参苓白术散调节Nrf2/ARE通路改善高尿酸血症型少弱精子症小鼠的生精功能

目的 探讨参苓白术散对高尿酸血症（HUA）型少弱精子症异病同治的作用及机制。方法 将32只雄性昆明种（KM）小鼠随机分为空白组（n=6）、模型组（n=6）、参苓白术散高剂量组（n=7）、参苓白术散低剂量组（n=7）和非布司他组（n=6）。除空白组外，其余各组连续腹腔注射氧嗪酸钾悬液（600 mg·kg^-1）7 d。造模完成后，参苓白术散高、低剂量组分别给予参苓白术散20.14、10.07 g·kg^-1灌胃，非布司他组给予非布司他0.25 g·kg^-1灌胃，空白组和模型组给予同体积生理盐水灌胃，每天灌胃1次，连续14 d后取材。生化法检测血清尿酸（UA），睾丸组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）；苏木素-伊红（HE）染色法观察睾丸组织病理学变化并进行生精功能评分；全自动精子分析仪检测精子密度和活动率；单细胞凝胶电泳（SCGE）检测精子DNA完整性；原位末端标记法（TUNEL）检测睾丸细胞凋亡率；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测睾丸组织Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）、核因子E₂相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测睾丸组织Keap1、Nrf2、HO-1 mRNA表达水平。结果 与空白组比较，模型组小鼠血清UA显著升高（P<0.01），睾丸生精功能、精子密度和活动率均显著下降（P<0.01），精子拖尾率、睾丸细胞凋亡率均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，参苓白术散高剂量组小鼠上述指标均有明显改善（P<0.05， P<0.01），且睾丸组织Keap1、Bax、Caspase-3表达量明显降低，Nrf2、HO-1、Bcl-2表达量明显升高（P<0.05， P<0.01），Keap1 mRNA水平明显降低（P<0.05， P<0.01），Nrf2、HO-1 mRNA水平明显升高（P<0.05，P<0.01）。结论 参苓白术散能明显改善HUA型少弱精子症，其机制可能与Nrf2/抗氧化反应元件（ARE）信号通路有关。     

益肾生精方治疗少弱精子症的药效评价及作用机制

目的 采用环磷酰胺致大鼠少弱精子症模型，研究益肾生精方对少弱精子症的治疗作用及作用机制。方法 随机选取8只SD雄性大鼠为正常组，其余大鼠连续5 d腹腔注射环磷酰胺（35 mg·kg^-1·d^-1）制备大鼠少弱精子症模型，而后随机分为模型组、益肾生精方低、中、高剂量组（2.91、5.83、11.66 g·kg^-1），五子衍宗丸组（1.03 g·kg^-1），左卡尼汀组（0.17 g·kg^-1），每组8只。药物干预28 d后，记录大鼠体质量、睾丸质量和指数；采用计算机辅助精子分析（CASA）系统检测附睾中精子质量；苏木素-伊红（HE）染色观察睾丸组织形态；比色法检测睾丸组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、睾酮（T）的水平；原位末端标志法（TUNEL）检测睾丸组织中细胞的凋亡情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测睾丸组织中B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠体质量、睾丸质量和指数、精子浓度和活力显著降低（P<0.01），睾丸病理评分显著升高（P<0.01）；与模型组比较，益肾生精方中、高剂量组、五子衍宗丸组和左卡尼汀组可提高体质量、睾丸质量和指数，并提高精子浓度和活力；降低睾丸病理评分。氧化应激水平检测结果显示，与正常组比较，模型组大鼠睾丸组织中SOD水平显著降低（P<0.01），MDA水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，益肾生精方高剂量组、五子衍宗丸组和左卡尼汀组可以明显提高SOD活性，降低MDA水平（P<0.05，P<0.01）。血清激素水平检测结果显示，与正常组比较，模型组T水平显著降低（P<0.01），FSH和LH水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，益肾生精方组、五子衍宗丸组和左卡尼汀组可以显著提高T水平（P<0.01），降低LH水平（P<0.05，P<0.01）。TUNEL结果显示，与正常组比较，模型组生精细胞凋亡率显著增加（P<0.01）；与模型组比较，益肾生精方中剂量组、五子衍宗丸组和左卡尼汀组可显著降低凋亡率（P<0.01）。Western blot结果显示，与正常组比较，模型组Bcl-2蛋白水平明显降低（P<0.05）、Bax和cleaved Caspase-3蛋白水平明显升高（P<0.05，P<0.01）；益肾生精方高剂量组、五子衍宗丸组和左卡尼汀组可以明显升高Bcl-2蛋白水平，降低cleaved Caspase-3蛋白水平（P<0.05，P<0.01）。结论 益肾生精方可改善少弱精子症模型大鼠的精子质量，其机制可能与抗氧化、调节性激素水平以及抑制生精细胞凋亡等多个途径有关。     

