造血生长因子在骨髓移植中的临床应用

自1966年Bradley等建立小鼠骨髓细胞体外琼脂培养技术以来,先后在来源不同的刺激因子作用下,培养出粒系、红系及巨核系造血祖细胞集落;分子生物学和遗传工程技术的发展,使其中多数因子得到分离、纯化及克隆表达,这些因子有粒细胞集落刺激因子(G—CSF)、巨噬系集落刺激因子(M—CSF)、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)及多能祖细胞集落刺激因子,即     

人干细胞因子与其它造血生长因子对造血集落形成的协同作用

本文观察了含有人造血干细胞因子(rh-SCF)的重组质粒转染的COS7上清液,在半固体培养中,单独或协同rhGM-CSF、G-CSF、IL-3、EPO刺激人粒单系和红系造血祖细胞形成集落的影响。结果表明:单独rh-SCF对造血祖细胞集落形成无明显作用,SCF主要是协同其它因子,明显增加集落形成数量和集落的大小。     

黄芪注射液影响贫血小鼠粒单系、红系造血及作用机制的探讨

目的：研究黄芪注射液对贫血小鼠粒单系和红系血发生的影响,并探讨其作用机制。方法：制备贫血小鼠模型,随机分为给药组和对照组,采用造血祖细胞体外培养等实验血液学技术。结果：一定浓度的黄芪注射液体内作用可使贫血小鼠血清集落刺激因子（CSF）水平明显升高,刺激贫血小鼠粒单系、红系造血祖细胞增殖和分化以及骨髓基质细胞增殖,使降低的骨髓有核细胞（BMC）数以及外周血象明显回升,黄芪注射液和造血细胞直接一起孵育对粒单系祖细胞（CFU－GM）和红系祖细胞（CFU－E、BFU－E）的产率无明显影响。结论：一定浓度的黄芪注射液体内作用可促进贫血小鼠粒单系和红系造血功能恢复。     

细胞因子对移植于scid小鼠体内的人不成熟细胞多系造血的刺激作用

重症联合免疫缺陷(scid)小鼠移植人的骨髓细胞后立即或在一个月后用人的肥大细胞生长因子,白细胞介素3与粒,巨噬细胞集落刺激因子的融合物或二者联合治疗,可重建小鼠骨髓,产生多种人的分化细胞。如细胞因子联合治疗方案中包含有红细胞生成素,则外周血中可出现人的红细胞。在生长因子治疗的小鼠骨髓中含多向性,髓系和红系定向祖细胞。而未用生长因子治疗的小鼠骨髓中几乎无人的细胞或仅存在粒,巨噬细胞祖细胞。因此该系统可用于测定人的不成熟细胞,研究调节这些细胞的生长因子,建立人类造血系统疾病的动物模型。     

中药对骨髓造血功能重建作用机理的研究现状

骨髓是出生后的主要造血器官。骨髓造血既需要一定数量和功能正常的适血干细胞(HSC)，又需要有利于其生长发育的造血微环境。HSC具有分化和增殖成粒-单系集落形成单位(CFu—GM)、红系爆式集落形成单位(BFU—E)、红系集落形成单位(CFU-E)、混合集落形成单位(CFU—GEMM)等多系祖细胞的功能，并与所处的微环境有密切的关系。骨髓造血微环境由基质细胞、细胞     

组织培养用于小鼠胚胎AGM区造血发育的研究

本研究通过建立组织培养方法探讨小鼠胚胎主动脉-性腺-中肾区(AGM)区造血发育规律。选取小鼠胚胎AGM区作为实验对象,体外组织培养2天后,应用集落形成实验观察髓系祖细胞的数量,应用体内移植考察CFU-S11和造血干细胞的发育。结果表明:组织培养后的AGM区细胞仍然具有形成髓系集落的能力;每个胚胎期10.5天(E10.5)AGM区在致死剂量照射的成年小鼠脾脏中可形成10.8±3.5个CFU-S11。更重要的是,经组织培养的E10.5-E11.5 AGM区能高比例(85.7%)、高嵌合〔(51.12±21.17)%〕、长期(>4个月)重建受致死剂量照射的成年小鼠的造血系统,在受鼠的外周血、骨髓、脾脏、胸腺中均能检测到供体来源的淋系或髓系祖细胞嵌合。结论:应用本研究建立的组织培养体系可对正常或基因突变胚胎AGM区中的多种造血起始细胞(尤其是造血干/祖细胞)进行发育动力学研究。     

