抗痫灵对戊四氮致痫大鼠脑组织中海马区白细胞介素Iβ蛋白表达的影响

癫痈作为一种免疫相关性神经系统疾病,其发生发展与细胞因子有着密切关系.近几年通过实验及临床研究证实了诸多细胞因子参与癫痫的发病过程,其中主要有白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素α(IFN)等,这些细胞因子具有广泛生物学作用.本研究通过观察中药复方抗痫灵对戊四氮(PTZ)致痈大鼠脑组织相关细胞因子IL-β蛋白表达的影响,从分子生物学水平探讨癫痫的发病机制及其抑痫作用.     

抗痫灵抗惊厥作用的实验研究

目的探讨抗痫灵抗癫痫作用。方法采用大鼠戊四氮(PTZ)惊厥法,观察大鼠惊厥发生率,惊厥发作潜伏期及惊厥发作持续时间。结果抗痫灵能明显抑制大鼠戊四氮惊厥发生率,缩短惊厥发作持续时间,潜伏期延长,并能降低阈剂量小鼠戊四氮半数惊厥剂量(CD50)。结论本品有一定的抗惊厥作用。     

定痫丸对青霉素致痫大鼠脑组织环核苷酸(cAMP、cGMP)影响

目的观察探讨定痫丸治疗癫痫的作用及作用机制。方法各组大鼠按不同剂量灌胃给药7 d后,采用腹腔注射青霉素制备癫痫急性模型,青霉素注射剂量为600万U.kg-1,分别测定各组大鼠脑组织中环核苷酸(cAMP、cGMP)的含量,并进行各组大鼠脑电波观察。结果定痫丸能明显减轻青霉素的致痫作用,减少模型大鼠癫痫发作的频率,显著升高模型大鼠脑组织中SOD活性、降低MDA含量,显著升高脑组织中cAMP含量、降低cGMP含量。结论定痫丸抗癫痫作用机制与其抑制自由基引起的脂质过氧化反应、增加自由基的清除,调节脑内cAMP、cGMP含量变化有关。     

环孢素A对戊四氮致痫过程中大鼠海马GFAP的干预研究

目的:研究环孢素A对戊四氮致痫过程中大鼠海马GFAP的影响,并观察大鼠癫痫发作行为变化.方法:72只大鼠随机分为空白对照组(N组)24只,非药物干预组(P组)24只和药物干预组24只(C组);P组和C组于每日给予腹腔注射戊四氮30mg/kg;同时C组每隔两日给予尾静脉注射环孢素A10mg/kg.采用免疫组化方法观察胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)于4d、7d、14d的增生变化;同时观察各组大鼠癫痫发作的时间、发作级别和发作次数.结果:P组大鼠在4d、7d、14d各时间点均未出现癫痫发作时,已经出现胶质细胞增生,并且随着时间的增加胶质细胞增生的程度逐渐升高,与空白对照组(N)比较有显著性差异(P＜0.01);与C组比较有显著性差异(P＜0.01);C组大鼠在4d、7d、14d各时间点也均未出现癫痫发作,随着时间的增加胶质细胞增生的程度也逐渐升高,但胶质细胞增生的程度明显低于P组,与P组对应时间点比较,有显著性差异(P＜0.01);C组大鼠各时间点胶质细胞增生的程度与N组比较也有显著性差异(P＜0.05).结论:环孢素A干预后大鼠海马星形胶质细胞增生程度降低,减低了大鼠癫痫发作的级别和次数,延迟癫痫发作时间,因此环孢素A具有预防癫痫发作的作用.     

HPLC测定大鼠海马中谷氨酸、γ-氨基丁酸的含量

目的建立了邻苯二甲醛（OPA）柱前衍生高效液相荧光色谱法检测大鼠海马中谷氨酸（GLU）、γ-氨基丁酸（GABA）含量的方法。方法采用AlltimaC18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,流动相为50mmol·L^-1乙酸钠（pH6.8）、甲醇、四氢呋喃梯度洗脱,流速1.0mL·min^-1。激发波长（λEx）338nm,发射波长（λEm）425nm。结果GLU、GABA线性范围分别为1.03～20.6μg·mL^-1（r=0.9992）和1.13～22.6μg·mL^-1（r=0.9997）;当信噪比为3时,GLU和GABA的检出限分别为5.27×10-4μg·mL^-1和7.35×10-4μg·mL^-1;测得精密度RSD分别为3.4%和3.5%;加样回收率分别为90%～96%,85%～91%。结论本方法简便、准确、灵敏,特异性强,重复性好,适用于海马中GLU和GABA的含量测定。     

