血必净注射液对急性百草枯中毒大鼠肺组织中基质金属蛋白酶及其组织抑制因子的影响

目的通过观察血必净注射液对急性百草枯中毒大鼠肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及其组织抑制因子1(TIMP-1)表达的影响,探索血必净注射液治疗急性百草枯中毒肺损伤的机制。方法将126只Wister大鼠采用随机数字表法分成正常组、染毒组、血必净组,每组42只。染毒组、血必净组均腹腔内注射百草枯进行造模,血必净组造模后每天给予血必净注射液4mL/kg腹腔内注射。分别于实验的第1,3,7,14,21,28,35天,每组各处死6只大鼠,留取肺组织标本,镜下观察病理变化,采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力、硫代巴比妥酸法检测MDA含量,免疫组化法检测肺组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达水平。结果染毒组肺泡充血水肿,肺间质增厚,炎性细胞大量浸润,第35天时成纤维细胞大量融合,形成纤维化;血必净组肺泡水肿、炎细胞浸润以及肺间质纤维化均好转,病理改变介于染毒组与正常组之间。染毒组大鼠肺组织中SOD活力下降,MDA含量升高,MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达水平第1天即开始上升,MMP-2第7天达到高峰,MMP-9第3天达到高峰,TIMP-1第21天达到高峰,达到高峰后,MMP-2、MMP-9逐渐下降,TIMP-1却维持在高水平,各时段与正常组比较差异均有统计学意义(P均0. 05)。与染毒组比较,血必净组大鼠肺组织中SOD活力明显升高(P 0. 05),MDA含量及MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达量明显降低(P均0.05);与正常组比较,SOD活力仍较低(P 0. 05),MDA含量和MMP-2、MMP-9、TIMP-1蛋白表达量仍较高(P均0. 05)。结论 MMP-2、MMP-9及TIMP-1在百草枯所致大鼠肺损伤中起重要作用,血必净注射液能抑制肺组织中氧自由基反应,降低MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达,减轻染毒大鼠的肺损伤。     

抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶表达的影响

目的:研究抗纤抑癌方对肝纤维化大鼠肝组织MMP-1及TIMP-1表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制。方法:以复方鳖甲软肝片和秋水仙碱为对照药,观察抗纤抑癌方对二乙基亚硝胺诱发大鼠肝纤维化模型大鼠肝脏组织病理的影响,并通过免疫组化方法测定各组大鼠肝脏MMP-1、TIMP-1的表达。结果:与模型组相比,抗纤抑癌组MMP-1表达显著升高,TIMP-1表达明显降低;鳖甲软肝组和秋水仙碱组MMP-1表达均显著高于模型组。与各治疗组相比,抗纤抑癌组MMP-1表达高于鳖甲软肝组。结论:抗纤抑癌方具有明显的抗肝纤维化作用,其作用机制可能与增加MMP-1表达、降低TIMP-1表达、促进细胞外基质降解等有关。     

益气活血方对大鼠放射性肺损伤组织MMP-2/TIMP-2表达的影响

目的: 检测益气活血方干预前后大鼠放射性肺损伤组织基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2,MMP2)和基质金属蛋白酶抑制剂2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinase,TIMP2)表达的影响,了解该方剂的作用机制. 方法: 健康成年雌性SD大鼠120只,随机分为模型组30只、照射加益气活血方高剂量组30只、照射加益气活血方低剂量组30只、空白组30只.益气活血方高、低剂量组大鼠受照当天开始,用药量20,10 g·kg^-1,每次ig益气活血方剂5 mL·kg^-1,2次/d;模型组、空白组每次ig蒸馏水5 mL·kg^-1,2次/d.4组大鼠分别于照射后第4,8,12,16,20周末随机抽取6只,处死并取其右肺组织保存.分别用反转录PCR技术(RT-PCR),蛋白质印迹法(Western-blotting)检测MMP-2／TIMP-2 mRNA及蛋白表达的动态变化. 结果: 模型组MMP-2 mRNA及蛋白表达于第12周达高峰,而TIMP-2 mRNA及蛋白表达在照射后第4周至20周期间出现逐渐升高的趋势,各时间点模型组与空白组相比均具有明显差异(P<0.01).益气活血方高剂量组与模型组相比,各mRNA及蛋白表达趋势与模型组相似,MMP-2 mRNA及蛋白表达在12周前低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).益气活血方低剂量组各项指标均有变化,趋势与模型组类似,差异没有统计学意义. 结论: 益气活血方高剂量在放射性肺损伤的各个时间段,从转录及翻译层面对MMP-2/TIMP-2的表达进行调整,使MMPs/TIMPs趋于平衡,从而减轻放射性肺损伤,这可能是该药防治放射性肺损伤的分子生物学机制.     

