嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的临床研究现状

目的：对嗅鞘细胞生物学特性、培养纯化、嗅鞘细胞移植的可能机制及嗅鞘细胞移植在临床的应用等方面进行分析,介绍嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状。 资料来源：以olfactory ensheathing cells,spinal cord injury,嗅鞘细胞,脊髓损伤为检索词检索PubMed数据库(2000/2009),中国期刊全文数据库(2000/2009)。 资料选择：纳入标准：①文章所述内容应与嗅鞘细胞及脊髓损伤密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准：①重复性研究。②Meta分析。 结局评价指标：嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展。 结果：嗅鞘细胞具有与许旺细胞和星形胶质细胞相似的特征。目前嗅鞘细胞移植的动物实验主要致力于提高轴突再生能力、替代细胞成分、阻止脱髓鞘病变和促进髓鞘再生等方面,移植的嗅鞘细胞具有促进感觉及运动功能恢复的客观结果,有些移植研究甚至已经进入了临床试验阶段。不过嗅鞘细胞移植由动物实验转化到临床应用还受到很多因素的影响,诸如移植剂量、细胞生长因子的活力,细胞移植的风险等,尤其是嗅鞘细胞移植后的近期及远期效果还需要进一步深入研究、评价,并且需要长时间的随访。有研究已经把用基因转染的嗅鞘细胞用于移植,在动物试验身上已经取得了满意的效果。 结论：随着基因工程技术发展以及嗅鞘细胞移植修复神经机制的深入研究,嗅鞘细胞移植必将为临床治疗脊髓损伤的患者带来康复的希望。     

人嗅粘膜嗅鞘细胞的分离、培养及生物学特性

目的细胞移植是目前的研究热点,本文主要研究人嗅粘膜嗅鞘细胞(OM-OECS)的分离、培养、纯化、鉴定,来观察其生长情况,分析其生物学特性,为具有神经功能障碍的患者实行同种细胞移植提供一种可行的方法。方法选取意外交通事故或意外疾病、事故急性死亡3h内及经蝶窦手术的患者,征得家属同意,取鼻中隔后1/3鼻粘膜,免疫吸附法结合采用P75抗体包被的培养皿进行纯化人OM-OECs,免疫组化方法进行细胞的鉴定。结果 OM-OECs体外培养过程中,采用免疫吸附法使抗体与间充质来源的成纤维细胞进行特异结合从而将其去除,P75抗体包被的培养皿促进了OECs的贴壁使其与杂质细胞进一步分离,在体外培养10d后,细胞增殖最快,经P75、GFAP免疫组化双标染色显示呈双阳性,计数阳性细胞率达90%以上,说明从人嗅粘膜分离培养OECs具有较高的纯度。结论从人鼻粘膜取材,可以分离培养出OECs,体外生长增殖旺盛,并且经纯化后具有较高的纯度。     

嗅鞘细胞移植在中枢神经损伤修复中的研究

成年哺乳动物的中枢神经系统（CNS）损伤后不能有效再生，CNS再生受阻并不是由于CNS轴突本身的缺陷引起的，主要是由于周围胶质细胞的抑制作用，而存在于嗅觉系统内的一种特殊类型的胶质细胞一嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells，OECs）是决定嗅神经元轴突再生的关键因素。OECs可分泌促进神经元损伤后存活和轴突再生的多种营养因子，并能形成穿越胶质瘢痕、利于再生轴突依附、延伸的支架桥梁，这是其它胶质细胞所无法比拟的。     

