FQ—PCR检测尖锐湿疣皮损中HPV—DNA

目的：了解尖锐湿疣（CA）组织中人乳头瘤病毒（HPV）感染的型别及其DNA含量。方法：采用HPV6／11和HPV16／18型荧光定量PCR诊断试剂盒,对临床表现典型的CA组织进行FQ－PCR检测。结果：HPV－DNA阳性检出率95．15％,其中HPV6／11型阳性检出率86．4％。HPV6／11含量在10^5～10^9opies,占92．13％。结论：CA主要为HPV6／11感染,皮损中HPV6／11DNA含量检测可以临床提供一定的参考。     

FQ—PCR方法检测女性尖锐湿疣（CA）患者HPV的基因分型

目的探讨女性尖锐湿疣（CA）患者感染人类乳头瘤病毒（HPV）的基因类型和分布。方法采用荧光定量聚合酶链反应（FQ．PCR）方法检测256例CA患者疣体组织或分泌物中的HPV类型。结果HPV6、11型阳性率为93％（238／256）,HPV16、18型阳性率为15．2％（39／256）,HPV6、11型和HPV16、18同时阳性为10．9％（28／256）。定量检测病毒载量最高为1．0×10^8eopies／ml,最低为2．2×10^4eopies／ml。结论本地区尖锐湿疣患者感染以HPV6、11低危型为主,少数为HPV16、18高危型;荧光PCR检测技术具有灵敏度高、特异性强及检测时间短等特点,能够及时准确的为HPV患者临床治疗及预后判断提供可靠的依据。     

HPV16／18型病毒感染与宫颈癌的关系研究

目的探讨高危型人乳头瘤病毒（human papilloma—virus,HPV）16／18型感染与宫颈癌的关系。方法应用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测176例宫颈癌患者及218例宫颈炎症患者的宫颈分泌物,计算两组HPV16／18型阳性率及各组中HPV—DNA病毒载量拷贝对数值。结果宫颈癌患者组HPVl6／18型阳性率78．41％（138／176）,宫颈炎患者组HPVl6／18型阳性率29．82％（65／218）,两组阳性率经）（2检验,有显著性差异（Х^2=92．06,P〈0．01）;病毒载量前者也显著高于后者（t=2．42,P〈0．01）。结论HPVl6／18型病毒感染与宫颈癌关系密切,实时荧光定量PCR检测可以早期发现、旱期治疗。是预防宫颈癌的有效手段。     

2500例门诊患者肝功能及血清HBV感染指标检测结果分析

目的：了解乙肝患者肝功能、乙肝五顶及HBVDNA的变化及其相关性。方法：收集门诊患者血清标本，同时检测肝功能，HBVELISA和HBVDNA三个不同水平。结果：在收集的2500例标本中，肝功能异常率为62．8％，HBs-Ag阳性率为71．2％，HBV DNA定量阳性率为90．4％，当病毒拷贝数在10^5-10^-6之间时，肝功能异常率为4．285％，HBV拷贝数增加肝功能也不同程度加重，HBs-Ag阴性的标本中，FQ－PCR检出率为30．56％，单独HBs-Ab阳性的FQ－PCR检测的阳性率为22．35％。结论：HBVDNA的FQ－PCR是目前检测乙肝最为敏感的方法。     

女性宫颈HPV基因检测及分析

目的研究女性宫颈常见人乳头瘤病毒（HPV）感染情况,探讨HPV的危害及处理办法。方法对620例患有宫颈炎、宫颈炎合并阴道炎、阴道炎及尖锐湿疣的门诊女性取宫颈脱落细胞进行HPV基因分型检测,并对HPV亚型感染的阳性率进行对比分析。结果620例标本中,HPV阳性者238例（38．4％）,其中单一HPV阳性者195例（31．5％）,复合HPV阳性者43例（6．9％）。涉及感染的HPV有23个亚型,常见的有HPV16、HPV11、HPV58、HPV6、HPV56、HFV43等,其中HPV16阳性率与其他亚型相比,差异有统计学意义;四组疾病中宫颈炎组与阴道炎组、尖锐湿疣组相比HPV16阳性率差异均有统计学意义,而与宫颈炎合并阴道炎组相比,HPV16阳性率差异无统计学意义;尖锐湿疣组与其他三组相比,HPV11型阳性率差异有统计学意义。结论HPV16为门诊女性尤其患宫颈炎女性最常见感染,而HPVI1为尖锐湿疣女性患者最常见感染,对HPV进行基因分型检测可能有助于宫颈癌及尖锐湿疣的预防、治疗和预后的判断。     

