血管组织工程种子细胞的建立及意义

目的：利用人Nanog基因转染血管组织工程的种子细胞（血管内皮细胞ECV304）,提高其增殖能力,以在较短时间内获得大量种子细胞,从而为克服血管组织工程种子细胞来源的匮乏及组织工程血管的快速构建提供新途径。方法：制备含有人Nanog基因的复制缺陷型重组腺相关病毒血清2型病毒颗粒rAAV2-hNanog,用rAAV2-hNanog转染ECV304细胞,然后采用RT-PCR检测hNanog基因在转染的ECV304细胞中的表达,再用MTT、免疫荧光及激光共聚焦技术检测hNanog基因对血管内皮细胞ECV304生长的影响。结果：（1）rAAV2-hNanog转染ECV304细胞后,RT-PCR检测表明hNanog基因能在血管内皮细胞ECV304中稳定表达;同时,血管内皮细胞在转染后的增殖能力也显著增强（P〈0.05）。光镜下观察发现,转染的血管内皮细胞的形态无明显改变。结论：转染hNanog基因后,血管内皮细胞的形态无显著变化,但其增殖能力明显增强。利用hNanog基因提高血管内皮细胞的增殖能力,能够克服血管组织工程种子细胞来源不足的瓶颈,为组织工程血管的快速构建及应用提供一种新的方法。     

单核细胞化学吸引蛋白质1 小分子干扰RNA人肾小管上皮细胞株的建立

目的 建立单核细胞化学吸引蛋白质1（MCP-1） 小分子干扰RNA（siRNA）人肾小管上皮细胞株，并检测MCP-1 siRNA对人肾小管上皮细胞（HKC）MCP-1基因的抑制效应。 方法 针对人MCP-1 mRNA 67、116、142位点设计并合成3对MCP-1 siRNA序列。构建MCP-1特异性siRNA真核表达载体，以脂质体法瞬时转染至HKC。转染24 h后分别应用实时定量RT-PCR及Western印迹技术检测HKC内MCP-1 mRNA、蛋白表达，筛选出抑制效率最高的MCP-1 siRNA。以筛选出的MCP-1 siRNA序列构建慢病毒穿梭质粒。使用慢病毒穿梭质粒进行慢病毒颗粒的包装和生产，得到病毒液并确定其滴度。以病毒液感染HKC，筛选MCP-1 siRNA人肾小管上皮细胞株，并应用实时定量RT-PCR及Western印迹技术检测HKC内MCP-1 mRNA、蛋白表达。 结果 成功建立MCP-1特异性siRNA人肾小管上皮细胞株。MCP-1 siRNA稳定转染能下调人肾小管上皮细胞MCP-1 mRNA (68.49±6.38)%、蛋白(72.97±6.13)%，与对照组比较差异有统计学意义(P < 0.01)。 结论 MCP-1特异性siRNA能高效抑制HKC内MCP-1基因表达。MCP-1 siRNA人肾小管上皮细胞株的建立为MCP-1基因功能及肾间质纤维化防治研究提供实验材料和依据。     

整合素连接激酶介导的高糖诱导肾小管上皮细胞纤连蛋白的表达

目的 观察在高糖刺激下纤连蛋白（FN）与整合素连接激酶(ILK) 在肾小管上皮细胞的表达情况，探讨糖尿病肾病小管间质纤维化的发病机制。 方法 以人肾小管上皮细胞株（HKC）细胞和链脲佐菌素（STZ）诱导的CD-1小鼠糖尿病动物模型为研究对象，采用Western印迹的方法检测细胞或肾组织ILK和FN蛋白的表达。通过基因转染的方法，将含无激酶活力的人ILK基因表达质粒pCMV-kdILK转染HKC细胞，观察抑制ILK活力对高糖诱导的HKC合成FN的影响。 结果 STZ注射后4周，CD-1小鼠血糖水平显著高于对照组[(20.3±2.7) mmol/L比 （6.1±1.4） mmol/L，P < 0.01]，同时，肾组织ILK和FN的表达量亦显著高于对照组，且ILK与FN表达量呈正相关(P < 0.01)。细胞培养实验证实，高糖能够刺激HKC上调ILK和FN蛋白的表达，并且呈时间和剂量依赖性。HKC细胞转染pCMV-kdILK质粒以抑制ILK的活力，能够显著地拮抗高糖刺激HKC表达FN的作用。 结论 高糖通过上调ILK蛋白增加肾小管表达并合成FN，抑制ILK能够拮抗高糖刺激HKC合成FN的作用。     