墓头回诱导脐血基质细胞生长促粒-单系和红系造血祖细胞集落形成的研究

目的 研究中药墓头回对脐血基质细胞促粒-单系和红系造血祖细胞集落形成的影响.方法 收集12例脐血单个核细胞(MNC),加入不同浓度的墓头回水提物共培养14天,基质细胞层形成后,消化,计数;收集基质细胞最多浓度的上清液(MTH-PSCS),以不同比例与MNC共同加入集落培养基中共培养14天,计数粒-单系和红系造血祖细胞集落数.结果 0.01μg/ml的墓头回与MNC共孵育14天后,基质细胞的数量(14±2.8)×105/ml明显多于对照组(9±2.2)×105/ml.0.01 μg/ml的MTH-PSCS以0、5、10、20比例作用后,脐血粒-单系造血祖细胞集落数分别为17±6、121±24、268±27、114±31、68±11,10%的MTH-PSCS作用最为明显;脐血红系造血祖细胞集落数分别为38±12、72±23、81±9、159±45、90±32,其中以20%的MTH-PSCS作用最为明显.结论 中药墓头回可诱导脐血基质细胞的生长,可以促进粒-单系和红系造血祖细胞集落的形成.     

脂多糖对腹膜和骨髓巨噬细胞产生红系造血调控因子的影响

腹膜和骨髓巨噬细胞培养中含红系造血祖细胞增殖的刺激因子,它不但能提高红系祖细胞的产率,而且还可增加每个集落中细胞数。大肠杆菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)可提高巨噬细胞产生红系增殖刺激因子的能力。经过LPS激活的巨噬细胞培养液对晚期红系造血祖细胞增殖表现出双向调控作用,低浓度促进,高浓度抑制,其中LPS激活腹膜贴壁巨噬细胞的活性高于骨髓巨噬细胞。     

骨髓基质细胞促进γ射线照射小鼠的造血恢复

用体外骨髓贴壁细胞长期传代法,建立一株骨髓基质细胞QXMSC1,经鉴定可能为巨噬细胞来源。用5Gyγ射线照射BALB/c小鼠建立造血功能缺损动物模型,将QXMSC1细胞输入到照射小鼠体内,用半固体琼脂法测定粒-巨噬系祖细胞,甲基纤维素法测定红系祖细胞,血细胞自动计数仪测定外周血各项血液学指标。结果表明,在照射后第10天,骨髓基质细胞可增加辐射损伤小鼠骨髓有核细胞数,增加CFU-GM,CFU-E和mBFU-E集落数。在照射后第20天,可促进外周血WBC,RBC,Hct和Hb的恢复。说明骨髓基质细胞QXMSC1可促进辐射损伤小鼠造血功能恢复。此外,QXMSC1细胞条件培养上清液具有刺激体外CFU-GM集落生长的作用。     

体外诱导人类诱导性多能干细胞分化为造血干 / 祖细胞的研究简

本研究探讨体外诱导人诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cell,iPSC）分化为造血干/祖细胞的能力.在体外用小鼠骨髓基质细胞OP9与人类iPSC共培养的方法,将iPSC诱导分化为造血干/祖细胞;用流式细胞术检测造血干/祖细胞表面标志物的表达水平;用实时定量PCR检测分化过程中iPSC及造血干/祖细胞的相关基因mRNA表达水平的变化;用免疫磁珠法分离CD34＋造血干/祖细胞并进行半固体集落形成实验检测细胞的集落形成能力.结果表明,iPSC与OP9细胞共培养诱导造血分化的第4天即可观察到iPSC形态变化;流式细胞术检测显示,分化得到的细胞表达已知的造血干/祖细胞相关表面标志物CD34和CD43分子.在体外分化过程中多能性的标志基因Oct4的表达逐渐下降,造血相关转录因子Gata-2的表达逐渐升高,而Runx-1的表达量则呈波浪式变化,CD34表达量逐渐升高.集落培养14 d能够得到红系集落（CFU-E）,粒系集落（CFU-G）,巨核系集落（CFU-M）,粒-巨核系集落（CFU-GM）和混合系集落（CFU-GEMM）.结论：iPSC细胞能够在体外通过与OP9细胞共培养分化为造血干/祖细胞.     

