Neuritin基因高表达系统构建及转染大鼠雪旺细胞的鉴定

目的构建neuritin基因的高表达系统,观察其转染雪旺细胞后neuritin的表达。方法根据大鼠neuritin mRNA序列体外合成编码序列(CDS区),构建到pGH载体,与酶切后的GV208-绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体片段进行连接、转化、酶切及测序鉴定重组克隆。提取阳性克隆,转染入293T细胞,包装成慢病毒,以此感染大鼠雪旺细胞。将雪旺细胞分为三组:空白对照组(A组)、无意义干扰组(B组)、高表达组(C组)。实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验检测细胞neuritin的表达。结果大鼠neuritin正确插入慢病毒载体,C组neuritin mRNA水平显著高于A组、B组(P<0.01)。检测到neuritin蛋白与GFP的融合蛋白。结论成功构建neuritin慢病毒高表达系统;其转染的雪旺细胞neuritin表达升高。     

大鼠雪旺细胞Neuritin的表达

目的 探讨体外培养大鼠雪旺细胞Neuritin的表达.方法 体外培养和纯化大鼠雪旺细胞,用 RT-PCR 和 Western blot 方法分别鉴定Neuritin在雪旺细胞转录和翻译水平的表达.结果 Neuritin在雪旺细胞的转录和翻译水平均有表达,分为细胞内和分泌性两种.结论 Neuritin在大鼠雪旺细胞有表达.     

胰岛素样生长因子-1及其受体在肺癌中的表达

目的研究胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及其受体在各种类型肺癌中的表达。方法应用免疫组化法对非小细胞肺癌和小细胞肺癌及其癌旁组织和正常肺组织进行IGF1及其受体的检测。结果IGF-1及IGF-1受体在鳞癌、腺癌、小细胞癌和癌旁肺组织中均有不同程度的表达。在伴有淋巴结转移的肺癌组织中的表达较强。结论IGF-1及其受体在不同类型肺癌中均有表达,可能在肺癌的发生发展中发挥一定的作用。     

雌孕激素对大鼠成骨细胞胰岛素样生长因子-1 mRNA及其蛋白表达的影响

目的 研究17β-雌二醇（E）、孕酮（P）和E、P联合应用对体外培养的大鼠成骨细胞（OB）胰岛素样生长因子－1 mRNA及其蛋白表达的影响。方法 分离并培养大鼠OB,传代后分4组：对照组培养液中不含激素，E组含E10^-8M,P组含P10^-7M,E P组含E10^-8M＋P10^-7M，每48小时换液一次，共3次。用RT－PCR方法测定OB中IGF-1 mRNA含量，用ELISA法测定无血清培养液中游离IGF－1浓度。结果 E组IGF－1 mRNA含量低于对照组（P＜0.01），而P组与对照组相似（P＞0.05）；E组及P组培养液中游离IGF－1浓度皆分别低于对照组（P＜0.01）；E＋P组IGF－1 mRNA含量及游离IGF－1浓度与对照组之间比较无统计学差异（P＞0.05）。结论 OB能合成IGF－1；E、P均降低体外大鼠OB培养液中游离IGF－1浓度，E抑制IGF－1mRNA基因转录，P作用于转录后的环节；E＋P则能逆转E或P的上述单独作用。     

大鼠雪旺细胞Neuritin基因shRNA表达载体构建及其体外抑制效应

目的构建针对大鼠neuritin基因的短发夹状小干扰RNA(shRNA)表达载体,并研究该载体对neuritin基因表达的沉默效应及雪旺细胞生存的影响。方法设计并合成neuritin靶向siRNA序列,连接pGCSIL-GFP慢病毒表达载体后,将neuritin基因干扰质粒和重组表达质粒共转染入293T细胞,包装成慢病毒,以此感染大鼠雪旺细胞,分为空白对照组(A组)、无意义干扰组(B组)和干扰组(C组)。RT-qPCR、Western blot及Annexin V/PI方法分别检测细胞neuritinmRNA、蛋白表达及细胞凋亡情况。结果与A、B组相比,C组雪旺细胞neuritin mRNA和蛋白表达水平降低,而细胞凋亡明显增加(P<0.01或P<0.05)。结论成功构建neuritin基因shRNA慢病毒表达载体。其转染的雪旺细胞neuritin基因表达受抑制,并导致细胞凋亡增加。     

胰岛素样生长因子1稳定表达CHO细胞株的建立

目的 建立稳定的高效表达胰岛素样生长因子1(IGF-1)的中国仓鼠卵巢细胞株(CHO),以便于大量生产纯化IGF-1蛋白.方法 采用脂质体将IGF-1的表达载体pSec-IGF-1导入CHO-K1细胞中.转染后用含潮霉素B(hygromycin B)的选择性培养液进行筛选,挑取耐药克隆,收集细胞培养上清,用Western blot法及ELISA法进行检测,并用免疫组化法对阳性克隆进行分析.结果 转染细胞在选择性培养液中生长出多个耐药克隆,Western blot检测示8个克隆表达上清出现与预计值相符的约7.7kDa的特异性条带;ELISA结果显示有2株表达量在2.0μg/ml以上;免疫组化检测,筛选到的阳性克隆细胞有IGF-1的表达.结论 建立了稳定的高效表达IGF-1的CHO细胞株.     

