白细胞介素-18对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞的作用及意义

目的 探讨白细胞介素-18(IL-18)对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)的作用及体外对转染乙型肝炎病毒(HBV)基因的人肝癌细胞系2.2.15(HepG2.2.15)细胞HBV DNA分泌的影响。方法 分离25例正常人及25例慢性乙型肝炎患者的PBMC,在乙型肝炎核心抗原(HBcAg)及不同浓度IL-18刺激下培养72h,收集其培养上清液,采用酶联免疫试验办法检测其中干扰素γ(IFN-γ)的含量;收集1例慢性乙型肝炎患者的PBMC,与已培养了24 h的HepG2.2.15细胞共孵育,经过不同浓度的IL-18刺激培养96h后,收集其培养上清液,采用聚合酶链反应(PCR)检测HBV DNA的含量。结果 PBMC在HBcAg联合0.2、1.0、5.0ng/ml的IL—18刺激下,慢性肝炎组培养上清液中IFN-γ的水平均较正常对照组明显增高(0.2ng/ml组:t 11.7,P<0.01;1.0ng/ml组:t-16.19,P<0.01;5.0ng/ml组:t-20.12,P<0.01);在HBcAg联合IL-18和IL-12刺激下,慢性肝炎IFN-γ的水平亦较正常对照组明显增高,分别为(1313.20±187.76)pg/ml和(390.75±43.23)pg/ml,t—23.94,P<0.01;在慢性肝炎轻、中、重度患者中,单独HBcAg刺激组与HBcAg联合不同浓度的IL-18刺激组相比,联合刺激组的IFN-γ的水平均较单独刺激组增高;HBcAg联合IL-18刺激组与联合IL-12和同一浓度的IL-18刺激组相比,IFN-γ的水平后者显著高     

IL-4对重型肝炎患者外周血单个核细胞IL-1α表达调节的研究

目的评价ＩＬ－４在重型肝炎治疗中的潜在应用价值。方法应用免疫组化法和半定量ＲＴ－ＰＣＲ系统地观察ＩＬ－４对重型肝炎患者ＰＢＭＣｓＩＬ－１α表达的影响。结果ＩＬ－４在蛋白质和ｍＲ－ＮＡ水平明显抑制ＬＰＳ诱导的亚急性和慢性重型肝炎患者ＰＢＭＣｓＩＬ－１α的产生，这种抑制作用呈剂量和时间依赖的方式。ＩＬ－４于１００Ｕ／ｍｌ时开始出现抑制效应，于１０００Ｕ／ｍｌ时抑制作用接近最大。虽然ＩＬ－４对慢性重型肝炎患者ＰＢＭＣｓＩＬ－１α的抑制作用略低，但与未经ＩＬ－４处理的ＰＢＭＣｓ相比较，ＩＬ－１α的表达水平仍明显下降。结论ＩＬ－４对亚急性和慢性重型肝炎ＰＢＭＣｓＩＬ－１α的表达均具有较强的下向调节作用，在重型肝炎的治疗上可能具有潜在的应用价值，值得进一步研究。     

皮肌炎患者外周血单个核细胞中白细胞介素-2白细胞介素-10和干扰素-γ mRNA的表达

皮肌炎 (ｄｅｒｍａｔｏｍｙｏｓｉｔｉｓ,ＤＭ)同系统性红斑狼疮 (ｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ,ＳＬＥ)是一类有体液免疫功能显著异常及血清中存在多种自身抗体的免疫异常性疾病 ,其抗体的产生有赖于Ｔ细胞的活化 ,而Ｔ细胞可通过一些细胞因子作用于Ｂ细胞及其他细胞影响抗体的免疫应答 ,所以在这类疾病中普遍存在着细胞因子的分泌异常。目前认为Ｔｈ1/Ｔｈ2型细胞因子的动态平衡在自身免疫病的发生、免疫调节、细胞增生和分化等方面具有重要的生物学意义。我们采用逆转录—聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)方法对Ｄ…     

慢性HBV感染者外周血单个核细胞中白细胞介素-12 mRNA的表达

１．资料与方法：（１）病例为我科２０００年２－８月收治的５１例门诊及住院慢性ＨＢＶ感染者,男４２例,女９例,平均（３５±８）岁。诊断按１９９５年全国病毒性肝炎诊断标准,排除ＨＣＶ、ＨＤＶ、ＨＩＶ感染。（２）外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）总ＲＮＡ提取及ＩＬ—１２ Ｐ４０ ｍＲＮＡ基因扩增：常规分离ＰＢＭＣ按ＲＮＡ提取试剂盒（Ｐｒｏｍｅｇａ公司）操作说明提取ＰＢＭＣ中总ＲＮＡ;一步法ＲＴ－ＰＣＲ（试剂盒购于Ｑｕｉａｇｅｎ公司）进行ＩＬ－１２ Ｐ４０和β肌动蛋白（β－ａｃｔｉｎ）基因扩增,引物序列为ＩＬ－…     