人脐血红系祖细胞体外培养观察

<正>脐血代替骨髓移植重建造血的成功,已引起人们对脐血造血功能研究的兴趣。笔者等曾在国内首先报告了脐血粒—单核系祖细胞(CFU-GM)体外培养观察,证实人脐血富含粒单核细胞系造血干/祖细胞。通过进一步以体外甲基纤维素法培养人脐血的红系祖细胞,包括红系集落形成单位(CFU-E)和爆式红系形成单位(BFU-E),笔者观察了人脐血红系祖细胞造血情况,现将结果报告如下。     

小鼠胎肝基质细胞高活性造血刺激因子的纯化及性能研究

对我室克隆的小鼠胎肝基质细胞林(MFLSC株)的无血清培养上清中的造血活性物质进行了初步纯化。通过离子交换层析和凝胶过滤层析两步分离,从中得到一高活性的造血刺激因子,称为基质细胞造血刺激因子-1(SHF-1)。经凝胶过滤及电泳结果估测,此因子是分子量约为70kD的单体蛋白,耐碱,较耐热。在体外它对小鼠骨髓粒系、红系祖细胞、多向祖细胞及多能造血干细胞均有刺激作用。     

采用多功能流式细胞术分析分选造血干细胞和髓系定向分化祖细胞

目的 探讨富集纯化造血干细胞(HSC)和髓系定向分化祖细胞的新实验方案.方法 根据造血干细胞和定向分化祖细胞在发育过程中表达某些特异性分化抗原的特性,通过免疫磁珠分选技术结合四色和六色流式细胞术分析14只健康小鼠的骨髓造血干细胞、造血祖细胞及定向分化祖细胞系列的表达,并对其进行分选,以进一步通过集落细胞培养和传代试验对分选后细胞的活性进行检测.结果 经上述实验方案分析,14只健康小鼠骨髓造血祖细胞(HPC)的表达率约为HSC的10倍;但其牛成活性远不如造血干细胞,共同髓系祖细胞(CMP)的传代能力仅为HSC的1/2,且次级分化的粒系单核系祖细胞(GMP)和红系巨核系祖细胞(MEP)的生成活性更弱,其传代次数为零.结论 通过多色流式细胞术实验方案可以分析纯化HSC和髓系定向分化祖细胞的表达,并精确计数HSC和祖细胞.     

成骨生长肽对红系造血祖细胞的体外促增殖作用

目的：通过研究人工合成成骨生长肽(sOGP)对红系造血祖细胞的体外促增殖作用，初步探索sOGP促造血活性的作用环节。方法：将正常小鼠和人骨髓有核细胞在标准红系祖细胞基础培养基中进行培养，设定sOGP的不同浓度梯度，于培养48h后计数小鼠CFU—E集落数，培养第4天与第14天计数人CFU—E、BFU—E集落数，将数据与空白对照组及EPO阳性对照组进行比较。结果：sOGP能够有效促进小鼠CFU—E及人CFU—E、BFU—E的体外增殖，量效关系明显，其有效作用浓度范围为10^-16～10^-10mol／L，高峰浓度约为10^-14～1011^-12 mol／L，呈低浓度、广范围及双相作用的特点。但是，sOGP对红系造血祖细胞的体外促增殖效果要弱于阳性对照药EPO。结论：sOGP能够在体外有效地促进红系造血祖细胞的增殖，可能是通过对骨髓基质细胞的作用而促进造血和造骨。     

小鼠巨噬细胞对红系血祖细胞增殖的影响

应用造血祖细胞体外培养技术,观察了小鼠腹腔巨噬细胞对BFU-E和CFU-E增殖的影响。结果标明,小鼠巨噬细胞对CFU-E表现为刺激作用;对BFU-E增殖表现为刺激和抑制双重作用,提示巨噬细胞具有促红纤细胞生成素(EPO)和爆式集落促进活性(BPA)样活性。     

