槲皮素、异鼠李素逆转体外HDL氧化修饰的实验研究

目的观察槲皮素(Quercetir,Que)和异鼠李素(Isorhamnetin,Iso)在体外对已受到Cu2 、Fe2 氧化修饰的人血浆高密度脂蛋白(high density liprotein,HDL)的作用.方法采用一次性密度法分离正常人血浆HDL,用Cu2 ,Fe2 进行体外氧化修饰.抗氧化组在修饰后6h加Que或Iso(100mol/L)作用不同时间(4,8和16 h).分别检测HDL中脂质过氧化物丙二醛(MDA)、维生素E(VitE)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果100μmol/L Que和Iso作用4,8h后可分别明显抵制Fe2 -Ox-HDL,Cu2 -Ox-HDL中MDA生成(P＜0.001).Que和Iso作用8,16 h后可分别提高Cu2 -Ox-HDL,Fe2 -Ox-HDL中SOD活性(P＜0.001);明显延缓VitE含量降低(P＜0.05).结论Que和Iso均对已受到Cu2 ,Fe2 氧化修饰的HDL具有明显的抑制作用,但对Cu2 ,Fe2 氧化修饰的HDL,槲皮素、异鼠李素的作用存在差异.Que和Iso的作用机制可能与其抗自由基氧化有关,提示该类物质是一种良好的抗氧化剂,对As的防治有一定的运用价值.     

Ebselen对Cu2+、Fe2+及巨噬细胞氧化修饰人LDL的抑制作用

目的:研究Ebselen对Cu2+、Fe2+及巨噬细胞氧化修饰人低密度脂蛋白(LDL)的抑制作用及其可能机制.方法:采用紫外分光光度法检测人LDL中硫代巴比妥酸反应物(TBARS)及共轭双烯(CD)的含量来表示LDL的被氧化程度.结果:Cu2+、Fe2+及体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞(MPM)都能氧化修饰人LDL,使其中的TBARS和CD含量显著升高.Ebselen(0.5～4.0 μmol/L)能剂量依赖性降低人LDL中TBARS和CD含量,其中2umol/L的Ebselen能完全抑制Cu2、Fe2+及MPM升高LDL中TBARS含量的作用.单用谷胱甘肽(GSH,0.5 mmol/L)对LDL中TBARS含量没有显著的影响,但GSH能显著增强Ebselen对TBARS生成的抑制作用.结论:Ebselen能抑制Cu2+、Fe2+及MPM氧化修饰人LDL,GSH能明显增强Ebselen的这种抑制作用.     

槲皮素、异鼠李素对Cu2+介导极低密度脂蛋白氧化修饰的影响

目的　观察槲皮素 (Que)及异鼠李素 (Iso)对 Cu2 +介导的极低密度脂蛋白 (VL DL)氧化修饰的影响。方法　采用一次性密度梯度离心法分离人血浆 VL DL,用 Cu2 +进行体外氧化修饰 ,抗氧化组在温育前加入不同浓度的 Que和 Iso。分别检测脂蛋白中丙二醛 (MDA)、维生素 E(Vit E)及超氧化物歧化酶 (SOD)活性。结果　Que和 Iso可明显降低 OX- VL DL 中 MDA含量 ,延缓 OX- VL DL 中 Vit E含量的减少 ;显著提高脂蛋白中 SOD活性。结论　 Que和 Iso可显著抑制 Cu2 +诱导的 VL DL 的氧化修饰 ,且二者的作用相近 ,这与其抗自由基氧化活性密切相关。     

褪黑素对小鼠血清铜、锌离子浓度的影响

目的:观察小鼠体内褪黑素水平对外周血中血清铜、锌离子浓度的影响.方法:将正常光照条件下共同饲养1wk的15只小鼠随机分为A,B,C 3组,每组5只.将A组小鼠置于正常光照条件下,B组小鼠置于持续光照条件下,C组置于持续光照条件下并注射褪黑素,用原子吸收法测定外周血血清铜、锌离子浓度.观察3组数值的差异.结果:B组小鼠血清锌离子浓度(24.8±0.4)低于A组(31.5±0.4)和C组(28.2±0.5),P＜0.01.B组小鼠血清铜离子浓度(19.0±0.9)高于A组(14.1±0.5)和C组(17.0±0.6),P＜0.01.结论:褪黑素在体内有升高血清锌离子浓度,降低血清铜离子浓度的作用,这可能与免疫机能的上调有关.     

