Fn14在上皮性卵巢癌细胞转移中的作用

目的:探讨成纤维细胞生长诱导因子14(Fn14)在上皮性卵巢癌转移中的作用。方法:选取人上皮性卵巢癌细胞株HO8910及其配对高转移能力细胞株HO8910-PM。Western blot法检测HO8910、HO8910-PM细胞株中Fn14表达,以及Fn14过表达质粒转染HO8910-PM细胞株后Fn14、Slug、MMP-9蛋白的表达情况。Transwell实验检测细胞株体外迁移和侵袭能力。结果:HO8910-PM细胞的迁移和侵袭细胞数均多于HO8910细胞(P0.05)。HO8910-PM细胞中Fn14表达水平明显低于HO8910细胞(P0.05)。Fn14过表达质粒转染HO8910-PM细胞后,细胞内Fn14表达水平上调(5.4±0.314)倍(P0.05),细胞的迁移和侵袭能力明显降低,同时细胞中侵袭转移相关蛋白Slug和MMP-9表达明显下降(P0.05)。结论:Fn14可能通过下调Slug和MMP-9表达进而抑制上皮性卵巢癌细胞的侵袭转移,Fn14可能为临床治疗上皮性卵巢癌提供新靶标。     

免疫球蛋白转录因子2在卵巢癌中的表达及临床意义

目的:探讨免疫球蛋白转录因子2(ITF2)在卵巢癌中的表达及临床意义。方法:免疫组化法检测20例卵巢良性囊腺瘤、20例卵巢交界性囊腺瘤、40例卵巢恶性肿瘤中ITF2表达水平,并分析其表达量与临床病理参数之间的关系。选取卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910及永生化卵巢上皮细胞IOSE80,Western blot法检测细胞中ITF2表达水平,划痕实验检测卵巢癌细胞的转移能力。结果:卵巢癌与交界性肿瘤中ITF2蛋白阳性表达率明显高于卵巢良性囊腺瘤(55.0%、45.0%vs 25.0%,P0.05)。卵巢癌中ITF2表达水平与病理分级、FIGO分期有关(P0.05)。卵巢癌细胞株SKOV3与HO8910中ITF2表达量高于正常卵巢上皮细胞IOSE80,ITF2表达量更高的SKOV3细胞的转移能力明显高于HO8910细胞(P0.05)。结论:ITF2在卵巢癌组织中多呈高表达,且与肿瘤转移能力相关。提示ITF2蛋白可能参与卵巢癌的发生和发展,有望成为卵巢癌诊断与治疗的一个潜在生物学标记。     

反义Snail转录因子抑制卵巢癌转移的实验研究

目的探讨反义Snail转录因子抑制卵巢癌转移的机理。方法采用RTPCR技术分别检测卵巢透明细胞癌细胞株ES2、卵巢腺癌细胞株OVCAR3、卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8910和高转移卵巢浆液性囊腺癌细胞株HO8910PM细胞中Snail、E钙黏蛋白mRNA的表达水平。将HO8910细胞分为两组,分别转染反义Snail质粒(反义组)和空载体质粒(对照组),观察Snail对E钙黏蛋白mRNA表达的逆转作用,及对卵巢癌细胞体外侵袭、运动的抑制作用。结果PCR产物凝胶电泳结果显示,SnailmRNA在ES2、HO8910、HO8910PM细胞中有表达,而E钙黏蛋白mRNA仅在OVCAR3细胞中有表达。HO8910细胞瞬时转染0、24、48h时,SnailmRNA的表达水平分别为0.897±0.005、0.865±0.010、0.338±0.014,0与24h时相比,差异有统计学意义(P<0.05);24h与48h时相比,差异有统计学意义(P<0.01);同时,E钙黏蛋白mRNA开始有表达,并随转染时间的增加而增加,0、24、48h时,E钙黏蛋白mRNA表达水平分别为0、0.130±0.001、0.217±0.005,各时间点间分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。HO8910细胞稳定转染后,反义组、对照组SnailmRNA表达水平分别为0.126±0.010、0.355±0.020,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);反义组E钙黏蛋白mRNA开始有表达,表达水平为0.467±0.040,而对照组为0,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01);同时,检测间质细胞标志物纤维连接蛋白mRNA的表达水平,反义组为0.191±0.010,显著低于对照组的0.582±0.010(P<0.01)。体外细胞运动实验表明,反义组、对照组跨膜细胞数[分别为(48±2)、(396±29)个/高倍镜(×200)]比较,差异有统计学意义(P<0.01)。重组细胞基底膜(Matrigel)侵袭实验显示,两组穿透基底膜细胞数[分别为(35±10)、(219±72)个/高倍镜(×200)]比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论卵巢癌细胞中存在SnailmRNA与E钙黏蛋白mRNA表达的逆转关系,抑制SnailmRNA的表达对卵巢癌细胞的侵袭和运动有抑制作用,可能为卵巢癌转移的基因治疗提供新的靶点。     

