-Rh_2联合ADR能够提高SGC7901/ADR细胞的化疗敏感性,可能通过阻滞细胞周期、增加细胞凋亡进而抑制细胞增殖。     

槐定碱调控B7-H1基因逆转人胃癌细胞多药耐药的研究

目的:探讨苦豆子提取物槐定碱(SR)I调控B7-H1基因对人胃癌细胞多药耐药的调节机制。方法:人胃癌细胞SGC7901和多药耐药细胞SGC7901/DDP常规培养,苦豆子提取物槐定碱干预48h后,MTT法检测SGC7901/DDP细胞对化疗药敏感性的影响,流式细胞仪分析细胞凋亡情况,流式细胞术检测B7-H1蛋白表达情况。结果:人胃癌多药耐药细胞SGC7901/DDP对DDP的敏感性明显低于SGC7901敏感细胞(P<0.01);槐定碱干预SGC7901/DDP细胞48h后,耐药细胞增殖受到抑制,凋亡率增加,B7-H1蛋白表达下调(P<0.05)。结论:槐定碱通过降低B7-H1基因表达,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,逆转SGC7901/DDP细胞株的多药耐药性。     

益气化瘀解毒方对MRP、GST-π和Topo Ⅱ基因在Sorafenib获得性耐药人肝癌QGY7702细胞表达的干预研究

目的探讨益气化瘀解毒方干预后对Sorafenib获得性耐药人肝癌QGY7702细胞(QGY7702/Sora)增殖及MRP、GST-π和Topo Ⅱ基因表达的影响。方法培养QGY7702/Sora细胞和QGY7702细胞,利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测Sorafenib对细胞的半数抑制率浓度(IC50值),计算耐药指数RI;观察益气化瘀解毒方对耐药细胞的增殖影响;采用荧光定量PCR检测药物干预前后2种细胞中MRP、GST-π和Topo Ⅱ基因表达水平。结果亲本细胞和耐药细胞Sorafenib的IC50值分别为(7.993±0.522)μmol/L和(19.651±1.216)μmol/L,RI约为2.5。益气化瘀解毒方可抑制耐药细胞的增殖活性。2种细胞的MRP、GST-π、Topo Ⅱ表达量无明显差异(P>0.05)。Sorafenib组可促进耐药细胞MRP 、GST-π基因的过表达(P<0.05),益气化瘀解毒方组可抑制GST-π基因的过表达(P<0.01),且联合Sorafenib可显著提高Topo Ⅱ基因的表达量(P<0.01)。结论 QGY7702/Sora细胞MRP、GST-π和Topo Ⅱ的表达水平与亲本细胞无显著差异。耐药细胞对Sorafenib敏感性降低与MRP、GST-π过表达相关,而益气化瘀解毒方拮抗Sorafenib耐药与抑制GST-π过表达相关。     

补骨脂复方对胃癌细胞SGC7901生物行为学的影响

目的:观察补骨脂复方对胃癌细胞株SGC7901增殖、黏附、侵袭、凋亡的影响。方法:①采用MTT法、细胞黏附人工重组基底膜实验、聚碳酸酯膜细胞培养小室(Transwell小室)法,观察不同浓度的补骨脂复方对胃癌细胞株SGC7901增殖、黏附和侵袭的影响;②TUNEL法研究不同浓度补骨脂复方对胃癌细胞株SGC7901早期凋亡的诱导作用。结果:①补骨脂复方有很强的抑瘤作用(P<0.05),并呈一定的浓度依赖性。②补骨脂复方高浓度组各时间段均有明显的抑制肿瘤黏附的作用(P<0.05),中浓度90min后有抑制肿瘤黏附的作用(P<0.05),低浓度组在120min时有抑制黏附作用(P<0.05)。③补骨脂复方高、中、低三种浓度药物对胃癌细胞株SGC7901细胞的侵袭抑制率分别为60.79%(P<0.01)、38.81%(P<0.01)、8.7%。④补骨脂复方高、中、低浓度组对胃癌细胞株SGC7901凋亡率分别为59.08%(P<0.01)、31.45%(P<0.01)、16.6%。结论:①补骨脂复方可明显降低胃癌细胞株SGC7901的增殖作用。②补骨脂复方可明显降低胃癌细胞株SGC7901的黏附能力和侵袭能力。③补骨脂复方有诱导人胃癌细胞株SGC7901凋亡的作用。     

