化疗药物体内外对免疫活性细胞的影响

目的：通过化疗对机体免疫细胞影响的研究。探讨肿瘤化疗后衔接生物治疗的最佳时效。方法：采用细胞培养技术，观察化疗药物对培养的肿瘤细胞，小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞的毒性作用；同时还观察化疗药物作用小鼠体内不同时间后，其对小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞代谢和激活功能的影响；运用细胞计数的方法，观察化疗对小鼠腹腔巨噬细胞时间后，其小鼠腹腔巨噬细胞和脾淋巴细胞代谢和激活功能的影响；运用细胞计数的方法，观察化疗对小鼠腹腔巨噬细胞和外周血免疫细胞的动力学影响；另外对经化疗药物注射2d后的小鼠进行H22肝癌细胞接种，14d后解剖小鼠观察肿瘤生长。结果：化疗药物体外对免疫细胞有很强毒性作用。体外使免疫细胞代谢降低。活化受阻，并使免疫细胞动力学发生改变，在化疗后第3天免疫细胞数降至最低，约10d左右恢复正常；化疗药物注射小鼠体内2d后，再接种瘤细胞，肿瘤生长明显加快。结论：化疗既降低机体免疫细胞数量，又抑制其功能，且在其杀瘤作用消失后还具有间接促瘤生长的作用。因此，化疗后立即实施以肿瘤免疫治疗为主的生物治疗是不恰当的，在化疗后间隔较长时间再给予生物治疗也是不恰当的，生物治疗应选择在化疗药物作用消失后，免疫细胞数降至最低或开始恢复时实施，方能取得较好的效果。     

小鼠移殖性肿瘤生长的性别差异及其原因探讨——(Ⅱ)阻断巨噬细胞机能对不同性别小鼠移植性肿瘤生长的影响

小白鼠腹腔注射硅胶悬液,使巨噬细胞中毒、死亡以阻断巨噬细胞的机能。结果在雌性小白鼠,实体型肉瘤180和肝癌的生长明显加快,向周围组织浸润也更广泛,在雄性小白鼠则无明显变化。推测系因雌性小白鼠对瘤细胞的抑制或杀伤作用较雄性更多依赖(直接或间接)于巨噬细胞的机能之故。     

裸小鼠人宫颈癌组织模型的建立及其生物学特性初探

目的 建立人宫颈癌HeLa细胞在裸小鼠的体表肿瘤模型,并研究其成瘤性及生物学特性。方法 以不同浓度人宫颈癌HeLa细胞悬液在裸小鼠皮下接种建立人宫颈癌裸小鼠模型,观察荷瘤鼠的成瘤率及肿瘤的一般特性,病理检查其组织学特性,流式细胞术检测其生长、凋亡情况,免疫组织化学法检测肿瘤组织中Survivin,Caspase-3和JAK-STAT3蛋白的表达情况。结果 成瘤率为100%,肿瘤生长以局部浸润为主,未见转移瘤,所有新生肿瘤组织符合人宫颈癌细胞组织特点,绝大多数肿瘤细胞处在增殖分化期,标本宫颈癌组织中有Survivin,Caspase-3和STAT3蛋白的阳性表达。结论 成功建立了裸小鼠人宫颈癌组织模型,该模型较好地模拟了人宫颈癌的生物学特性,为进一步研究针对诱导细胞凋亡治疗的新方法提供了理想的动物模型。初步观察了不同浓度HeLa细胞悬液接种生长的肿瘤组织在生长方面的区别。     

肿瘤病人T淋巴细胞活性和巨噬细胞吞噬功能的研究

本文以114例肿瘤病人和58例正常人外周血ANAE+T淋巴细胞的活性和皮泡渗出液中的吞噬细胞功能进行了研究,结果与对照组相比较,有显著性差异(p<0.001),但各组肿瘤病人间无差别。体外试验也证实了肿瘤病人的血请者皮泡渗出液对正常人的T淋巴细胞ANAE的活性和小鼠巨噬细胞的吞噬功能均有明显的抑制作用。再次证明肿瘤病人的免疫损伤是以细胞免疫为主。肿瘤病人ANAE+细胞减少和巨噬细胞吞噬功能下降可能与肿瘤本身在血请或皮泡渗出液中产生的抑制因子有关。鼻咽癌病人放疗后的ANAE+细胞和巨噬细胞的吞噬功能,较疗前近一步下降。此外我们对ANAE+细胞的临床意义进行了讨论。     