嗅鞘细胞移植治疗中枢神经系统损伤的理论研究及临床应用

进行中枢神经系统损伤修复的候选胶质细胞包括嗅鞘细胞、少突胶质前体细胞和许旺细胞。少突胶质前体细胞很难获得大量移植用供体细胞,许旺细胞很难穿透胶质瘢痕,从应用方面均不如嗅鞘细胞。离体培养中嗅鞘细胞极强的可塑性可能会使嗅鞘细胞适时改变自身形态,以适应体内复杂的微环境,有利于神经再生。嗅鞘细胞移植后对脊髓后根损伤后再生有一定作用,其作用大小可能与嗅鞘移植物的成分有关,细胞制备技术和混合细胞移植能影响嗅鞘细胞移植物的效果。虽然胎脑的免疫原性很低,但合理应用免疫抑制剂会使嗅鞘细胞的移植效果有所改观。嗅鞘细胞除了重建损伤通路外,还可能通过轴突发芽、在非突触部位释放单胺类物质、改善病变部位环境并帮助附近的残余神经纤维保存功能和活性等机制对中枢神经的功能发生作用。嗅鞘细胞的细胞生物学和移植后行为学的深入研究都会加快人们对脊髓损伤的理解,并对脊髓损伤的修复治疗产生重要的理论指导意义。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤的研究一直是神经科学界探讨的热点,而脊髓损伤后的神经修复和功能重建也一直困扰着临床医学界。既往认为中枢神经细胞的轴突损伤在自然条件下几乎不能再生,其原因是中枢神经环境不利于轴突再生、中枢神经细胞本身的再生能力低下、以及神经轴突不能穿越损伤瘢痕区到达靶细胞。脊髓损伤包括原发性损伤和继发性损伤,二者均可引起部分神经元的丢失和神经纤维的断裂;而继发性损伤可导致原发性损伤范围的扩大,使更多的神经元凋亡和神经纤维的变性、脱髓鞘改变等,从而导致相应部位的感觉、运动和神经反射功能的丧失。近年来,随着神经科学…     

年轻成年GFP大鼠嗅鞘细胞的分离培养与形态学特征

目的 建立年轻成年GFP大鼠嗅鞘细胞(OECs)的分离培养方法 ,为OECs移植治疗脊髓损伤奠定基础. 方法 解剖显微镜下、无菌环境取2.5月龄的GFP大鼠嗅球最外层,经酶消化法分散后将细胞接种于含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基中.定期进行光电镜观察并摄片.在培养第10天进行S-100和NGFRp75的免疫细胞化学染色鉴定,并计算OECs的纯度. 结果 培养的GFP-OECs在荧光显微镜下呈绿色强荧光,形态以双极、多突起形为主,呈S-100、NGFR p75阳性,纯度在95%以上.电镜下形态与光镜下一致,但细胞结构更为精细. 结论 本文所用方法 简便易行,可分离出高纯度的GFP-OECs,其形态学特征与生物学活性无变异.源自GFP转基因大鼠的OECs可以作为一种有效的工具细胞,广泛应用于OEC在脊髓损伤修复中的研究.     

嗅鞘细胞的可塑性研究

2004年诺贝尔医学和生理学奖得主Richard Axel和Linda Buck证实：原来认为不具备分化能力的小鼠嗅感觉神经元能够再次进入细胞周期发生分裂．这一发现是嗅觉神经系统可塑性的典型体现。嗅鞘细胞（olfactory ensheathing cells，OECs）作为嗅觉系统内一种特殊类型的胶质细胞．大量研究证实其可促进中枢神经系统（central nervous system．CNS）损伤的修复。但目前对OECs生物学特性的认识仍存在不同观点．其可塑性的研究近年来逐渐受到关注。可塑性指在变化的内外环境刺激下细胞改变自身特性．在形态、抗原表达和功能上呈现很大程度的可变性。目前被证实OECS表达的抗原有S100β、神经生长因子低亲和力受体（p751、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrill aryacidicprotein，GFAP）、神经肽Y（neuropeptide Y．NPY）、O4和神经细胞黏附分子（neural cell adhesion molecule，NCAM）等。     

嗅鞘细胞与脊髓损伤的治疗

摘要：嗅鞘细胞是一种特殊类型的神经胶质细胞,起源于嗅基底膜,分布在嗅球、嗅神经,并可伴随嗅神经轴突迁徙入脑。尽管目前嗅鞘细胞移植技术治疗脊髓损伤的疗效已经被大量基础实验证实,并且已经开始了初步的临床试验,但其在移植后作用的主要机制仍然需要继续探讨。脊髓的再生与修复是一个非常复杂的过程, 目前还有许多问题有待解决, 如嗅鞘细胞移植治疗的主要机制、嗅鞘细胞移植时机的选择、嗅鞘细胞纯度对移植效果的影响、嗅鞘细胞植入的方法等。     