整合素连锁激酶介导转化生长因子β1上调肾小管上皮细胞表达纤连蛋白的研究

目的 研究转化生长因子β1（TGF-β1）诱导肾小管上皮细胞合成纤连蛋白（FN）与整合素连锁激酶（ILK）表达的关系.方法 培养人肾小管上皮细胞（HKC）,用蛋白印迹方法检测TGF-β1诱导HKC合成FN和表达ILK的作用.通过基因转染的方法,将含人野生型ILK基因的表达质粒pCMV-wtILK和无激酶活力的人ILK基因表达质粒pCMV-kdILK转染HKC细胞,观察ILK过度表达和抑制ILK活力对TGF-β1诱导的HKC合成FN的影响.结果 TGF-β1能够刺激HKC合成FN,其作用呈剂量依赖性.TGF-β1刺激8 h即可上调HKC细胞ILK的表达,与TGF-β1所致的FN合成的增加相一致.转染pCMV-wtILK质粒的HKC细胞,其FN的表达呈增加趋势.转染pCMV-kdILK抑制ILK的活力能够显著拮抗TGF-β1刺激HKC表达FN的作用.结论 TGF-β1刺激肾小管上皮细胞FN合成与其所致的ILK表达密切相关.抑制ILK的活力能够拮抗TGF-β1导致的FN合成.     

NNMT在肾透明细胞癌的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的:研究NNMT在肾透明细胞癌中的表达情况及对肾癌细胞侵袭能力的影响。方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测正常肾小管上皮细胞株HKC、肾癌细胞株786-O及30例肾透明细胞癌组织、相应癌旁组织中NNMT的mRNA和蛋白的表达水平,并分析NNMT的mRNA水平与临床病理参数的关系。化学合成针对NNMT特异的siRNA序列,应用脂质体Lipofectamine 2000将其转染进786-O细胞中,利用RT-PCR和Western blot法检测NNMT在786-O细胞中的表达水平,用Transwell小室法检测肾癌细胞786-O侵袭能力的变化。结果:NNMT在肾癌细胞786-O中的mRNA和蛋白表达水平显著高于正常肾小管上皮细胞株HKC(P<0.001);肾透明细胞癌组织和对应的癌旁组织中NNMT的mRNA相对表达量分别为(1.582±0.2145)、(0.1269±0.04279),两组比较P<0.001。NNMT的mRNA水平与肿瘤大小、临床分期有关(P<0.05);Tran-swell法检测结果显示降低NNMT的表达后786-O细胞的侵袭能力明显下降。结论:NNMT在肾透明细胞癌组织和细胞中表达升高,可能在肾癌发生、发展过程中发挥重要作用。     

BMP2重组慢病毒转染兔BMSCs黏附DBM支架的生物矿化研究

目的 探究BMP2重组慢病毒转染兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)黏附脱钙骨(DBM)支架体外构建转基因组织工程骨的生物矿化能力。方法 密度梯度离心及贴壁培养法获取第5代兔BMSCs,用BMP2重组慢病毒转染细胞，通过RT-PCR检测目的基因的表达，利用倒置荧光显微镜观察细胞在DBM支架上的生长情况，借助扫描电镜和能谱分析观测细胞在DBM支架上的表面微观形貌及生物矿化能力。结果 BMP2重组慢病毒成功转染兔BMSCs, RT-PCR显示转染后细胞能高效表达BMP2目的基因，在倒置荧光显微镜下观察见转染后细胞黏附在DBM支架上呈满天星样，并沿DBM支架孔隙内壁贴壁叠加生长、分裂增殖，扫描电镜下见细胞填满整个DBM支架孔隙，分泌大量细胞外基质，并在DBM支架表面形成凹凸不平的光泽结晶矿化物，能谱分析显示其钙磷比(Ca/P)为1.89±0.31,与正常骨组织成分相近(P>0.05)。结论 BMP2重组慢病毒转染兔BMSCs黏附DBM支架构建的转基因组织工程骨成功完成了生物矿化过程，体现出较好的生物矿化能力。     