白细胞介素-17在狼疮性肾炎外周血单个核细胞上的表达及意义

目的　探讨白细胞介素 - 17(IL - 17)在狼疮性肾炎患者 (LN)外周血单个核细胞 (PBMC)表达和分泌及其与LN疾病活动性的关系。方法　用酶联免疫吸附法 (ELISA)检测LN活动期患者血浆及PBMC体外自发培养或刺激培养的上清液中IL - 17蛋白水平 ,流式细胞仪免疫荧光分析法检测PBMC表达IL - 17的水平 ;用逆转录 -聚合酶联反应 (RT -PCR)法测定LN活动期患者PBMC体外自发培养和刺激培养后的IL - 17mRNA的表达水平。结果　LN活动期患者血浆检测不出IL - 17(<5ng/L) ;PBMC自发培养和PHA刺激培养下 ,LN活动期、LN静止期和正常对照 ,三组均检测不出IL - 17;而PBMC在CD3mAb +CD2 8mAb和PMA +ionomycin刺激培养下 ,较自发培养和PHA刺激培养 ,上述 3组IL - 17水平均明显升高 (P <0 .0 1) ,LN活动期PBMC表达、分泌IL - 17水平与SLE疾病活动指数 (SLEDAI)呈明显正相关。结论　LN活动期患者PBMC表达、分泌IL -17水平存在明显异常 ,并能反映LN疾病活动程度     

慢性乙型肝炎外周血单个核细胞白细胞介素2受体的含量

慢性乙型肝炎外周血单个核细胞白细胞介素２受体的含量严玉兰，吴广利，张树林，陈太平，赵英仁，李义方不同临床类型的乙型肝炎患者血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平均较正常对照明显升高，血清ｓＩＬ－２Ｒ水平与肝损害程度明显相关。但对不同临床类型的...     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞穿孔素表达与干扰素抗病毒疗效的关系

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者干扰素(IFN)治疗前、后外周血单个核细胞(PBMC)中穿孔素表达情况,探讨其对IFN抗病毒疗效的影响。方法采用免疫细胞化学技术检测35例CHB患者IFNα-2b治疗前、后PBMC中穿孔索的表达。结果IFNα～2b治疗前、后PBMC穿孔素的表达分别为7．9%±4．6%和15．3%±6．4%,较治疗前明显上升,t=6．53,P＜0．01,差异有统计学意义。IFNα-2b治疗后完全应答者有12例、部分应答者14例、无应答者9例。IFN治疗后完全应答组穿孔索的表达为19．2%±5．2%,部分应答组为14．2%±5．5%,无应答组为11．7%±6．7%,完全应答组与部分应答组比较,t=2．33,P＜0．05；完全应答组与无应答组比较,t=2．89,P＜0．01,差异有统计学意义。结论CHB患者IFN治疗可以使PBMC中穿孔素的表达升高,PBMC中穿孔素的表达可能与IFN抗病毒疗效有密切的关系。     

性慢乙型肝炎外周血单个核细胞白细胞介素—18mRNA的表达及动态观察

我们对慢性乙型病毒性肝炎患者活动期及缓解期进行外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)白细胞介素 (ＩＬ) 18诱生的研究 ,以探讨ＩＬ 18在乙型病毒性肝炎中的作用。一、材料与方法1 研究对象 :随机选取我科住院的乙型肝炎病毒感染者 33例 ,并对其中 30例进行动态观察。我科门诊ＨＢｓＡｇ阳性无症状携带者 15例。所有病例的诊断均符合 1995年第五次全国传染病与寄生虫学术会议修订的病毒性肝炎诊断标准 ,并排除合并其他型病毒性肝炎。 33例慢性肝炎患者均有肝组织病理诊断 ,肝组织炎症程度分为 4级 ,标准同上。以 10例健康献血员为正常对照。2 .标…     