护津方对急性肺损伤大鼠肺组织金属基质蛋白酶2mRNA及其抑制因子2mRNA表达的影响

目的：探讨护津方对细菌脂多糖诱导的急性肺损伤（Au）大鼠肺组织金属基质蛋白酶2mRNA（MMP一2mRNA）及其抑制因子2mRNA（tiMP一2mRNA）表达的影响。方法：40只雄性Wislar大鼠随机分为4组：正常对照组、LPS模型组、地塞米松组和护津方组,每组再分为4小时和8小时两个亚组。分别用地塞米松和护津方在LPS诱导Au模型前预处理大鼠。检测大鼠肺体指数,实时荧光定量PcR检测肺组织MMP一2mRNA、TIMP一2mRNA表达,并光镜观察肺组织病理形态变化。结果：与模型组相比,在两个时相点护津方组大鼠肺体指数显著降低（P〈0．01或P〈0．05）、MMP一2mRNA表达表达明显降低（P〈0．01）及TIMP一2mRNA表达明显升高（P〈0．01或P〈0．05）。病理学观察,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,护津方组大鼠肺组织病理损伤程度较模型组减轻。结论：护津方对内毒素致急性肺损伤大鼠有保护作用,其机理可能与其能降低MMP一2mRNA的表达和升高TIMP一2mRNA的表达有关。     

抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌基质金属蛋白酶-2及其抑制剂-2表达的影响

目的 观察抗纤益心方对扩张型心肌病大鼠心肌基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其抑制剂-2(TIMP-2)表达的影响.方法 喂饲大鼠呋喃唑酮8周建立扩张型心肌病动物模型,随机分组后药物干预8周,检测心肌MMP-2及TIMP-2的表达.结果 与模型组比较,中西药联用组、中药大剂量组和卡托普利组均明显下调MMP-2表达(P均<0.05),上调TIMP-2蛋白表达(P均<0.05).中药小剂量组也能够下调MMP-2表达(P<0.05),但TIMP-2蛋白表达与模型组无差异(P>0.05).结论 抗纤益心方能够减轻扩张型心肌病大鼠心肌组织纤维化,其机制与下调MMP-2表达、上调TIMP-2表达有关.     

猪血清肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶-9/13和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1/2表达的动态变化及下瘀血汤对其影响

目的:研究免疫性肝纤维化大鼠肝组织基质金属蛋白酶9/13和基质金属蛋白酶组织抑制因子1/2表达的动态变化及下瘀血汤对其影响,探讨下瘀血汤抗肝纤维化的机制。方法:猪血清腹腔复制大鼠肝纤维化模型,造模8周后ig下瘀血汤的流浸膏,用药4周后和在造模过程中的1、24、、8周动态处死大鼠,获取标本,检测指标。结果:MMP-2/9的高活性和TIMP-1的高表达贯穿于本模型的始终。MMP-9/13蛋白表达在肝纤维化发生发展过程中有先抑制后升高,再次抑制而后升高的反复过程,并受TIMP-1/2表达影响;下瘀血汤可以提高MMP-9活性,促进MMP-9/13而抑制TIMP-1,2表达。结论:该模型有MMP-9/13和TIMP-1/2表达的失衡;下瘀血汤可通过调控MMp-9/13和TIMP-1/2的表达,降解过度沉积的细胞外基质而发挥抗肝纤维化的作用。     

丹参多酚酸盐对心衰大鼠基质金属蛋白酶-3及其抑制因子-1表达的影响

目的探讨丹参多酚酸盐对心衰大鼠基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)及其抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响。方法 60只雄性SD大鼠完全随机分成模型组,丹参多酚酸盐低剂量组、高剂量组,卡托普利组,卡托普利和丹参多酚酸盐高剂量联合组(简称中西药联合组),正常对照组。除正常对照组,其余大鼠运用阿霉素腹腔注射制造心衰模型,正常对照组大鼠腹腔注射等体积的生理盐水,每周1次,共6周。在开始造模的同时,各组开始相关干预。8周后,检测心功能,行心肌组织天狼猩红染色,检测心肌胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF)、心肌血管周围胶原面积与管腔面积的比例(perivasular circumferentiall area,PVCA)。荧光PCR检测心肌MMP-3、TIMP-1的mRNA水平,Western blot检测心肌MMP-3、TIMP-1的表达情况。结果与模型组相比,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组均有不同程度的降低心肌CVF、PVCA(P0.05,P0.01,P0.01),中西药联合组较卡托普利组更明显(P0.05);丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组心肌组织中MMP-3的mRNA水平及蛋白表达较模型组均降低(P0.05,P0.01,P0.01),且中西药联合组低于卡托普利组(P0.05);与模型组相比,丹参多酚酸盐高剂量组、卡托普利组、中西药联合组均能上调心肌组织TIMP-1的mRNA水平及蛋白表达(P0.05,P0.01,P0.01),且中西药联合组高于卡托普利组(P0.05)。结论丹参多酚酸盐能降低心肌间质胶原,其机制可能与下调MMP-3及上调TIMP-1的表达有关。     