~(131)I-Herceptin对卵巢癌细胞的体外作用

目的:研究~(131)I标记抗HER-2/neu单克隆抗体Herceptin(~(131)I-Herceptin)体外对高表达HER-2/neu卵巢癌细胞的生物学作用,探讨将其用于卵巢癌放射免疫治疗的可行性。方法:(1)流式细胞仪检测人卵巢癌SKOV3和HO8910细胞株HER-2/neu的表达。(2)Iodogen法~(131)I标记Herceptin,测定其标记率、放化纯度、稳定性及免疫活性。(3)MTT比色法检测~(131)I-Herceptin对人卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910的抑制作用。(4)流式细胞法检测SKOV3在~(131)I-Herceptin作用下细胞周期改变和凋亡情况。结果:(1)SK-OV3细胞株HER-2/neu表达率为92.67%;HO8910表达率为9.59%。(2)~(131)I-Herceptin标记率为89.8%,放化纯度为98.4%,24h后仍大于80%,标记物免疫活性较好。(3)131I-Her-ceptin对SKOV3细胞株的抑制作用明显高于HO8910(P<0.001),且明显高于~(131)I组﹑Her-ceptin组以及~(131)I+Herceptin组(P<0.01)。(4)流式细胞检测~(131)I-Herceptin组SKOV3细胞的凋亡率明显高于~(131)I+Herceptin、Herceptin和~(131)I组(P<0.05),各干预组均检测到细胞周期阻滞,~(131)I-Herceptin组G0-G1期细胞比例明显高于其它三组(P<0.05)。结论:~(131)I-Herceptin对高表达HER-2/neu的人卵巢癌细胞SKOV3有明显的抑制和杀伤作用。     

体外模拟的二氧化碳气腹环境对卵巢癌细胞增殖的影响

目的 :通过建立体外模拟腹腔镜二氧化碳 (CO2 )气腹的手术环境 ,研究CO2气腹环境本身对卵巢癌细胞增殖的影响 ,从而对腹腔镜用于卵巢癌手术的安全性作出初步评价。方法 :体外建立模拟的CO2 气腹腹腔镜手术环境 ,在卵巢癌细胞株HO8910和SKOV3体外培养的基础上 ,通过流式细胞仪PI染色分析细胞周期的方法 ,以及MTT比色法测定活细胞数量的方法 ,比较CO2 不同的压力 (0～ 16mmHg)和作用时间 (1～ 4h)对细胞增殖程度的影响。结果 :HO8910细胞在不同的CO2 气腹环境中培养 72h后CO2 刺激组与非CO2 刺激的对照组一样 ,均呈增殖性生长。但随压力增加和作用时间的延长 ,CO2 刺激组细胞增殖的速率变慢 ;在 72h后 ,各压力刺激组之间的细胞增殖指数 (PI)以及压力组和对照组之间的PI值出现显著性差异 (P <0 .0 5 )。SKOV3细胞在刺激后各CO2 压力组和对照组均呈抑制性生长 ,但随压力增加和作用时间的延长 ,CO2 刺激组下降的速度更快 ,PI值在 72h后差异有显著性 (P <0 .0 5 )。MTT比色法显示HO8910和SKOV3细胞随着CO2 作用时间的延长 ,细胞增殖受抑制程度增大 ,其中 4h作用组的抑制程度最为显著 (P <0 .0 5 ) ,各时间组的抑制程度也随压力的增大有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :体外模拟的CO2 环境对HO8910和SKOV3两种?     