重组人干细胞因子对骨髓增生异常综合征长期骨髓培养和集落形成的影响

骨髓增生异常综合征(MDS)是造血干细胞异质性克隆性疾病,有报道MDS祖细胞对细胞因子刺激的反应能力有缺陷,其骨髓培养中细胞集落形成明显低于正常人。而干细胞因子(SCF)尤其是与GM-CSF、G-CSF及IL-3联合应用可显著地增加MDS病人CFU-GM的体积和集落数。尤以对红细     

不同组合细胞因子与人参总皂苷对体外培养CD34^＋细胞分化的诱导效应

背景:造血生长因子可分别作用于不同的造血细胞和细胞的不同分化阶段。红细胞生成素可促进晚期红系祖细胞的增殖分化,白细胞介素3为多潜能集落刺激因子,对多种造血细胞的分化成熟具有促进作用。目的:观察细胞因子的不同组合及人参总皂苷对CD34 细胞体外定向诱导分化为红系血细胞的影响。设计:观察对比实验。单位:重庆医科大学。材料:实验于2002-07/2004-01在重庆医科大学组织胚胎学教研室、基础医学研究所、重庆市生物化学与分子药理学重点实验室完成。正常人骨髓细胞来自第三军医大学大坪医院胸外科无血液系统疾病患者手术摘除的肋骨,所有患者知情同意。人参总皂苷和试剂由重庆中药研究所惠赠。胎牛血清、FITCCD34 抗体、FITC标记同型对照小鼠IgG1为BectonDickinson公司产品,CD71 抗体为SantaCruz公司产品,血小板生成素、Flt-3配基、干细胞因子、白细胞介素-3为SantaCruz公司产品,红细胞生成素为Amgen公司。方法:应用阴性分选策略,以StemsepTM系统从正常人骨髓细胞中分离CD34 造血干/祖细胞。经造血细胞因子不同组合(白细胞介素3 红细胞生成素、干细胞因子 白细胞介素3 红细胞生成素、Flt-3配基 血小板生成素 干细胞因子 白细胞介素3 红细胞生成素)进行液体培养,并以干细胞因子 白细胞介素3 红细胞生成素为对照组,在其中加入终浓度分别为10,20,50,70,100mg/L人参总皂苷为加药组,检测细胞总数、CD71 细胞比例;在CD34 细胞培养体系中加入不同剂量的人参总皂苷(剂量同前)为药物组,以不加人参总皂苷为对照组,通过甲基纤维素半固体培养法检测人参总皂苷诱导CD34 造血干/祖细胞向红系祖细胞(早期红系祖细胞、晚期红系祖细胞)增殖与分化能力。主要观察指标:①不同的细胞因子组CD34 细胞体外增殖情况。②人参总皂苷对CD34 细胞定向诱导分化为红系血细胞的影响。③人参总皂苷对CD34 细胞形成红系祖细胞能力的影响。结果:①各因子组合中以Flt-3配基 血小板生成素 干细胞因子 白细胞介素3 红细胞生成素细胞因子组合诱导CD34 细胞分化为红系血细胞的能力最强,2周时CD71 细胞比例为(61.20±5.31)%。②人参总皂苷20mg/L是液体培养诱导CD34 细胞向红系分化的最佳浓度,与干细胞因子 白细胞介素3 红细胞生成素协同作用CD34 细胞2周后,CD71 细胞比例从(48.39±5.07)%增加到(56.20±1.40)%。③人参总皂苷10～50mg/L均能提高CD34 细胞形成早期红系祖细胞、晚期红系祖细胞的集落产率。结论:含有Flt-3配基 血小板生成素 干细胞因子 白细胞介素3 红细胞生成素的细胞因子组合,可诱导CD34 细胞定向生成大量的红系细胞;人参总皂苷能促进CD34 细胞定向诱导分化为红系血细胞。     