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆及其表达

目的获得大量高纯度、具有生物学活性的人胰岛素样生长因子 1(hIGF 1) ,构建hIGF 1原核表达载体 ,并进行表达与纯化。方法以pUCIGF质粒为模板 ,PCR扩增了hIGF 1基因。经适当酶切后 ,构建表达载体pRSET IGF ,转入大肠杆菌BL2 1(DE3)进行表达 ,并经阴离子交换色谱、疏水色谱和凝胶过滤纯化。结果带有重组质粒pRSET IGF的大肠杆菌经IPTG诱导后 ,以可溶性形式表达 7.8kD大小的蛋白 ,其表达量占菌体总蛋白量的10 %～ 2 0 % ,纯化后目的蛋白纯度达 95 %以上 ,Western印迹表明重组蛋白具有hIGF 1抗原活性。结论构建了pRSET IGF重组质粒 ,并成功地在大肠杆菌中获得可溶性表达 ,为获得大量基因工程产品奠定了基础     

早产儿胰岛素样生长因子-1和胰岛素样生长因子结合蛋白-3早期检测的临床意义

目的:研究早产儿早期胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)水平,指导围产期临床孕产妇及早产儿合理营养干预。方法:对145例早产儿生后3天内进行IGF-1I、GFBP-3测定,将其按小于胎龄儿与适于胎龄儿、小早产儿(小于34周)与晚期早产儿(大于34周)、双胞胎大体重与小体重3种方式对比分组,分别比较IGF-1I、GFBP-3水平。结果:145例早产儿生后3天内监测IGF-1I、GFBP-3值显示适于胎龄儿组明显高于小于胎适龄儿组,大于34周组明显高于小于34周组,大体重组明显高于小体重组,组间比较有极显著性差异(P<0.01)。结论:应加强围生期孕产妇管理,避免早产和胎儿宫内发育迟缓发生,早产儿、小于胎龄儿生后应尽早给予合理营养支持。     

胰岛素样生长因子-1在乳腺癌组织中的表达

目的探讨乳腺癌组织中胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的表达及其与乳腺癌发生发展的关系。方法应用RT—PCR方法对70例乳腺癌患者的癌、癌旁组织中的IGF-1mRNA的表达进行检测，以配对乳腺正常乳腺组织为对照。结果IGF-1mRNA在乳腺癌组织中的表达明显高于配对癌旁及正常组织，IGF-1／β—actin比值分别为0.679&#177;0．075、0．463&#177;0．085、0．305&#177;0.031，三组组间比，差异有统计学意义（P〈0.05）；IGF-1表达与乳腺癌的淋巴结转移、病理分期及ER状态显著相关（P〈0．05），与肿瘤病理分型无显著相关（P〉0．05）。结论IGF-1在乳腺癌组织中高表达与乳腺癌的发生发展及转移有关。     

胰岛素样生长因子-1和阿尔茨海默病的关系研究进展

胰岛素样生长因子-1(IGF-1)是一种与机体组织分化、增殖和成熟有关的重要细胞因子。IGF-1具有保护神经细胞、抑制其凋亡的作用。近年来的研究证明IGF-1和阿尔茨海默病的发生、发展有关,IGF-1有可能作为神经保护剂用于阿尔茨海默病的治疗。     

人胰岛素样生长因子-l的原核表达和纯化

目的构建高表达、易纯化的人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)工程菌。方法采用pET32a(+)质粒构建带羟胺裂解部位的表达载体,转入大肠杆菌DH5α进行诱导表达。表达产物经镍离子-亲和柱色谱分离后进行羟胺裂解。裂解产物纯化后用MALDI-TOF-MS法测定相对分子质量(Mr)。结果重组质粒序列完全正确。工程菌可表达预计Mr的融合蛋白,经Western blot证实有hIGF-1抗原活性。经镍离子-亲和柱色谱分离、羟胺裂解后得到的肽的Mr为7 640,和理论值相符。结论成功构建了表达hIGF-1的工程菌,为开发hIGF-1奠定了基础。     