谷胱甘肽对微囊藻毒素-LR所致小鼠肾脏氧化损伤的保护作用研究

目的：研究谷胱甘肽（GSH）对微囊藻毒素‐LR（MC‐LR）致小鼠肾脏氧化损伤的保护作用。方法用随机数字表法将40只健康清洁级昆明小鼠分为5组,分别为生理盐水组、GSH对照组、MC‐LR染毒组、GSH低剂量＋ MC‐LR染毒组、GSH高剂量＋MC‐LR染毒组,每组8只（雌雄各半）,经腹腔注射染毒,每日1次,持续15 d ,取出肾脏用于病理观察及检测过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH‐Px）活力和谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量。结果与生理盐水组比较,MC‐LR染毒能引起MDA含量[（2．31±0．22）nmol／mg prot]明显升高（P＝0．000）,以及GSH含量[（0．68±0．02） mg／g prot]、CAT活力[（320．54±38．99）nmol／mg prot]、SOD活力[（180．93±15．30）U／mg prot]、GSH‐Px 活力[（295．11±42．40）U／mg prot]下降（P＜0．05）;而外源性加入GSH干预后,与MC‐LR染毒组比较,GSH高剂量＋MC‐LR染毒组MDA含量[（1．94±0．12）nmol／mg prot]明显下降（P＜0．05）,GSH 低、高剂量＋ MC‐LR染毒组 GSH 含量[（1．01±0．08）mg／g prot、（1．08±0．16）mg／g prot]、CAT活力[（383．46±21．98）nmol／mg prot、（428．50±28．61）nmol／mg prot]均明显升高（P＜0．05）, GSH高剂量＋MC‐LR染毒组SOD活力[（222．01±11．51）U／mg prot]、GSH‐Px活力[（358．37±20．29）U／mg prot]活力均明显升高（P＜0．05）。结论 MC‐LR可能通过促进肾脏细胞发生脂质过氧化反应而引起导致肾脏氧化损伤,而加入GSH则可能通过减少脂质过氧化物质,提高抗氧化物活力,清除氧自由基而达到一定的肾脏保护作用。     

高脂膳食诱发家兔血清LPO升高及LDL,VLDL和HDL在活体内的氧化修饰

为探讨高脂膳食对家兔血清过氧化脂质升高和ＬＤＬ、ＶＬＤＬ，特别是ＨＤＬ氧化修饰的影响。正常对照组（ｎ＝８）喂以普通饲料，高脂实验组（ｎ＝８）用高胆固醇饲料（普通饲料加５％猪油，另每只兔加喂０．５ｇ胆固醇）喂养１２周。兔血清ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＨＤＬ用密度梯度超速离心法分离得到。ＬＤＬ、ＶＬＤＬ及ＨＤＬ的氧化修复用琼脂糖凝胶电泳、２３４ｎｍ光吸收及ＴＢＡＲＳ荧光检测进行鉴定。结果显示：高脂实验组兔血清     

金属硫蛋白对阿霉素致心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的 观察金属硫蛋白(metallothionein,MT)对阿霉素(adriamycin,ADR)致心肌细胞氧化损伤的保护作用.方法 将培养的心肌细胞随机分5组进行实验:①对照组;②阿霉素(1 mg/L)组;③阿霉素(1 mg/L)+MT1(5×10-9mol/L)组;④阿霉素(1 mg/L)+MT2(10-8mol/L)组;⑤阿霉素(1 mg/L)+MT3(5×10-8mol/L)组.MTT法计算心肌细胞存活率;试剂盒检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、细胞丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果 与对照组相比,阿霉素组心肌细胞存活率下降(P＜0.01),细胞LDH漏出量增加(P＜0.01),细胞MDA及NO含量升高(P＜0.01),细胞SOD活力降低(P＜0.01).分别应用5×10-9,10-8,5×10-8 mol/L MT与阿霉素共同处理心肌细胞,细胞存活率分别较单用阿霉素增加31.8%,47.8%和51.4%(均P＜0.01);细胞LDH漏出量分别较单用阿霉素降低20.5%,23.3%和34.6%(均P＜0.01);细胞MDA含量分别较单用阿霉素降低16.3%(P＜0.05),21.1%(P＜0.01),36.5%(P＜0.01);NO含量分别较单用阿霉素降低17.7%(P＜0.05),19.8%(P＜0.05)和30.1%(P＜0.01);心肌细胞SOD活性分别较单用阿霉素增加31.2%,36.5%和39.1%(均P＜0.01).结论 阿霉素导致心肌细胞氧化损伤,外源性MT具有降低这种心肌细胞氧化损伤的作用.     