DCC基因对卵巢上皮性癌细胞生长及其化疗敏感性的影响

目的研究DCC基因对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞生长及其化疗敏感性的影响。方法采用脂质体转染法将含有DCC基因的真核表达载体pcDNA3．1（＋）-DCC质粒导人卵巢癌细胞系HO8910细胞中（HO8910-DCC组）,以转染空载体pcDNA3．1（＋）质粒（HO8910-Neo组）和脂质体（空白对照组）为对照。转染24h后,经氨基糖甙类抗生素G418筛选,RT-PCR技术以及免疫组化法检测3组细胞DCC mRNA及蛋白表达情况;四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定3组细胞转染后1～7d的细胞生长情况及经梯度浓度[0．1、0．2、1．0、5．0、10．0血浆峰浓度（PPC）]化疗药物顺铂和紫杉醇处理后48h的细胞存活率,并绘制细胞生长曲线。结果转染DCC基因后,DCC基因可在HO8910细胞中稳定表达。转染后1～7d,HO8910-DCC组细胞生长速度较其他两组细胞明显减慢,除转染后第1天外,分别比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）;空白对照组和HO8910-Neo组细胞生长速度比较,差异则无统计学意义（P〉0．05）。HO8910-DCC组细胞经0．1～5．0PPC的顺铂和紫杉醇处理后,细胞存活率显著低于空白对照组和HO8910-Neo组（P〈0．01）;经10．0PPC的顺铂处理后细胞存活率也明显低于空白对照组和HO8910-Neo组（P〈0．05）;但经10．0PPC的紫杉醇处理后细胞存活率与空白对照组和HO8910-Neo组相比,差异则无统计学意义（P〉0．05）。空白对照组和HO8910-Neo组细胞经各梯度浓度药物处理后的细胞存活率间比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论DCC基因可明显抑制卵巢癌细胞的生长,并增强卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。     

Nanog介导FSH诱导卵巢癌转移和侵袭的研究

目的:探讨Nanog在FSH诱导的卵巢癌转移和侵袭中的作用。方法:采用Western blot法检测永生化卵巢上皮细胞Moody,良性卵巢肿瘤细胞Mcv152和卵巢癌细胞Hey、Ho8910、SKOV3中Nanog表达。使用FSH以浓度梯度和时间梯度的方式处理SKOV3细胞,Western blot法检测Nanog蛋白表达。使用FSH处理si-Con或si-Nanog转染卵巢癌SKOV3细胞,实验分组:0.1%DMSO+转染空白干扰RNA组(Con+si-Con)、FSH+转染空白干扰RNA组(FSH+si-Con)、0.1%DMSO+转染Nanog干扰RNA组(Con+siNanog)和FSH+转染Nanog干扰RNA组(FSH+si-Nanog)。使用划痕实验和Transwell侵袭实验检测4组细胞的转移和侵袭能力,Western blot法分析4组细胞中Nanog蛋白表达。应用免疫组化法检测卵巢癌组织中Nanog蛋白表达情况。结果:卵巢癌细胞系Hey、Ho8910、SKOV3中Nanog表达明显高于永生化和良性卵巢上皮细胞系(P0.05)。FSH上调Nanog表达以浓度和时间依赖的方式。对照组(Con+si-Con,Con+si-Nanog)的迁移和侵袭能力明显低于实验组(FSH+si-Con,FSH+si-Nanog)(P0.05)。卵巢癌组织中Nanog表达水平明显高于正常卵巢组织(P0.05),Nanog蛋白表达与卵巢癌转移相关。结论:Nanog是FSH重要的下游靶基因,介导FSH诱导的卵巢癌转移作用。     

