转化生长因子-β1与心脏移植

转化生长因子 β1 (TGF β1 )是一种普遍存在强效细胞生长增殖调节蛋白 ,在器官移植免疫中扮演重要角色。了解TGF β1 的分子生物学及其在移植免疫中的作用 ,有助于进行TGF β1 与心脏移植供心再灌注损伤、移植物排斥反应、TGF β1 转基因治疗及移植血管病关系的研究。     

白细胞介素-1β在心脏移植排斥反应中的作用

目的 :研究白细胞介素 (IL) 1β在大鼠心脏移植排斥反应中心脏局部的表达变化情况 ,探讨其在心脏移植急性排斥反应诊断中的可能作用。方法 :建立大鼠颈部异位心脏移植模型 ,不同品系大鼠之间的移植供、受体分别为SD大鼠和Wistar大鼠 (共 5 0只 ) ,同品系大鼠之间的移植供受体均为Wistar大鼠 (共 5 0只 )。观察移植心脏自然生存时间 ,另于术后第 1、3、5、7、9、11天 ,分别切取移植心脏各 5只 ,提取总RNA ,进行逆转录 ,将目的引物和对照引物在同一管中扩增 ,以两者像素值比值均数作曲线图 ,观察排斥反应时IL 1βmRNA的动态表达情况。结果 :不同品系移植心脏的停跳高峰出现在术后第 6～ 10天。排斥反应时移植心脏局部IL 1βmRNA的表达水平明显增高 ,峰值在术后第 1天。结论 :IL 1β在心脏移植排斥反应中可能起重要的作用 ,IL 1βmRNA的动态检测可望成为早期诊断急性排斥反应的指标     

转化生长因子β1对大鼠肝星状细胞表达β-连环蛋白的影响

目的研究转化生长因子β1（TGF—β1）对大鼠肝星状细胞（HSC）表达β-连环蛋白（β-catenin）的影响。方法采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）比较经不同浓度的TGF-β1刺激不同时间后HSC表达β-catenin、smad3和α-SMA mRNA的变化,并比较三者之间的关系。结果1ng／ml TGF—β1刺激2h后,HSC表达β—catenin mRNA、smad3 mRNA和α—SMA mRNA量最大,β—catenin mRNA表达与两者均具有明显的相关关系（r=0．947,P〈0．01;r=0．950,P〈0．01）。结论β—catenin在TGF—β1活化HSC的过程中发挥重要作用。     

转化生长因子-β1与骨转换

骨转换的过程受许多细胞因子的调控。转化生长因子B(TGF-β1)是骨基质中含量丰富的细胞因子，它刺激干细胞生长并使之分化为成骨细胞。成骨细胞也可分泌TGF-β1，它可能通过TGF-β1进行自我调节。同时TGF-β1又是破骨细胞分化的一个重要自分泌因素。TGF-β1通过调节成骨细胞和破骨细胞的功能而调节骨形成与骨吸收的平衡。TGF-β1基因突变与代谢性骨病的发生有关，其基因型的不同影响青少年时峰值骨量以及成年后的骨丢失率。     

人转化生长因子-β1转基因表达对大肠癌细胞(HT-29)体内生物学行为的影响

为证实 TGF-β1转基因表达对 HT-29细胞株体内生物学行为的影响,将正反义 TGF-β1基因转染后克隆出的抗性细胞株分别接种棵鼠皮下。结果证实:TGF-β1基因表达对裸鼠移植瘤产生明显的抑制作用,导致出瘤时间延长,肿瘤增殖速度减慢。TGF-β1抑制大肠癌细胞发生发展作用机制可能与 TGF-β1基因表达产物启动细胞凋亡有关。     

转化生长因子-β1与心房颤动关系研究进展

心房颤动(房颤)是常见的心律失常之一.很多研究揭示房颤与心房纤维化有关,而且有研究显示房颤病人的转化生长因子-β1的表达和活性都有所升高.因此,清楚认识转化生长因子-β1在房颤发病机制中的关系,对了解房颤发生发展过程中炎症及纤维化的作用,和指导临床治疗房颤、预防房颤复发等诸方面都非常重要.     