三苯氧胺,雌激素和巨噬细胞对小鼠移植性肿瘤生长性别差异的影响

我们研究了三苯氧胺、雌激素和巨噬细胞对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠可移植性肿瘤肉瘤１８０生长的性别差异影响。移植性肉瘤１８０的生长在ＢＡＬＢ／小鼠具有明显的差异。即在雄性小鼠瘤块出现的时间早，肿瘤的生长速度也比雌性快。     

激活的巨噬细胞对处于细胞周期不同时相肿瘤靶细胞的作用

作者认为巨噬细胞之所以能表现出细胞杀伤或细胞抑制效应是与靶细胞未确定的特性相关。为此作者研究了短小棒状杆菌(CP)激活的或正常的小鼠腹腔巨噬细胞对处于细胞周期不同时相的EMT-6小鼠腺肉瘤细胞的细胞抑制效应。激活的巨噬细胞对该瘤株只有细胞抑制效应且作用是可逆的;作者用有丝分裂选择法获得大量同步化的EMT-6肿瘤细胞,由~3H-TdR掺入及细胞计数确定该瘤株细胞周期的不同时相。在靶细胞不同时相加入0.5毫升效应细胞(4×10~(?)/毫升),1小时后除去不粘附的细胞,加入新鲜培养液。在一     

小鼠S180肉瘤脂质体瘤苗的实验研究

作者以脂质体包裹Ｓ１８０肿瘤相关抗原制备成脂质体瘤苗，以瘤苗免疫小鼠后进行肿瘤细胞攻击试验及腹腔巨噬细胞毒试验，观察小鼠Ｓ１８０肉瘤脂质体瘤苗的免疫保护作用。结果提示，脂质体瘤苗具有一定的免疫保护作用，Ｓ１８０脂质体瘤苗免疫小鼠具有抑制Ｓ１８０肿瘤生长（Ｐ＜０．０５），延长荷瘤鼠生存期（Ｐ＜０．０１）和提高小鼠腹腔巨噬细胞的细胞毒活性（Ｐ＜０．０１）的作用，但其作用不及弗氏佐剂加肿瘤细胞匀浆组。     

抗前列腺癌细胞特异抗体库的构建及特异结合抗体的筛选

目的:研究复方中药VI-28胶囊(即卫康胶囊,主要成分有人参、鹿茸、菟丝子)辅助环磷酰胺体内抑制肿瘤生长的作用及其机制。方法:C57BL/6纯系小鼠背部皮下接种Lewis肺癌细胞(LCC,每只106个细胞),同时按40mg/kg隔天腹腔注射环磷酰胺治疗。实验组灌胃VI-28(2%悬液,每只0.5ml,隔天给药)。第28天时取小鼠胸腺和肿瘤组织块,计算肿瘤指数和胸腺指数。取脾细胞测定细胞免疫功能。组织切片观察所形成实体瘤的病理学特征。结果:小鼠接种LLC细胞14d后在接种部位开始形成实体瘤,瘤块直径增加为1—1.8cm。与单纯化疗荷瘤组小鼠相比,VI-28辅助治疗组的胸腺较大,脾细胞对ConA反应性较强,形成实体瘤的瘤块较小且分化程度较高。结论:VI-28胶囊可有效地促进化疗小鼠免疫功能的恢复,帮助化疗药物抑制肿瘤生长,是一种有效的化疗辅助药。     

银耳制剂对小鼠移植性肿瘤预防及其机理的实验研究

小鼠在移植肿瘤细胞前,注射银耳制剂,显示出银耳对荷腹水型或荷实体瘤小鼠肿瘤的生长有明显的抑制作用.正常小鼠给银耳制剂后,其腹腔巨噬细胞(M￠)数量与功能、形态有明显变化,此M￠可吞噬和杀伤肿瘤细胞.     