孕康口服液通过TGF-β/Smads信号通路调节产后肾虚小鼠的复旧作用分析

目的 探究孕康口服液对产后肾虚小鼠的作用。方法 将妊娠后小鼠随机分为4组，即模型组、孕康低剂量组（6 mL·kg^-1）、孕康中剂量组（9 mL·kg^-1）、孕康高剂量组（12 mL·kg^-1），睡眠剥夺与强迫游泳复合造模制备产后肾虚小鼠模型，造模同时灌胃给药，另设9只雌性ICR小鼠为正常组。检测小鼠动情周期、自主活动、背温、抓力、骨强度、舌苔色；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清雌二醇（E₂）、孕酮（P）、促卵泡生长激素（FSH）和促黄体生成素（LH）水平；苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢、子宫组织形态学改变；免疫组化和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢和子宫转化生长因子（TGF）-β、Smad2/3蛋白表达。结果 模型组小鼠呈现动情周期延长，自主活动、背温、抓力、骨强度降低，小鼠舌薄白等症状。孕康口服液能缩短模型小鼠动情周期；提高自主活动、背温、抓力、骨强度；改善舌苔薄白；升高血清E₂、P水平，降低血清FSH、LH水平；降低卵巢卵泡闭锁率，促进子宫修复；降低卵巢及子宫组织TGF-β、Smad2/3蛋白表达。结论 孕康口服液对小鼠产后肾虚具有改善作用，其作用机制可能与调节TGF-β/Smads信号通路有关。     

庞氏安胎止血汤通过调控p38 MAPK信号通路干预热证自然流产大鼠蜕膜组织Th1/Th2平衡的机制

目的 基于p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）信号通路探讨庞氏安胎止血汤的保胎作用及对蜕膜组织辅助性T细胞（Th）1/Th2平衡的影响机制研究。方法 采用灌胃附子、干姜、肉桂水煎剂方式制备热证自然流产大鼠模型。将模型大鼠随机分为模型组、阿司匹林组（5.25 mg·kg^-1）、地屈孕酮组（3.02 mg·kg^-1）和庞氏安胎止血汤低、中、高剂量组（11、22、44 g·kg^-1），每组10只，另取10只作为正常组。各组大鼠依据组别给予相应药物干预，1次/d，连续干预12 d，末次给药24 h后，腹主动脉取血，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测β-绒毛膜促性腺激素（β-HCG）、孕激素（P）、雌二醇（E₂）、γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）水平；取大鼠子宫及蜕膜组织，测定流产数和流产率；采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测蜕膜组织中GATA3、T-bet、p38 MAPK及其磷酸化水平。结果 与正常组比较，模型组大鼠活胎数和血清β-HCG、P、E₂、IL-4及蜕膜组织GATA3蛋白水平显著降低（P<0.01），流产数、流产率、血清IFN-γ及脱模组织p-p38 MAPK、T-bet蛋白水平显著升高（P<0.01）；与模型组比较，庞氏安胎止血汤中剂量组大鼠活胎数和血清β-HCG、P、E₂、IL-4及蜕膜组织GATA3蛋白水平显著升高（P<0.01），流产数、流产率、血清IFN-γ及脱模组织p-p38 MAPK、T-bet蛋白水平显著降低（P<0.01）；与阿司匹林组比较，地屈孕酮组和庞氏安胎止血汤中、高剂量组大鼠血清P、E₂、IL-4水平显著上高（P<0.01），庞氏安胎止血汤中剂量组大鼠活胎数显著升高（P<0.01），地屈孕酮组大鼠血清β-HCG、IFN-γ水平显著降低（P<0.01），庞氏安胎止血汤中剂量组大鼠流产数、流产率、血清IFN-γ及蜕膜组织T-bet、GATA3水平明显降低（P<0.05）；与庞氏安胎止血汤中剂量组比较，庞氏安胎止血汤低、高剂量组和地屈孕酮组大鼠流产数及流产率明显升高（P<0.05），庞氏安胎止血汤高剂量组和地屈孕酮大鼠活胎数显著降低（P<0.01），庞氏安胎止血汤低剂量组大鼠血清IFN-γ、蜕膜组织p-p38 MAPK、T-bet蛋白水平明显升高（P<0.05），庞氏安胎止血汤高剂量组大鼠蜕膜组织p-p38 MAPK、T-bet蛋白水平明显升高（P<0.05），庞氏安胎止血汤低剂量组、地屈孕酮组和阿司匹林组大鼠血清β-HCG、P、E₂水平显著降低（P<0.01），庞氏安胎止血汤低、高剂量组和地屈孕酮组大鼠血清IL-4和蜕膜组织GATA3蛋白水平显著降低（P<0.01）。结论 庞氏安胎止血汤通过调控p38 MAPK信号通路，调节Th1/Th2平衡，从而实现保胎作用。     