HPLC测定大鼠海马中谷氨酸、γ-氨基丁酸的含量

目的 建立了邻苯二甲醛(OPA)柱前衍生高效液相荧光色谱法检测大鼠海马中谷氨酸(GLU)、γ-氨基丁酸(GABA)含量的方法。方法 采用Alltima C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为50 mmol·L^-1乙酸钠(pH 6.8)、甲醇、四氢呋喃梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1。激发波长(λ_Ex)338 nm,发射波长(λ_Em)425 nm。结果 GLU、GABA线性范围分别为1.03~20.6 μg·mL^-1(r=0.999 2)和1.13~22.6 μg·mL^-1(r=0.999 7);当信噪比为3时,GLU和GABA的检出限分别为5.27×10^-4μg·mL^-1和7.35×10^-4 μg·mL^-1;测得精密度RSD分别为3.4%和3.5%;加样回收率分别为90%~96%,85%~91%。结论 本方法简便、准确、灵敏,特异性强,重复性好,适用于海马中GLU和GABA的含量测定。     

川芎醇提取物对马桑内酯致痫神经元胞浆游离钙的影响

目的　研究川芎醇提取物对马桑内酯致痫神经元胞浆内游离Ca2 + 浓度 ([Ca2 + ]i)的作用 ,寻找创新中药的理论基础。方法　采用体外培养 4～ 6d的大鼠皮层神经元 ,分为生理盐水空白对照组、乙醇本底对照组、尼莫地平阳性对照组、川芎醇提取物干预组。以胞浆内Ca2 + 特异性荧光探针Fluo 3负载神经元后 ,分别加入马桑内酯 80、12 0 μg·ml-1作用 5min ,用激光扫描共聚焦显微镜动态监测药物对神经元胞浆 [Ca2 + ]的影响。结果　马桑内酯 12 0 μg·ml-1促进神经元 [Ca2 + ]荧光强度增加 ,乙醇抑制马桑内酯所致神经元胞浆内 [Ca2 + ]增加 ,尼莫地平有这种作用趋势却无统计学意义 ,川芎的醇提部分 10 0 μg·ml-1能够抑制马桑内酯导致的神经元胞浆Ca2 + 荧光强度增加 (P <0 .0 5 )。结论　川芎的醇提部分对致痫神经元有钙通道拮抗作用 ,为创新中药的发展提供细胞学基础     

中药复方962对基底前脑损毁大鼠学习记忆及兴奋性的影响

目的：研究中药复方９６２胶囊改善基底前脑损毁大鼠学习记忆功能下降的作用及对中枢兴奋性的影响。方法：采用鹅膏覃氨酸基底前脑注射造成拟阿尔茨海默病大鼠模型,实验分为假手术、模型、小剂量（０．４５ｇ／ｋｇ）、中剂量（０．９ｇ／ｋｇ）和大剂量（１．８ｇ／ｋｇ）５组。采用灌胃给药途径给药１个月,分别用水迷宫、避暗反应及旷场分析对动物学习记忆功能及兴奋性进行评价。结果：中药复方小、中剂量组均能显著缩短水迷宫游出时间（Ｐ〈０．０１）。大剂量有趋势;３个剂量组均减小错误次数（Ｐ〈０．０１）。避暗反应表明,９６２各剂量组的成绩均优于模型组,其中９６２大剂量平均错误积分及潜伏期有显著性差异（Ｐ〈０．０５）。旷场分布发现该药对模型大鼠兴奋性无显著影响。结论：中药复方９６２具有改善基底前脑损毁大鼠学习记忆能力,对兴奋性无显著影响．     

抗痫灵对大鼠杏仁核点燃效应的拮抗作用

用大鼠杏仁核点燃模型研究了抗痫灵的抗癫痫作用。每日1次电刺激杏仁基底外侧核可在第15d产生点燃效应的5期反应,刺激后放电显著延长。抗痫灵在未产生中枢镇静的剂量就能抑制点燃效应的5期反应,ED_(50)为84.7mg/kg,对刺激后放电影响较少。丙戊酸钠抑制5期反应作用较强,并能显著缩短刺激后放电时程。实验表明抗痫灵具有对抗慢性杏仁核点燃效应的作用。     

抗痫灵在大鼠肝脏中代谢的研究

用离体大鼠肝脏灌流法,研究了抗痫灵在肝脏灌流过程中的代谢规律。用高效液相色谱法由灌流液中分离、制备得到了两种代谢物,经紫外吸收光谱与质谱鉴定,确定代谢物的结构为3,4-次甲基二氧桂皮酰羟基哌啶及阿魏酰哌啶,后者经化学合成得到了进一步的确证。本文还研究了肝循环过程中抗痫灵的代谢动力学,揭示了大部份抗痫灵以原形结合贮存于肝脏中。     