血清胰岛素样生长因子-1与早产儿视网膜病发生的关系

目的 检测早产儿生后血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的浓度变化,探讨其与早产儿视网膜病（ROP）发生的关系.方法 以我院收治的胎龄＜34周或出生体重＜2000g的早产儿为研究对象,按有无ROP发生分组,有ROP的30例设为ROP组,无ROP的选30例设为早产对照组.所有入选研究对象分别在生后1周及纠正胎龄32周、34周、36周、40周时收集外周静脉血,检测血清IGF-1水平.同时选取30例健康足月新生儿作为足月对照组.结果 两组早产儿在纠正胎龄40周前血清IGF-1水平均随周龄的增长呈上升趋势.ROP组在生后1周及纠正胎龄32、34、36周时血清IGF-1水平均明显低于早产对照组（P＜0.05）.ROP组及早产对照组在生后第1周时IGF-1浓度低于足月对照组（P＜0.05）.在纠正胎龄40周时三组IGF-1水平差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 早产儿生后早期低IGF-1水平可能导致早产儿ROP的发生,于生后早期提高早产儿血中IGF-1浓度或许能有效防治ROP的发生发展.     

胰岛素样生长因子1及其受体在不同程度子宫内膜组织中的表达

目的检测胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及其受体（IGF-1R）在不同程度子宫内膜组织中的表达，探讨两者在子宫内膜癌诊断中的意义。方法应用免疫组织化学技术检测两者在实验组及对照组中的表达。结果IGF-1阳性表达在各组间有相应增加趋势，并且线性趋势卡方检验差异有统计学意义（X^2=14．461，P〈0．05），IGF-1R在正常和癌两种子宫内膜组织中的阳性表达率分别为60．0％和67．5％，差异无统计学意义（X^2=0．487，P〉0．05）；过度表达率分别为0和10．0％，差异有统计学意义（X^2=4．211，P〈0．05）。结论IGF-1／IR表达与子宫内膜病变有关，可作为子宫内膜癌的一个检测指标。     

血清胰岛素样生长因子1在骨折合并脑损伤患者血清中的表达及其意义

目的 探讨血清胰岛素样生长因子1（IGF-1）在骨折合并脑损伤中的表达及其意义.方法 选择2011年11月至2012年12月在成都医学院第一附属医院住院患者30例,根据其受伤情况分为3组,单纯骨折组、骨折合并脑外伤组及单纯脑外伤组,每组10例.正常对照组10例为门诊体检的健康人群.每例于伤后6h内（超过6h者于入院时）、24、72、168 h,正常对照组于体检时、体检后24、72、168 h抽取外周静脉血5 ml,使用抗体芯片技术测定IGF-1的浓度.结果 伤后6、24、72、168 h,单纯脑外伤组IGF-1含量分别为（2.13 ±0.21）、（2.22±0.19）、（2.94 ±0.22）、（5.31±0.22） μg/L;单纯骨折组分别为（2.08±0.18）、（2.30±0.21）、（3.02 ±0.27）、（5.24±0.30） μg/L;脑损伤合并骨折组含量分别为（3.91±0.23）、（5.42±0.21）、（8.54±0.23）、（13.11±0.28） μg/L;正常对照组体检时、体检后24、72、168 h IGF-1含量分别为（2.11±0.19）、（2.05 ±0.17）、（2.10±0.20）、（2.08±0.17） μg/L.单纯脑外伤组和单纯骨折组伤后72 h血清IGF-1含量分别为正常对照组的1.4、1.4倍,168 h分别为正常对照组的2.5、2.5倍.骨折合并脑外伤组伤后6h血清IGF-1含量较正常对照组即明显升高（P＜0.05）,为正常对照组的1.9倍,24 h为正常对照组的2.6倍,72 h可达正常对照组的4.1倍,168 h可达正常对照组的6.3倍.骨折合并脑外伤组与单纯骨折组或单纯脑外伤组IGF-1水平比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 骨折合并脑外伤患者IGF-1含量早期即明显升高,提示IGF-1在早期即加速骨折愈合.     