E2/ERβ信号通路介导引火汤改善慢性应激诱导的双侧卵巢摘除小鼠抑郁样行为

目的 观察引火汤（YHT）对慢性应激诱导的双侧卵巢摘除（OVX）小鼠抑郁样行为的影响并探索其基于雌二醇（E₂）/雌激素受体β（ERβ）信号通路的作用机制。方法 实验分两部分完成,第一部分将小鼠随机分为假手术组（Sham）,模型组（OVX）,阳性药组（E₂,0.13 mg·kg^-1）和引火汤组（YHT,23.4 g·kg^-1）。采用OVX联合慢性不可预知性温和刺激（CUMS）方法复制OVX。双侧卵巢摘除术后第8天,各组小鼠开始CUMS并开始给药,强迫游泳（FST）,悬尾（TST）,旷场（OFT）3种行为学实验观察各组小鼠不动时间、水平运动评分及垂直运动评分变化,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清、脑组织E₂水平,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测芳香化酶（Cyp19）基因转录,免疫组织化学法（IHC）检测海马齿状回ERα和ERβ表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测脑内总ERα和ERβ蛋白水平。第二部分实验分Sham,OVX,YHT和阻断剂组（Y+B,23.4 g·kg^-1+100 μg·kg^-1）,Y+B组小鼠在引火汤灌胃同时采用隔天腹腔注射方式的给予ERβ阻断剂（PHTPP）,3种行为学实验观察各组小鼠不动时间、水平运动评分及垂直运动评分变化。结果 与Sham组比较,OVX组小鼠不动时间显著增加、水平运动及垂直运动水平显著降低（P<0.01）,血清和脑内E₂显著降低（P<0.01）,脑内Cyp19 mRNA表达显著降低（P<0.01）,海马齿状回和脑内总ERα差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERβ表达显著降低（P<0.01）;与OVX组比较,E₂组小鼠不动时间显著降低、水平运动及垂直运动水平显著增加（P<0.01）,血清E₂显著升高（P<0.01）,脑内Cyp19 mRNA表达差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERα差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERβ表达显著升高（P<0.01）,YHT组小鼠不动时间显著降低、水平运动及垂直运动水平显著增加（P<0.01）,血清E₂未见升高,脑内E₂明显升高（P<0.01）,脑内Cyp19 mRNA表达显著增加（P<0.01）,海马齿状回和脑内总ERα差异无统计学意义,海马齿状回和脑内总ERβ表达均显著升高（P<0.05,P<0.01）。PHTPP可阻断引火汤对OVX小鼠在FST,TST,OFT实验中的作用。结论 引火汤促进脑内源性雌激素合成和释放,激活E₂/ERβ信号通路可能是其改善慢性应激诱导的OVX小鼠抑郁样行为关键机制之一。     

基于Bcl-2/Bax/Caspase-3信号通路探究参红通络方对心肌缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的 探讨参红通络方加减对心肌缺血再灌注损伤（MI/RI）大鼠细胞凋亡的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、参红通络方剂低、中、高剂量组和辛伐他汀组。除空白组外,采用线栓结扎冠状动脉左前降支方式制备心肌缺血再灌注损伤大鼠模型（MI/RI模型）,造模成功后第1天起,空白组（生理盐水1.0 mL·kg^-1）、模型组（生理盐水1.0 mL·kg^-1）、参红通络方剂低、中、高剂量组（1.031、2.063、4.126 g·kg^-1参红通络方标准浓缩液）和辛伐他汀组（辛伐他汀0.71 mg·kg^-1）,定时灌胃给药,每日1次,连续2周。苏木素-伊红（HE）染色法观察心肌细胞病理形态学变化;酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平变化;原位末端转移酶标记技术（TUNEL）染色法检测大鼠心肌细胞凋亡率;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和胱天蛋白酶-3（Caspase-3）表达水平。结果 与空白组比较,模型组HE染色可见心肌细胞排列紊乱,纤维不完整,心肌细胞小灶性坏死,并伴有炎性细胞浸润;血清CK-MB、IL-6和TNF-α水平明显上升（P<0.05）;心肌细胞凋亡率明显升高（P<0.05）,Bax、Caspase-3蛋白表达水平则明显升高,Bcl-2明显下降（P<0.05）;与模型组比较,参红通络方剂加减低、中、高剂量组可明显降低CK-MB、IL-6和TNF-α水平（P<0.05）;明显下调心肌细胞凋亡率（P<0.05）;Bax、Caspase-3蛋白显著降低,Bcl-2表达水平明显增加（P<0.05）。参红通络方剂加减组中Bax、Caspase-3蛋白随参红通络方给药剂量的增加而明显降低,Bcl-2表达水平随参红通络方给药剂量的增加而明显升高（P<0.05）。结论 参红通络方加减可通过减轻心肌组织病理损伤并降低心肌细胞凋亡,可能与抑制Caspase-3、Bax表达、促进Bcl-2水平表达有关。     