复方调脂合剂对高脂血症大鼠血清apoA—I、appB100的影响

目的 观察复方调脂合剂对高脂血症大鼠血清apoA—I、apoB100的影响。方法 采用喂食高脂饲料方法复制大鼠高脂血症模型，以脂必妥为对照，检测各组大鼠血清apoA—I、apoB100的含量。结果 复方调脂合剂可显著升高模型大鼠血清apoA—I含量，降低apoB100含量。结论 复方调脂合剂通过提高apoA—I含量，增强LCAT和LPL的活性表达而调节血脂，这可能是复方调脂合剂治疗高脂血症的主要机制。     

灵芝孢子粉对戊四氮致痫大鼠脑组织BDNF表达的影响

目的:观察使用灵芝孢子粉后,癫痫点燃大鼠模型皮质和海马区脑源性神经营养因子(BDNF)的含量及神经元形态学的改变,探索癫痫发病机制以及灵芝孢子粉对癫痫的干预作用.方法:采用戊四氮(PTZ)腹腔注射制作Wistar大鼠慢性点燃模型,并将其分为空白对照组、癫痫模型组和灵芝孢子粉组,点燃后断头取脑,免疫组化染色观察BDNF含量的变化及神经元形态学的改变.结果:所有大鼠均达到癫痫模型点燃标准.使用灵芝孢子粉的中药干预组与癫痫模型组相比,脑内BDNF含量明显升高,同时神经元形态学改变明显好转.结论:灵芝孢子粉能够增强脑源性神经营养因子的表达,从而减轻癫痫发作给神经系统带来的损伤,所以灵芝孢子粉可能具有减轻痫性发作、保护神经元的作用.     

抗痫灵在大鼠肝脏中代谢的研究

用离体大鼠肝脏灌流法,研究了抗痫灵在肝脏灌流过程中的代谢规律。用高效液相色谱法由灌流液中分离、制备得到了两种代谢物,经紫外吸收光谱与质谱鉴定,确定代谢物的结构为3,4-次甲基二氧桂皮酰羟基哌啶及阿魏酰哌啶,后者经化学合成得到了进一步的确证。本文还研究了肝循环过程中抗痫灵的代谢动力学,揭示了大部份抗痫灵以原形结合贮存于肝脏中。     

同病异治复方对戊四氮慢性点燃大鼠痫性发作的影响

目的:研究癫痫"从肝论治"、"从痰论治"的复方柴胡疏肝汤及定痫丸对戊四氮(PTZ)慢性点燃大鼠痫性发作的影响。方法:建立大鼠PTZ慢性点燃的癫痫模型,选取完全点燃大鼠随机分为4组,即生理盐水组(A组)、丙戊酸钠组(B组)、定痫丸组(C组)、柴胡疏肝汤组(D组),连续灌胃给药28天,于给药第7、14、21及28天观察大鼠阵发性痉挛发作潜伏期、痫性发作级别以及强直性惊厥发生率。结果:C组与D组在各用药时间点均能不同程度延长PTZ慢性点燃大鼠的阵发性痉挛发作潜伏期,与A组相比有显著性差异(P<0.05或P<0.01),与B组作用相当(P>0.05),而C组与D组无显著性差异(P>0.05)。结论:癫痫"从肝论治"的复方柴胡疏肝汤、"从痰论治"的复方定痫丸均能明显抑制PTZ致痫大鼠的痫性发作,有明显的抗癫痫作用,但两复方在时效关系中可能存在差异。     

丙泊酚对大鼠海马突触体释放谷氨酸和γ-氨基丁酸的影响

目的观察丙泊酚对大鼠海马突触体谷氨酸和γ氨基丁酸(GABA)Ca2+依赖性释放和非Ca2+依赖性释放的影响。方法制备突触体后用人工脑脊液(aCSF)孵育,分为7组,应用丙泊酚(propofol)的浓度分别为3(Pro3组)、10(Pro10组)、30(Pro30组)、100(Pro100组)和300μmol·L-1(Pro300组),脂肪乳剂对照组加入脂肪乳(Intralipid组),空白对照组(Control组)不加入任何药物。在观察Ca2+依赖性释放时,加入二氢海人藻酸和哌啶酸;在观察非Ca2+依赖性释放的时候,去除aCSF中的Ca2+。在37℃的条件下,应用20μmol·L-1藜芦定或30mmol·L-1KCl诱发递质释放。应用反相高效液相色谱法测定aCSF中谷氨酸和GABA的浓度。结果①Ca2+依赖性递质释放:应用藜芦定时,Pro30、Pro100和Pro300组的谷氨酸和GABA释放量低于Intralipid组(P<0.01或P<0.05);应用KCl时,各组的谷氨酸和GABA释放量无差异(P>0.05)。②非Ca2+依赖性释放:各组应用藜芦定和KCl诱发的谷氨酸和GABA释放量无差异(P>0.05)。结论丙泊酚可以抑制Ca2+依赖性谷氨酸和GABA的释放,而对非Ca2+依赖性谷氨酸和GABA释放无影响。     