肿瘤坏死因子α作用后脐静脉内皮细胞质内钙离子的变化

目的 :观察不同浓度肿瘤坏死因子α(TNF α)对培养人脐静脉内皮细胞质内钙离子变化的影响。　方法 :用Fluo 3作为钙指示剂 ,用激光共聚焦显微镜观察测定不同浓度TNF α作用后脐静脉内皮细胞质内钙离子 [Ca2 ]i的变化。　结果 :① 10 5U/mlTNF α刺激后 ,脐静脉内皮细胞内 [Ca2 ]i水平迅速升高。随着TNF α刺激浓度的下降 ,内皮细胞内 [Ca2 ]i升高波峰亦逐渐下降 ,10 2 U/mlTNF α作用后内皮细胞内 [Ca2 ]i水平无显著变化。②用D Hanks液平衡后 ,10 5U/mlTNF α刺激后脐静脉内皮细胞内 [Ca2 ]i的水平迅速下降 ,随着TNF α刺激浓度的下降 ,内皮细胞内 [Ca2 ]i下降波峰亦逐渐减缓 ;与此同时 ,细胞外液中Ca2 水平逐渐升高。③用EGTA预处理后 ,不同浓度TNF α作用后脐静脉内皮细胞质内外Ca2 水平无显著变化。　结论 :TNF α可使内皮细胞膜钙离子通透性增高 ,可能与其致凋亡或细胞毒功能有关     

羟基红花黄色素Ａ抗谷氨酸氧化性神经损伤的保护作用

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对谷氨酸(Glu)诱导的氧化性神经损伤的保护作用。方法以体外原代培养Wistar胎鼠大脑皮层神经元为实验材料，进行形态学观察，采用噻唑蓝（MTT）比色法、Hoechst33342/PI双荧光探针染色、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）含量检测、流式细胞仪分析细胞凋亡率以及免疫细胞化学法检测细胞色素C（CytC）荧光强度，综合评价HSYA对Glu氧化性神经损伤的保护作用。结果与Glu损伤组相比，HSYA能显著提高细胞相对存活率，维持细胞内较高SOD和GSH水平，降低Glu引起的细胞凋亡率及线粒体内CytC向胞质的释放，以160μg/mL浓度的 HSYA保护效果最为显著。结论HSYA对Glu氧化性神经损伤有显著的保护作用，其机制与抗氧化、抑制细胞凋亡有关。     

槲皮素对香烟暴露大鼠肺组织氧化应激和Nrf2表达的影响

目的探讨槲皮素对香烟暴露大鼠肺组织氧化应激和Nrf2表达的影响。方法将20只雄性SD大鼠随机分为正常对照组,单纯槲皮素对照组,熏烟模型组,熏烟＋槲皮素组,后两组大鼠均接受被动吸烟4周,熏烟＋槲皮素组在接受熏烟前予槲皮素50mg/kg.d腹腔注射干预。造模结束后留取肺组织,HE染色观察肺部形态学变化,匀浆肺组织检测谷胱甘肽和丙二醛的变化,Western Blot法检测Nrf2的表达。结果吸烟能明显增强大鼠肺组织的氧化应激状态和上调Nrf2的表达,槲皮素干预能降低香烟m暴露诱导的肺组织氧化应激状态,降低Nrf2在熏烟大鼠肺组织的表达。结论槲皮素能降低香烟暴露导致大鼠肺组织的高氧化应激状态,下调熏烟诱导的Nrf2高表达。     

绞股蓝皂甙抗谷氨酸诱导的氧化性神经毒性

目的：探讨绞股蓝皂甙(gypenoside，GP)对谷氨酸(glutamate，Glu)介导的氧化性神经毒性的拮抗作用。方法：体外培养胎鼠大脑皮层神经细胞，建立Glu氧化性损伤模型，用MTT法测定细胞活力，透射电镜观察Glu所致的神经细胞死亡方式，流式细胞术分析细胞凋亡率。结果：GP以时间依赖性方式明显拮抗谷氨酸介导的氧化性神经毒性，于Glu损伤前达到最佳保护效果，Glu氧化性毒性导致神经细胞发生凋亡兼具坏死特征的死亡，Glu损伤组细胞凋亡率(21．63％)明显高于正常对照组(0．09％)及GP保护组(8．94％)。结论：GP可明显拮抗Glu介导的氧化性神经毒性。     