生慧汤对APP/PS1雄性AD小鼠海马内APP代谢产物的昼夜变化影响＊

目的研究生慧汤对APP/PS1（β-amyloid precursor protein/presenilin 1246E）小鼠海马内β淀粉样前体蛋白（Amyloid precursor protein，APP）代谢产物昼夜表达的影响。方法 将56只雄性APP/PS1双转基因痴呆模型小鼠随机分为4组，分别为：痴呆模型组、褪黑素治疗组（0.78 mg·kg^-1·d^-1）、生慧汤高剂量组（27.0 g·kg^-1·d^-1）、生慧汤低剂量组（13.5 g·kg^-1·d^-1），每组14只；对照组为14只雄性C57BL/6J小鼠，连续给药30天。采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力，采用酶联免疫吸附检测（ELISA）检测不同时间段取出的海马组织sAPPα含量。对海马β淀粉样蛋白_1-40、β淀粉样蛋白_1-42表达进行免疫印迹分析。免疫组化（IHC）检测海马CA1区Aβ_1-40蛋白的表达。结果 Morris水迷宫结果表明，与对照组相比，模型组上平台潜伏期明显延长、穿越平台次数明显减少（P<0.01）；与模型组相比，生慧汤不同剂量组上平台潜伏期明显缩短（P<0.01、P<0.05），穿越平台次数明显增加（P<0.05）。ELISA结果表明，与对照组相比，模型组的sAPPα总量、各时间段（12：00、24：00）sAPPα含量明显减少（P<0.01）；与模型组相比，生慧汤不同剂量组sAPPα总量明显增多（P<0.01、P<0.05），生慧汤高剂量组仅能增加12：00 sAPPα含量（P<0.01），生慧汤低剂量组仅能增加24：00 sAPPα含量（P<0.05）。对照组sAPPα含量具有明显昼夜差异（P<0.01）。模型组sAPPα含量的昼夜差异性消失（P>0.05）。生慧汤高剂量组sAPPα含量具有昼夜差异（P<0.01），生慧汤低剂量组sAPPα含量不具有昼夜差异（P>0.05）。Western blot结果显示，与对照组相比，模型组Aβ_1-40、Aβ_1-42蛋白表达明显增加（P<0.01）；与模型组相比，生慧汤高剂量组Aβ_1-40、Aβ_1-42蛋白表达减少（P<0.05、P<0.01）；生慧汤低剂量组仅能减少Aβ_1-40蛋白的表达（P<0.05），对Aβ_1-42蛋白表达无影响（P>0.05）。免疫组化结果表明，与对照组相比，模型组Aβ_1-40表达明显增加（P<0.01）；与模型组相比，生慧汤不同剂量组Aβ_1-40表达不同程度减少（P<0.01、P<0.05）。结论 生慧汤能够改善5月龄APP/PS1阿尔茨海默病模型小鼠的学习记忆障碍，其机制可能与恢复海马内APP代谢产物sAPPα的昼夜节律性表达、从而减少Aβ的沉积有关。     

艾烟对弱精子症模型大鼠精子参数和血清性激素的影响＊

目的 观察艾烟对奥硝唑灌胃所建立的弱精子症模型大鼠生殖功能的保护作用。方法 将32只雄性SD大鼠按体质量随机分为溶剂对照组（8只）、弱精子症模型组（8只）、艾烟组（8只）、香烟对照组（8只）。模型组、艾烟组、香烟组：每组均使用奥硝唑溶液灌胃，每次400 mg/kg，每日1次，连续灌胃10天。从第11天起，将三个组的奥硝唑剂量调至200 mg/kg，每日1次，并开始艾烟和香烟干预，每天20min，每日1次，每周6天。实验共8周。溶剂对照组：只给与等体积的0.2%羧甲基纤维素钠溶液灌胃，每日1次，共灌胃8周，不进行其他干预。观察各组大鼠附睾中精子浓度、精子活力、精子活率、A级精子数、A+B级精子数指标的变化，血清中性激素睾酮、促黄体生成素含量的变化，睾丸HE染色组织形态学改变。结果 ①与溶剂组相比：模型组和香烟组大鼠的精子活力、精子活率、A级精子数、A+B级精子数明显下降（P < 0.01），而艾烟组上述指标无差异（P > 0.05）；②与模型组相比，艾烟组大鼠的上述精子参数均明显上升（P < 0.01），香烟组的精子活力、精子活率、A + B级精子数有所上升（P < 0.05）；③与香烟组相比，艾烟组的精子活力、精子活率、A级精子数、A + B级精子数明显上升（P < 0.01）；④与溶剂组相比，模型组和香烟组大鼠的血清睾酮的含量显著下降（P < 0.01）、促黄体生成素的含量上升（P < 0.01）；⑤与模型组相比，艾烟组睾酮的含量上升（P < 0.01）、促黄体生成素的含量下降（P < 0.05）；⑥病理结果显示，模型组大鼠睾丸组织受损，艾烟组大鼠的组织有所恢复，香烟组的睾丸损伤程度最重。结论 艾烟可以提高弱精子症模型大鼠的精子质量，提高精子活力、精子活率、A级精子数、A + B级精子数，调节血清睾酮和促黄体生成素水平，减轻睾丸组织病变。     

