原代胶质瘤细胞化疗药物敏感性研究

目的 观察不同抗肿瘤药物在体外对原代人胶质瘤细胞的敏感性,为临床筛选化疗药物、制订个体化方案提供指导.方法 46例经手术后病理证实的胶质瘤新鲜组织标本进行体外原代培养,流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法榆测替尼泊苷、尼莫司汀、甲氨蝶呤和替莫唑胺在体外对原代胶质瘤细胞的敏感性;分析不同化疗药物敏感性与患者性别、年龄和肿瘤病理分级之间的关系.结果 人胶质瘤细胞对4种化疗药物敏感性的强弱程度依次为替尼泊苷(39.13%)、替莫唑胺(34.78%)、尼莫司汀(26.09%)和甲氨蝶呤(6.52%),组间差异具有统计学意义(x2=14.770,P=0.002);甲氨蝶呤组患者对化疗药物敏感性最低,与其他各组比较差异有统计学意义(x2=13.883,11.210,6.452;均P＜0.05).亚组分析提示,性别和年龄对化疗药物敏感性无显著影响(均P＞0.05),但不同WHO病理分级对替莫唑胺化疗敏感性存在差异并具有统计学意义(x2=4.305,P=0.038).结论 不同胶质瘤个体对化疗药物的敏感性不同,以替尼泊苷抗胶质瘤作用较强,替莫唑胺对高级别胶质瘤药物化疗效果更佳.流式细胞术可作为快速化疗药物敏感性检测方法,为胶质瘤筛选化疗药物并制订个体化方案.     

脑胶质瘤的化疗敏感性研究

目的应用MTT比色法比较六种抗肿瘤药物对脑胶质瘤细胞的抑制作用，为临床化疗筛选药物、制定化疗方案提供指导。方法应用MTT比色法对62例脑胶质瘤新鲜标本进行化疗药物敏感性研究。结果六种药物敏感率经卡方检验有明显差别，由高至低依次为：Vm-26、Fotemustine、BCNU、CBP、DDP、Vp-16。病人性别对药物敏感率无影响，年龄、术前机能状态KPS评分对大多数药物敏感率无影响，肿瘤病理分级只对部分药物敏感率有影响。结论MTT比色法是一种快速、准确检测体外药物敏感性的方法。Vm-26抑制肿瘤细胞增殖作用较强，优于Fotemustine、BCNU、CBP、DDP、Vp-16。     

脑胶质瘤体外化疗药物敏感性试验与耐药基因蛋白表达的相关性研究

目的研究脑胶质瘤耐药相关基因蛋白的表达情况,分析其与化疗药物体外敏感性之间的相关性。方法采用组织培养药敏检测法测定50例脑胶质瘤标本对五种不同类型化疗药物：顺铂（cisplatin,DDP）、长春新碱（vincristine,VCR）、替尼泊甙（teniposide,VM26）、尼莫司汀（nimustine,ACNU）和替莫唑胺（temozolomide,TMZ）的体外敏感性（通过计算体外抑制率）;同时在组织芯片平台上,运用免疫组织化学法检测耐药相关蛋白O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶（MGMT）、P-170、TopoⅡ、谷胱苷肽-S-转移酶霄（GST-百）的表达,并用免疫组织化学法和原位杂交法检测P53蛋白及p53基因的表达。结果（1）ACNU体外抑制率与GST-盯表达水平之间呈显著性负相关r=-0．318,P〈0．05）。②耐药相关蛋白GST-π与P-170、TopoⅡ表达水平之间呈显著性相关（r分别为0.317和～0．298,P〈0．05）。③突变型P53蛋白与野生型p53mRNA之间呈显著性负相关（r=-0．806,P〈0．001）。④突变型P53蛋白与TopoⅡ表达水平之间呈显著性相关（r=0．401,P〈0．01）。结论肿瘤体外药敏试验结合耐药相关基因蛋白的检测。对于胶质瘤个体化化疗方案的制定及临床化疗疗效的预测等具有重要意义。     