白藜芦醇对小鼠辐射氧化损伤的保护性研究

目的:研究白藜芦醇(Rev)对辐射所致的小鼠氧化损伤的防护作用,探讨其可能作用机制。方法:使小鼠接受亚致死剂量(6Gy)的全身照射(TBI),制备辐射损伤模型。检测辐射损伤小鼠血浆中SOD,Mn-SOD和CAT的活性和骨髓单个核细胞中CAT的活性。结果:①在血浆中,单独给药组Mn-SOD水平低于对照组(P<0.05),总SOD变化不明显;照射给药组与照射组相比,总SOD水平显著上升(P<0.05),说明单独给予白藜芦醇后可以降低Mn-SOD水平,但对总SOD无影响。②骨髓单个核细胞和血浆中,单独给予白藜芦醇后可以显著提高CAT活性(P<0.05);照射给药组与照射组相比CAT活性明显提高(P<0.05)。结论:白藜芦醇对由辐射引起的氧化应激损伤有保护作用,其机制可能与提高相应组织过氧化物酶活性有关。     

西红花酸对过氧化氢诱发心肌细胞[Ca2+]i改变的作用

目的 观察西红花酸对H2O2诱发培养心肌细胞[Ca^2 ]i改变的效应，并探讨其机制。方法 应用Fluo-3／AM荧光标记技术和激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测不同因素处理的单个培养心肌细胞[Ca^2 ]i。结果 H2O2呈浓度依赖性地使单个培养心肌细胞[Ca^2 ]i增加，并不受细胞外环境是否存在Ca^2 的影响，L-型Ca^2 通道阻滞剂维拉帕米也不能完全中止[Ca^2 ]i的增加；不同剂量的西红花酸则能减低H2O2引发的单个培养心肌细胞[Ca^2 ]i增高的幅度。结论 西红花酸能明显抑制H2O2诱发培养心肌细胞[Ca^2 ]i增加的作用，可能与调整胞内钙库Ca^2 的释放和摄取、Ca^2 内流等机制有关。     

罗格列酮对细菌脂多糖所致小鼠肺部炎症和氧化应激的保护效应

目的 探讨罗格列酮(RSG)预处理减轻细菌脂多糖(LPS)所致小鼠急性肺损伤(ALI)进程中炎症和氧化应激的机制.方法 将32只SPF级CD-1雄性小鼠随机分成对照组、RSG组、LPS 6 h组和RSG+LPS 6 h组.LPS 6 h组及RSG+LPS 6 h组小鼠经腹腔注射单剂量LPS(2 mg/kg);RSG组及...     

五味子酮对β-淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元内游离钙离子浓度变化的影响

目的观察中药五味子酮对β-淀粉样蛋白(Aβ25~35)诱导的大鼠海马神经元内游离钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法采用大鼠海马神经元原代培养技术,运用双激发波荧光指示剂Fura-2/AM标记胞内相对[Ca2+]i的变化并进行比较。结果1μmol/L Aβ25~35作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.5951±0.0311,明显高于空白对照组的0.3617±0.0197(P<0.05);1μmol/L Aβ25~35和100μmol/L五味子酮共同作用于海马神经元48 h后,[Ca2+]i为0.4168±0.0468,仍明显高于空白对照组(P<0.05),但较单纯Aβ25~35作用后明显下降(P<0.05)。结论中药五味子酮可以通过抑制Aβ诱导的神经元[Ca2+]i增加,维持细胞内钙稳态,对神经元有一定的保护作用。     