Smad 6和Smad 7基因治疗对肾小管间质纤维化进程的影响

目的 观察腺相关病毒(rAAV)介导的Smad6和Smad7基因治疗对单侧输尿管梗阻性(LIUO)肾小管间质纤维化进程的影响。方法 构建产生表达Smad6和Smad7基因的无辅毒腺相关病毒载体，再将此病毒颗粒通过肾动脉途径转移到UUO模型。30只Wistar大鼠随机分为假手术组、梗阻组、LacZ AAV转染组、Smad6 AAV转染组和Smad7 AAV转染组(n=6)，于术后第3周处死大鼠。采用β-半乳糖苷酶染色和免疫组化观察外源基因的定位，Western印迹法观察外源基因、胞内磷酸化Smad2、PAI-1和α-SMA的表达；底物酶谱法检测MMP-2和MMP-9活性，分光光度法测定肾组织羟脯氨酸含量。结果 Smad6和Smad7成功地转染到外髓的肾小管间质区，定位在肾小管和集合管细胞，而血管细胞、肾小球或间质细胞均未见有AAV转移基因的表达。Smad7基因治疗可显著降低肾组织PAI-1、α-SMA的表达和肾组织羟脯氨酸含量，增加MMP-2和MMP-9活性，这些作用与Smad7阻断Smad2磷酸化有关。相反，Smad6没有这样的治疗作用。结论 Smad7基因转移能有效缓解单侧输尿管梗阻肾小管间质纤维化，AAV介导的Smad7基因转移有望成为治疗肾小管间质纤维化的方法之一。     

bcl-2高表达提高肾小管上皮细胞抗凋亡能力的研究

目的 观察凋亡相关基因bcl-2高表达抑制过氧化氢诱导肾小管上皮细胞凋亡的作用.方法 构建含有人bcl-2 cDNA的逆转录病毒真核表达载体PLXSN,脂质体法将重组质粒转染PA317细胞,G418筛选阳性克隆,鉴定后浓缩收集病毒上清,浓缩病毒液,感染人肾小管上皮细胞株HK-2,Western blot检测bcl-2 mRNA表达.5 mmol/L过氧化氢(HO2)诱导细胞凋亡后,流式细胞仪检测细胞凋亡发生变化.结果 流式细胞仪分析显示5 mmol/L H2O2:成功诱导肾小管上皮细胞凋亡,bel-2逆转录病毒感染肾小管上皮细胞后,bcl-2蛋白水平呈高表达,HK bcl-2组细胞凋亡数量(12.41±3.46)较HK-2组(19.62±4.20)显著减少(P<0.05).而转染空载体的对照组无明显变化(19.62±4.20,P<0.05).结论 bel-2蛋白高表达显著抑制氧化剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡.     

Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯对肾正常及肿瘤细胞c-myc的影响

目的 观察Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)对肾小管上皮细胞HKC及肾肿瘤细胞786-O中c-myc表达及对细胞增殖的影响.方法 通过实时定量聚合酶链反应(real-time PCR)及Western blot方法连续3次检测HKC及786-O 中c-myc的表达及DAPT处理后HKC及786-O细胞中c-myc的表达变化,并检测DAPT对细胞增殖及周期的影响.结果 786-O中c-myc表达比HKC高(2.54±0.24)倍(P＜0.01).DAPT处理后,HKC及786-O细胞中c-myc表达分别下调(1.41±0.13)和(2.93±0.26)倍(P均＜0.05);两株细胞的增殖均受到抑制,HKC及786-O G0/G1期细胞比例分别增加9.75％和16.54％(P均＜0.01).结论 Notch信号抑制剂DAPT可能通过抑制c-myc的表达而抑制肾正常及肿瘤细胞的增殖.     