神经干细胞与嗅鞘细胞联合移植的研究进展

神经干细胞（NSCs）能分化成神经元替代坏死,凋亡神经元,嗅鞘细胞（OECs）是一种特殊类型的胶质细胞,两种细胞联合移植能在中枢神经系统修复过程中起到互补作用,更好地修复损伤组织,改善宿主运动及认知功能。     

嗅鞘细胞对培养脊髓神经元生长状态的影响

目的研究嗅鞘细胞(OECs)对体外培养脊髓背根神经节神经元生长状态的影响。方法取新生大鼠脊髓背根神经节细胞与嗅鞘细胞共培养,在显微镜下观察神经元生长发育情况,染色后进行细胞计数,并测定细胞活性。结果共培养组细胞密度明显高于对照组,神经元胞体大而饱满,突起较长,细胞活性较高。结论嗅鞘细胞可明显促进体外培养脊髓背根神经节神经元的生长,提高细胞活性。     

用于移植的嗅鞘细胞的纯化培养方法研究

目的 探讨移植用成年大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的培养和纯化方法.方法 取成年SD大鼠嗅球,将分离消化所得细胞悬液进行接种.然后分别于接种后2 h、6 h和18 h 3个时间点进行单步骤差速贴壁法去除成纤维细胞,纯化嗅鞘细胞,纯化培养约11 d时采用神经生长因子受体P75(NGFRP75)和碘化丙啶(PI)双染OECs并对其纯度及细胞数量进行免疫荧光鉴定分析.结果 纯化培养11 d后在共聚焦显微镜下呈双染阳性的细胞为OECs,数量级达106/mL,形态以梭形、双极或三极突起为主,亦有少量多极或单极细胞.2 h、6 h和18 h组嗅鞘细胞纯度分别为(53±5)%、(73±8)%和(69±13)%,组间差异有统计学意义(F=11.766,P<0.001). 结论分别经2、6、18 h单步骤差速贴壁法纯化的OECs在纯度和数量级上均可满足移植用细胞的要求,且方法简单、经济、快捷.     

不同来源嗅鞘细胞移植治疗脑出血的比较

背景：嗅鞘细胞是目前已知用于移植细胞中惟一可以跨越周围神经系统与中枢神经系统边界的细胞。在众多的国内外文献中,大多以嗅球来源嗅鞘细胞作为观察对象;但采用嗅黏膜嗅鞘细胞移植具有来源方便、损伤小、可自体取材等优势。 目的：比较嗅球来源嗅鞘细胞和嗅黏膜嗅鞘细胞移植对脑出血后神经功能损伤恢复作用的差异。 设计、时间及地点：免疫组织化学水平的随机对照动物实验,于2005-10/2007-10在无锡市第三人民医院细胞实验室完成。 材料：选用健康雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为3组,对照组、嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组各10只。 方法：分别获取人鼻中隔黏膜、人胚嗅球,进行嗅鞘细胞的分离培养纯化,取培养10 d的细胞用作细胞移植。取SD大鼠制备尾状核出血模型,嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组各取10μL细胞悬液在立体定向下引导微量注射器向大鼠脑组织内匀速注射(1 μL/min),对照组注入等量培养基,注射点为右侧尾状核。 主要观察指标：观察两种来源嗅鞘细胞的体外培养情况。嗅鞘细胞移植后对动物行定期行为学评定,功能损伤越重,得分越高;并观察组织切片靶区域免疫细胞化学分析结果。 结果：从体外培养结果看,无论在形态上还是表型上,两者无明显区别。嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组大鼠的Longa 5分制法及前肢放置试验评分在移植后第14,28,56天显著低于对照组（P < 0.05）,两移植组差异无显著性意义（P > 0.05）,移植组各时间段差异无显著性意义（P > 0.05）。 结论：用于移植修复神经功能的两种嗅鞘细胞在细胞特性、移植效果方面均无明显差异。     