白细胞介素-17在系统性红斑狼疮外周血单个核细胞中的表达

白细胞介素 17(ＩＬ 17)在一些自身免疫性疾病如移植肾排斥反应、类风湿关节炎等存在表达和分泌异常 ,但在系统性红斑狼疮 (ＳＬＥ)患者中 ,其表达及分泌是否异常 ,尚不清楚[1] 。我们通过测定ＳＬＥ患者血浆 ,无刺激或加不同刺激培养外周血单个核细胞 (ＰＢＭＣ)上清液ＩＬ 17蛋白水平和其ＰＢＭＣ内ＩＬ 17ｍＲＮＡ水平的表达量 ,了解ＳＬＥ患者ＰＢＭＣ表达、分泌ＩＬ 17有无异常及其与ＳＬＥ疾病活动性的关系。一、材料和方法1.病例选择 :30例患者 ,全部符合美国风湿病协会 1982年ＳＬＥ诊断标准。入院前均未使用激素及其他免疫抑制剂 ,…     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞内HBV DNA存在的意义

目的探讨外周血单个核细胞（PBMC）内HBVDNA与HBV标志物的关系及在慢性肝病发展过程中的作用．方法应用RCR技术结合斑点杂交技术测定血清HBVDNA及PBMC内HBVDNA血清学标志物采用ELISA法结果在HBsAg＋，HBeAg十组48例中，血清与PBMC内HBVDNA阳性检出率分别为93．8％和83．3％；在HBsAg＋，抗-HBe 组41例中，其阳性检出率分别为48．8％和58．5％.两组间存在显著性差异（P＜0．01）在其他各组中血清及PBMC内HBVDNA检出率均较抵有6例呈单纯PBMC内HBVDNA阳性.在不同类型慢性乙肝患者中，CSH和CMoH组PBMC-HBVDNA检出率分别为78．6％和61．8％，与CMiH组（25．0％）、ASC组（14．3％）比较，存在非常显著性差异（P＜0．01），呈随病情加重而检出率增高的趋势结论PBMC清除HBVDNA较血液缓慢，在病毒持续感染及造成肝细胞损伤过程中可能起一定作用．     

慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体2和4的变化

目的探讨慢性乙型肝炎和慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体2 （TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的变化情况及其意义。方法用流式细胞仪检测正常对照、慢性乙型肝炎患者和慢性重型乙型肝炎患者外周血单核细胞表面TLR2和TLR4的表达,ELISA法检测上述患者血清TNFα的水平。Student-t检验比较3组间TLR2、TLR4和TNFα表达的差异;3组病例TLR2、TLR4的表达水平间及它们与血清TNFα水平间的相关性分析采用线性相关分析。结果正常对照组（30例）、慢性乙型肝炎组（31例）和慢性重型乙型肝炎组（30例）外周血单核细胞TLR2和TLR4的平均免疫荧光强度（MFI）分别为21．5±2．7、39．0±4．1．47．7±21．4和2．3±1．1、3．7±2．3、6．9±4．1;外周血清TNFα（ng／L）水平分别为53．8±38．1、164．3±89．9、359．8±1 40．0,自正常对照组到慢性乙型肝炎组及慢性重型乙型肝炎组外周血单核细胞TLR2、TLR4表达强度和外周血清TNFα水平均依次显著升高;经线性相关分析研究发现,外周血单核细胞TLR2、TLR4表达水平和血清TNFα表达水平间均呈现显著的正相关性。结论TLR2和TLR4可能与慢性乙型肝炎及慢性重型乙型肝炎的发病有关。     

慢性乙型重型肝炎患者外周血单个核细胞衍生的树突状细胞表型与功能

目的 通过检测慢性乙型重型肝炎(CSHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)衍生的树突状细胞(MoDC)经聚肌胞苷酸刺激后表型变化及细胞因子分泌情况,了解MoDC的免疫调节功能及其在慢性乙型肝炎(CHB)重症化中的作用.方法 采集CSHB组患者37例、CHB组患者20例和健康对照者20例的外周血,分离PBMC,免疫磁珠细胞分选法获得纯化的PBMC,体外培养诱导为未成熟树突状细胞(iDC),聚肌胞苷酸刺激为成熟树突状细胞(mDC).流式细胞术检测iDC及mDC细胞表面人类白细胞DR抗原(HLA-DR)、CD83、CD86、CD80的平均荧光强度(MFI);ELISA测定聚肌胞苷酸刺激后12、24、48 h的MoDC培养上清液中IL-12、IL-6、TNF-α分泌水平.多组间比较采用单因素方差分析,并进行方差齐性检验.结果 3组iDC表面HLA-DR、CD83、CD86、CD80的MFI比较,差异无统计学意义.CSHB组患者mDC表面HLA-DR、CD83、CD86、CD80的MFI与CHB组、健康对照组比较,显著低下(F值分别为59.73、13.95、34.80和73.02,均P＜0.05).聚肌胞苷酸刺激12、24、48 h时IL-12分泌量为:健康对照组＞CHB组＞CSHB组(F值分别为151.34、126.65、72.76,均P＜0.05),其中24 h时分泌量最高,分别为(48.2±7.6)、(56.7±11.8)、(97.8±16.2)ng/L.IL-6在上述3个时间点的分泌量为:CSHB组＞CHB组＞健康对照组(F值分别为92.50、86.89、64.57,均P＜0.05),其中12 h分泌量最高,分别为(1698.3±340.4)、(965.8±231.7)、(697.8±213.6)ng/L.TNF-α在上述3个时间点的分泌量为:CSHB组＞CHB组＞健康对照组(F值分别为58.66、122.36、44.73,均P＜0.05),24 h表达量分别为(19 672.7±4214.7)、(9946.1±2586.5)、(6659.2±955.8)ng/L.结论 CSHB患者MoDC成熟障碍,表现为IL-12分泌低下,而IL-6及TNF-α分泌亢进,可能是加剧肝脏炎性反应致重型肝炎的重要因素.     

慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞丙型肝炎病毒感染研究

目的 以分子生物学、免疫学有电镜等技术对慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣｓ进行综合检测,以证实其受ＨＣＶ感染,并试图在电镜下发现和证实感染细胞内ＨＣＶ颗粒。方法 对逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和免疫组织化学等技术分别检测患者ＰＢＭＣｓ内的ＨＣＶ ＲＮＡ和ＨＣＶＡｇ,以常规和免疫电镜技术观察研究感染细胞内ＨＣＶ的形态、定位和超微结构。结果 ＨＣＶ ＲＮＡ阳性检出率为７７．２％（１７／２２）,ＨＣＶＡｇ     

穿心莲内酯对慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞的免疫调节作用

目的 探讨穿心莲内酯对体外培养慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)表达Th1细胞因子IFN-γ mRNA及Th2细胞因子IL-4 mRNA和IL-10 mRNA的影响及其抗HBV的活性.方法 分别应用穿心莲内酯10mg/L(实验组)及0.1%二甲基亚砜(对照组)加入细胞培养液中刺激CHB患者PBMC.不同浓度穿心莲内酯(实验组)及阿德福韦(对照组)刺激HepG2.2.15细胞系,实时荧光定量PCR检测处理后PBMC的IFN-γ tuRNA、IL-4 mRNA及IL-10mRNA表达水平及HepG2.2.15细胞系HBV DNA复制水平.结果 穿心莲内酯10 mg/L处理16 h后,实验组PBMC的IFN-γ mRNA表达水平高于对照组(Z=-2.78,P=0.05),IL-4 mRNA及IL-10 mRNA的表达水平明显低于对照组(Z=-3.82,P<0.01),IFN一γ/IL-4 mRNA的比例较对照组明显提高(Z=-3.82,P<0.01),不同浓度穿心莲内酯对HepG2.2.15细胞系HBV DNA复制无明显影响(t=11.88,P>0.05),而阿德福韦对HBV DNA有抑制作用(t=15.95,P<0.05).结论 穿心莲内酯对CHB患者PBMC内IFN一γ mRNA、IL-4 mRNA及IL-10 mRNA的表达水平有调节作用,改善Th1/Th2平衡,对HBV DNA无直接抑制作用.     

Toll样受体4在慢性乙型肝炎病毒感染者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的了解慢性乙型肝炎、肝硬化、重型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）中Toll样受体4（TLR4）的作用。方法采用流式细胞术及反转录-PCR方法分别检测37例慢性乙型肝炎，28例肝硬化，31例慢性重型肝炎患者及27例健康对照者PBMCTLR4蛋白及mRNA的表达；同时检测患者肝功能、凝血酶原活动度（PTA）、血常规及HBVDNA滴度。结果各实验组TLR4蛋白及mRNA的表达均明显高于健康对照组（P〈0．05）；TLR4蛋白的表达水平与TLR4mRNA的表达量显著正相关（r=0．897，P〈0．01），且与患者的ALT、AST、TBil及中性粒细胞百分比之间呈正相关性（r值分别为0．475、0．558、0．924、0．443），而与Alb、PTA及HBVDNA之间呈负相关（r值分别为-0．927、-0．902、-0．272）。结论慢性HBV感染患者外周血TLR4蛋白及mRNA表达的增高与患者的肝脏损害密切相关。     

慢性乙型重型肝炎患者外周血单个核细胞B7/CD28分子的表达及意义

为了解慢重型肝炎肝损伤中B7／CD28共刺激途径的作用，我们应用流式细胞技术（FCM），检测慢性乙型重型肝炎（CSHB）及慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单个核细胞（PBMC）中淋巴细胞和单核细胞上表达B7／CD28共刺激分子的情况，并探讨其临床意义。