糖尿病微血管病变患者血清胰岛素样生长因子-1的变化研究

目的探讨糖尿病微血管病变的发病机制,为临床糖尿病微血管病变的防治提供依据。方法选择74例2型糖尿病患者和15名健康对照,常规测量身高、体重、血压;检测血糖、空腹胰岛素、糖化血红蛋白、血脂、尿白蛋白排泄率;利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测所有研究对象血清胰岛素样生长因子(IGF-1)水平;经眼科专人眼底镜检查及荧光眼底血管造影检查。结果①糖尿病患者血清IGF-1水平明显高于对照组。②糖尿病合并微血管病变时血清IGF-1水平明显高于无微血管病变组,且血清IGF-1水平与糖尿病微血管病变的严重程度呈正相关。结论血清IGF-1水平可以反映糖尿病微血管病变的严重程度,对糖尿病微血管病变的诊断有参考价值,并可作为糖尿病微血管病变治疗的新靶点。     

乳腺癌患者血清胰岛素样生长因子-1术前及术后水平检测意义研究

目的 检测乳腺癌患者术前及术后血清胰岛素样生长因子-1的水平.方法 应用双位点免疫放射测定法(IRMA)对不同TNM分期的49例乳腺癌患者术前、术后外周血中IGF-1水平进行检测,20例健康志愿者设为正常对照.结果 乳腺癌患者手术前后血清IGF-1水平均高于正常对照(P<0.05),手术前后乳腺癌患者血清IGF-1水平差异无统计学意义(P>0.05).结论 乳腺癌患者血清IGF-1参与乳腺癌的发病过程,是乳腺癌发生、发展过程中的重要因子.     

单侧输尿管结扎大鼠肾组织胰岛素样生长因子-1表达及其与肾间质纤维化的相关性研究

目的研究单侧输尿管结扎(UUO)模型中胰岛素样生长因子-1(IGF-1)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达趋势及其与肾间质纤维化的关系,以及用胰岛素增敏剂曲格列酮的干预效果。方法采用UUO模型,将90只SD雄性大鼠,随机平均分为3组,即:假手术组(行手术分离但不结扎左侧输尿管)、模型组(手术结扎左侧输尿管近肾盂段)和曲格列酮治疗组。分别在术后第1、3、7、14天观察肾小管受损的程度,用免疫组织化学法检测IGF-1和MMP-2在肾间质纤维化中的表达。结果 模型组IGF-1及肾小管间质损伤程度明显高于假手术组,随着梗阻时间的延长,IGF-1表达逐渐上调,而MMP-2的表达逐渐下降;治疗组与模型组相比IGF-1表达下降,而MMP-2表达上调。相关分析显示,IGF-1与MMP-2呈负相关(r=-0.890,P<0.01)。结论 IGF-1和MMP-2的表达趋势的变化与肾间质纤维化的发生、发展有重要的意义,而曲格列酮有明显的干预效应。     

乳腺癌患者血清胰岛素样生长因子-1及结合蛋白-3的变化及意义

目的探讨乳腺癌患者血清胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、胰岛素样生长因子结合蛋白-3（IGFBP-3）和两者比率的变化及临床意义。方法80例良性乳腺肿瘤和135例乳腺癌患者术前采集空腹血分离血清-30℃冻存，用ELISA法测定标本的IGF-1和IFGBP-3浓度，用免疫组化法检测乳腺癌标本nm23基因。结果乳腺癌和良性乳腺肿瘤两组间IGF-1浓度和IGF-1：IFGBP-3呈高度显著差异（P〈0．01）．而IGFBP-3差异无显著意义（P〉0．05）。乳腺癌患者绝经前后IGF-1差异有显著意义（P=0．04），绝经前或有淋巴结转移的乳腺癌患者IGF-1：IGFBP-3明显高于绝经后或无淋巴结转移的乳腺癌患者。nm23阳性和阴性的乳腺癌之间血清IFGBP-3浓度差异有显著意义（P=0．01），但IGF-1浓度差异无显著意义。结论检测血清IGF-1、IGFBP-3有助于筛选和确定乳腺癌高危患者，从而有利于早期诊断及判断预后。     

人胰岛素样生长因子1前体基因的重组、表达及纯化

目的 构建含有人胰岛素样生长因子1（hIGF-1）前体编码基因的重组载体,在E.coli BL21中表达,并探讨其抗原性和应用价值。方法 用PCR法,从现有重组质粒pBakPAK 8／hIGF-1中,扩增编码hIGF-1前体的基因片段,经双酶切、纯化、连接后得到pET29a（＋）／hIGF-1重组体,再将其转化大肠杆菌BL21-CodonPlus并诱导表达。表达产物经镍柱亲和层析纯化后,用Western blot法检测重组蛋白的抗原活性。结果 重组持粒pET29a（＋）／hIGF-1经双酶切鉴定和测序分析证实构建成功。在大肠杆菌BL21-CodonPlus中经IPTG诱导表达,有一相对分子质量15000的重组蛋白hIGF-1前体,该蛋白经镍柱亲和层析获得了良好的纯化效果,具有特异的抗原活性。结论 成功地克隆并表达相对分子质量为15000的hIGF-1前体编码基因,为进一步制备抗hIGF-1抗体和后续hIGF-1生物学功能研究打下了良好基础。