角膜内树突状细胞及其在角膜移植免疫排斥反应中的作用

树突状细胞是目前已知的体内功能最强的抗原呈递细胞。成熟树突状细胞可引发机体免疫反应,而未成熟树突状细胞则会诱导机体免疫耐受。最近研究表明,角膜中央区内的树突状细胞完全处于未成熟状态,而角膜周边区内的树突状细胞则大多处于成熟状态;树突状细胞在角膜移植免疫排斥反应中发挥着重要作用。本文就角膜内的树突状细胞以及其在角膜移植免疫排斥反应中的作用作一综述。     

RelA基因修饰的树突状细胞在大鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用

目的 探讨RelA基因修饰供体骨髓来源的树突状细胞(dendritic cells,DC)在大鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用.方法 以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,建立大鼠穿透性同种异体角膜移植动物模型.将60只受体大鼠随机分为4组,每组15只,分别为对照组(造模前7d尾静脉注射PBS 1 mL)、mDC组(造模前7d尾静脉注射mDC 1 mL,共5×106个细胞)、imDC组(造模前7d尾静脉注射imDC 1 mL,共5×106个细胞)及RelA-DC组(造模前7d尾静脉注射RelA修饰的DC 1 mL,共5×106个细胞).术后每天观察角膜植片免疫排斥反应情况并记录角膜植片的存活时间;术后14 d每组随机处死5只受体大鼠取其角膜作组织病理学观察.结果 RelA-DC组角膜植片存活时间为(26.2±2.3)d,较对照组(11.4±1.3)d、mDC组(9.3±1.3)d及imDC组(19.4±2.6)d均明显延长,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);imDC组的存活时间显著长于对照组、mDC组(均为P＜O.05);与mDC组比较,对照组植片的存活时间延长,差异有统计学意义(P＞0.05).角膜植片组织病理学(HE染色)结果显示,对照组、mDC组角膜植片明显增厚、水肿,基质层胶原纤维排列紊乱,可见大量炎症细胞浸润以及新生血管;imDC组角膜植片呈不同程度水肿,基质层胶原纤维排列轻度紊乱,可见少量炎症细胞浸润;RelA-DC组角膜植片轻度水肿,基质层胶原纤维排列较规则,几乎没有单核细胞浸润.结论 静脉输注RelA基因修饰的DC能抑制大鼠角膜移植术后免疫排斥反应的发生,明显延长角膜植片的存活时间.     

未成熟树突状细胞在大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中的作用

目的 研究供体骨髓来源的未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用,探讨imDC抑制排斥反应的机理.方法 以60只SD大鼠为受体,30只Wistar大鼠为供体,碱烧伤建立同种异体高危角膜移植模型.受体SD大鼠随机分为对照组、imDC组、成熟树突状细胞(mature dendritic cell,mDC)组,每组20只;对照组:术前7d经尾静脉注射PBS液0.1 mL;imDC组:术前7d经尾静脉注射体外培养的供体骨髓来源的imDC 1×106个;mDC组:术前7d经尾静脉注射体外培养的供体骨髓来源的mDC1×106个.术后每天裂隙灯观察各组角膜植片存活情况并评分;于术后3d、7d、14 d每组随机处死4只大鼠,取角膜植片行HE染色,Western blot分析检测各组大鼠脾脏CD4+ CD25+调节性T细胞表面特异性标志转录因子Foxp3编码的Scurfin蛋白的表达.结果 imDC组角膜植片存活时间为(19.6±1.1)d,较对照组的(9.5±0.9)d和mDC组的(7.0±1.6)d明显延长,差异均有统计学意义(均为P＜0.01);Western blot检测结果显示,术后3d、7d、14 d imDC组Foxp3编码的Scurfin蛋白的表达(相对吸光度值分别为2.21±0.76、2.31±0.68、2.24±0.18)明显高于对照组(相对吸光度值分别为1.41±0.12、1.47±0.25、1.68±0.09)和mDC组(相对吸光度值分别为1.43±0.14、1.58±0.41、1.46±0.13),差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 应用体外培养的供体来源的imDC可以抑制大鼠同种异体高危角膜移植免疫排斥反应,而诱导CD4+ CD25+调节性T细胞的产生是其降低大鼠角膜移植术后免疫排斥反应的机制之一.     