结缔组织生长因子反义寡核苷酸对肾小管上皮细胞纤溶酶原激活物抑制物1表达的影响

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ODN)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)mRNA表达和蛋白产生的影响,以明确CTGF在肾脏细胞外基质(ECM)降解中的作用。方法体外培养人近曲小管上皮细胞(HKC),以脂质体介导方法将CTGF反义ODN转染细胞。以TGF-β1(5μg/L)刺激HKC不同时间后,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测PAI-1mRNA表达;流式细胞仪法检测胞内PAI-1蛋白合成;Western印迹方法检测HKC分泌到上清中的PAI-1蛋白含量。结果TGF-β1可诱导HKC高表达CTGF和PAI-1。转染后6h,CTGF反义ODN可显著抑制TGF-β1诱导的HKCPAI-1mRNA表达。转染后24h,CTGF反义ODN可明显抑制胞内PAI-1蛋白合成,并减少了HKC分泌到胞外的PAI-1。结论CTGF在肾小管间质纤维化时ECM降解中起了关键调控作用,其反义ODN的导入可能是延缓肾小管间质纤维化的有效手段之一。     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染对鼠胎肝干细胞培养的优化作用

：目的 观察以重组腺相关病毒（rAAV）为载体介导碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因转染对体外培养的鼠胎肝干细胞增殖及细胞周期的影响.方法 体外培养鼠胎肝干细胞,经rAAV作为载体介导bFGF基因转染,分为对照组、空载病毒转染组和bFGF转染组.用逆转录PCR和蛋白质印迹法检测鼠胎肝干细胞转染前、后bFGF基因和蛋白的表达.应用细胞生长曲线和CCK-8法观察细胞生长速度;采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化.结果 转染bFGF后,bFGF转染组与对照组、空载病毒转染组相比,bFGF基因和蛋白水平均有表达,细胞的生长速度增快（q=20.43,P=0.001;q=26.52,P=0.001）,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多（q=72.56,P=0.000;q=32.28,P=0.001）.结论 通过rAAV作为载体介导bFGF基因转染能促进体外培养的鼠胎肝干细胞增殖,对其培养有优化作用.     

白蛋白活化肾小管上皮细胞对肾小管周微血管的影响及机制研究

目的 探讨人类血清白蛋白（HSA）超负荷损伤肾小管上皮细胞后对肾间质微血管损伤的影响及可能机制。 方法 激光共聚焦显微镜观察肾小管上皮细胞（HKC）吞饮罗丹明标记白蛋白（TRITC-BSA）以及吞饮受体cubilin siRNA对其的抑制效应。氢化乙锭标记的荧光探针检测白蛋白刺激HKC产生O2－以及白蛋白吞饮受体cubilin siRNA和线粒体呼吸链复合物I抑制剂鱼藤酮对HKC产生O2－的抑制作用。培养上清H2O2采用化学比色方法检测。倒置显微镜下观察HSA激活的HKC以及cubilin siRNA或鱼藤酮预处理的HKC与脐静脉内皮细胞（HUVEC）共培养后血管内皮管样结构形成情况。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定内皮细胞活力。用流式细胞仪以AnnexinV FITC/PI双染法检测内皮细胞凋亡率。 结果 （1）cubilin siRNA可显著抑制HKC吞饮白蛋白(P ＜ 0.05)。（2）HSA刺激HKC产生 ROS呈剂量及时间依赖性(P ＜ 0.05)；cubilin siRNA及鱼藤酮均可抑制白蛋白超负荷诱导HKC产生大量ROS (P ＜ 0.05)。（3）HKC与HUVEC共培养体系中，HSA活化的HKC抑制内皮细胞管样结构的形成，内皮细胞增殖显著减少(P ＜ 0.05)，细胞凋亡率显著增高(P ＜ 0.05)；而cubilin siRNA和鱼藤酮干预组内皮细胞管样结构数及内皮细胞活力显著增加(P ＜ 0.05)，细胞凋亡率显著降低(P ＜ 0.05)。 结论 白蛋白可通过吞饮受体cubilin激活肾小管上皮细胞线粒体呼吸链复合物I产生大量ROS，后者可能是慢性肾病时大量蛋白尿活化肾小管上皮细胞进而损伤肾小管周微血管网的重要介质。     

