抗瓜氨酸化蛋白抗体特异性免疫复合物ELISA法的建立与临床初步应用

目的建立检测血清抗瓜氨酸化蛋白抗体特异性免疫复合物(ACPA-IC)的ELISA技术,探讨ACPA-IC对类风湿关节炎(RA)的临床意义。方法建立检测血清ACPA-IC的ELISA技术,并对方法的特异性、稳定性和重复性进行评估。采用PEG6000沉淀法自RA患者血清中提取IC。用建立的ACPA-IC ELISA法对92例RA患者包括46例ACPA阳性(ACPA+)患者和46例ACPA阴性(ACPA-)患者、46例SLE患者及47例健康献血员血清ACPA-IC水平进行检测。并分析RA患者血清ACPA-IC水平与ACPA和类风湿因子(RF)的相关性。结果经方法学评估,建立的ACPA-IC ELISA法在特异性、稳定性和可重复性方面均达到检测要求。ACPA+患者ACPA-IC水平高于ACPA-患者、SLE患者及健康对照组(P0.01)。当cut off值设为0.9时,该法测得RA患者血清ACPA-IC的阳性率为45.65%(42/92),显著高于SLE(6/46,13.04%)及健康对照组(2/47,4.26%),χ2分别为14.376和24.632,P均0.01。46例ACPA+RA患者ACPA-IC阳性者36例(78.26%),而ACPARA患者ACPA-IC阳性者仅6例(13.04%),差异有统计学意义(χ2=39.429,P0.01)。ACPA-IC与ACPA和RF的Spearman相关分析结果表明,RA患者血清ACPA-IC水平分别与血清ACPA(r=0.708,P=0.000)、RF(r=0.571,P=0.000)呈正相关。结论成功建立检测血清ACPA-IC水平的ELISA技术。RA患者尤其是ACPA+患者血清ACPA-IC水平显著升高。ACPA-IC在RA患者血清中出现可能具有重要的致病意义。     

抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿关节炎

类风湿关节炎 (RA)是一种致畸性的自身免疫性疾病 ,发病 2年内即可出现不可逆的骨关节破坏。全世界人口中约有1%的RA患者 ,每年用于医疗及福利的费用达六亿五千万美元[1] ,给患者和社会造成了严重的负担。在过去几十年中 ,对于RA的治疗策略已经从单纯缓解症状过渡到早期干预、阻断疾病进程。因此 ,早期诊断尤其重要 ,在此基础上应用改善病程药 (DMARDs)才能有效地减少关节破坏[2 ] 。现行的诊断标准主要依靠临床表现、X线检查以及类风湿因子 (RF)检测 ,符合此标准时病人常已出现骨关节破坏 ,加之RF缺乏特异性 ,不利于早期诊断及早期…     

血清抗环瓜氨酸肽抗体在类风湿关节炎诊断中的评价

目的:评价抗环瓜氨酸抗体在类风湿关节炎(RA)诊断中的价值。方法:用ELISA法检测RA及疑似患者血清中的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体。比较抗CCP抗体和类风湿因子(RF)对RA诊断的敏感度、特异度及诊断预测性方面的差异。结果:抗CCP抗体的敏感度为42.5%,RF为67.8%,RF高于抗CCP抗体(P<0.05),抗CCP抗体的特异度为97.4%,RF为78.7%,抗CCP抗体明显高于RF(P<0.05),在RA诊断预测中,抗CCP抗体明显优于RF(P<0.05)。结论:抗CCP抗体在RA诊断中具有高的特异性和预测性,可作为诊断RA的理想血清学指标。     

抗环瓜氨酸肽抗体对类风湿性关节炎的诊断价值

目的探讨抗环瓜氮酸肽抗体（抗-CCP）对类风湿性关节炎（RA）诊断的临床价值。方法采用酶联免疫吸附试验法和乳胶增强比浊法分别测定155例RA、178例非RA和100例健康人的血清抗-CCP和类风湿因子（RF）,并比较抗～CCP和RF的灵敏度、特异度、阳性预期值和阴性预期值。结果抗-CCP和RF的灵敏度分别为63．2％和59．1％,特异度分别为95．0％和81．6％,阳性预期值分别为87．5％和64．3％,阴性预期值分别为82．2％和58．2％。抗-CCP阳性率在RF阴性的RA患者中为34．9％,抗-CCP阳性的RA患者有较高的C反应蛋白浓度和较多的关节肿胀,并且抗-CCP与患者的关节损伤率有一定的相关性,但是抗-CCP与DAS28评分之间无相关性。结论与RF相比,抗-CCP对诊断RA有较好的临床价值,并与影像学检查有一定的相关性。     

抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体在类风湿关节炎诊断中的价值探讨

目的了解抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体（抗MCV抗体）对类风湿关节炎（RA）的诊断价值。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测50例RA患者、50例其他非RA关节炎患者及50名正常对照者抗MCV抗体,并同时检测类风湿因子-IgM（IgM—RF）,计算2项指标的灵敏度、特异性、阳性及阴性预测值。结果RA组抗MCV抗体阳性率为88％,非RA关节炎组抗MCV抗体阳性率为8％,正常对照组均为阴性。RA组抗MCV抗体灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为88．1％、91．0％、90．7％、88．7％;IgM—RF则为74．9％、79．0％、77．9％、75．2％。结论抗MCV抗体诊断RA的灵敏度、特异性高于IgM—RF,可作为诊断RA的血清学指标之-。     

应用生物素-链霉亲合素放大ELISA系统检测抗环瓜氨酸肽抗体

目的用生物素-链霉亲合素放大ELISA系统建立一种敏感、特异、经济简便的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的测定法。方法用链霉亲合素(SA)预包被,使生物素化的CCP(bio-CCP)固相化,摸索检测抗CCP抗体的最优实验条件,并进行方法学考核和临床应用评价。结果本法对类风湿关节炎(RA)的诊断敏感性为69.4%,特异性为96.8%,阳性预测值为89.1%,阴性预测值为94.1%,阳性似然比为19.28,阴性似然比为0.317,Youden指数为0.658。与欧蒙试剂比对,两法所测抗CCP抗体吸光度/cutoff比值显著相关(n=61,r=0.9253,P<0.001)。在所统计的168例血清样本中,两法同时阳性者60例,同时阴性者105例,一致性百分率达98.2%,结果具有高度一致性(Kappa=0.961,P<0.001)。ROC曲线分析结果显示本法所测抗CCP抗体对RA诊断准确性达到了一个较高水平(AUCROC值=0.901)。在13例诊断为早期RA者中,有10例抗CCP抗体阳性(阳性率76.9%),未发现抗CCP抗体与RA患者临床症状、疾病活动指标(ESR)及RF水平有关。结论成功将生物素-链霉亲合素ELIS...     

抗环瓜氨酸肽抗体检测在类风湿关节炎诊断中的临床意义

目的 检测类风湿关节炎(RA)血清中的抗环瓜氨酸肽(抗-CCP)抗体对RA诊断的灵敏度和特异性及其在风湿性疾病中的临床应用价值。方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)对175例RA、其他风湿性疾病患者133例和健康人41名进行抗-CCP抗体检测，并分析RA其他诊断指标与抗-CCP抗体的相关性。结果 175例RA患者中，抗-CCP抗体阳性率为84．6％(148／175)，其他风湿性疾病的阳性率为5．3％(7／133)。抗-CCP抗体对RA诊断的灵敏度为84．6％，特异性为94．7％。阳性和阴性似然比分别为16．08和0．16。抗-CCP抗体和类风湿因子(RF)、抗核周因子(APF)、抗角蛋白抗体(AKA)具有相关性。结论 抗-CCP抗体对RA诊断具有良好的灵敏度和特异性，可视为RA新的血清学指标。     

抗角质层抗体的ELISA检测

用盐析法提取大鼠食管上皮组织的角质层抗原成分 ,建立抗角质层抗体 (AKA)的酶联免疫吸附方法 (ELISA) ,探讨AKA在类风湿性关节炎 (RA)、系统性红斑狼疮 (SLE)、干燥综合征 (SS)等风湿病特别是RA诊断中的意义。结果 ,RA、SLE患者中的AKA水平显著高于正常对照组 (P <0 0 1) 。RA的阳性率为 44 7% (31/ 71) ,SLE阳性率为 2 6 8% (11/41) ,RF阴性的RA患者的AKA检出率为 40 9%。     

类风湿关节炎患者抗环瓜氨酸肽抗体的测定及临床意义

目的 检测抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）在类风湿关节炎（RA）中的阳性率及在RA诊断中的意义。方法 用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法检测60例RA,30例非RA的其他风湿病患者,其中包括系统性红斑狼疮（SLE）,原发干燥综合征（PSS）,强直性脊柱炎（AS）,关节炎（OA）以及30例健康对照组中的抗CCP抗体。结果 抗CCP抗体对RA的敏感性为76．67％,特异性为96．67％,阳性预测值为95．83％,阴性预测值为80．56％;30例早期RA患者中25例抗CCP抗体阳性（83．33％）。抗CCP抗体与抗角蛋白抗体（AKA）（r=0．56,P〈0．05）及类风湿因子（RF）（r=0．36,P〈0．05）均有相关性。结论 抗CCP抗体能用于RA,特别是早期RA的诊断。     

ELISA 与胶体金免疫层析法检测血清抗 CCP 抗体在 RA 诊断中的比较

目的：比较胶体金免疫层析法和酶联免疫吸附试验（ELISA ）检测血清抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体结果差异性。方法采用胶体金免疫层析法和 ELISA 法同步检测110例 RA 患者和110例健康体检者的抗 CCP 抗体。结果2种方法经配对χ2检验,差异有统计学意义（χ2＝174．354,P＜0．01）;K ap pa值评价（K ＝0．890,P ＜0．01）显示2种检测方法具有高度一致性。 ELISA 法灵敏度和特异度分别为83．64％和92．73％,均优于胶体金免疫层析法。结论2种方法检测血清抗 CCP 抗体存在差异,ELISA 法的灵敏度和特异度均较高,优于胶体金免疫层析法。     