脑胶质瘤化疗敏感性实验研究

目的探讨脑胶质瘤细胞体外对化疗药物的敏感性，为临床有效治疗胶质瘤提供实验依据。方法采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）检测50例原代培养胶质瘤细胞在体外对替尼泊甙（VM-26）、卡氮芥（BCNU）、顺铂（CDDP）、长春新碱（VCR）、甲氨蝶呤（MTX）5种化疗药物单一或联合化疗的敏感性。结果42例获得药敏结果，成功率达84％。42例胶质瘤细胞对单一化疗药物的敏感性从高到低依次为VM-26〉BCNU〉CDDP〉VCR〉MTX。两种联合化疗方案（BCNU＋VM-26＋CDDP）和（BCNU＋VCR＋MTX）对胶质瘤细胞的敏感性明显优于单一用药（P〈0．01），且对绝大多数胶质瘤细胞增殖抑制率较高。结论两种联合化疗方案（BCNU＋VM-26＋CDDP）和（BCNU＋VCR＋MTX）可能对胶质瘤的化疗效果更好。     

儿童脑胶质瘤的化疗进展

胶质瘤是儿童中枢神经系统最常见的肿瘤,侵袭性强,治疗难度大,预后差,复发率高.传统的手术治疗不仅并发症较多,且可能给病儿造成心理和认知障碍,放疗对小儿正在发育的神经系统及骨髓造血系统等有难以预测的影响.因此,化疗逐渐成为治疗儿童胶质瘤的重要手段.本文就儿童胶质瘤的特点和化疗方案进行论述,总结不同类型儿童胶质瘤的推荐化疗方案,并对所采纳研究的循证医学证据级别作了说明;安全性是儿童化疗中需着重解决的问题,延迟放疗、低剂量多次化疗和复发重复化疗等方案均证明对儿童是安全、有效的;化疗耐药机制方面的探索将进一步提高疗效,最终达到儿童胶质瘤的治愈.     

脑胶质瘤化疗敏感性的体外实验研究

目的 探讨体外培养的脑胶质瘤细胞对化疗药物的敏感性,为临床有效治疗胶质瘤提供实验依据.方法 采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测26例原代培养胶质瘤细胞在体外对顺铂(DDP)、环磷酰胺(CTX)、5-氟脲嘧啶(5-FU)、长春新碱(VCR)化疗药物的敏感性.结果 19例胶质瘤细胞对单一化疗药物的敏感性从高到低依次为DDP>CFX>5-FU>VCR.患者年龄与药物敏感性均无明显相关性;除DDP外,病理分级与其他药物敏感性无明显相关性.结论 比色法是一种快速、有效检测体外药物敏感性的方法.体外药敏试验对排除无效药物、筛选敏感药物进行个体化的化疗,提高临床化疗效果,具有重要意义.     

脑胶质瘤细胞体外原代培养化疗药物敏感性研究

目的探讨脑胶质瘤原代培养细胞对常用化疗药物的敏感性,为临床脑胶质瘤切除术后病人进行最佳的个体化化疗提供理论依据。方法取手术切除的80例人脑恶性胶质瘤的新鲜临床标本进行原代培养,采用MTT法检测恶性脑胶质瘤细胞对长春新碱(VCR)、顺铂(DDP)、尼莫司汀(ACNU)、替莫唑胺(TMZ)、替尼泊甙(VM-26)的体外敏感性。结果长春新碱(VCR)、顺铂(DDP)、尼莫司汀(ACNU)、替莫唑胺(TMZ)、替尼泊甙(VM-26)的敏感率分别为9.4%、43.8%、57.8%、51.6%和62.5%,VM-26的敏感率最高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论用MTT法进行化疗药物的敏感性测定可以指导临床个体化化疗方案的制定,避免耐药药物的盲目应用。     

脑胶质瘤化疗研究进展

脑胶质瘤发生于神经外胚层细胞，是最常见的颅内肿瘤，约占成人颅内肿瘤的52％，儿童颅内肿瘤的24％。生物学行为上呈浸润性生长．与正常脑组织无明显界限，多数不限于一个脑叶，向脑组织呈指状深入生长。近年的文献根据其恶性程度分为低分级和高分级两种，低分级者生长缓慢．自然病程较长；高分级者生长迅速．可发生脑脊液转移．自然病程短。化疗作为术后辅助治疗和复发的治疗手段应用于脑胶质瘤已有多年历史，虽发展缓慢，但愈来愈受到人们的重视。[第一段]     

脑胶质瘤药物化疗新进展

不同级别脑胶质瘤的生物学行为存在显著差异,而不同的治疗方法患者预后也明显不同。脑胶质瘤的常规治疗方法包括手术切除、放射治疗以及药物化疗,其中化疗在恶性胶质瘤治疗中的地位已     