荧光定量PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义

目的：分析386例以荧光定量PCR法检测的HBV-DNA结果,以探讨其临床价值。方法：血清标本同时以酶免法检测乙肝两对半,以荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果：大三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为95.5%,拷贝数为（4.32±1.63）×10^6/ml;小三阳模式中HBV-DNA定量阳性率为55.5%,拷贝数为（2.45±2.23）×10^5/ml;HBsAg、HBcAb阳性模式中HBV-DNA定量阳性率为35.7%,拷贝数为（6.74±1.18）×10^4/ml;HBsAg、HBeAg阴性模式中HBV-DNA定量阳性率为3.84%,拷贝数为（2.14±1.11）×10^4/ml。结论：荧光定量PCR法检测HBV-DNA可以直接反映体内乙肝病毒（HBV）感染状态及病毒载量情况,有利于判断疾病的严重程度和传染性,更有利于临床治疗的药物选择和疗效观察。     

HPV感染的FQ-PCR检测结果分析

目的了解人乳头瘤病毒6,11和16,18型（HPV6,11、HPV16,18）感染情况。方法用荧光定量PCR（FQ—PCR）方法测定HPV6,11、HPV16,18。观察男女间不同部位感染情况、各年龄段感染情况。结果男性检出HPV6。11阳性标本157例（30％）,检出HPV16,18阳性标本1例（20％）。女性检出HPV6,11阳性标本81例（36．2％）,检出HPV16,18阳性标本41例（9．4％）。HPV6,11皮肤组织标本阳性率：男性为32．9％,女性为57.7％。两型HPV感染均以21岁-50岁年龄段为多。结论男女性HPV6,11感染总阳性率无明显差异,女性皮肤组织HPV6,11感染阳性率高于泌尿生殖道,也高于男性组。男性泌尿道也有HPV16,18感染者,建议重视这方面的检查。女性HPV16,18感染以中青年多见,提示宫颈癌发生有年轻化趋势。     

应用荧光杂交定量PCR和ELISA法进行产前TORCH筛查比较及临床意义的研究

目的：比较荧光杂交定量PCR和ELISA法进行产前TORCH筛查的差异，探讨病原微生物拷贝数在临床诊治中的作用；方法：分别用荧光杂交定量PCR和ELISA IgM法筛查孕期血标本272例，其中包括妊娠早期102例，晚期170例；采集121例分娩孕妇及新生儿脐带血标本；222例不明原因流产标本，其中66例采集了新鲜自然流产脱膜和绒毛；结果：孕期筛查血CMV DNA和TOX DNA的阳性率分别为1．8％（5／272）和0．36％（1／272），其中妊娠早期CMV DNA的阳性率为2．9％（3／102），晚期为1．2％（2／170），不明原因流产，查出血清CMV感染22例，TOX4例，CMV DNA和TOX DNA的阳性率分别为9．9％（22／222）和1．8％（4／222）。脱膜和绒毛均感染3例，1例血清，脱膜感染但未采到绒毛标本。有2例是母血清中查到CMV，流产组织中未查到。查出血清，脱膜和绒毛均感染TOX1例，妊娠妇女外周血CMVDAN≥10^3有88％的发生流产；结论：荧光杂交定量PCR法不但具有较高的灵敏度和特异性而且可检测病毒负载量－拷贝数／ml，拷贝数越高发生流产的可能性愈高，应推荐作为妊娠初期筛查的首选方法。     

运用实时荧光定量PCR技术检测424例患者HPV结果分析

目的探讨采用实时荧光定量PCR反应(qPCR)检测人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况及检测HPV分型的临床意义。方法用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测424例门诊患者阴道分泌物中HPV6/11和HPV8个基因型(HPV16、18、31、33、45、52、56、58型)的病毒拷贝数。结果共检出HPV6/11阳性者99例,阳性率为23%,其中<20岁年龄组阳性率最高,达到50%;共检出HPV8个基因型阳性者103例,阳性率为24%,其中>50岁年龄组阳性率最高,达到42%。结论 qPCR检测技术具有灵敏度高、特异性强及操作快捷等特点,可为HPV感染患者的临床治疗及预后观察提供可靠依据,具有较高的临床应用价值。     

乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义

目的 探讨荧光定量PCR法检测的乙型病毒DNA与乙肝病毒标志物之间的关系。方法 362例血清标本同时进行乙肝病毒标志物和HBV DNA的检测,按照不同的乙肝病毒标志阳性情况分级后,进行乙肝病毒DNA与乙肝病毒标志物的分析研究。结果 乙肝病毒标志物HBsAg HBeAg HBcAb阳性组HBV DNA阳性率97.7%,拷贝数在10^4-10^8之间;HBsAg HBeAb HBcAb阳性组阳性率56％,拷贝数在10^2－10^7之间;HBsAg HBcAb阳性组阳性率54％,拷贝数在10^2－10^7之间;HBsAg HBeAg组阳性率100％,拷贝数在10^7之间;HBeAb HBcAb组3例,有1例阳性,拷贝数10^2;HBsAb组阳性率14.3%,拷贝数在10^3－10^7之间;189例全阴性有2例阳性（1.06%）,拷贝数在10^4－10^5之间。结论 HBV DNA在各种模式的HBV标志阳性血清甚至全阴性的血清中均可检出,但检出率相差甚大,从1.06%－100％;HBV DNA乙肝病毒标志中HBeAg阳性者其HBV DNA阳性率及拷贝数较高;HBsAg及其抗体阳性者仍可检出HBV DNA,说明仅仅依靠乙肝病毒标志进行早期诊断以及判断病人是否具有传染性是不够的。     

129例生殖道人乳头瘤病毒感染的分型

目的 了解女性生殖道人乳头瘤病毒（HPV）感染的型别组成。方法 用荧光定量聚合酶链反应（PCR）对129例已确诊为HPV感染的门诊标本进行HPV6、11型和HPV16、18型的分型检测。结果 在129例标本中检出阳性126例,阳性检出率为97.7%。其中单独HPV6、11型阳性69例,占53.5%;单独HPV16、18型阳性14例,占10.9%;HPV6、11和HPV16、18型同时阳性43例,占33.3%;HPV6、11和HPV16、18型同时阴性3例。结论 在女性生殖道HPV感染中HPV6、11、16、18占绝对优势。     

Comparison of polymerase chain reaction and catalyzed signal amplification in situ hybridization methods for human papillomavirus detection in paraffin-embedded cervical preneoplastic and neoplastic lesions

BACKGROUND: Two molecular methods for HPV genotyping in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue were evaluated: in house polymerase chain reaction assay (PCR) with consensus and type-specific primers and a novel procedure of in situ hybridization-a catalyzed signal amplification system (CSA-ISH, Genpoint, DAKO, Glostrup, Denmark). The number of HPV positive cases and detected viral types were compared in cervical biopsies and cone specimens according to histopathological diagnosis. Primer efficiency in detecting various types of HPV by PCR method was evaluated. METHODS: DNA samples (101) were used as a template to amplify with three pairs of consensus (MY09/11, GP5+/6 +, CPI/IIG) and four type-specific HPV primers (HPV-6/11, 18, 16 and 33). The according histological tissue sections were analyzed with CSA-ISH method, using commercial HPV biotinylated probes HPV-6/11, 16/18 and 31/33/51. RESULTS: The degree of concordance for PCR and CSA-ISH was 64.4%. In 63 of 101 samples (62.4%), HPV was detected by PCR, while only 35 (34.7%) were positive using CSA-ISH. CSA-ISH found lower percentages for all HPV types, except HPV-6/11. A lower percentage of positive results in all high-grade lesions was detected by CSA-ISH. Multiple infections were detected by PCR in only one sample and in three samples by CSA-ISH. Detection with My09/11 primers followed by Gp5+/6+ primers, in nested reaction, gave the highest number of positive results: 58 of 63 (92%). None of the samples diagnosed as condylomata planum or CIN I was positive for HPV-6/11 (low risk type), which was detected exclusively in condylomata acuminatum group. CONCLUSIONS: A significantly higher number of positive samples was detected with PCR than with CSA-ISH method. CSA-ISH method should be improved, especially in detecting HPV in high-grade lesions. CSA-ISH may be more accurate in detection of multiple infections. GP5+/6+ in nested reaction after MY09/11 detected the highest number of positive results. Samples diagnosed as benign lesions positive on HPV-X must be monitored as possible candidates for progression. CIN I lesions, which were HPV negative, probably will not progress. This finding may be important in planning therapy and avoiding unnecessary treatment.     

南昌地区人乳头瘤病毒6／11型感染调查的初步研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对南昌地区４３５例男女生殖道尖锐湿疣可疑患者进行ＨＰＶ６／１１ＤＮＡ检测,发现女性感染阳性率高于男性感染阳性率,特别是２０～２９岁,３０～３９岁两个年龄组;而且ＰＣＲ诊断的阳性率（４０．９％）比临床诊断的阳性率（２４．３７％）要提高约１５％。     

荧光定量PCR检测乙型肝炎患者血清中HBV DNA的临床意义

目的检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的含量,了解其与免疫学指标的关系。方法采用荧光定量PCR技术和ELISA法,分别检测287例乙型肝炎患者血清中HBVDNA含量和免疫学指标。结果287例乙型肝炎患者血清中检出HBVDNA199例,阳性率为69.34%(199/287);144例HBsAg、HBeAg、抗HBc三项阳性的血清,其血清中HBVDNA也全部阳性;而HBsAg、抗HBe、抗HBc三项阳性和HBsAg、抗HBc二项阳性的标本,HBVDNA的检出率分别38.9%(42/108)和37.1%(13/35)。结论乙型肝炎患者血清中HBVDNA的拷贝数与HBeAg密切相关,但系统转换不能说明HBV停止复制,而只是复制水平的降低而已。     