高糖对心肌细胞转化生长因子β1分泌的影响及缬沙坦的干预作用

目的观察高糖对心肌细胞分泌心肌组织转化生长因子(TGF-β1)的影响和缬沙坦的干预作用.方法在乳鼠心肌细胞培养液中加入高糖和不同浓度缬沙坦,用ELISA法检测培养液中TGF-β1的含量.结果高糖刺激TGF-β1分泌增加,加入缬沙坦后含量减少.结论高糖可能通过血管紧张素Ⅱ-1型受体刺激心肌细胞TGF-β1分泌增加,缬沙坦可拮抗此作用.     

转化生长因子β1对慢乙肝细胞免疫功能的影响

观察慢性乙肝、肝硬化患者血清TGF - β1和T淋巴细胞亚群的关系 ,探讨TGF - β1对慢乙肝细胞免疫功能的影响。以ELISA法测定 83例慢性乙肝、肝硬化患者血清TGF - β1,以抗体致敏的红细胞花环试验测定T淋巴细胞亚群。 1 慢性乙肝轻、中、重度及肝硬化患者血清TGF - β1水平明显高于对照组 ;2 慢性乙肝轻、中、重度、肝硬化患者血清CD3 T细胞、CD4 T细胞、CD4 /CD8 明显低于对照组 ,CD8 T细胞明显高于对照组。相关分析发现 ,血清TGF - β1与CD4 T细胞、CD4 /CD8 呈负相关 ,与CD8 T细胞呈正相关。慢乙肝、肝硬化患者血清TGF -β1水平明显升高 ,而细胞免疫功能低下 ;TGF - β1对细胞免疫功能的抑制作用是慢性乙肝、肝硬化患者细胞免疫功能低下的原因之一     

粉防己碱对肝星状细胞转化生长因子-β1反应性影响

目的观察低浓度粉防己碱（Tetrandrine）对转化牛长因子-β1（TGF-β1）促进静止期大鼠肝星状细胞（HSCs）活化和维持HSCs活化作用的影响，并探讨该作用与TGF-β1受体后信号通路的关系。方法HSCs原代培养，取静止期（培养3d）和活化HSCs（培养8d），给予TGF-β1（质量浓度5ug／L）和（或）粉防己碱（1．6umol／L）干预，观察HSCs形态变化，分别以RT．PCR和Western blot法检测TGF-β1、Smad7以及α—SMAmRNA和（或）蛋白表达。结果粉防己碱（1．6umol／L）能抑制静止期HSCs胞体伸展，粉防己碱使活化的HSCs膜状伸展的胞体收缩和梭形变，在单纯粉防己碱处理组和混合处理组均可见此现象。在静止期和活化HSCs中，粉防己碱均能抑制TGF-β1．诱导的HSCsd—SMA表达，TGF-β1表达下降，使静止期HSCsSmad7表达上调，但不影响活化HSCs Smad7表达.结论低浓度粉防己碱显著抑制TGF-β1对静止期的HSCs促活化作用和对活化HSCs的活化维持作用，诱导培养活化的HSCs活化逆转，其作用机制在不同活化状态的HSCs中存在差异。     

β-连环蛋白对转化生长因子β 1活化HSC-T6细胞的影响

目的 观察β-连环蛋白对转化生长因子β 1(TGF β1)活化肝星状细胞(HSC)的影响. 方法通过脂质体介导,将β-连环蛋白真核表达质粒[pcDNA3.1(+)-β-catenin]和绿色荧光质粒pEGFP-N1共转染体外培养的HSC-T6细胞株,用逆转录PCR和Western blot法检测经TGF β1刺激后两组细胞smad3、β-连环蛋白mRNA及蛋白质的表达.组间比较采用方差分析.结果 β-连环蛋白转染阳性的HSC-T6细胞株经TGF β 1刺激后表达smad3、β-连环蛋白及其mRNA明显强于未转染β-连环蛋白基因的HSC-T6细胞,更强于正常培养的HSC-T6细胞,smad3mRNA相对表达量分别为;0.642±0.011、0.501±0.021、0.511±0.019、0.356±0.017,F=135.304,P<0.05;β-连环蛋白mRNA相对表达量分别为:0.783±0.021、0.543±0.033、0.538±0.024、0.212±0.019,F=267.340,P值均<0.05.smad3蛋白质相对表达量分别为:0.892±0.012、0.124±0.011、0.130±0.021、0.003±0.001,F=2823.813,P<0.05;β-连环蛋白相对表达量分别为:0.921±0.020、0.210±0.010、0.208±0.008、0.002±0.001,F=3440.982,P<0.05.β-连环蛋白和smad3蛋白质的表达均与α-平滑肌肌动蛋白的表达显著相关(r=0.901,P<0.01;r=0.939,P<0.01).结论 β-连环蛋白基因转染体外培养的HSC-T6细胞株,促使HSC表达smad3、α-平滑肌肌动蛋白增强,提示β-连环蛋白能增强TGF β1的致纤维化作用.     