三七总皂苷对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-13及其抑制因子-1表达的影响

目的:观察三七总皂苷(PNS)对四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶(MMP)-13、基质金属蛋白酶抑制因子(TIMP)-1表达的影响,探讨PNS抗肝纤维化作用的可能机制.方法:将大鼠随机分成正常组、模型组、PNS低、中、高剂量(50,100,200 mg·kg-1)组和秋水仙碱(Col,0.1mg·kg-1)组.除正常组外其余各组采用CCl4皮下注射的方法诱导肝纤维化大鼠模型,每周2次,连续18周.于造模第9周起,给药组分别灌胃相应的受试药物,正常组和模型组灌胃等容量的生理盐水,疗程10周.实验结束后,计算肝脏、脾脏指数;比色法测定血清中ALT,AST含量;同时取固定部位肝脏组织,HE染色观察肝组织病理学改变,免疫组化技术测定肝组织中MMP-13,TIMP-1蛋白的表达,RT-PCR技术测定MMP-13,TIMP-1mRNA的表达.结果:与模型组相比,三七总皂苷(100,200 mg·kg-1)不仅可减轻大鼠肝纤维化程度,降低肝脏、脾脏指数及血清ALT,AST的含量,还可显著升高肝纤维化大鼠肝脏MMP-13的表达,降低TIMP-1的表达.结论:三七总皂苷对大鼠肝纤维化具有一定的保护作用,其机制可能与上调MMP-13,抑制TIMP-1的表达,促进胶原降解有关.     

护津方对急性肺损伤大鼠肺组织核转录因子-κB mRNA表达的影响

目的 探讨护津方对细菌脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤大鼠肺组织核转录因子-κB mRNA(NF-κBmRNA)表达的影响.方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、地塞米松组和护津方组,每组再分为4h和8h两个亚组;分别用地塞米松和护津方在LPS诱导急性肺损伤模型前预处理大鼠.采用免疫组化法和定量RT-PCR检测大鼠肺组织NF-κB蛋白及NF-κB mRNA的表达,光镜观察肺组织病理形态.结果 与模型组相比,护津方组两个亚组大鼠肺组织NF-κB蛋白及NF-κB mRNA的表达均显著降低.病理学观察显示,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,护津方组大鼠肺组织病理损伤程度较模型组减轻.结论 护津方对内毒素致急性肺损伤大鼠有保护作用,其机制可能与其降低内毒素致急性肺损伤大鼠NF-κB蛋白及NF-κB mRNA的表达有关.     

肺纤方对博莱霉素大鼠肺纤维化模型基质金属蛋白酶1、2及组织金属蛋白酶抑制剂1、2的影响

目的:观察肺纤方抗大鼠肺纤维化肺基质重建的作用。方法:气管内注入博莱霉素制造大鼠肺纤维化模型,观察造模后14、28、45d模型组、假手术组、肺纤方组、泼尼松组血清基质金属蛋白酶1、2及其抑制物组织金属蛋白酶抑制剂1、2的变化。结果:肺纤方可以显著降低血清基质金属蛋白酶1、2及组织金属蛋白酶抑制剂1、2。结论:肺纤方具有抗大鼠肺纤维化基质重建作用。     