纳米磁流体-单纯疱疹病毒胸苷激酶重组质粒的构建及其对胃癌细胞增殖的影响

目的研究hTERT启动子调控下单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）重组质粒的构建、在人胃癌细胞BGC823中的表达及对胃癌细胞BGC823增殖的影响。方法构建重组质粒pGL3-hTERT-tk和相应的荧光报告质粒pGL3-hTERT-tk-Luc＋：经纳米磁流体PEG-PEI／Fe304转染胃癌细胞BGC823．荧光显微镜观察细胞形态变化和转染效率．免疫组织化学（免疫组化）方法检测目的基因在胃癌细胞BGC823中的表达．M1Tr法检测胃癌细胞BGC823的增殖能力．以上实验均以正常肝细胞L02为对照。结果重组质粒pGL3-hTERT-tk构建成功,其长度为1100bp。荧光素酶标记的阳性、阴性对照及治疗报告质粒pGL3-hTERT-TK-Luc＋均能有效转染高表达端粒酶活性的胃癌细胞BGC823,转染效率为（28．1±2．3）％。免疫组化结果显示,重组质粒组胃癌细胞BGC823的细胞质中可见大量HSV-tk基因编码的表达。MqT检测结果示．转染pGL3．hTERT-tk质粒4d后．BGC823细胞增殖受抑制．其A,,值为0．254±0．011,低于L02细胞的0．322±0．013;亦低于pGL3-basic-tk转染的BGC823细胞（0．357±0．014）（均P〈0．05）。结论纳米磁流体能将重组质粒pGL3-hTERT．tk转染BGC823细胞并获得表达,PEG-PEI／Fe3O4纳米磁流体-tk可显著抑制BGC823细胞增殖。有望成为胃癌基因治疗的新型生物制剂之一。     

9型重组腺相关病毒介导抗核转录因子-κB核酶基因体外转染大鼠心肌细胞及对核转录因子-κB活性的影响

目的 观察9型重组腺相关病毒(rAAV9)介导抗核转录因子-κB(NF-κB)核酶基因(rAAV9-ECFP-R65)对大鼠心肌H9C2细胞的转染及对NF-κB活性的影响.方法 rAAV9-EGFP-R65按转染复数(MOI)1×106v.g./cell转染H9C2细胞,在倒置荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP)阳性表达,采用流式细胞仪检测转染效率.Alamar Blue法检测rAAV9-EGFP-R65对H9C2细胞增殖影响.肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、rAAV9-EGFP-R65及PDTC处理H9C2细胞,凝胶迁移滞后实验(EMSA)检测NF-κB活性.结果 转染后第1天EGFP开始表达,表达强度随着时间延长而逐渐增强,第5天达到高峰,此时流式细胞仪检测转染率为(32.27±3.19)%.Alamar Blue法检测表明转染组细胞增殖末受影响.常态下H9C2细胞NF-κB有一定活性,TNF-α刺激后NF-κB活性明显增高,而rAAV9-EGFP-R65、PDTC抑制NF-κB活性.结论 rAAV9-ECFP-R65能够有效地转染H9C2细胞,对细胞增殖无明显抑制,并能显著抑制H9C2细胞NF-κB活性.     

明胶/聚己内酯纳米纤维电纺膜在表皮组织工程中的应用

目的：观察明胶/聚己内酯（GT/PCL）纳米纤维电纺膜应用于表皮组织工程的可行性。方法测定HaCaT细胞（人类表皮细胞系）与电纺膜的生物相容性,并对于接种细胞前后该膜片的机械性能进行评价。应用CCK-8法检测细胞增殖情况。体内研究检测GT/PCL纳米纤维电纺膜构建的组织工程化表皮修复裸鼠皮肤缺损的效果。结果 HaCaT细胞能够在膜片上很好地附着和增殖,该膜片具有良好的生物相容性。机械性能测试显示,该膜片具有足够的力学特性以用于移植。体内研究表明,应用GT/PCL纳米纤维电纺膜构建的组织工程化表皮能够修复裸鼠的皮肤缺损。结论GT/PCL纳米纤维电纺膜是一种适合构建组织工程化表皮的支架材料。     