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨左归丸对60Co-γ射线损伤大鼠卵泡凋亡调控作用

目的 以磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路为靶点,探讨左归丸对⁶⁰Co-γ射线早衰大鼠的保护作用。方法 采用⁶⁰Co-γ射线一次性照射（6.0 Gy,LD₄₀）性成熟雌性SD大鼠60只,随机分成模型组、补佳乐组（0.18 g·kg^-1·d^-1）、补佳乐（0.09 g·kg^-1·d^-1）+左归丸高剂量（23.625 g·kg^-1·d^-1）组、左归丸高剂量（23.625 g·kg^-1·d^-1）组、左归丸中剂量（9.45 g·kg^-1·d^-1）组和左归丸低剂量（4.725 g·kg^-1·d^-1）组,每日1次,治疗21 d,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清［卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）和雌二醇（E₂）］,苏木素-伊红（HE）染色观察卵巢的组织形态变化,原位末端标记法（TUNEL）检测颗粒细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织磷酸化（p）-PI3K、p-Akt、p-mTOR和B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白表达结果。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清FSH显著上升（P<0.01）,E₂明显下降（P<0.05）,卵巢早期卵泡和黄体数量减少（P<0.01）;颗粒细胞凋亡率显著增加（P<0.01）;卵巢组织p-PI3K、p-Akt、p-mTOR和Bcl-2蛋白表达明显下降,Bax蛋白表达显著增加（P<0.01）;与模型组比较,各给药组干预后卵巢内早期卵泡数量增加,颗粒细胞凋亡率降低,p-PI3K、p-Akt、p-mTOR和Bcl-2蛋白表达有增加趋势,Bax蛋白表达有下降趋势,尤以补佳乐+左归丸高剂量组差异均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 左归丸对辐射损伤卵巢的保护作用机制可能是通过活化卵巢组织PI3K/Akt/mTOR蛋白表达,增加Bcl-2蛋白量和抑制Bax蛋白表达。     

当归芍药散含药血清调控UPP途径对Aβ1-40损伤PC12细胞的保护作用及机制

目的 探讨当归芍药散（DSS）含药血清对β淀粉样蛋白（Aβ）_1-40损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞的保护作用及对泛素-蛋白酶体途径（UPP）的调控作用机制。方法 采用Aβ_1-40干预PC12细胞制备损伤模型。实验分为空白组、模型组、DSS含药血清高、中、低剂量组（10%、5%、2.5%）。细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测细胞Aβ和磷酸化（p）-Tau蛋白含量,免疫荧光细胞化学（ICC）标记UPP重要靶点泛素（Ub）、泛素连接酶E3（E3）、26S蛋白酶体、泛素羧基端水解酶1（UCHL1）和UCHL3蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Ub、E3、26S、UCHL1、UCHL3 mRNA和蛋白的表达。结果 根据CCK-8实验结果,筛选5 μmol·L^-1、48 h为PC12细胞损伤最佳造模条件。与空白组比较,模型组细胞存活率降低（P<0.05）、凋亡率升高（P<0.05）,Aβ及p-Tau表达升高（P<0.05）,Ub蛋白及mRNA表达升高,26S、E3、UCHL1+3蛋白及mRNA表达降低（P<0.05）。与模型组比较,DSS中剂量组细胞存活率升高（P<0.05）;DSS各剂量组细胞凋亡率下降（P<0.05）;DSS各剂量组Aβ含量降低（P<0.05）,DSS高、中剂量组p-Tau 含量降低（P<0.05）;DSS各剂量组Ub mRNA表达降低（P<0.05）,DSS各剂量组26S mRNA表达升高（P<0.05）,DSS中剂量组UCHL1 mRNA表达升高（P<0.05）,DSS高、中剂量组E3和UCHL 3mRNA表达升高（P<0.05）;DSS各剂量组Ub蛋白表达降低,DSS高、中剂量组26S、E3、UCHL1+3蛋白表达升高,以DSS中剂量效果最佳。结论 DSS含药血清可提高细胞存活率、降低细胞凋亡率、清除Aβ和p-Tau蛋白沉积,对Aβ_1-40损伤PC12细胞有保护作用,其作用可能是通过调控UPP降低Ub表达及升高26S、E3、UCHL1及UCHL3表达来发挥。     

薯蓣皂苷元调控Nrf2信号通道干预大鼠干性AMD氧化应激机制的研究

目的 观察薯蓣皂苷元对核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2-related factor 2，Nrf2）mRNA表达及超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）的影响，探讨其干预干性年龄相关性黄斑变性（age-related macular degeneration，AMD）氧化应激反应的机制。方法 将SD系大鼠随机分为空白组、碘酸钠组、乐盯组、薯蓣皂苷元低剂量组（100 mg·kg^-1）、薯蓣皂苷元中剂量组（200 mg·kg^-1）、薯蓣皂苷元高剂量组（400 mg·kg^-1），每组20只，雌雄各半。用碘酸钠60 mg·kg^-1造模，乐盯组90 g·kg^-1乐盯灌胃，薯蓣皂苷元低、中、高剂量组分别按100 mg·kg^-1、200 mg·kg^-1、400 mg·kg^-1灌胃给药。连续灌胃20天和30天后分别取10只（雌雄各半）进行取材和指标检测。结果 碘酸钠组大鼠视网膜组织形态学改变、Nrf2 mRNA表达及SOD、GXH-PX、MDA与空白组、乐盯组有显著差异（P < 0.05、P < 0.01），而乐盯组与空白组之间无明显差异（P > 0.05）。灌胃20天时，高中剂量组的Nrf2 mRNA表达、GSH-Px值和MDA值和高中低剂量组SOD值优于碘酸钠组（P < 0.05、P < 0.01），其中，高剂量组Nrf2 mRNA表达，高中剂量组SOD值、GSH-Px值和MDA值，与乐盯组、空白组无明显差异（P > 0.05）；灌胃30天时，高中低剂量组Nrf2mRNA表达、GSH-Px值、MDA值优于碘酸钠组（P < 0.05、P < 0.01），但高中剂量组优势更明显，与乐盯组、空白组无差异（P > 0.05）。结论 薯蓣皂苷元能够上调Nrf2mRNA表达，增加SOD、GXH-PX活性，降低MDA水平，干预干性AMD的发生。且其作用与剂量和时间具有一定相关性。     