通心络对大鼠心梗后心肌MMP-9及TIMP-1表达作用的研究

目的：研究通心络对大鼠心梗后心肌MMP-9及TIMP-1表达作用的影响。方法：应用结扎冠脉前降支的方法制备大鼠心梗模型，将SD大鼠随机分为5组：假手术组、心梗组、通心络干预组（2．0g／kg／day）、卡维地洛干预组（1mg／kg／d）、福辛普利干预组（10mg／kg／d）。干预3个月后，苦味酸天狼猩红染色观察心肌间质胶原重塑的改变，以蛋白免疫印迹法（western blot）的方法检测MMP-9及TIMP-1的表达情况。结果：福辛普利、卡维地洛及通心络干预组大鼠血流动力学指标较心梗组都有不同程度地改善，苦味酸天狼猩红染色见：心梗组心肌间质胶原沉积显著，卡维地洛、福辛普利及通心络干预组胶原沉积的情况减轻。与假手术组相比，心梗组MMP-9的表达显著升高，药物干预后表达下调，以卡维地洛组最为明显。TIMP-1的表达心梗组最低，通心络、福辛普利及卡维地洛干预后表达有不同程度的增高。结论：中药通心络可以减轻大鼠心肌梗死后心肌间质胶原沉积，下调MMP-9的表达，促进TIMp-1的表达。     

雄芍汤对免疫性肝纤维化大鼠MMP-9和TIMP-1的影响

目的:研究雄芍汤对肝纤维化大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响.方法:大鼠分为正常组、模型组、扶正化瘀胶囊对照组(0.525 g·kg-1)、雄芍汤预防组(7.9 g·kg-1)和高、低剂量组(15.8,7.9g·kg-1).采用猪血清腹腔注射法复制大鼠肝纤维化模型.酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清MMP-9含量,实时荧光定量PCR技术检测肝组织中TIMP-1 mRNA的表达.结果:雄芍汤7.9 g·kg-1剂量预防组MMP-9含量显著高于模型组(P＜0.01).雄芍汤15.8 g·kg-1剂量组TIMP-1 mRNA表达显著低于模型组(P＜0.01).结论:雄芍汤可以促进免疫性肝纤维化大鼠血清MMP-9生成,抑制大鼠肝组织TIMP-1 mRNA表达.调节MMP与TIMP的协调平衡可能是雄芍汤抗肝纤维化的机制之一.     

益气化瘀方对大鼠前列腺增生组织MMP-2/TIMP-2表达的影响

目的:观察益气化瘀方对大鼠前列腺增生组织血管新生和基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其抑制物(TIMP-2)表达的影响。方法:50只SD大鼠去势7天后,皮下注射丙酸睾酮5mg.kg-1.d-1,同时给予益气化瘀方、非那雄胺混悬液灌胃,30天后股动脉放血处死大鼠,摘取前列腺,测量前列腺体积,计算前列腺指数(PI),检测前列腺微血管密度(MVD)和前列腺组织中MMP-2及其抑制物(TIMP-2)表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠前列腺指数明显增大(P<0.01),前列腺组织MVD明显增高(P<0.01),MMP-2蛋白表达显著增高(P<0.01),MMP-2/TIMP-2比值明显增大(P<0.05);各给药组前列腺前列腺指数、MVD、MMP-2表达、MMP-2/TIMP-2比值均明显低于模型组(P<0.05或P<0.01);益气化瘀方中、高剂量组大鼠前列腺指数、MMP-2表达量、MMP-2/TIMP-2比值与非那雄胺组比较,差异均无统计学意义(P>0.05),但前列腺组织MVD明显低于非那雄胺组(P<0.05)。结论:中药益气化瘀方具有抗前列腺组织增生作用,其机制可能与抑制MMP-2过度表达,进而抑制前列腺增生组织新生血管形成有关。     

枳实薤白桂枝汤对不稳定型心绞痛患者MMP-9/TIMP-1的影响

目的:探讨枳实薤白桂枝汤对血瘀、痰浊、气滞、寒凝为主的不稳定型心绞痛(UA)患者基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)水平及其基因表达的影响及其作用机制.方法:UA患者60例,按随机原则,将患者划分为对照组和治疗组,每组各30例.酶联免疫标记(ELISA)测定血清MMP-9,TIMP-1水平,实时荧光定量PCR技术进行相对定量检测MMP-9,TIMP-1基因表达,比较两组MMP-9,TIMP-1水平及其基因表达的变化.结果:两组患者症候积分较治疗前均有改善(P＜0.05),且治疗组优于对照组(P＜0.05).两组患者MMP-9,TIMP-1水平较治疗前均有改善(P＜0.05),且治疗组优于对照组(P＜0.05).两组患者MMP-9,TIMP-1 mRAN较治疗前均有改善(P＜0.05),MMP-9/TIMP-1 mRAN比较,治疗组优于对照组(P＜0.05).结论:在规范化治疗的基础上加用枳实薤白桂枝汤可进一步改善UA患者MMP-9,TIMP-1水平及其基因表达,促进粥样斑块的稳定性.     