VI-28胶囊辅助环磷酰胺治疗荷载LLC肿瘤小鼠的实验研究

目的: 研究复方中药VI-28胶囊(即卫康胶囊,主要成分有人参、鹿茸、菟丝子)辅助环磷酰胺体内抑制肿瘤生长的作用及其机制.方法: C57BL/6纯系小鼠背部皮下接种Lewis肺癌细胞(LCC,每只106个细胞),同时按40mg/kg隔天腹腔注射环磷酰胺治疗.实验组灌胃VI-28(2%悬液,每只0.5 ml,隔天给药).第28天时取小鼠胸腺和肿瘤组织块,计算肿瘤指数和胸腺指数.取脾细胞测定细胞免疫功能.组织切片观察所形成实体瘤的病理学特征.结果: 小鼠接种LLC细胞14 d后在接种部位开始形成实体瘤,瘤块直径增加为1～1.8 cm.与单纯化疗荷瘤组小鼠相比,VI-28辅助治疗组的胸腺较大,脾细胞对ConA反应性较强,形成实体瘤的瘤块较小且分化程度较高.结论: VI-28胶囊可有效地促进化疗小鼠免疫功能的恢复,帮助化疗药物抑制肿瘤生长,是一种有效的化疗辅助药.     

脂质体瘤苗激活巨噬细胞的抗瘤作用

巨噬细胞是体内重要的抗瘤效应细胞,使用巨噬细胞过继免疫治疗肿瘤已日益受到重视.本文用脂质体瘤苗免疫小鼠后,取其腹腔巨噬细胞(PEM)进行同系动物的过继免疫治疗,观察疗效.PEM来源于供体A.用H22肿瘤相关抗原脂质体瘤苗免疫的小鼠.供体B.用Frund’s adjuvant comleptH22癌细胞匀浆免疫的小鼠.供体C.艾氏腹水瘤肿瘤相关抗原脂质体瘤苗免疫的小鼠.供体D.用不含抗原的脂质体免疫的小鼠.供体E.用生理盐水代替免疫制剂免疫的小鼠.每只小鼠腹腔注射1×10~5个H22癌细胞后第二天腹腔分别转输各组PEM细胞5×10~6,对照组用生理盐水代替PEM.结果表明,死亡动物存活时间(X±SD)分别为A:32.7±9.3、B:30.6±6.8、C:31.2±9.2、D:31.1±6.6、     

利用细胞膜片技术构建新型前列腺癌皮下移植瘤动物模型

背景与目的：传统前列腺癌皮下移植瘤模型的建立采取细胞悬液注射方式,但该方式存在较大局限性。探索利用细胞膜片技术构建新型前列腺癌皮下移植瘤动物模型的可行性。方法：将人前列腺癌细胞系DU145接种至35 mm温度敏感性细胞培养皿中,连续培养制备前列腺癌细胞膜片,并采用H-E染色和免疫组织化学方法鉴定。根据研究目的,设置细胞悬液组和细胞膜片组,细胞悬液组在BALB/c裸小鼠皮下注射DU145细胞悬液,细胞膜片组在裸小鼠皮下注射DU145细胞膜片。移植后4周处死裸小鼠,剥离两组移植瘤作进一步组织学分析,包括胶原纤维含量、局部浸润及血管生成情况。同时,解剖前列腺癌常见的转移脏器,如骨、肺和肝脏等,评估两组的全身转移情况。结果：培养1周后可制备前列腺癌DU145细胞膜片,大体观察呈现半透明胶质薄片,具备较好的组织学强度。组织学染色见膜片状结构,平均厚度约为(32.6±7.5)μm。DU145细胞标志物vimentin高表达,E-cadherin低表达,胶原纤维含量丰富,在膜片中高表达。皮下移植4周后,H-E染色显示,细胞膜片组肿瘤结构致密,有明显周围肌肉浸润,而细胞悬液组肿瘤存在较多空泡,与周围组...     