TGF-β1与缺血再灌注心肌细胞凋亡的关系

取新生SD大鼠心肌细胞,随机分为四组：①正常对照组（A组）：在不含处理因素的含10%胎牛血清DMEM培养基中置37℃、5%CO2、95%空气培养箱培养48h;②缺血再灌注诱导凋亡模型组（B组）：在不含血清的低糖DMEM培养基,三气培养箱中培养48h后,置10%胎牛血清DMEM培养基,37℃、5%CO2、95%空气培养箱中培养3h;③转化生长因子（TGF）-β1干预组（C组）：在不含血清的低糖DMEM培养基加入TGF-β1（5ng/ml）,先于三气培养箱中培养48h后,置10%胎牛血清、TGF-β1（5ng/ml）DMEM培养基,37℃、5%CO2、95%空气培养箱中培养3h;④TGF-β1抑制剂干预组（D组）：培养基中加入TGF-β1同时加入其抑制剂LY364947（59nmol/L）,余同C组。采用流式细胞术及Tunel染色法检测各组细胞凋亡率。结果A、B、C、D组心肌细胞凋亡率分别为5.89%&#177;1.28%、26.68%&#177;6.17%、54.19%&#177;11.86%、31.31%&#177;3.78%;C组与其他各组之间比较,P均〈0.05,D组与B组比较,P〉0.05。认为TGF-β1可以诱导心肌细胞缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡,而LY364947可抑制TGF-β1的作用。     

类风湿关节炎滑膜组织转化生长因子β1 转化生长因子β受体Ⅰ及转化生长因子β1 mRNA的表达

类风湿关节炎 (ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄａｒｔｈｒｉｔｉｓ,ＲＡ)的基本病理改变为关节滑膜慢性炎症形成侵袭性血管翳 ,破坏软骨、骨与周围组织。在参与免疫炎症反应的各种因子中 ,转化生长因子 (ＴＧＦ) β1为一种重要的有双向作用的细胞因子 ,可促进炎症细胞活化、浸润 ,又可促进血管增生、组织修复。本研究应用免疫组织化学ＳＡＢＣ法与地高辛标记原位杂交法对ＲＡ滑膜组织中ＴＧＦ β1、转化生长因子 β受体Ⅰ (ＴＧＦ βＲⅠ )、ＴＧＦ β1ｍＲＮＡ的表达分布情况进行分析 ,以探讨它们与ＲＡ发病机制和治疗的关系。1　材料与方法1 1　标…     

冠心病患者血清转化生长因子-β1与肝细胞生长因子的相关性

目的探讨血清转化生长因子(TGF)-β1和肝细胞生长因子(HGF)的水平变化对冠心病患者心功能的影响。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定急性心肌梗死(AMI)组(n=40)、不稳定型心绞痛(UAP)组(n=45)、稳定型心绞痛(SA)组(n=35)患者血清TGF-β1、HGF水平。结果对照组TGF-β1水平显著高于SA组、UAP组和AMI组(P0.05),且SA组TGF-β1水平显著高于UAP组和AMI组;SA组、UAP组和AMI组HGF水平显著高于对照组(P0.05);与SA组比较,AMI组、UAP组血清HGF显著高于SA组(P0.05),与UAP组相比,AMI组血清HGF浓度明显升高(P0.05)。冠心病患者血清TGF-β1水平与HGF呈负相关(r=-0.534)。结论血清TGF-β1和HGF可能参与冠状动脉粥样硬化的发生发展过程,TGF-β1和HGF在冠心病的发病机制中互为影响。     