含hTERT基因核心启动子和canstatin基因重组腺病毒载体的构建及其对卵巢上皮性癌的抑制作用

目的 构建含hTERT基因核心启动子和canstatin基因的重组腺病毒载体AdhTERT-Can,探讨其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)的抑制作用.方法 应用分子克隆技术构建重组腺病毒载体AdhTERT-Can,并采用酶切、电泳、测序方法进行鉴定.体外实验:卵巢癌细胞株HO8910PM细胞经脂质体介导转染AdhTERT-Can后,荧光显微镜观察HO8910PM细胞的转染情况,RT-PCR技术检测HO8910PM细胞中eanstatin mRNA的表达.体内实验:建立卵巢癌裸鼠异体移植瘤动物模型,随机分为3组,AdhTERT-Can组(尾静脉注射含canstatin基因的重组腺病毒载体AdhTERT-Can上清液)、Ad-Can组(尾静脉注射Ad-Can上清液)和空白对照组(尾静脉注射磷酸盐缓冲液),比较各组裸鼠治疗后的肿瘤体积.结果成功构建重组腺病毒载体AdhTERT-Can,并经相关鉴定证实.体外实验显示,AdhTERT-Can质粒转染HO8910PM细胞后,在荧光显微镜下观察可见约60%卵巢癌细胞发出绿色荧光;RT-PCR技术检测显示,HO8910PM细胞中有canstatin mRNA的表达.体内实验显示,自治疗后8 d开始,各组肿瘤生长出现明显筹异,AdhTERT-Can组肿瘤体积明显小于Ad-Can、空白对照组(P<0.01),且随着治疗时间的延长差异越来越明显;而Ad-Can组与空白对照组比较,差异则无统计学意义(P>0.05).治疗30 d后,各组均可见肿瘤破溃和囊性变,但以AdhTERT-Can组最为明显,Ad-Can组次之;病理检查可见,各组肿瘤细胞均可见液化和坏死,尤其以AdhTERT-Can组最为明显.结论本研究成功构建了重组腺病毒载体AdhTERT-Can,且其转染卵巢癌细胞的能力较强;AdhTERT-Can质粒通过尾静脉注射能明显抑制裸鼠体内卵巢癌的生长,显示r肿瘤基因治疗的靶向性.     

RNA干扰抑制高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究RNA干扰抑制HMGB1的表达对高侵袭转移能力的卵巢癌细胞亚系S1,A1和HO8910PM增殖和侵袭能力的影响。方法:构建靶向HMGB1基因的慢病毒vshRNA载体,转染具有高侵袭转移能力的S1,A1和HO8910PM,同时利用细胞爬片、real-time RT-PCR、Western blot等方法检测RNA干扰抑制HMGB1表达的效果。绘制生长曲线,软琼脂培养克隆形成实验和Boyden chamber侵袭移动实验检测RNA干扰抑制HMGB1基因表达对卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响。结果:细胞爬片、real-time RT-PCR和Western blot均证实慢病毒HMGB1 shRNA载体成功抑制HMGB1在S1,A1和HO8910PM中的mRNA和蛋白表达。生长曲线,软琼脂培养克隆形成实验和Boydenchamber侵袭移动试验结果显示HMGB1的表达下调抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力。结论:HMGB1的表达下调可明显抑制卵巢癌细胞的体外增殖和侵袭能力,为卵巢癌治疗提供了新思路。     

KDM5B基因在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌耐药能力的影响

目的:检测组蛋白去甲基化转移酶KDM5B(JARID1B/PLU-1)在正常卵巢、卵巢癌组织及细胞株中的表达,以及其对卵巢癌细胞株耐药能力的影响。方法:RT-q PCR法检测KDM5B在36例卵巢癌、15例正常卵巢、6例术后化疗耐药复发患者组织及卵巢上皮细胞株IOSE和5株卵巢癌细胞中的表达情况;构建p MSCVpuro-KDM5B过表达质粒和p GIPZ-sh1、p GIPZ-sh2干扰质粒,并筛选得到稳定过表达的SKOV3和稳定干扰的Caov3细胞株,RT-q PCR和Western blot法鉴定调控效果;用浓度梯度递增的顺铂处理SKOV3过表达和Caov3干扰细胞株,CCK-8法检测顺铂半抑制浓度(IC50)变化。结果:RTq PCR结果示,正常卵巢组织中KDM5B相对表达量(1.950±0.3003)低于卵巢癌组织(4.924±0.2989),差异有统计学意义(t=5.909,P0.0001)。KDM5B表达量与卵巢癌患者的FIGO分期、病理分级、转移和耐药发生明显相关,与患者年龄、CA125水平不相关。6例复发患者中,5例KDM5B表达明显升高(P0.001)。KDM5B的mRNA和蛋白水平在卵巢上皮性细胞株IOSE中最低,在卵巢癌细胞株SKOV3、HO-8910、ES-2、A2780、Caov3中表达逐渐增加。RT-q PCR结果示,SKOV3过表达组的KDM5B表达量为对照组的27.4倍,Caov3干扰sh1和sh2组分别为对照组的0.38和0.41倍,Western blot也显示过表达和干扰有效。用浓度梯度递增的顺铂处理Caov3细胞株,KDM5B表达量随顺铂浓度增加而逐渐升高;检测SKOV3细胞株KDM5B过表达组IC50为3.666(95%CI为3.067~4.382)μg/ml高于对照组[1.676(95%CI为1.553~1.810)μg/ml],Caov3细胞株干扰sh1组和sh2组分别为3.359(95%CI为2.875~3.925)μg/ml、2.881(95%CI为2.49~3.324)μg/ml,均低于对照组[6.972(95%CI为6.182~7.864)]。结论:组蛋白去甲基化转移酶KDM5B在卵巢癌中表达升高,并且具有促进卵巢癌细胞株耐药的作用。     