胚胎干细胞来源的BL-CFC可产生高增殖潜能造血祖细胞

小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES cell)体外分化2，5—3．5天形成的拟胚体(embryoid body，EB)中可产生原始细胞集落形成细胞(blast dtony—forming cell，BL—CFC)，后具有造血和内皮细胞双向分化潜能，是目前体外实验可检测到的最早期的定向造血分化的细胞。本研究建立BL—CFC培养体系，并通过造血祖细胞集落培养、免疫荧光标记以及巢式RT—PCR鉴定单个原始细胞集落来源的贴壁细胞和非贴壁细胞的分化特点。结果表明：部分贴壁细胞吞噬DiI—Ac—LDL。并表达CD31，UEA—I，VF—cadtherin等内皮细胞特异性的表面分子；非贴壁细胞具有原始造血(primitive hematopoiesis)和(或)永久造血(definitive hematopoiesis)活性，其中20％的原始细胞集落含有高增殖潜能集落形成细胞(high proliferative potential colony—forming cell，HPP—CFC)，后能形成次级造血集落。结论：胚胎干细胞来源的BL-CFC可产生高增殖潜能造血祖细胞，但原始细胞集落来源的HPP—CFC是否具有体内造血活性有待进一步的研究证实。     

人巨细胞病毒感染致造血祖细胞增殖抑制与更昔洛韦的影响

背景:临床研究显示,骨髓移植后人巨细胞病毒感染可阻碍血小板植入、出现表型异常的外周血白细胞,导致骨髓移植失败,这可能是由于人巨细胞病毒感染直接影响了造血祖细胞所致.目的:观察更昔洛韦对人巨细胞病毒感染所致脐血粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞体外增殖抑制的影响及更昔洛韦对此的保护作用. 设计:对比观察性实验.单位:泸州医学院附属医院分子生物学实验室.对象:正常足月顺产新生儿脐血标本20例,每份10 mL,由泸州医学院附属医院妇产科提供,产妇对本实验知情同意.实验经医院伦理委员会批准.方法:实验于2004-06/2006-12在泸州医学院附属医院分子生物学实验室完成.采用脐血标本造血祖细胞培养技术,观察、计数100 TCID50人巨细胞病毒-AD169感染粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞后各祖细胞集落数,记录集落维持时间.用PCR和荧光定量PCR技术检测集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA.将7.5 mg/L更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的造血祖细胞,再分别计集落数、集落维持时间及集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA.设正常培养的造血祖细胞为空白对照组,设与含灭活性人巨细胞病毒的正常造血祖细胞培养系统为灭活对照组.主要观察指标:①祖细胞集落数、祖细胞集落维持时间.②祖细胞集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA. 结果:①集落数和集落维持时间:人巨细胞病毒感染的祖细胞集落数较对照组明显减少(P < 0.01),集落维持时间较对照组明显缩短(P < 0.01).在人巨细胞病毒感染的集落细胞内检测到人巨细胞病毒-DNA的存在;更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后,与人巨细胞病毒感染的祖细胞比较集落数明显提高,差异有非常显著性意义(P < 0.01) ,集落维持时间明显延长,差异有非常显著性意义(P < 0.05).②集落增殖提高率: 粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞、巨核系祖细胞分别为37.4%,74.2%,40.1%,67.4%,38.9%.③集落细胞内人巨细胞病毒-AD169DNA:荧光定量PCR显示更昔洛韦作用于人巨细胞病毒感染的祖细胞后核酸载量较人巨细胞病毒感染的祖细胞降低,差异有非常显著性意义(P < 0.01).结论:人巨细胞病毒-AD169株在体外能明显抑制粒-巨噬系祖细胞、红系祖细胞、淋巴系祖细胞、多向造血祖细胞及巨核系祖细胞集落细胞的增殖;在体外更昔洛韦有抗人巨细胞病毒的活性,能促进人巨细胞病毒感染的造血祖细胞增殖.     

再障病人血清爆式集落刺激活性研究进展

爆式集落刺激活性(Burst-Promoting Activity,BPA)系指一组具有造血调控作用的物质的活性。对于体外培养的早期红系造血祖细胞(BFU-E),BPA具有维持其生存、促进其增殖、分化的作用。自从Dukes和Nissen分别自再生障碍性贫血(再障)病人尿液及血清中发现较正常人为高的BPA以来,国外一些学者对BPA与再障的关系做了许多工作。下面仅就此作一文献复习。一、BPA的来源、生物学作用及其理化特性人及小鼠红系造血祖细胞是一个异质性的群体。在进行体外半固体培养时,可以产生3种不同的集落形式:早期BFU-E、晚期BFU-E及CFU-E。这3种集落分别起源于3种分