可溶性转化生长因子β1Ⅱ型受体逆转录病毒表达载体对人肝细胞凋亡的抑制作用

目的构建表达人转化生长因子-β1(TGF-β1)Ⅱ型受体细胞外结合区和人IgG1 Fc的融合蛋白逆转录病毒载体,并研究重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN是否拮抗外源性TGF-β1诱发的肝细胞凋亡,从而为该载体对于肝纤维化的临床应用提供理论依据.方法(1)以RT-PCR法扩增目的基因TβRⅡ-IgG1 Fc,扩增产物纯化后克隆至测序载体pGEM-T-Easy,挑取阳性克隆酶切鉴定后测序;利用重组DNA技术,将TβRⅡ-IgG1 Fc基因亚克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞,G418筛选,直至出现抗性克隆,扩大培养,测定病毒滴度.(2)以人正常肝细胞HL-7702为靶细胞,将细胞分为空白对照组、TGF-β1组、载体组、TGF-β1 载体组.用TUNEL原位标记法和流式细胞仪对各组细胞凋亡率进行检测.结果(1)经测序、限制性酶切分析及PCR方法鉴定,载体插入基因序列、大小、位置均正确无误,并用PA317细胞进行包装、病毒滴度测定、筛选,建立具有较高滴度的感染性重组病毒产生细胞系.(2)TGF-β1组TUMEL阳性细胞明显多于其他各组,而TGF-β1 载体组和空白对照、载体组细胞相比,差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞仪分析结果显示,与其他各组细胞相比,TGF-β1组细胞碎片占细胞总数的百分比明显增加,而加入载体后细胞周期的比例、凋亡率和正常对照组相比没有明显变化.结论成功构建的重组质粒pL(TβRⅡ-IgG1 Fc)SN可有效的阻断外源性TGF-β1诱导肝细胞凋亡的作用,提示该载体可望为肝纤维化的基因治疗提供有效途径.     

白细胞介素10基因转染对小鼠心脏移植排斥反应中细胞因子表达的影响

目的 :探讨白细胞介素 10 (IL 10 )基因转染对小鼠心脏移植排斥反应中IL 12、IL 15、IL 18和IL 4表达的影响。方法 :采用小鼠颈部心脏移植模型 ,随机分为 3组 :对照组、移植组和IL 10组。于术后第 5天取移植心脏 ,用逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)法观察IL 12、IL 15、IL 18、IL 4及IL 10的表达情况。结果 :移植组IL 12、IL 15、IL 18表达与对照组比较明显升高 ,IL 10、IL 4表达显著降低 (均P <0 .0 1)。IL 10组IL 12、IL 15、IL 18表达与移植组比较明显降低 ,而IL 4及IL 10表达显著升高 (均P <0 .0 1)。结论 :IL 10基因转染抑制心脏移植排斥反应主要与其抑制IL 12、IL 15、IL 18等Th1型细胞因子的表达 ,促进Th2型细胞因子IL 4的表达 ,使免疫反应由Th1型向Th2型偏移有关     

洛伐他汀对心肌细胞转化生长因子β1和白细胞介素-6的调节

目的研究洛伐他汀对心肌细胞中转化生长因子(TGF)-β1和白细胞介素(IL)-6表达水平的影响。方法大鼠心肌细胞株H9c2(2-1)进行体外培养过程中,以100 nmol/L洛伐他汀处理72 h,采用蛋白免疫印迹杂交检测TGF-β1和IL-6蛋白表达水平,然后进行量化比较分析。结果洛伐他汀处理导致心肌细胞TGF-β1和IL-6蛋白表达水平分别下降到对照水平的(69.70±20.89)%和(56.26±25.04)%,两组内处理组和对照组的差异均具有统计学意义(TGF-β1组:P=0.013;IL-6组:P=0.008)。结论洛伐他汀在心肌细胞中抑制TGF-β1和IL-6的表达,该效应可能是洛伐他汀抗炎机制的关键因素之一。     