透明质酸结合蛋白1在人卵巢癌细胞系中表达及其与紫杉醇敏感性的关系

目的探讨透明质酸结合蛋白1在人卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910PM、HO-8910LM、OVCA429和OVCA420中的表达和定位及其与紫杉醇敏感性之间的关系。方法 2007年2月至2008年12月在哈尔滨医科大学附属三院研究所应用荧光定量RT-PCR技术和免疫荧光化学法结合激光共聚焦显微镜分别检测人卵巢癌细胞系SKOV3、HO-8910PM、HO-8910LM、OVCA429和OVCA420中HABP1 mRNA和蛋白的表达以及其在细胞中的定位,MTT法分析各卵巢癌细胞系对紫杉醇的敏感性。结果 HABP1 mRNA在人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCA429和HO-8910PM中的表达水平分别是OVCA420的3.7、2.8和2.1倍(P值均<0.05),HO-8910LM和OVCA420中HABP1 mRNA的表达水平无统计学差异(P值>0.05),激光共聚焦显示5种人卵巢癌细胞系中HABP1蛋白的表达变化趋势与mRNA水平基本一致,其中SKOV3、OVCA429和HO-8910PM细胞系中HABP1蛋白在细胞核周的表达量明显高于OVCA420和HO-8910LM。MTT分析显示,SKOV3、OVCA429、OVCA420、HO-8910PM和HO-8910LM细胞对紫杉醇的中效浓度分别是:0.047μmol/L、0.221μmol/L、0.723μmol/L、0.092μmol/L和0.672μmol/L,相关分析显示HABP1 mRNA表达水平与卵巢癌细胞对紫杉醇的中效浓度之间的相关系数为-0.888,P<0.05。结论 HABP1的表达与卵巢癌细胞对紫杉醇的敏感性呈显著正相关,其机制可能是由于其在细胞中的分布位置不同所致,HABP1可作为筛选卵巢癌化疗药物的指标之一。     