嗅鞘细胞移植治疗晚期脊髓损伤临床试验初步报告

目的　开展嗅鞘细胞移植治疗晚期脊髓损伤的临床试验研究 ,探讨其移植是否安全可行 ,对晚期脊髓损伤患者是否有帮助脊髓神经功能恢复的作用。方法　取胚胎嗅球 ,消化成单个嗅鞘细胞后 ,培养 2～ 3周 ,然后将其移植到脊髓损伤部位的上下处。共治疗 171例伤后时间为 6个月至 18年 ,脊髓损伤部位没有压迫性病变的脊髓损伤患者 ,其中男 139例 ,女 32例 ,年龄为 2 .5～ 6 4岁。结果　嗅鞘细胞移植后两周～两个月时随访 ,按ASIA脊髓损伤神经功能分类国际标准评价 ,171例患者的脊髓功能均有部分恢复 ,其中运动功能由术前 34.5± 2 0 .3提高到 4 2 .0± 2 0 .0 ,轻触觉由术前 4 7.2± 2 4 .0提高到 6 1.8± 2 2 .9,痛觉由术前 4 8.6± 2 3.5提高到 6 4 .0± 2 2 .8。自身术前术后对照t检验 ,P <0 .0 0 1。患者无术后长期发热、脊髓感染和功能恶化等并发症 ,无与手术有关的死亡。结论　嗅鞘细胞移植安全可行 ,能帮助晚期脊髓损伤患者恢复部分脊髓神经功能。     

嗅鞘细胞与中枢神经系统损伤的修复

神经损伤的修复,特别是中枢神经系统损伤的修复,至今仍是困扰医学界的一个难题。主要原因是中枢神经系统的再生能力低下,而且其微环境对轴突再生有一定的抑制作用[1]。近些年来研究发现,     

《嗅鞘细胞移植》出版

由黄红云教授主编的《嗅鞘细胞移植》一书，于2007年7月由北京科学出版社出版。该书是第一部关于嗅鞘细胞基础与临床应用研究的学术专著，涵盖了当今关于嗅鞘细胞基础研究领域的主要内容，基于1000余例嗅鞘细胞移植治疗神经系统难治性疾病患者的实践经验，提出了临床治疗新理念和原创性干预策略，反映了当前国际中枢神经修复、功能重建和治疗的前沿水平。[第一段]     

嗅鞘细胞移植治疗多发性硬化1例

作者在治疗晚期脊髓损伤的基础上[1],采用嗅鞘细胞移植治疗脊髓多发性硬化1例,取得较好效果.     

新生大鼠嗅球成鞘细胞的体外培养

应用原代培养和免疫组化等技术,对新生大鼠嗅球成鞘细胞的体外培养增殖和简易纯化条件进行探索,并观察了其形态发育特点及免疫组化特性。     

嗅鞘细胞移植后大鼠损伤脊髓神经生长因子的表达

目的 研究嗅鞘细胞移植对大鼠损伤脊髓内的神经生长因子(NGF)表达的影响,以从NGF角度探讨嗅鞘细胞移植修复大鼠脊髓损伤的机制.方法 48只SD大鼠用NYU -Ⅱ撞击机(10g-25 mm)损伤T10脊髓制作脊髓损伤(SCI)模型,随机分为嗅鞘细胞组、DMEM组各24只;另设立正常对照组6只.将GFP-嗅鞘细胞细胞悬液移植入嗅鞘细胞组大鼠损伤处,DMEM组用单纯的DMEM/F12液代替,正常对照组不做任何处理.移植术后1d、7d、14 d、21 d,用BBB评分法测定脊髓运动功能,RT - PCR方法比较各时间点NGF表达差异.移植术后第21天应用免疫组化比较嗅鞘细胞组、DMEM组、正常对照组大鼠脊髓损伤区NGF的表达差异.结果 移植后1d、7d、14 d、21 d,嗅鞘细胞移植组运动功能评分均高于同期DMEM组.NGF表达量在术后第1天最高,第7天达峰值,之后缓慢降低.移植后第21天,嗅鞘细胞移植组脊髓NGF表达量高于同期DMEM组和正常对照组.结论 嗅鞘细胞移植可上调损伤脊髓NGF的表达,从而促进了损伤脊髓的修复.     