人重组骨形成蛋白-7对高糖诱导的肾系膜细胞转化生长因子-β1及结缔组织生长因子表达的影响

目的 探讨人重组骨形成蛋白-7(rhBMP-7)对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)基因表达及细胞外基质(ECM)成分Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维黏连蛋白(FN)分泌的影响.方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为四组:正常对照组(DMEM培养基含1 000 mg/L葡萄糖)、高糖组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖)、rhBMP-7低剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+50 nmol/L rhBMP-7)、rhBMP-7高剂量组(DMEM培养基含4 500 mg/L葡萄糖+100 nmol/L rhBMP-7).RT-PCR技术检测TGF-β1和CTGF基因表达水平,ELISA技术检测上清液中TGFβ1、ColⅣ、FN含量.结果 高糖组系膜细胞TGF-β1和CTGF mRNA水平明显高于正常对照组(P<0.01),TGF-β1、ColⅣ和FN分泌增多,与正常对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与高糖组比较,rhBMP-7不同剂量(50、100 ng/ml)TGF-β1和CTGF mRNA表达明显降低,培养上清中TGF-β1、ColⅣ及FN分泌量亦明显减少,且差异显著(P<0.05).结论 RhBMP-7通过抑制高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1、CTGF基因表达和ECM的分泌可能起到抗纤维化作用.     

曲尼司特对急性心肌梗死大鼠转化生长因子-β1的影响

目的 探讨曲尼司特对心肌梗死后转化生长因子-β1(TGF-β1)影响的研究.方法 制作急性心肌梗死(AMI)大鼠模型,分为AMI组、曲尼司特组,另取假手术大鼠12只作为对照组.于第4周末处死大鼠,用氯胺T法测定羟脯氧酸含量,用RT-PCR检测大鼠心肌TGF-β1 mRNA(TGF-β1/GAPDH),用免疫印迹法(West-blotting)测定TGF-β1蛋白水平(TGF-β1/β-actin).结果 AMI组大鼠心肌组织TGF-β1mRNA水平、蛋白水平和心肌羟脯氨酸含量均较假手术组明显升高(P<0.01).曲尼司特组大鼠心肌组织TGF-β1 mRNA水平、蛋白水平和心肌羟脯氨酸含量均较心肌梗死组明显降低(P<0.05或P<0.01);但与假手术组比较,各指标均明显升高(P<0.05).结论 曲尼司特能降低大鼠心肌梗死后心肌TGF-β1mRNA和蛋白的表达,这可能是其抑制心肌梗死后心肌纤维化的机制之一.     

青藤碱对大鼠心脏移植慢性排斥反应抑制作用的实验研究

目的 探讨青藤碱对大鼠心脏移植慢性排斥反应抑制作用的可能机制.方法 PVG大鼠作为供体、DA大鼠作为受体,所有大鼠在移植后的10 d给予环孢素A,受体大鼠被分为单用青藤碱组、单用环孢素A组和两药联合治疗组.移植物经形态学测定和免疫组织化学分析.用逆转录-聚合酶链反应评估成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、内皮素-1的表达.结果 与未治疗组和环孢素A组受体大鼠相比,青藤碱组大鼠心脏移植物的血管病较轻(血管分数分别为2.63±0.41、2.21±0.45、2.21±0.45).两药联合治疗组比单用任何一种药的移植物血管病都轻(1.65±0.55).单用青藤碱不影响bFGF、VEGF和ET-1的表达.青藤碱和环孢素A联合用药明显地减少bFGF、VEGF和ET-1的表达.单用青藤碱不能抑制抗供体抗体的形成物.结论 青藤碱在慢性心脏移植物排斥模型中有治疗价值.青藤碱联合环孢素A能有效抑制心脏移植物血管病,其机制可能与抑制移植物内血管的发生、血管紧张度和组织重构的介质表达有关.     

褪黑素对糖尿病大鼠心肌转化生长因子-β1表达的影响

糖尿病(DM)心肌病是DM患者所特有的心脏病变，其病理特点是心肌细胞肥大、心肌纤维化和心肌微小血管广泛内膜病变。转化生长因子β1(TGF-β1)对细胞的生长、分化和免疫功能都有重要的调节作用。动物试验表明体内转染TGF-β1基因可促进心肌纤维化。Doi等用免疫组化方法证实，DM大鼠心脏TGF-β1表达显著增高。褪黑素(Me