阳和汤对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡Egr1/p21信号通路的影响

目的:以早期生长反应基因1(Egr1)/细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)信号通路为基础,探讨古方阳和汤含药血清对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡的影响。方法:制备阳和汤大鼠含药血清,体外培养三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞。设空白组,阳和汤高、中、低剂量组(23. 4,11. 7,5. 85 g·kg~(-1)),分别干预MDA-MB-231细胞24,48,72 h,细胞增殖检测(CCK-8)法检测各组细胞增殖情况。设空白组,阳和汤高、中、低剂量组(23. 4,11. 7,5. 85 g·kg~(-1)),干预MDA-MB-231细胞48 h,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况以及细胞周期分布情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组细胞Egr1,p21 mRNA的表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞Egr1,p21蛋白的表达情况。结果:阳和汤干预MDA-MB-231细胞24,48,72 h,与空白组相比,阳和汤高、中剂量组能显著抑制MDA-MB-231细胞增殖(P 0. 01)。阳和汤干预MDA-MB-231细胞48 h,与空白组相比,阳和汤高、中剂量组细胞的凋亡率明显增加(P 0. 05,P 0. 01);阳和汤高、中剂量组细胞周期G_0/G_1期所占比例降低,G_2/M期所占比例升高(P 0. 05,P 0. 01);阳和汤高、中剂量组细胞Egr1,p21mRNA和蛋白表达均增加(P 0. 05,P 0. 01)。结论:阳和汤可激活MDA-MB-231细胞中Egr1/p21信号通路,增加Egr1,p21的表达,引起G_2/M细胞周期阻滞,从而诱导MDA-MB-231细胞凋亡。     

人参皂苷Rb1对脑缺血大鼠GFAP及脑血流的影响

目的:采用光化学诱导局部脑缺血模型,研究人参皂苷Rb_1(ginsenosideRb_1,GRb_1)对大鼠右侧脑皮质区神经胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及局部脑血流量(regional cerebral blood flow,rCBF)的影响及可能的机制。方法:48只SD大鼠随机分为模型组,假手术组,GRb_1高剂量组(100 mg·kg-1),中剂量组(50 mg·kg-1),低剂量组(25 mg·kg-1),尼莫地平组(1 mg·kg-1),每组8只。用激光多普勒血流监测仪测定缺血后24 h右侧脑皮质区r CBF的改变。用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测GFAP mRNA的表达,用免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western bolt)检测GFAP的表达。应用神经行为学评分评价大鼠神经功能症状。结果:与假手术组比较,模型组r CBF明显下降(P0.01);与模型组比较,高剂量GRb_1组神经功能缺损程度降低(P0.05),GRb_1各组r CBF明显增加(P0.05);模型组GFAP mRNA和蛋白表达较假手术组明显增加(P0.05),GRb_1组GFAP阳性细胞表达较模型组明显增加(P0.05),其中以高剂量GRb_1组GFAP表达增加明显(P0.01);GRb_1高剂量组与尼莫地平组间差异无统计学意义。结论:在脑缺血急性期GRb_1可增加局部r CBF,并促进GFAP的表达,稳定星形胶质细胞形态,保护缺血半暗带细胞。     

桔梗总皂苷对肺炎支原体感染大鼠肺组织SP-A的影响

目的:通过研究桔梗总皂苷对肺炎支原体(MP)感染大鼠肺部组织中肺表面活性蛋白A(SP-A)表达的影响,探讨其对肺炎支原体感染大鼠肺部组织可能的修复机制。方法:60只Wistar大鼠,雌雄各半,体重80~100 g,随机分为6组,每组10只。分别为空白组、模型组、阳性药(阿奇霉素)组(第1天为45 mg·kg-1,第2~5天为22.5 mg·kg-1)、桔梗总皂苷高、中、低(56,28,14 mg·kg-1)剂量组。采用肺炎支原体滴鼻法造模1次。造模后第2天开始ig给药,阿奇霉素给药5 d,桔梗总皂苷给药10 d后采集大鼠左肺及右肺组织中叶,常规HE染色,显微镜下观察肺组织病理改变,逆转录聚合酶链反应法(RTPCR)检测肺组织中SP-A mRNA的表达水平,采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析。结果:病理结果显示:模型组与空白组比较,肺组织可见明显的肺间质炎症(P0.01);与模型组比较,阳性药组、桔梗总皂苷高、中、低剂量组的肺组织炎症较模型组明显减轻(P0.05);肺组织中SP-A mRNA的表达水平显示:与空白组比较,模型组的肺组织SP-A mRNA表达明显下调(P0.01),与模型组比较,阳性药组、桔梗总皂苷高、中剂量组SP-A mRNA表达上调(P0.05)桔梗总皂苷低剂量组无显著差异。结论:桔梗总皂苷能够改善MP感染大鼠肺部组织的炎症,且对肺部的修复作用可能是通过上调SP-A表达实现的。     