与ezrin基因表达相关的微小RNA的筛选及在卵巢上皮性癌浸润转移中的作用

目的 筛选卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞中与ezrin基因表达相关的微小RNA(miRNA),并分析其在卵巢癌浸润转移中的作用.方法 (1)实时逆转录(RT)PCR技术和蛋白印迹法分别检测两对具有不同侵袭转移能力的卵巢癌细胞系SKOV3和SKOV3ip细胞、HO-8910和HO-8910PM细胞中ezrin mRNA和蛋白的表达差异,选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系(即SKOV3和SKOV3ip细胞)用于以下实验.(2)用miRNA芯片筛选SKOV3和SKOV3ip细胞中差异表达miRNA,然后用生物信息学工具[三大数据库,即TARGETSCAN(http://www.targetscan.org)、MICROCOSM(http://www.ebi.ac.uk/enright-srv/microcosm/htdocs/targets/v5/)和PICTAR(http://www.pictar.mdc-berlin.de)数据库]预测并比对miRNA芯片的筛选结果,筛选出与ezrin基因表达相关的miRNA,并采用实时RT-PCR技术验证.将筛选出来的miRNA转染SKOV3ip细胞,用蛋白印迹法和实时RT-PCR技术检测其对SKOV3ip细胞中ezrin mRNA和蛋白表达的调控作用,以未做任何处理者为空白对照.结果 (1)SKOV3ip细胞中ezrin mRNA的表达水平是SKOV3细胞的(81.74±5.34)倍,HO-8910PM细胞中ezrin mRNA的表达水平是HO-8910细胞的(2.61±0.14)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);蛋白印迹法检测显示,SKOV3ip细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于SKOV3细胞,HO-8910PM细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于HO-8910细胞.选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系,即SKOV3和SKOV3ip细胞用于以下实验.(2)将miRNA芯片筛选结果与生物信息学工具预测结果对比分析,筛选出两个可能调控ezrin基因表达的特异miRNA,即miR-183和miR-22;实时RT-PCR技术检测显示,miR-183和miR-22在SKOV3和SKOV3ip细胞中的表达差异,与miRNA芯片筛选结果一致,SKOV3细胞中miR-183和miR-22的表达水平分别是SKOV3ip细胞的(5.84±0.66)和(6.67±0.67)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).miRNA转染SKOV3ip细胞后,其ezrin mRNA的表达水平是空白对照的(1.03±0.10)倍,两者比较,差异无统计学意义(P＞0.05);而ezrin蛋白的表达强度则明显低于空白对照.结论 侵袭力强的卵巢癌细胞中ezrin mRNA和蛋白均高表达,与ezrin基因表达相关的miRNA--miR-183和miR-22的过度表达均能有效调节侵袭转移相关基因ezrin蛋白的表达水平,它们可能具有ezrin基因介导的抑制卵巢癌细胞浸润转移的潜在功能.     

卵巢癌细胞系中CD147的表达对基质金属蛋白酶分泌和活性的影响

目的 :探讨CD1 4 7在卵巢癌细胞中的表达和卵巢癌细胞与鼠成纤维细胞共孵育对基质金属蛋白酶产生及活性的影响。方法 :Westernblot方法检测不同卵巢癌细胞系HO 891 0 ,3AO ,SKOV3 ,TC 1及鼠成纤维细胞NIH3T3中CD1 4 7的表达 ,检测卵巢癌细胞系与鼠成纤维细胞共孵育时CD1 4 7的表达及基质金属蛋白酶的分泌 ;凝胶酶谱分析其产生MMPs的含量及活性。结果 :SKOV3 ,TC 1 ,NIH3T3细胞系中CD1 4 7表达阴性 ,HO 891 0 ,3AO细胞系CD1 4 7表达阳性 ;MMP 2 ,MMP 9在HO 891 0 ,3AO细胞系中表达明显增高 ,MMP 9以酶原和活性形式表达 ,MMP 2仅以酶原形式表达 ;CD1 4 7可以促进MMPs的分泌 ,增加MMPs活性。结论 :CD1 4 7可能在卵巢癌侵袭转移过程中起重要作用 ,可能是判断卵巢癌细胞具备高侵袭转移能力的标志     

卵巢上皮性癌细胞转移相关蛋白的比较蛋白组学分析

目的筛选卵巢上皮性癌（卵巢癌）转移相关蛋白,进一步探讨卵巢癌的转移机制。方法以卵巢癌细胞系HO-8910和高转移卯巢癌细胞系HO-8910PM为研究对象,采用比较蛋白组学的研究技术（双向电泳、质谱分析）,筛选两个细胞系中差异表达的蛋白质。结果高转移细胞系HO-8910PM与卵巢癌细胞系HO-8910比较,共出现了21个差异表达蛋白质点,其中16个蛋白质点表达上调,5个蛋白质点表达下调。21个差异表达蛋白质点有17个被鉴定,并分为7大类,即锌指蛋白、钙结合蛋白、DNA修复及合成蛋白、细胞调节蛋白、细胞代谢相关蛋白、细胞信号和传导蛋白及细胞表面抗原。结论卵巢癌细胞系HO-8910和高转移卵巢癌细胞系HO-8910PM的蛋白质表达存在明显差异。     