小檗碱对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨小檗碱对胃癌细胞系SGC7901的抑制作用及相关机制。方法:采用MTT的方法观察不同浓度小檗碱对SGC7901细胞的24h和48h抑制率,并计算24h和48h的50%抑制浓度(IC50)值;采用流式细胞技术检测不同浓度小檗碱作用48h后胃癌细胞系SGC7901凋亡的发生率和细胞周期的变化。结果:小檗碱对胃癌细胞SGC7901生长的抑制作用呈现出时间和剂量依赖性。24h和48h IC50分别为74.16、36.84μmol/L。1μmol/L至120μmol/L浓度梯度的小檗碱干预48h后,SGC7901凋亡率发生率逐渐增加。其中5、10、25、50、75、120μmol/L与对照组比较有统计学差异(P0.05),120μmol/L时凋亡发生率达到35.43%;5、25、75μmol/L浓度的小檗碱作用后,SGC7901胃癌细胞G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P0.05),而S期细胞比例则随浓度增加呈现出下降趋势,其中25、75μmol/L浓度组与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05),对G2/M期细胞,各组比例变化无明显差别。结论:小檗碱对胃癌细胞系SGC7901具有时间和浓度依赖性的抑制作用,抑制作用与阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制DNA合成和诱导凋亡有关。     

猕猴桃根多糖对人胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及p-p38表达的影响

目的探讨猕猴桃根多糖（Actinidia chinensis Planch polysaccharid,ACPS）对人胃腺癌细胞（SGC-7901）增殖和凋亡的影响,及对SGC-7901细胞磷酸化p38（p-p38）蛋白表达的影响。方法采用CCK-8检测不同浓度ACPS对SGC-7901细胞的24、48、72h的抑制作用;流式细胞技术检测各浓度ACPS作用48h后SGC-7901细胞凋亡的发生率;Western blot法检测各浓度ACPS作用SGC-7901细胞后前体半胱氨酰天冬氨酸酶-9（pro-caspase-9）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）和p-p38蛋白量的表达,以及p38特畀性抑制剂预处理细胞后pro-caspase-9、PARP和p-p38蛋白量的表达。结果与对照组比较,1、2．5、5、10mg／mLACPS作用胃癌SGC．7901细胞后吸光度下降（P〈0．05）;同时药物剂量越高,作用时间越长,吸光度越低（P〈0．01）;24、48、72hIC50分别为7．43、3．88、1．32mg／mL;ACPS能下调SGC-7901细胞中pro-caspase-9蛋白的表达（P〈0．01）,增加PARP剪切蛋白的表达（P〈0．01）;进一步研究发现,ACPS处理SGC-7901细胞24h后,p38的磷酸化水平升高（P〈0．05）,p38特异性抑制剂处理细胞2h后能抑制p38磷酸化表达,并能抑制ACPS诱导的细胞凋亡。结论ACPS具有抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导其凋亡的作用;激活p38途径,进而激活caspase-9和PARP,最终导致细胞死亡,可能是其诱导胃癌细胞凋亡的分子机制之一。     

圣和散逆转胃癌SGC7901/VCR细胞多药耐药的研究

目的探讨中药圣和散逆转胃癌耐药细胞SGC7901/VCR多药耐药的机制。方法圣和散(浓度2.5、5和10mg/ml)处理胃癌耐药细胞SGC7901/VCR,用流式细胞技术检测P-糖蛋白(P-gp)表达,免疫组织化学SABC法及图像分析技术检测B细胞淋巴瘤/白血病基因-2(Bcl-2)。结果实验组SGC7901/VCR细胞Bcl-2表达A值(121.34±0.16)明显高于对照组(104.37±0.089)(P<0.05),Bcl-2表达减少,P-gp表达也明显降低。结论圣和散能逆转胃癌耐药细胞SGC7901/VCR多药耐药,其作用可能与调节Bcl-2和P-gp表达有关。     