表皮生长因子受体靶向药物治疗脑恶性胶质瘤的研究进展

表皮生长因子受体（EGFR）在多数恶性胶质瘤中存在过表达,对肿瘤发生、发展起着重要作用,其靶向药物在基础研究和临床实验中均表现出良好效果。分子靶向治疗可能成为除手术、放疗和化疗之外脑恶性胶质瘤治疗的重要手段。本文对EGFR靶向药物分类及治疗脑恶性胶质瘤的机制进行综述。     

成球实验在胶质瘤干细胞培养中的局限性及未来展望

在过去的十多年中,肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)成为癌症研究的新热点.CSC理论认为,肿瘤细胞具有异质性,而对肿瘤的发生、发展起决定性作用的仅仅是其中的一小部分细胞.这一小部分细胞与正常组织中的干细胞同样具有两个关键特性:自我更新和多向分化潜能[1-3].CSC由此得名.自从1995年Bonnet和Dic[4]从急性非淋巴细胞性白血病中发现CSC以来,人类已经在乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、肺癌等多种肿瘤中发现CSC[5-8].     

Differences in the accumulation of lithium in human neuroblastoma and glioma cells in tissue culture

A human neuronal and a human glioma line were used to study lithium (Li) transport mechanisms and kinetics of influx. We demonstrated that, unlike the human erythrocyte or clonal neuroblastoma cell SY5Y, the cloned glioma cell line A₁B₁ had neither a ouabain or phloretin-sensitive component of Li influx. Furthermore, glioma cells were shown to accumulate significantly more (4 fold) Li and at an apparently faster rate when compared to the neuroblastoma cell, SY5Y, over the same time period. Thus, these two clones may be better in vitro model system for the study of Li transport components native to the human central nervous system as compared to erythrocytes. This study also suggests that glial tissue may preferentially accumulate Li and in this way control the levels of extracellular Li surrounding some neurons.     

星形胶质瘤细胞的分离培养及生物学特性观察

目的建立人脑胶质瘤细胞体外分离培养体系,观察不同病理分级胶质瘤细胞的基本生物学特性,探讨病理分级与胶质瘤细胞生物学特性之间的关系。方法采集手术切除新鲜胶质瘤标本,进行体外分离培养,运用免疫细胞化学染色、流式细胞仪和染色体核型分析等技术对胶质瘤细胞形态学、生长特性和染色体核型变化情况进行观察和比较分析。结果①原代培养胶质瘤细胞主要呈现圆形、星形和梭形三种细胞形态。②星形细胞瘤细胞生长速度与病理分级相关,恶性程度越高,细胞增殖越快。③染色体核型分析结果可见胶质瘤细胞存在染色体数目与结构异常。结论星形胶质瘤细胞的分离培养试验提示:星形细胞瘤细胞生长速度与病理分级呈正相关,恶性程度越高,增殖速度越快。     

白细胞介素-6与脑胶质瘤关系的研究

目的:通过观察人脑胶质瘤细胞是否可以自发分泌白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),为进一步探讨IL-6在脑胶质瘤发生、发展中的可能作用提供线索。方法:对4例脑胶质瘤病人的手术标本进行原代细胞培养,分不同时相收获上清,并对其上清进行IL-6活性检测。结果:各组上清中均有IL-6活性,IL-6生物活性以D_(0～6)上清活性最高(1.131U/L),D_(0～6)上清活性最低(0.18U/L)。人脑胶质瘤细胞受细菌脂多糖刺激后,分泌IL-6的能力略有增强。IL-6单克隆抗体可中和脑胶质瘤上清对B9.9细胞的增殖作用。结论:原代培养的人脑胶质瘤细胞可自发分泌IL-6。     

组织定向活检诊断为胶质瘤与手术病理符合率的比较研究

目的探讨组织定向活检技术在诊断胶质瘤中的病理定性诊断价值。方法回顾性分析住院胶质瘤病例51例,比较活检与手术的病理情况。活检部位为额叶23例,颞叶15例,顶叶7例,枕叶3例,多发病例3例。肿瘤位于右侧半球27例,左侧24例。其中临床考虑胶质瘤复发者7例。结果手术病理同样确定为胶质瘤者39例,临床符合率为76.4%;淋巴瘤1例,炎性肉芽肿2例,脑感染性疾病2例,放射性脑坏死4例,脑梗死3例。手术中确诊为胶质瘤,但是活检确诊为低级别胶质瘤,而手术病理确诊为高级别胶质瘤者13例,占33%。结论对于活检病理确诊为胶质瘤的可靠性需要进行新的评估。     