菟丝子水提物对人精子膜结构和功能氧化损伤的干预作用

 目的观察菟丝子水提物对活性氧(ROS)所致人精子膜结构和功能氧化损伤的干预作用及其对精子膜功能的保护作用。探讨菟丝子治疗男性不育弱精子症的作用机制。方法采用Percoll梯度离心法优选具有正常生理功能的精子作为正常精子模型,将精子悬液分为正常组、模型组、阳性药对照组(维生素C组)和菟丝子水提物小、中、大剂量组,应用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶(HX-XO)体系产生ROS,在有氧环境下,不同剂量(每1 mL含0.125,0.25和0.5 g生药)的菟丝子水提物与精子悬液共同孵育后,检测精子膜脂质过氧化损伤程度,通过精子低渗膨胀试验评估精子膜功能,并与已知的抗氧化剂维生素C对照。结果菟丝子水提物小、中、大剂量组(每1 mL含0.125,0.25和0.5 g生药)在相同的条件下均可提高精子悬液超氧化物歧化酶(SOD)活力,降低丙二醛(MDA)含量,对ROS所致精子膜的损伤均具有不同程度的干预作用,对精子膜功能具有一定的保护作用。其中每1 mL含0.125,0.5 g生药的菟丝子水提物组与维生素C组(0.25 g·L^-1)无明显差别(均P>0.05),0.25 g生药的菟丝子水提物组明显优于维生素C组(P<0.001)。结论适量的菟丝子水提物能显著提高精子悬液SOD活力,降低MDA含量,通过其抗氧化作用干预ROS对精子膜的脂质过氧化反应,对精子膜结构和功能具有明显的保护作用,这可能是菟丝子治疗男性不育弱精子症的作用机制之一。     

温阳解郁汤对抑郁模型大鼠的影响

目的:研究温阳解郁汤对慢性应激抑郁模型大鼠抑郁行为的影响。方法:选取120只雄性Wistar大鼠,随机分为6组:正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、温阳解郁汤高,中,低剂量组(8,6,4g·kg-1)和氟西汀组(3.33mg·kg-1)。所有大鼠ig给药,ig容量均为20mL·kg-1。同时,除正常组外,其余各组接受慢性不可预知温和刺激(CUMS)并孤养21d,在实验21d采用旷场实验(OFT)、强迫游泳实验(FST)和悬尾实验(TST)对大鼠行为进行评价,并于21d检测大鼠血清皮质酮(CORT),促肾上腺皮质激素(ACTH)水平。结果:模型组大鼠强迫游泳、悬尾不动时间(94±10),(90±9)s和穿格次数(11.4±3.5)次较正常组(19±5),(28±6)s,(48±10)次有明显改变(P<0.05)。与模型组比较,高、中剂量(8,6g·kg-1)温阳解郁汤组大鼠强迫游泳、悬尾实验不动时间减少(53±8),(47±7)s;(58±9),(50±9)s,(P<0.05);高剂量温阳解郁汤组大鼠旷场实验中穿格数增多(28.6±7.6)次,(P<0.05),血CORT和ACTH水平(246±21)μg·L-1,(234±19)ng·L-1较模型组(290±19)μg·L-1,(279±20)ng·L-1降低(P<0.05)。结论:温阳解郁汤具有改善CUMS大鼠抑郁行为的作用;温阳解郁汤能够降低抑郁模型大鼠升高的血皮质酮和促肾上腺皮质激素水平。     

龙脷平喘膏抗哮喘大鼠气道炎症作用及机制

目的:探讨龙脷平喘膏对发作期小儿哮喘气道炎症的影响。方法:48只大鼠按体重均衡随机分为空白对照组、模型组、地塞米松组(1 mg·kg-1)、龙脷平喘膏高、中、低剂量组(74.8,37.4,18.7 g·kg-1),每组8只。采用卵清蛋白(OVA)复制哮喘大鼠模型,连续给药1周,记录大鼠过敏性鼻炎症状,取鼻黏膜和肺组织,观察鼻黏膜及肺组织病理形态变化,并检测肺组织炎症细胞凋亡率和原癌基因Fas(Fas mRNA),B细胞淋巴瘤/白血病2基因(Bcl-2 mRNA)的表达。结果:除空白组外,其他各组在引发过敏性哮喘的同时均诱发了不同程度的过敏性鼻炎症状,且模型组鼻黏膜和肺组织均见嗜酸粒细胞浸润及相似的病理形态学改变;与空白组比较,模型组大鼠搔鼻和喷嚏的次数显著增多(P<0.01);与模型组比较,龙脷平喘膏能明显减少哮喘大鼠搔鼻和喷嚏的次数(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠肺组织中炎症细胞凋亡率显著降低(P<0.01);与模型组比较,龙脷平喘膏高、中剂量组大鼠肺组织中炎症细胞凋亡率明显升高(P<0.05),且肺组织中促炎症细胞凋亡的调控基因Fas mRNA阳性表达率显著升高(P<0.01),抑制炎症细胞凋亡的调控基因Bcl-2 mRNA阳性表达率则显著下降(P<0.01)。结论:龙脷平喘膏能明显抑制哮喘大鼠气道炎症,机制可能与其逆转Fas/Bcl-2失衡,促进炎症细胞凋亡有关。     