中药复方肠胃清含药血清对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响

目的观察中药复方肠胃清含药血清对胃癌SGC7901细胞凋亡的影响,探讨其作用机制。方法将人胃癌SGC7901细胞分为6组：空白对照组及肠胃清药物血清低、中、高剂量组和5-氟尿嘧啶（5-FU）组、5-FU联合肠胃清中剂量组。用MTT法观察肠胃清药物血清对SGC7901细胞增殖活性的影响;用流式细胞术检测肠胃清药物血清对细胞凋亡的影响;用Western blot检测方法测定细胞P53、Bax与Bcl-2蛋白表达水平;RT-PCR方法检测肿瘤细胞P53、Bax及Bcl-2基因表达。结果肠胃清药物血清能抑制胃癌SGC7901细胞增殖,并诱导细胞凋亡,同时明显抑制Bcl-2蛋白和基因的表达（P〈0.05或P〈0.01）,增强P53、Bax蛋白和基因表达水平（P〈0.05或P〈0.01）。结论中药复方肠胃清能抑制胃癌SGC7901细胞增殖,并诱导细胞凋亡,其机制可能与促进P53、Bax基因及抑制Bcl-2基因蛋白表达有关。     

黄连素对人胃癌细胞SGC7901凋亡影响的研究

目的:探讨黄连素对人胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法:MTS法检测不同浓度的黄连素(100、150、200μmol/L)对胃癌细胞的抑制作用,Hoechst 33258染色检测不同浓度的黄连素(100、150、200μmol/L)对细胞凋亡的影响;Real Time Q-PCR检测胃癌细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA表达;Western blot检测胃癌细胞中Cleaved Caspase-3、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:不同浓度的黄连素能显著降低人胃癌细胞SGC701活性(P<0.05,P<0.01),促进其凋亡,升高Cleaved Caspase-3、Bax的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01),降低Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:不同浓度的黄连素可诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与升高Cleaved Caspase-3、Bax的表达,降低Bcl-2的表达有关。     

四藤方对SGC-7901胃癌Caspase-3、剪辑型PARP及Livin表达影响

目的：观察四藤方对人胃癌SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤Caspase-3、剪辑型PARP及Livin蛋白表达的影响。方法：人胃腺癌SGC-7901细胞BALB／C裸小鼠皮下移植瘤模型,随机分为3组,每组10只。对照组予生理盐水0．3mL灌胃,1次／d;四藤方组予四藤方煎剂0．3mL灌胃,1次／d;5-Fu组予5-Fu腹腔注射,1mg／次·周。免疫组织化学法检测胃癌组织Caspase-3、剪辑型PARP及Livin蛋白表达。结果：四藤方治疗后,SGC-7901裸小鼠移植瘤Caspase-3及剪辑型PARP蛋白表达升高（P〈0．05）;Livin蛋白表达降低（P〈0．01）。结论：四藤方可上调SGC-7901裸鼠移植瘤Caspase-3,促进PARP剪辑,下调Livin蛋白表达。     

汉黄芩素体外抗人胃癌SGC7901细胞的增殖、凋亡作用

 目的 探讨汉黄芩素对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。方法 应用四甲基偶氮唑盐（MTT法测定汉黄芩素对于SGC7901细胞增殖活性;应用肿瘤细胞侵袭实验观察细胞侵袭能力;应用形态学方法、流式细胞仪测定汉黄芩素对SGC7901细胞的凋亡作用,进行细胞周期分析,并观察对胃癌细胞内活性氧（ROS的影响。结果 汉黄芩素对SGC7901细胞增殖和侵袭活性具有明显抑制作用,其抑制细胞增殖的IC₅₀为（74.26±1.21μmol·L-1,汉黄芩素也具有诱导胃癌细胞凋亡作用,荧光染色可见明显核碎裂、染色体聚集,并使胃癌细胞阻滞于G₀/G₁期;使肿瘤细胞内ROS水平明显升高。结论 汉黄芩素对胃癌SGC7901细胞的增殖有抑制及促进凋亡的作用,可能与上调细胞内ROS水平有关。