MMP-2、TIMP-2、CD147在中医药防治肝纤维化中的作用

基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)是降解Ⅳ型胶原的主要酶,基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(tissue inhibitor of metalloproteinase-2,TIMP-2)是其天然抑制剂,二者也是维持细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)正常代谢的关键。CD147又被称为细胞外基质金属蛋白酶诱导因子,是MMP-2活化过程中的重要因子。越来越多的研究发现,中医药可通过影响MMPs/TIMPs的表达来防治肝纤维化。中医药学家通过大量的临床和实验研究来防治肝纤维化,并取得了很大的进展,但仍有很多现实问题。临床实际中各中医学家对肝纤维化阶段的辨证着眼点不同,易忽视与其他脏腑之间关系,正确把握"祛邪与扶正"的关系值得进一步探讨。基础研究相对滞后,体外实验研究的局限性,缺乏与人体肝纤维化相近的模型,天然中药成分复杂,中药复方作用机理更加难以阐明,阻碍了中医药防治肝纤维化的应用。中药来源、处理等过程不同,起作用的生物活性物质所用含量有差别,难以对研究结果进行比较。但中药种类丰富,具有多成分、多层次、多途径、多靶点的综合药理作用,可以对肝纤维化复杂的病理过程进行应对,在此方面充分显示了优势,也显示出中医药在防治肝纤维化方面的前景。肝纤维化产生机制复杂,寻求有效的防治肝纤维化之路、逆转早期肝纤维化及延缓肝硬化甚至肝癌的进程有很重要的现实意义,我们还需要不懈的努力和继续进行探索。     

补肺汤对肺纤维化大鼠肺组织MMP-9、TIMP-1蛋白表达影响

目的:观察补肺汤对肺纤维化大鼠肺组织中基质金属蛋白-9(MMP-9)和组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)蛋白表达及肺组织病理变化的影响。方法:雄性SD大鼠,随机分成4组:空白组、模型组、强的松组、补肺汤组。除空白组外,其余3组均采用博莱霉素(BLM)制作肺纤维化大鼠模型,每日灌胃给药,造模后7、14、28天取材。通过免疫组织化学染色方法,检测肺组织MMP-9、TIMP-1蛋白表达,采用光学显微镜观察肺组织病理变化。结果:与模型组比较,补肺汤组、强的松组各时间点肺泡炎和肺纤维化程度均较轻;与模型组比较,各时间点强的松组、补肺汤组肺组织MMP-9蛋白表达明显减低;与模型组比较,各时间点的强的松组、补肺汤组肺组织TIMP-1蛋白表达明显降低。结论:补肺汤能够抑制早期肺泡炎的发生,降低肺组织MMP-9与TIMP-1蛋白表达,纠正MMP-9/TIMP-1失衡,改善细胞外基质的异常代谢,从而抑制或延缓博莱霉素致大鼠肺纤维化的发生和发展。     

红芪黄酮对肺纤维化模型大鼠基质金属蛋白酶-2及其抑制剂-1蛋白表达的影响

目的探讨红芪黄酮防治肺纤维化的作用机制。方法 SPF级Wistar大鼠216只,分为正常组、模型组、强的松组及红芪黄酮高、中、低剂量组。采用气管内滴注博莱霉素法建立肺纤维化模型,从造模后第2日起,各药物组分别给予相应剂量药物,按时间点连续灌胃治疗7、14、28 d,免疫组化法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1蛋白的表达。结果红芪黄酮高剂量组第7、14、28日及红芪黄酮中剂量组第14日MMP-2蛋白的表达较模型组明显减轻,差异有统计学意义(P0.05),红芪黄酮高剂量组表达水平与强的松组相似;红芪黄酮高、中剂量组第14日及红芪黄酮高剂量组第28日TIMP-1蛋白表达均较模型组明显减轻,差异有统计学意义(P0.05)。结论红芪黄酮在各个时点调整MMP-2和TIMP-1的蛋白表达,使MMPs/TIMPs趋于平衡,可能是其抑制肺纤维化进程的一种有效机制。     

益气补肾方对SGC-7901细胞MMP-2和TIMP-2基因表达的影响

目的:探究益气补肾方抗胃癌转移作用的可能机理。方法:采用RT-PCR检测法测定益气补肾方水煎液对SGC-7901细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制酶-2(TIMP-2)基因表达水平的变化。结果:益气补肾方能下调MMP-2 mRNA的表达。结论:益气补肾方抗胃癌转移作用的机制可能与下调MMP-2 mRNA表达有关。