新生大鼠肝细胞分离及体外培养方法*

背景：新生大鼠肝细胞是中度分化细胞,兼具肝祖细胞和成熟肝细胞的特性和功能,是研究肝细胞特性的理想细胞来源。 目的：探讨新生大鼠肝细胞分离及体外培养方法。 设计、时间及地点：细胞学体外实验,于2008-03/08 在解放军总医院普通外科研究所完成。 材料：SD新生大鼠,雌雄不限,3月龄。 方法：采用组织块-胰酶冷消化法和多步低速离心获取新生大鼠肝细胞,给予含体积分数10%胎牛血清的HepatoZYME-SFM培养基体外二维培养。采用相差显微镜观察、MTT分析、PAS染色和脲酶法对培养的肝细胞生长及功能进行检测和分析。 主要观察指标：肝细胞形态、活性,糖原水平,培养上清中的尿素浓度。 结果：分离纯化的新生大鼠肝细胞总数1.0×106~2×106/肝,活力在90%以上, 光镜下肝细胞呈圆形或卵圆形,核大而圆,胞体较成熟肝细胞小。通过多步低速离心可去除红细胞、其他非实质细胞和死亡的肝细胞,其纯度可达95%以上。肝细胞活性在培养初期即缓慢上升,至第3天时开始快速增殖,第11天时达到高峰,与第1天相比差异有显著性意义(P=0),但随后又缓慢降低,到15天时与第11天相比差异有显著性意义(P=0)培养的肝细胞贴壁生长,并保持肝细胞特异细胞形态。培养至第7天的肝细胞PAS染色呈强阳性,之后阳性细胞逐渐减少,至15 d时可见少量阳性细胞。培养上清中尿素在培养初期基本没有变化,培养至第7天时显著下降。 结论：组织块-胰酶冷消化法和HepatoZYME-SFM培养基二维培养为种简单有效的新生大鼠肝细胞分离培养方法。     

Long-term culture of organotypic multicellular glioma spheroids: a good culture model for studying gliomas

Gliomas. as well as other solid tumours. contain tumour stroma composed of connective tissue, macrophages, capillaries and other non-cellular constituents. Therefore, a homogeneous culture of tumour cells alone, as is often used as a culture model for gliomas, is not ideal to study all aspects of gliomas. In the present study we describe an alternative culture model, i.e. organotypic multicellular spheroids (OMS), that histologically closely resembles the tumour in vivo . Glioma explants. obtained at surgery from five patients, were cultured on agarose to form OMS, which were cultured for up to 16 weeks. At regular intervals. OMS were fured and histological and immunocytochemical analyses were carried out. The histology as well as the immunocytochemical characteristics of the OMS proved to be almost unchanged after a culture period of 16 weeks. In contrast to monolayer cultures, glial fibrillary acidic protein (GFAP) expression in the OMS is preserved after 16 weeks of culture. However, in OMS from three out of five patients, small GFAP-negative cells appeared in the outer cell layers between 1 and 2 weeks of culture. Furthermore, after about 6 weeks of culture, the capillaries disappeared from the OMS. After prolonged culture, tumour cell heterogeneity, the cellular composition, and the histology of the OMS still closely resembled the tumour in vivo It is suggested that OMS provide a good long-term culture model for the study of gliomas.     

miR-137调控人脑胶质瘤细胞增殖侵袭能力的体内外研究

目的探讨miR-137调控人脑胶质瘤细胞的增殖侵袭性生长能力及其机制。方法采用实时PCR分析miR-137在不同品系胶质瘤细胞及不同级别胶质瘤样本中的表达;脂质体介导miR-137模拟物转染胶质瘤细胞,实时PCR检测转染后miR-137的表达;应用MTT法、流式细胞术评价细胞生长和增殖的生物学特征变化;划痕实验、transwell细胞体外迁移实验检测肿瘤细胞迁移、侵袭能力;动物实验评价体内条件下肿瘤生长能力变化;Western blot、免疫组织化学染色检测肿瘤细胞Ki-67、MMP9表达水平。结果实时PCR分析显示：miR-137在胶质瘤中低表达。miR-137模拟物转染LN229和U87细胞后,实时PCR显示：miR-137表达上调;MTT法及流式细胞术显示细胞生长受抑,出现G0/G1期阻滞;划痕实验及transwell实验证实：细胞迁移侵袭能力下降;进一步Western blot、免疫组织化学染色显示：增殖侵袭相关蛋白Ki-67、MMP9表达降低;动物实验反映：肿瘤细胞生长受抑制。结论 miR-137高表达可抑制胶质瘤细胞生长和侵袭能力,提示miR-137可作为基因治疗脑胶质瘤的候选靶点。