IL-10基因修饰的未成熟树突状细胞在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

目的：通过建立大鼠角膜穿透性移植模型,探讨IL－10基因修饰的未成熟树突状细胞在大鼠角膜移植排斥反应中的作用及其作用机制。方法：建立大鼠同种异体穿透性角膜移植模型,将受体SD大鼠随机分为：阳性对照组、GFP－DC组、8－DC组及IL－10－GFP－DC组,分别于角膜移植术前3 d尾静脉注射等量的PBS、供体Wistar 大鼠骨髓源8－DC （培养8d的DC）、转染48h的GFP－DC及IL－10－GFP－DC。术后每天在裂隙灯下观察角膜植片情况,记录排斥反应指数及角膜植片存活时间,在移植术后第14 d行各组角膜组织的病理学检查及免疫组织化学检查。结果：IL－10－GFP－DC组角膜植片存活时间较GFP－DC组、8－DC组比较显著延长（ P＜0．01）。术后第14 d时IL－10－GFP－DC组角膜植片的混浊、水肿、新生血管及排斥指数均显著降低（P＜0．01）。病理组织学检查结果显示各实验组角膜植片的炎症反应较阳性对照组轻,植片中央未见明显新生血管。免疫组织化学结果显示：IL－10－GFP－DC组的CD4＋、CD8＋、CD25＋、IL－2＋、NK＋及NF－κB＋阳性细胞数量较阳性对照组、GFP－DC组、8－DC组减少,差异均具有显著统计学意义（P＜0．01）。结论：经过供体来源未成熟树突状细胞预处理的受体,角膜植片的存活时间显著延长,成功诱导角膜移植免疫耐受。 CD4＋、CD8＋、CD25＋、IL－2＋、NK＋及NF－κB＋阳性细胞参与了同种异体角膜移植排斥反应的调控,IL－10－GFP－DC可降低CD4＋、CD8＋、CD25＋、IL－2＋、NK＋及NF－κB＋阳性细胞的浸润,抑制角膜移植排斥反应的发生。     

角膜移植免疫排斥反应细胞疗法的研究进展

角膜移植术后免疫排斥反应是导致手术失败的主要原因,而临床上常用的免疫抑制剂存在着许多不良反应.细胞治疗效果确切,不良反应少,已成为新的研究热点.大量研究表明,在诱导、维持机体免疫耐受和免疫应答稳态方面具有重要作用的调节性T细胞能直接参与角膜移植术后免疫耐受的形成.近年来,树突状细胞被发现在免疫系统中扮演着双重角色,除作为抗原递呈细胞诱发免疫反应外,不成熟或表达抑制性细胞因子的树突状细胞还可诱导免疫耐受.体内外研究表明,间充质干细胞是一种具有多向分化潜能的非造血基质细胞,可通过对免疫细胞的影响,诱导抗炎效应和/或免疫耐受状态,有效抑制器官移植排斥反应.而作为继Tregs之后的又一热点细胞,髓源性抑制细胞能由多种途径抑制效应性T细胞增生,减少细胞因子的分泌,促进T细胞凋亡,抑制B细胞、NK细胞和巨噬细胞等的活动,甚至能诱导Tregs的产生,在抑制自身免疫性疾病和器官移植排斥中起着重要的作用.本文就以上4种细胞的免疫特点及其在角膜移植排斥反应治疗方面的研究进展进行综述.     

角膜移植术后免疫排斥反应临床研究

确立角膜移植术后免疫排斥反应的有效防治策略。方法对穿透性角膜移植术后发生免疫排斥反应的８６例进行回顾性总结。结论从分子水平减少供受体间的抗原差异,研制新一代高效安全的免疫抑制剂,创造免疫耐度的理论环境可能是控制高角角膜移植免疫排斥反应的有效措施。     

郎罕细胞与角膜移植排斥反应

尽管角膜移植术的成功率高居其它组织器官移植术成功率之首，术后排斥反应仍然是角膜（特别是血管化的高危角膜）移植术失败的主要原因。近年来，有关郎罕细胞（Langerhanscell，LC）对角膜移植排斥反应的作用的研究引人注目，现综述如下。1角膜LC的特点在免疫应答过程中，除免疫活性细胞起。核心作用外，尚需另一些免疫细胞协助，即辅佐细胞（accessorycell，AC）。AC的主要作用之一是递呈抗原，故又称抗原递呈细胞（antigenpresentingcell，APC）。LC即为APC的一种，其主要功能是：（1）作为免疫反应中的刺激细胞，在混合淋巴细胞…     