嗅鞘细胞培养液对海仁藻酸损伤脊髓神经元一氧化氮产生的影响

目的研究嗅鞘细胞培养液(OECCM)对海仁藻酸(KA)损伤后原代培养脊髓神经元的作用,进一步探讨其保护的作用机理。方法采用原代细胞培养法,分别培养了胚胎小鼠脊髓神经元和成年大鼠的嗅神经鞘细胞(OECs),收集OECCM。通过给予KA建立体外的损伤模型,KA分别作用6,8,12h后,加入OECCM继续培养24￣36h。然后进行抗神经元型一氧化氮合酶(ncNOS)免疫细胞化学染色,观察细胞ncNOS表达情况,并对各组ncNOS阳性神经元数目进行统计,同时运用四唑盐(MTT)比色法检测神经细胞活性;最后对不同组的一氧化氮合酶(NOS)阳性细胞染色情况、阳性细胞数目和细胞活性进行比较。结果KA作用后,一氧化氮(NO)都出现异常表达,但与实验组(OECCM干预组)相比,OECCM处理组NO表达水平明显低于单纯KA损伤组。OECCM处理组NOS阳性细胞数目(6h组,34.3±5.25;8h组,40.6±3.68),明显低于对照组(6h组,42.3±3.48;8h组,54.5±6.30)(P<0.01),在KA损伤12h时,两组NOS阳性细胞数(52.3±5.23vs61.32±6.45)(P<0.05);而细胞活性(6h,0.372±0.034;8h,0.312±0.026)明显高于对照组(6h,0.283±0.041;8h,0.219±0.033)(P<0.01),12h时两组细胞活性没有明显差异(0.199±0.012vs0.202±0.032)(P>0.05)。结论OECCM中可能含有一些保护脊髓神经元免遭KA损伤的因子,这些因子可能在参与抑制NOS异常表达起了重要作用。     

嗅鞘细胞移植脊髓损伤大鼠NG2的表达

背景：对于脊髓损伤,目前临床尚无有效的治疗对策,近年来嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤修复取得了一定的进展。NG2是主要的硫酸软骨素蛋白多糖分子,对轴突有抑制作用。 目的：观察嗅鞘细胞移植对脊髓损伤大鼠NG2表达的影响,进一步分析嗅鞘细胞移植在修复脊髓损伤中的作用途径。 方法：将112只大鼠随机分为4组,空白组、模型组、嗅鞘细胞移植组及DF12组各28只。空白组仅切开T10全椎板及T9,T11部分椎板,对脊髓未作其他处理;其他3组应用脊髓横切法制作脊髓损伤动物模型。嗅鞘细胞移植组进行嗅鞘细胞移植,每侧断端植入20 000 cells;DF12组于相同部位注射DF12培养液。在大鼠脊髓损伤后1,3,7,14,28,42和56 d时,取材按照SP试剂盒的操作步骤检测NG2的表达。 结果与结论：空白组NG2呈低表达,在模型组、DF12组脊髓损伤24 h后损伤部位的NG2的表达开始升高,7 d时达到顶点,4周时NG2表达明显降低,6,8周时仅在局部有所表达。嗅鞘细胞移植组脊髓损伤1 d时NG2表达开始增加,主要在损伤部位,在各时间点与模型组、DF12组相比NG2表达水平明显降低,但高于空白组NG2各时间点的表达。提示嗅鞘细胞移植后NG2的表达水平降低,嗅鞘细胞具有抑制NG2表达的作用,可消除或减轻细胞外基质中对轴突有抑制作用的化学屏障,这可能是其治疗脊髓损伤促进轴突再生的机制之一。