β-胡萝卜素增强小鼠对同基因肿瘤的免疫应答

给接种 B_(16)黑色素瘤的 C57BL/6小鼠行β-胡萝卜素灌胃,每日10mg/kg。20天后,取小鼠脾细胞和B_1~6黑色素瘤细胞混合注入健康 C57BL/6小鼠皮下,观察肿瘤生长情况并检测脾细胞增殖活性和腹腔巨噬细胞的细胞毒活性。实验组和对照组小鼠肿瘤大小无显著性差异,但实验组肺部瘤转移灶数明显低于对照组;实验组脾细胞增殖活性和巨噬细胞细胞毒活性明显高于对照组。提示β-胡萝卜素可增强小鼠的抗肿瘤免疫功能。     

瘤内/瘤周注射巨噬细胞集落刺激因子或(和)干扰素γ基因转染的巨噬细胞对肿瘤的治疗作用

目的观察巨噬细胞集落刺激因子（ＭＣＳＦ）和干扰素γ（ＩＦＮγ）基因单独或联合转染的巨噬细胞（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，Ｍ）对局部黑色素瘤的治疗效果及相关免疫机理。方法荷瘤小鼠经基因转染的巨噬细胞治疗后，观察其长期存活期并检测其体内抗肿瘤免疫功能。用４小时５１Ｃｒ释放法检测荷瘤小鼠脾细胞自然杀伤细胞（ＮＫ）、细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）活性，间接ＭＴＴ法检测荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的杀伤活性，常规方法检测脾细胞诱导上清中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、白细胞介素２（ＩＬ２）、γ干扰素（ＩＦＮγ）活性，局部肿瘤经治疗后行常规病理分析。结果经ＩＦＮγ基因及联合基因转染的巨噬细胞治疗后的荷瘤小鼠有２５％能长期存活，体外诱导的ＣＴＬ和小鼠腹腔巨噬细胞杀伤活性显著增强，脾细胞经诱导产生的细胞因子有不同程度的增加，与对照组相比差别显著。常规病理显示，ＭＣＳＦ和ＩＦＮγ联合基因转染的巨噬细胞治疗的小鼠肿瘤局部有大量的淋巴细胞浸润。结论ＭＣＳＦ和ＩＦＮγ基因转染的巨噬细胞瘤内瘤周注射对肿瘤有较好的治疗效果，其机制除了与巨噬细胞在局部直接接触杀伤瘤细胞有关外，宿主抗肿瘤免疫功能的增强亦起了重要的作用     

巨噬细胞过继免疫治疗的实验研究

目的 研究脂质体瘤苗激活小鼠巨噬细胞的过继免疫治疗作用.方法 制备脂质体H22肝癌瘤苗,脂质体S180瘤苗,Freund's完全佐剂H22肝癌瘤苗以及对照脂质体瘤苗并免疫小鼠.用Hanks液清洗免疫鼠的腹腔收集糖原诱导的腹腔巨噬细胞.实验鼠腹腔注射1×105个H22肝癌细胞24小时后再腹腔给予各供体巨噬细胞5×106个/只.结果 脂质体H22瘤苗和Freund's佐剂H22瘤苗与对照组相比较,其免疫鼠提供的巨噬细胞具有较强的过继免疫治疗作用.结论 脂质体瘤苗激活的小鼠巨噬细胞具有特异性的可过继转移的抗瘤作用.     

BALB／C小鼠黑色素瘤肿瘤模型的建立及对荷瘤鼠的影响

目的建立小鼠不同部位黑色素瘤模型，为不同研究目的提供合适的动物肿瘤模型。方法接种B16小鼠黑色素瘤细胞于BALB／C小鼠足部、腹腔和尾静脉，建立移植瘤模型和肺部转移瘤模型。观察B16实体瘤的形态学特点，接种细胞数与肿瘤生成的关系，肿瘤生长对小鼠生存时间、血清肿瘤坏死因子（sTNF）和唾液酸（SA）的影响。结果足部接种5X10瘤细胞后10天，肿瘤进入对数生长，成瘤率近100％；腹腔接种瘤细胞数大于5000个／只，成瘤率与接种细胞数成正比；接种3X10细胞／只，10天后在小鼠腹壁和肠系膜可见散在黑色素瘤结节，荷瘤鼠sTNF和SA水平明显高于正常小鼠，且与肿瘤的大小和数量成正比，小鼠平均存活59天；尾静脉接种后3周，肺部可见大小不等转移瘤灶，两肺平均瘤灶数可达192.11士92。结论B16黑色素瘤细胞株在BALB／C小白鼠具有很高的成瘤率和转移特性，且较C57／B16小黑鼠模型具有方便、稳定和观察容易等优点，是一较理想的模型。     