生长分化因子5基因转染诱导骨髓基质干细胞分化的研究

目的 探讨人生长分化因子5(GDF5)基因转染对骨髓基质干细胞(BMSCs)生长及分化的影响.方法 采用脂质体介导法将GDF5基因导人人BMSCs,通过MTT法和流式细胞仪分别检测细胞增殖能力和细胞周期,在光镜和电镜水平观察细胞形态,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法榆测GDF5和Ⅱ型胶原mRNA和蛋白质的表达.柠檬酸铅法检测细胞碱性磷酸酶活性,RT-PCR法检测骨钙素mRNA表达.结果 GDF5在转染细胞内得到稳定表达,转染细胞的增殖能力和细胞周期与未转染细胞基本一致.光镜下转染细胞中多角形细胞相对增多,排列方式不规则.电镜下转染细胞核呈不规则形,细胞器丰富.转染细胞Ⅱ型胶原mRNA和蛋白表达阳性,骨钙素mRNA表达阴性.结论 GDF5基因脂质体法转染BMSCs成功,转染细胞仍保持正常生长增殖特性.GDF5可诱导BMSCs向软骨表型分化,GDF5基因修饰的BMSCs可作为软骨组织上程的候选种子细胞.     

人皮肤成纤维细胞体外转染Brgl基因的实验研究

目的探讨重组Brgl基因转染人皮肤成纤维细胞的可行性,以及转染对细胞增殖和活性的影响。方法体外重组Brgl基因,借助真核表达载体系统,转入体外培养的人皮肤成纤维细胞;通过流式细胞仪检测报告基因表达,并确定细胞转染效率：应用ReahimePCR比较转染前后BrglmRNA的表达;MTT法检测Brgl基因对细胞增殖能力的影响。结果Brgl基因转染后,（73．0±6．7）％的被转染细胞表达报告基因;BrglmRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为（6．23±1．18）、（1．11±0．22）和（1．52±0．12）,转染组BrglmRNA相对表达量较未转染组及转染空载体组明显增高（P〈0．01）;细胞的增殖能力在Brgl基因转染前后无显著差异。结论人皮肤成纤维细胞可作为Brgl转染的靶细胞．转染Brgl基因对人成纤维细胞的增殖能力无显著影响。     

RNA干扰抑制KATO-Ⅲ CD133阳性胃癌细胞CD133基因表达及对其生物学特性的影响

目的 探讨CD133基因表达被抑制后对胃癌细胞增殖、侵袭、克隆球形成及化疗药物敏感性的影响.方法 通过免疫磁珠分选KATO-Ⅲ胃癌细胞中的CD133阳性细胞,将合成的CD133小干扰核糖核酸分子（siRNA）转染至KATO-ⅢCD133阳性胃癌细胞内,使用荧光标记的siRNA （FAM-siRNA）检测转染效率,通过RT-PCR、Western-blot方法检测CD133基因表达的沉默效果及上皮-间质转化（EMT）相关因子（E-cadherin、Snail和N-cadherin）的蛋白表达,采用CCK-8、Transwell侵袭实验、单克隆球形成实验和CCK- 8等方法分别检测细胞增殖、侵袭、克隆球形成能力及对化疗药物5-氟尿嘧啶（5-FU）的敏感性.结果 转染24 h后,转染效率可达到（87.7±8.1）％.干扰组CD133 mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组（P＜0.01）.转染24、48和72 h后,与阴性对照组比较,干扰组细胞的增殖活性均得到显著抑制,差异均有统计学意义（P＜0.01）;转染72 h,干扰组细胞的增殖活性较阴性对照组降低了（52.1±8.0）％.与阴性对照组比较,干扰组的细胞侵袭数减少[（41.7±6.0）比 （130.3±11.0）,P＜0.05],克隆球形成率降低[（24.3±4.3）％比（45.1±6.4）％,P＜0.01],Snail和N- cadherin蛋白表达降低（P＜0.01）,而E-cadherin蛋白表达增高（P＜0.01）.干扰组细胞对化疗药物5-FU的敏感性显著增强,5-FU对干扰组细胞的抑制率为（62.4±3.3）％,较阴性对照组的（21.5±2.2）％增加（P＜0.01）.结论 CD133基因在胃癌细胞的增殖、侵袭、克隆球形成和化疗抵抗性等方面具有重要作用,可能是胃癌干细胞新型标志物,有望成为胃癌生物治疗的新靶点.