外阴尖锐湿疣人乳头瘤病毒感染的检测与分型

目的 了解患外阴尖锐湿疣人乳头瘤病毒(HPV)6型和11型的感染情况及PCR方法对尖锐湿疣诊断与分型的临床意义。方法 采用PCR方法测定160例尖锐湿疣患病题组织或分泌物中HPV6／11型及HPVl6／18型的感染率。结果 HPV6／11型感染率为95％(152／160)，HPVl6／18型感染率为5％(8／160)，HPV6／11型 HPVl6／18型混合感染率为1．3％(2／160)。结论 外阴尖锐湿疣患以HPV6型和11型感染为主。PCR方法是一种比较适合临床HPV检测与分型的极为敏感和特异的诊断方法。     

6对通用引物检测不同型别人乳头瘤病毒效果分析

目的: 比较6对通用引物检测9种不同型别人乳头瘤病毒（HPV）的效果,为临床提供一种快速简便的HPV检测方法。方法: 收集女性宫颈脱落细胞标本954例,使用HPV分型试剂盒进行HPV DNA检测并分型。分别使用6对通用引物（① GP5/GP6,② GP5+/GP6+,③ CP Ⅰ/CP ⅡS,④ CP I/CP ⅡG,⑤ 外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+,⑥ SPF1/GP6++）对HPV-DNA阳性标本进行PCR检测,比较6对通用引物检测9种不同类型HPV DNA效果。结果： 采用HPV分型试剂盒从954例标本中共检出263例HPV-DNA阳性标本,阳性率为27.57%。在阳性标本中,采用通用引物SPF1/GP6++检出的阳性例数为223例,检出率为84.79%;采用巢氏PCR引物（外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+）检出的阳性例数为207例,检出率为78.71%。上述两对通用引物均可以检出9种型别HPV DNA。结论： 通用引物SPF1/GP6++检测效果最佳,但引物含次黄嘌呤,成本较高;巢氏PCR引物（外：MY09/MY11,内：GP5+/GP6+）检测效果次之,且合成成本较低。在HPV研究中可以根据实际情况选用。     

HPV的快速检测与分型

以通用引物PCR初筛158例标本，凡HPV感染阳性标本再用型持异引物PCR作分型检测，结果：疣、乳头瘤等良性病变的HPV检出率为61．1％（55／90），主要检出HPV6和／或HPV11，占阳性例数的89．1％（49／55）；食管癌组织有较高的HPV感染率（66．2％，45／68），以检出HPV6，11，16为主，并明显高于HPV8（X2检验，P＜0．01），提示HPV感染可能与本地区食管癌发生密切用关。本研究建立的HPV快速检测和分型方法，用于临床检测和回顾性研究均可获得满意结果。     

鼻内翻性乳头状瘤与人乳头瘤病毒感染的相关性研究

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)感染与鼻内翻性乳头状瘤(NIP)发病及复发的相关性.方法 应用聚合酶链反应(PCR)和PCR产物斑点杂交技术,检测33例患者42份NIP石蜡和新鲜标本,以及20份正常鼻黏膜组织HPV6、11、16、18、33五个型别的HPV-DNA.结果 NIP组织HPV总阳性率为54 7%(23/42),其中HPV6为19.0%(8/42),HPV11为21.4%(9/42);HPV16为7.1%(3/42);HPV11 16为7.1%(3/42);HPV18 33均为阴性.对照组各型检测结果均为阴性.两组比较差别具有非常显著性意义(P＜0.001).结论 HPV感染在NIP的发病和复发过程中起一定的作用.良性NIP发病与HPV6、11型感染有关.     

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值

目的: 探讨实时荧光定量PCR(F Q-PCR)检测乙型肝炎病毒DNA的临床应用价值。方法: 采用FQ-PCR方法检测196例患者血清中HBV-DNA。结果: 112例HBeAg(+)/HBeAb(-)标本中FQ-PCR均阳性,HBV-DNA拷贝数1.08×107/ml;68例HBeAg(-)/HBeAb(+)标本中,平均拷贝数6.12×105/ml,其阳性率为66.2%;16例HBeAg(-)/HBeAb(-)标本中,平均拷贝数为2.72×104/ml。结论: 实时FQ-PCR可以实现准确定量,是了解HBV在体内复制和判断疗效的有利手段。