参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-13,IL-23及COX-2,CREB表达的影响

目的:观察参苓白术散对脾虚湿困型溃疡型结肠炎大鼠结肠组织白细胞介素(IL)-13,IL-23及环氧合酶-2(COX-2),c AMP反应元件结合蛋白(CREB)表达的影响,探究其对溃疡性结肠炎作用机制。方法:将48只SPF级Wistar大鼠随机分为6组,分别是空白组、模型组、参苓白术散高、中、低剂量组和美沙拉秦组,每组8只,雌雄各半。除空白组,其余各组采用病证结合法复制脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠模型,即饮食、环境干预等措施联合2,4-二硝基苯磺酸灌肠。造模成功后,参苓白术散高、中、低剂量组分别按照24,12,6 g·kg-1·d-1,美沙拉秦组0.2 g·kg-1·d-1进行灌胃。连续灌胃21 d后采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠结肠组织IL-13,IL-23含量;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR)检测结肠组织IL-13,IL-23,COX-2,CREB mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织COX-2,CREB蛋白表达量。结果:与空白组比较,模型组大鼠结肠IL-13含量和IL-13 mRNA表达水平明显降低(P0.05),IL-23含量和IL-23 mRNA升高(P0.05),COX-2,CREB mRNA及蛋白相对表达量升高(P0.05)。与模型组比较,参苓白术散(高、中、低剂量)组大鼠结肠IL-13含量和IL-13 mRNA表达均升高,尤以参苓白术散高剂量组最显著(P0.05),IL-23含量和IL-23 mRNA降低(P0.05),COX-2,CREB mRNA表达及蛋白相对表达量降低(P0.05)。结论:参苓白术散可能调节脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-13,IL-23及COX-2,CREB的表达,减少结肠的炎症反应。     

秦皮醇提物对亚急性衰老小鼠的抗衰老作用

目的:观察秦皮醇提物(EEFC)对D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠的抗衰老作用。方法:将ICR小鼠60只随机分为空白组(生理盐水100 mg·kg-1),模型组(D-半乳糖100 mg·kg-1),阳性药维生素E组(D-半乳糖100 mg·kg-1+维生素E30 mg·kg-1),EEFC低剂量组(D-半乳糖100 mg·kg-1+秦皮醇提物37.5 mg·kg-1)、中剂量组(D-半乳糖100 mg·kg-1+秦皮醇提物75 mg·kg-1)和高剂量组(D-半乳糖100 mg·kg-1+秦皮醇提物150 mg·kg-1),每组10只。连续ig给药60 d,末次给药后摘眼球取血,之后取脑、胸腺、脾脏、肝、皮肤,测定脑、胸腺、脾脏的脏器指数;测定血清、脑、肝、皮肤超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(T-AOC)。结果:模型组的脑、胸腺、脾脏指数比空白组明显降低(P<0.05,P<0.01),小鼠血清、肝脏、皮肤、脑模型组T-AOC,SOD,CAT的值与空白组明显降低,MDA升高。秦皮醇提物各剂量组与模型组相比,高剂量组的脑、胸腺、脾脏质量指数显著增加(P<0.05,P<0.01)。秦皮醇提物组血清、脑组织、肝和皮肤中的SOD,CAT活性均显著增强(P<0.05,P<0.01),MDA含量降低(P<0.05,P<0.01),T-AOC显著增强(P<0.05,P<0.01),血清和皮肤中的GSH-Px活性显著增强(P<0.05,P<0.01)。结论:秦皮醇提物具有延缓D-半乳糖所致亚急性衰老小鼠的衰老作用。     

健脾消癌方对小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的:通过体内实验研究健脾消癌方对小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨其抗大肠癌复发转移的作用机制。方法:通过皮下注射结肠癌细胞CT-26构建大肠癌皮下移植瘤小鼠模型,随机分为模型组,健脾消癌方低(15.75 g·kg~(-1)),中(31.5 g·kg~(-1)),高(63 g·kg~(-1))剂量组及5-氟尿嘧啶(5-Fu)组,分别给药14 d后,处死小鼠,剪取瘤体、称取瘤质量后剪碎瘤组织,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,并采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞凋亡相关蛋白表达情况。结果:与模型组比较,健脾消癌方(15.75,31.5,63 g·kg~(-1))组瘤质量均减轻(P0.05),细胞凋亡率均升高(P0.05);B细胞淋巴瘤-2基因相关X蛋白(Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),半胱氨酸蛋白酶-8(Caspase-8)表达增高(P0.05),B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)表达降低(P0.05);与健脾消癌方(15.75,31.5 g·kg~(-1))组比较,健脾消癌方(63 g·kg~(-1))组Bax,Caspase-3,Caspase-8增高明显(P0.05)。结论:健脾消癌方可通过促进小鼠大肠癌皮下移植瘤细胞凋亡实现抑瘤作用,其机制可能与其调节细胞凋亡相关蛋白表达有关。