树突状细胞在角膜移植排斥反应中的免疫调节机制的探讨

目的 观察自体未成熟树突状细胞(Idc)对于小鼠同种异体角膜移植的免疫调节作用,探讨其作用机制.方法 PBS或自体Idc尾静脉注射7 d后,采用双色免疫荧光染色法及流式细胞术分析小鼠脾脏中CD4 CD28 及CD4 CTLA4 T细胞的表达.PBS或自体Idc尾静脉注射7 d后进行小鼠同种异体角膜移植,临床观察两组植片的存活时间.结果 Idc注射后,脾脏中CD4 CD28 T细胞的比例下降(P＜0.01),而CD4 CTLA 4 T细胞比例明显升高 (P＜0.01).Idc经尾静脉注射后明显延长了同种异体角膜移植片的存活时间(P＜0.01).结论 Idc可诱导CD80/CD86-CTLA-4抑制型共刺激信号替代CD80/CD86-CD28信号通路,从而阻断协同刺激信号的传递及T细胞的活化,对于同种异体角膜移植排斥反应具有免疫抑制作用.     

细胞因子在角膜移植排斥反应中的作用

细胞因子是目前生命科学领域研究的热点之一。与角膜移植有密切关系的免疫赦免及前房相关免疫偏离中均有多种细胞因子的参与。本文就眼内,特别是角膜中细胞因子的作用方式、来源、功能及与角膜移植排斥反应密切相关的细胞因子、基于细胞因子或其受体的免疫治疗进行综述。     

穿透角膜移植术后植片的免疫排斥反应

本文对角膜移植术后免疫排斥反应的发生率,危险因素,临床表现,以及发生机制和治疗一综述。     

Cytotoxic T cells play no essential role in acute rejection of orthotopic corneal allografts in mice

PURPOSE: To determine whether cytotoxic T cells of the direct alloreactive type are activated and responsible for early, acute failure of orthotopic corneal allografts observed in eyes of C57BL/6 but not of BALB/c mice. METHODS: Corneas from BALB/c and BALB.B mice were placed orthotopically in eyes of C57BL/6 and beta-2 microglobulin knockout mice (deficient in CD8(+) cytotoxic T cells). Graft fates were assessed clinically, and the T lymphocytes of recipients were assayed for the capacity to lyse target cells bearing donor major (MHC) and/or minor histocompatibility (minor H) antigens (direct and indirect pathways, respectively). RESULTS. Similar to BALB/c recipients, C57BL/6 mice with rejected cornea allografts acquired donor minor H-specific T cells. Unlike BALB/c recipients, C57BL/6 mice-both rejectors and acceptors-acquired donor MHC-specific T cells. beta-2 Microglobulin knockout mice showed rejection of corneal allografts in a manner indistinguishable from C57BL/6 mice, including early, acute rejection, yet T cells from beta-2 microglobulin knockout recipients of corneal allografts displayed no cytotoxic T cells specific for either donor MHC or minor H alloantigens. CONCLUSIONS: Although C57BL/6 mice acquired donor MHC-specific cytotoxic T cells (direct alloreactive cells), neither these cells nor donor minor H-specific cytotoxic T cells (indirect alloreactive cells) play any essential role in corneal allograft rejection, including the early acute failure uniquely observed in C57BL/6 eyes.     

T cell subsets in the immune rejection of murine heterotopic corneal allografts

Using a previously described murine heterotopic corneal allograft model, we examined the roles of delayed-type hypersensitivity (DTH) and cytotoxic T lymphocytes (CTL) in corneal allograft rejection. We have previously shown that normal C57BL/6 mice consistently reject heterotopic corneal allografts within 14 days of grafting. These hosts develop antigen-specific CTL responses but no evidence of DTH reactivity. The absence of DTH suggested that this T cell subset was unnecessary for corneal allograft rejection. The present studies using T cell-deficient mice selectively reconstituted with specific T cell subsets confirmed this suspicion. T cell-deficient (i.e., adult thymectomized, lethally irradiated, bone marrow-reconstituted = ATXBM) C57BL/6 mice were selectively reconstituted with the following categories of syngeneic lymph node cells (LNC): BALB/c skin-immune LNC treated with anti-Lyt 1 antibody + complement; BALB/c skin- or cornea-immune LNC treated with anti-Lyt 2 antibody + complement; or BALB/c cornea- or skin-immune LNC not treated with antibody. ATXBM mice reconstituted with syngeneic Lyt 1-depleted, BALB/c skin-immunized LNC failed to develop DTH, yet rapidly rejected BALB/c corneal allografts. Similarly, ATXBM mice reconstituted with Lyt 1-depleted cornea-immune LNC did not demonstrate DTH responses but were able to reject 100% of the corneal allografts in an accelerated fashion. By contrast, corneal allograft rejection was significantly delayed in ATXBM mice reconstituted with cornea-immune LNC partially depleted of Lyt 2+ T cells. Collectively, the results indicate that: heterotopic corneal allografts can be rejected in the absence of DTH; heterotopic corneal allografts fail to induce allospecific DTH; and partial depletion of Lyt 2+ CTL leads to a prolongation of heterotopic corneal allograft survival. Thus, the primary T cell-dependent immune effector elements responsible for heterotopic corneal allograft rejection appears to reside in the cytolytic T lymphocyte population.     