中药复方对糖尿病大鼠勃起功能的影响

勃起功能障碍(ED)是糖尿病常见的并发症。国外报道糖尿病患者发病率为30-70%。糖尿病ED的发病机制尚未完全阐明．近年研究表明一氧化氮(NO)在阴茎勃起中起关键神经递质作用。在本实验中我们通过观察中药对链脲佐菌素糖尿病大鼠阴茎勃起潜伏期及阴茎海绵体中一氧化氮合酶(NOS)和球海绵体肌乙酰胆碱酯酶(AchE)的影响，探讨其对糖尿病大鼠勃起功能障碍的防治作用。     

戊四氮慢性致痫大鼠海马区NF-kB、I-kBα动态表达及地塞米松的影响

目的:研究戊四氮慢性点燃大鼠即癫痫形成过程中海马区NF-Kb及其抑制蛋白I-kBα的动态变化及作用,并同时探讨地塞米松的抗痫作用机制.方法:将81只Wistar大鼠随机分为对照组(C),非用药组(P),用药组(D)即地塞米松干预组,除对照组外,均给予戊四氮(PIZ)35mg/kg·d腹腔注射.用免疫组织化学法检测不同时间点(4,7,11,15d)海马区NF-Kb、I-kBα的蛋白表达,同时行为学观察和脑电图确定痫性发作.结果:注射PIZ的各组大鼠海马区NF-Kb的表达随着注射时间逐渐增加,并于第15天达到高峰,且用药组相同时间点NF-Kb表达较非用药组减少(P<0.05); I-kBα蛋白量随着PTZ的注射逐渐减少(P<0.05),并于第15天降到最低,用药组相同时间I-kBα蛋白的减少较非用药组少(P<0.05);且地塞米松明显改善了大鼠点燃时的痫性发作程度,延长了发作潜伏期.结论:慢性癫痫的形成过程中海马区神经细胞中存在NF-Kb 的激活及其I-kBα的减少;NF-Kb介导了癫痫形成过程中的炎症反应过程,同时,地塞米松可能通过抑制NF-Kb活性发挥抗痫作用.     

中药复方制剂对实验性高脂血症大鼠血脂及血液流变性的影响

目的观察中药复方制剂(TCM)治疗大鼠高脂血症及血液流变性相关指标的作用。方法制备wistar大鼠高脂模型及急性血瘀模型，给予不同剂量的TCM，观察用药后实验动物的血脂和血液流变学等各项指标。结果TCM能降低实验性高脂模型大鼠血清中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、动脉硬化指数(AI)水平，提高高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，井能降低血瘀大鼠的多项血液流变学指标。结论TCM对Wistar大鼠实验性高脂血症有明显的治疗作用，且对血瘀大鼠的多项血液流变学指标具有改善作用。     

灵芝孢子粉对戊四氮致痫大鼠大脑皮质及海马区PCNA变化的影响

目的：探讨灵芝孢子粉对戊四氮（PTZ）致痫大鼠大脑皮质及海马区增殖细胞核抗原（PCNA）变化的影响,进一步研究癫痫的发病机制及灵芝孢子粉的干预机制。方法：免疫组织化学法（SABC法）检测皮质和海马区PCNA的免疫反应性;Western-blot检测海马区PCNA蛋白含量的变化。结果：癫痫模型组PCNA阳性细胞数目明显增多与对照组比较差异有显著性（P〈0.01）,灵芝孢子粉干预组与癫痫模型组比较PCNA阳性细胞数明显减少差异有显著性（P〈0.01）;PCNA在戊四氮致痫组的大脑海马区的蛋白含量与对照组比较差异有显著性（P〈0.01）,灵芝孢子粉干预组与癫痫模型组比较差异有显著性（P〈0.01）。结论：灵芝孢子粉可以通过调节PCNA含量抑制星形胶质细胞（AS）增生,从而影响戊四氮致痫大鼠癫痫发作的发生与发展。