ELISA联合检测方法的建立及应用

目的在微孔板平台上建立多指标联合检测的方法,为急诊、门诊及基层等多种医疗机构提供1种新的血清学检测手段。方法本研究根据酶联免疫吸附法(ELISA法)原理,以卵泡刺激素(FSH)、泌乳素(PRL)、黄体生成素(LH)、生长激素(GH)为检测靶标,在自行设计的聚苯乙烯板孔上完成反应体系的优化,包括FSH、PRL、LH、GH包被抗体浓度及酶标抗体浓度,建立1种并行分析样品中多种指标的方法。结果成功确定4种垂体激素联合检测的条件,包括4种激素抗体包被浓度、酶标抗体浓度等,并成功应用于临床样本的检测。结论本研究首次建立了1种简单、特异性高、成本低、并行分析4种垂体激素的联合检测方法,提高了常规ELISA法的检测效率。     

流行性乙型脑炎病毒IgG抗体捕获酶联免疫吸附试验检测方法的建立

目的利用流行性乙型脑炎(乙脑)病毒特异性单克隆抗体建立检测人血清中乙脑病毒IgG抗体的捕获ELISA方法。方法将乙脑病毒特异性单克隆抗体包被在固相载体上,加入灭活并经过纯化的乙脑病毒抗原,再加入待测血清,经洗涤、显色等判定最终检测结果。采用免疫荧光法作为对照。结果与免疫荧光法相比较,本方法的灵敏度为95.6%,特异度为85.7%,一致性为91.3%;本方法的灵敏度和特异度高于市售的两种检测试剂。结论本研究所建立的乙脑病毒IgG抗体捕获ELISA方法具有良好的检测性能,可以应用于正常人群血清中乙脑病毒IgG抗体的筛查。     

血清glypican 3 ELISA检测法的建立及初步应用

目的 建立血清中磷酯酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3,GPC3)的双抗体夹心ELISA检测法,并探讨其应用价值.方法 以本室自制抗GPC3单克隆抗体为包被抗体,以兔抗人GPC3抗体为检测抗体,建立检测GPC3的双抗体夹心ELISA法.对建立的方法进行线性范围、灵敏度、精密度、回收率等方法学评价,并用于测定原发性肝...     

定量检测人表皮生长因子试剂盒的研制及应用

目的研制亲和素生物素酶联免疫吸附法(ABCELISA)定量检测人表皮生长因子(EGF)试剂盒。方法以纯化的重组人表皮生长因子(rhEGF)为抗原,制备兔抗rhEGF多克隆抗体和鼠抗rhEGF单克隆抗体(McAb),并鉴定其生物学特性。用生物素标记抗rhEGFMcAb,建立ABCELISA定量检测人EGF的方法,同时用该方法检测50名正常人和38例肿瘤病人血清EGF含量,并与YAS公司EGFABCELISA试剂盒(n=88)进行比对。结果本研究建立的ABCELISA定量检测法的灵敏度为0.050ng/ml,批内变异系数(CV)<4%,批间CV<6.3%,回收率95.7%～102.5%,特异性鉴定显示,与相关蛋白无交叉反应,同YAS公司同类试剂盒检测结果无差异(P>0.05)。肿瘤病人血清EGF含量(0.426±0.084ng/ml～0.456±0.095ng/ml)比正常人(0.243±0.086ng/ml)明显增高(P<0.05)。结论本研究成功制备的抗人EGF多克隆抗体和McAb特异性好,亲和力高;初步建立的ABCELISA检测人EGF试剂盒与YAS公司同类试剂盒质量相当,适于推广应用。     

抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体对类风湿性关节炎的临床诊断价值

目的 探讨抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体(anti-mutated citrullinated vimentin,anti-MCV)对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的临床诊断价值. 方法 用酶联免疫吸附试验法测定80例RA患者和35例其他自身免疫性疾病的非RA患者血清抗MCV抗体,用免疫速率散射比浊法同步检测类风湿因子(rheumatoid factor,RF),计算绘制受试者工作特性(ROC)曲线下面积. 结果 抗MCV和RF检测的敏感度分别为85.0%,70.0%;特异度为91.4%,45.7%;一致率分别为87.0%,62.6%,Kappa值分别为0.713,0.164,抗MCV检测均优于RF检测(均P<0.05).抗MCV抗体的ROC曲线下面积为0.923(95%可信区间为0.872～0.973),RF为0.658(95%可信区间为0.559～0.757),抗MCV抗体对RA的临床诊断价值较高. 结论 抗MCV抗体可作为临床诊断RA的一项很好的血清学指标,具有较高的敏感度和特异度,优于RF等其他血清学指标.对于筛查和辅助诊断类风湿性关节炎具有重要意义.