仙茅苷对H2O2氧化损伤心肌细胞的保护作用

目的探讨仙茅苷对H2O2氧化损伤心肌细胞的保护作用及机制。方法体外培养大鼠原代心肌细胞,将其分为空白对照组、DMSO溶剂对照组（0.1%）、H2O2氧化损伤组（200μmol/L）、槲皮素干预组（槲皮素30μmol/L＋H2O2200μmol/L）、低浓度仙茅苷干预组（仙茅苷0.5μmol/L＋H2O2200μmol/L）、中浓度仙茅苷干预组（仙茅苷5μmol/L＋H2O2μmol/L）、高浓度仙茅苷干预组（仙茅苷50μmol/L＋H2O2200μmol/L）。用H2O2氧化损伤经槲皮素及不同浓度仙茅苷预培养24 h的心肌细胞,18 h后测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）释放量、心肌细胞内丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-px）含量,并测定心肌细胞的凋亡率和生长抑制率。结果 H2O2氧化损伤后LDH、MDA含量明显升高,GSH-px活性明显下降,细胞抑制率和凋亡率均增加（P〈0.01）;而经槲皮素、不同浓度的仙茅苷预处理组的心肌细胞,LDH、M DA含量明显下降,GSH-px活性明显升高,细胞生长抑制率和凋亡率均降低（P〈0.01）;且仙茅苷对心肌细胞氧化损伤的保护作用呈浓度依赖性。结论仙茅苷预处理心肌细胞可保护H2O2所诱导的氧化损伤,其作用可能与抑制脂质过氧化、增加抗氧化酶活性、减少心肌细胞凋亡有关。     

高热预处理对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨高热预处理（HPC）对过氧化氢（H2O2）所致大鼠嗜铬细胞瘤株（PC12）细胞氧化应激损伤的影响。方法 体外培养PC12细胞,将细胞分为正常对照组、HPC组、H2O2组、HPC＋H2O2组,采用MTT法测定细胞活力,乳酸脱氢酶（LDH）检测细胞损伤,流式细胞术分析细胞凋亡。结果 与正常对照组相比,H2O2组引起PC12细胞MTT活力明显下降（P〈0．01）,LDH释放量增多（P〈0．01）,凋亡明显;而与H2O2处理组相比,HPC＋H2O2组则表现为MTT活力升高（P〈0．05）,LDH释放量减少（P〈0．05）,且没有出现明显凋亡。结论 高热预处理对H2O2所致PC12细胞氧化应激损伤产生保护作用。     

胍丁胺对脂多糖诱导RAW264.7细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨胍丁胺(agmatine,AGM)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠巨噬细胞系RAW264.7氧化应激的抑制作用及其机制.方法 RAW264.7细胞经LPS(10 μg/mL)刺激发生氧化应激,同时AGM(1 mmol/L)对其进行干预.分为对照组、LPS组、LPS+AGM组、AGM组.药物作用24 h,以2,7-二氢二氯荧光素二乙酸酯(2 ',7'-dichlorofluoresce in diacetate,DCFH-DA)为荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;Griess法检测细胞内一氧化氮(NO)水平;Western blot检测细胞内的iNOS蛋白及细胞质细胞核内Nrf2蛋白表达;RT-PCR检测Nrf2下游抗氧化酶血红素氧合酶(heme oxygenase-1,HO-1)mRNA的表达.结果 与对照组相比,LPS可显著增加RAW264.7细胞中ROS、NO以及iNOS蛋白水平,而AGM干预后上述指标含量均明显降低(P＜0.05).AGM干预组中细胞核的Nrf2表达及其下游分子HO-1 mRNA表达水平较LPS单独刺激组显著升高,表明Nrf2信号通路在AGM的作用下被活化.结论 AGM可通过活化转录因子Nrf2促进抗氧化酶HO-1的表达,进而减轻细胞内的氧化应激损伤.     

褪黑素对氯胺酮所致大鼠膀胱氧化应激损伤的保护作用

目的探讨褪黑素对氯胺酮所致大鼠膀胱氧化应激损伤的保护作用及机制。方法将雄性SD大鼠30只随机分为3组:生理盐水组(NS组,生理盐水1ml/d)、氯胺酮组(KET组,氯胺酮100mg/(kg·d~(-1))、氯胺酮+褪黑素组[MT组,氯胺酮100mg/(kg·d~(-1))+褪黑素10mg/(kg·d~(-1))],每组10只。连续腹腔注射给药12周后收集大鼠膀胱组织,免疫组化法检测膀胱组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白和环氧化酶-2(COX-2)蛋白的表达,TUNEL法检测膀胱细胞凋亡情况,透射电镜观察膀胱细胞超微结构的改变。结果与NS组、MT组比较,KET组细胞凋亡数、iNOS和COX-2蛋白表达明显增加(P<0.05),透射电镜下膀胱上皮细胞线粒体出现明显肿胀以及空泡化。与NS组比较,MT组细胞凋亡数、iNOS和COX-2蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),透射电镜下膀胱上皮细胞线粒体形态未见明显异常,与NS组相似。结论褪黑素对氯胺酮所致的大鼠膀胱氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能与抑制iNOS和COX-2活性,减轻线粒体损伤有关。