Rejection of corneal allografts

Corneal graft rejection is the major cause of penetrating keratoplasty failure. It is a complex immunological process that involves recognition of alloantigens from the corneal graft by the host's immune system, leading to an efferent immune response against the graft. Each layer of the cornea can undergo rejection, endothelial rejection being the most severe form. In some cases, rejection will lead to corneal graft failure. Many donor- and host-related risk factors contribute to corneal graft rejection. Corticosteroid therapy, topical or systemic, is the gold-standard in the preventive and curative treatment of rejection. Other immunosuppressive agents are promising but require further evaluation. Early detection of rejection is essential to establish an aggressive treatment and reduce the risk of graft failure. Prevention of rejection is also based on tissue matching between donor and recipient. In high-risk patients, ABO compatibility decreases the risk of rejection. HLA compatibility could positively influence corneal graft survival in some cases.     

联合阻断CD28和ICOS对兔高危角膜移植排斥反应的影响

目的:建立兔角膜移植高危模型,通过联合阻断CD28和ICOS,探讨CTLA4-Ig及ICOSmAb对角膜移植排斥反应的影响.方法:实验动物随机分成4组,每组10只.联合阻断组:植片为浸入含有CTLA4-Ig和ICOSmAb的中期保存液中.ICOS组:植片为浸入含有ICOSmAb的中期保存液中.CTLA4组:植片为浸入含有CTLA-4Ig的中期保存液中.对照组:单纯角膜移植,不做CTLA-4Ig和ICOSmAb处理组.观察术后受体植片角膜混浊情况和植片病理改变,RT-PCR方法检测植片IL-2,IL-10mRNA的表达情况,应用流式细胞仪检测植片CD4 ,CD8 T淋巴细胞表达情况.结果:联合阻断组兔角膜移植片存活时间(92±18)d,较其它3组明显延长(P＜0.05);术后21d联合阻断组移植物中IL-2mRNA表达明显降低(P＜0.05),CD4 ,CD8 T淋巴细胞表达明显降低(P＜0.05);植片组织病理学检查淋巴细胞浸润较其它3组明显减少.结论:应用CTLA4-Ig和ICOSmAb联合阻断CD28和I-COS,可以明显抑制高危角膜移植排斥反应,提高移植的存活率.     

Immunology of corneal allograft rejection: HLA-DR antigens on human corneal cells

Human stromal and endothelial cultures were established from corneas obtained from the Maryland Eye Bank. Cultures were incubated in the presence of human gamma interferon for 4 days, trypsinized, washed, and then stained with a monoclonal reagent specific for human Class II (HLA-DR) antigens. Under these conditions, 100% of human corneal endothelial cells and 40 to 70% human corneal stromal cells expressed HLA-DR antigens.     

角膜移植排斥反应中调节性T细胞的发展及应用

角膜移植术是角膜盲的有效治疗方式,是角膜盲患者复明的唯一希望。角膜无血管、无淋巴管,被称为免疫赦免器官,因此角膜移植术的成功率明显高于其他器官移植术,但角膜移植术后的排斥反应仍然是角膜移植术失败的主要原因。器官移植术后的免疫反应主要是免疫细胞向淋巴组织、炎症部位的定向移动,而调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)在免疫调节中起着关键性作用,其可以通过调节和抑制效应T细胞的活化来诱导免疫耐受,从而减轻角膜移植术后的排斥反应。据此,文章对在角膜移植术后发生免疫排斥反应中Treg的来源、作用机制以及治疗等多方面做简单综述,同时也探讨了应用冬虫夏草提取物FTY720增强Treg的有效性,以期为后续针对性开展临床应用转化及基础研究提供一定的参考。