温热低渗液联合丝裂霉素对小鼠腹水瘤腹腔种植的影响

 目的　探讨低渗性温热化疗对小鼠腹水瘤细胞腹腔种植的影响及探索能够结合热化疗药物达到最佳疗效的灌注液介质的浓度。方法　以昆明小鼠腹水瘤为模型,观察不同温度、不同浓度的低渗液结合MMC抑制腹水瘤细胞的生长及其毒性作用。结果　以上方法均能破坏小鼠腹水瘤细胞,减少瘤细胞数量,抑制腹水产生,延长小鼠生存时间,S期肿瘤细胞百分率减少,瘤细胞DNA指数(DI)降低(P<0.05),且以43°C重蒸溜水(DDW)及MMC腹腔内灌注的方法疗效最佳。结论　低渗液,尤其是DDW结合热化疗药物行腹腔内灌注是进展期消化道肿瘤患者发生腹膜种植转移的一种新的、有效的治疗方法。     

小鼠腹水瘤白血病病毒的纯化和结构蛋白的研究

小鼠腹水瘤(SRS)系用小鼠L~(6565)白血病胸腺组织的悬液接种昆明种小鼠腹腔建立成功的。在离心沉淀的SRS瘤细胞的超薄切片内可观察到A型和C型病毒样颗粒。本文报道应用超速离心密度梯度方法,分离和纯化除去瘤细胞后的腹水液中病毒(SRS-V),以及研究其形态和结构蛋白质等特性。     

紫杉醇节律化疗抗Lewis肺癌血管生成作用的实验研究

目的 观察紫杉醇节律化疗对C57BL/6小鼠Lewis肺癌(LLC)肿瘤生长及血管生成的影响并探讨其可能的机制.方法 建立小鼠LLC模型,随机分组后分别给予紫杉醇节律化疗和生理盐水腹腔注射,隔天测量小鼠体重及肿瘤体积.小鼠处死后称瘤重,应用免疫组化观察小鼠肿瘤组织中微血管和巨噬细胞、NF-κB蛋白的表达.结果 节律化疗组小鼠移植瘤的生长速度减慢,对照组皮下瘤重及体积明显大于节律化疗组(P＜0.05),节律化疗组微血管和巨噬细胞减少(P＜0.05),NF-κB蛋白表达亦减少(P＜0.05).巨噬细胞计数与微血管计数有相关关系.结论 紫杉醇节律化疗可明显抑制小鼠LLC的生长及血管生成,其可能机制之一是节律化疗可以下调小鼠肿瘤组织中的NF-κB蛋白表达,从而减少肿瘤新生血管生成.     

小鼠宫颈未分化鳞状细胞癌(U_(14))的生长规律

1.小鼠宫颈未分化鳞状细胞癌(U_(14))悬液接种皮下后瘤结的生长可分为三个阶段,即潜伏期(接种后3—5天瘤结开始摸到为止),瘤结开始逐渐长大(第6—11天)和12天以后,瘤结迅速长大(12天以后)。 2.传代用0.1毫升1:10的瘤组织悬液接种于昆明小鼠腋窝皮下,成活率为96.7％,未见瘤结自行消退。“接种不长”占3.3％。 3.宿主寿命为19—37天,平均寿命为27天,中间存活时间为26天。 4.癌细胞呈弥漫分布,癌细胞为多边形,细胞界限清楚,细胞间可见间隙,难见间桥,核大,呈圆、椭圆或不整形,核仁粗大,1—3个不等。瘤细胞的异型性显著。瘤间质极少。主要内脏器官与区域淋巴结很少看到转移。 5.接种初期在肿瘤实质中,可见较多的白细胞,淋巴细胞与巨噬细胞的聚集。1例接种肿瘤后无瘤生长之皮下部位,有较多的前浆细胞及浆细胞的存在,是机体免疫反应的表现。 6.本瘤已经近20年的传代,目前已传至第106代,生长与瘤型已告十分稳定。 7.本瘤株对化疗药物环磷酰胺十分敏感,其瘤重抑制率为100％,对氟尿嘧啶具有一定的敏感性。两个不同剂量的抑制率均为66％,这说明使用本瘤株作为抗癌药物的筛选是可取的。从1969年分院迁到四川后,目前传至106代。