喜树碱药物NSC606985抗卵巢癌细胞活性及其机制的研究

目的:体外观察喜树碱药物NSC606985对人卵巢癌细胞的生长抑制效应、凋亡诱导效应以及抗癌机制。方法:采用MTT法检测不同浓度(6.25,12.5,25,50,100nmol/L)NSC606985作用特定时间(24,48,72h)后对人卵巢癌COC1细胞的生长抑制效应,用AnnexinV-FITC/PI双染法FCM检测NSC606985对COC1细胞的凋亡诱导效应,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测缺氧(2%O2)对HIF-1α,AMFR及RhoC mRNA表达水平的影响。用免疫印迹技术(Western blot)检测物理性缺氧及氯化钴(CoCl2)化学模拟缺氧下HIF-1α蛋白的表达水平以及NSC606985对HIF-1α的调控效应。结果:纳摩尔浓度的NSC606985可以显著抑制人卵巢癌COC1细胞生长,呈现剂量及时间依赖效应。不同浓度(50,100,200nmol/L)NSC606985作用24h凋亡细胞比率分别是68.44%,80.86%,91.98%,具有剂量依赖性。在人卵巢癌细胞系COC1和SKOV3中,缺氧(2%O2)14h对HIF-1α、AMFR及RhoC mRNA的表达无影响,却可以上调HO-8910PM细胞HIF-1αmRNA水平。物理性缺氧(2%O2 14h)及CoCl2化学模拟缺氧(50μmol/L或150μmol/L 24h)诱导COC1,HO-8910PM及SKOV3等卵巢癌细胞株HIF-1α蛋白高水平表达,NSC606985(20～400nmol/L 14h或24h)可呈剂量依赖性显著下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白。结论:NSC606985抑制卵巢癌细胞增殖具有剂量和时间依赖性,可能与诱导细胞凋亡相关。缺氧下HIF-1α在卵巢癌细胞的恶性生物学行为中发挥重要作用,NSC606985可通过下调缺氧诱导的HIF-1α蛋白发挥独特的抗癌机制。     

苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞HO-8910PM增殖及乙酰肝素酶表达的影响

目的探讨苏拉明对体外培养的人卵巢癌细胞增殖和乙酰肝素酶基因表达的影响。方法不同浓度苏拉明作用于人卵巢癌细胞株HO-8910PM,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HO-8910PM增殖情况;免疫细胞化学方法和原位杂交方法检测苏拉明作用前后HO-8910PM乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达变化。结果MTT结果显示50、100、200、300、400、500、600μg/ml浓度的苏拉明作用于HO-8910PM细胞96h的生长抑制率(GI)分别是13.1%、22.6%、35.1%、43.7%、54.3%、64.8%、70.9%(P0.01),不同时间及不同浓度组吸光光度值A差异有统计学意义(P0.01)。对照组比较苏拉明作用48h后,HO-8910PM细胞乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达显著降低(P0.01)。结论苏拉明以时间及剂量效应方式抑制体外培养的HO-8910PM增殖;同时下调乙酰肝素酶基因mRNA及蛋白表达;提示苏拉明作为HPA抑制剂有望成为转移性卵巢癌联合化疗用药。     

TWEAK对人卵巢癌细胞HO-8910PM侵袭转移的影响及其机制的研究

目的:研究肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PM转移相关能力的影响及其作用机制。方法:水溶性四唑盐(WST-1)比色法检测TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力的影响,细胞黏附和移动实验检测TWEAK对细胞体外黏附和移动力的影响,细胞侵袭重建基底膜实验检测TWEAK组细胞体外侵袭力的变化。采用Western blot法检测TWEAK对细胞IκB-α、NF-κB(P65)和VEGF蛋白表达的影响。通过应用NF-κB拮抗剂PDTC,观察阻断NF-κB通路后VEGF蛋白表达的变化。结果:TWEAK组在24、48h和72h时细胞增殖率无明显变化(P>0.05)。TWEAK组细胞黏附力提高23.67%(P<0.01);TWEAK可增强细胞体外的移动和侵袭力,其趋化指数和侵袭指数分别为1.9±0.3和1.7±0.3(P<0.01)。TWEAK能显著下调IκB-α蛋白表达,上调NF-κB(P65)蛋白在核内的表达,并使VEGF蛋白表达量显著增加。用NF-κB拮抗剂PDTC阻断NF-κB通路,能有效抑制VEGF蛋白的表达。结论:TWEAK对HO-8910PM细胞增殖力无明显影响。TWEAK能促进HO-8910PM细胞移动、黏附和侵袭力。TWEAK促肿瘤侵袭转移的机制之一可能是通过激活NF-κB通路上调VEGF蛋白表达。