SERPINB7对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂B7(SERPINB7)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用及其可能机制。方法 将人乳腺癌细胞系MCF-7分为sh-SERPINB7组、空白对照组(BC组)和阴性对照组(NC组);其中,sh-SERPINB7组和NC组分别转染SERPINB7 RNA干扰慢病毒和阴性对照慢病毒。采用qRT-PCR法检测SERPINB7 mRNA表达,CCK-8法、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭,Western blot法检测SERPINB7、Bax、Bcl-2、Snail、Slug、转化生长因子β(TGF-β)、Smad3和磷酸化Smad3(p-Smad3)的蛋白表达。结果 MCF-7细胞中SERPINB7蛋白表达高于人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P<0.05)。与BC组和NC组相比,sh-SERPINB7组MCF-7细胞中SERPINB7 mRNA表达以及Bcl-2、Snail、Slug、TGF-β、p-Smad3蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,细胞划痕愈合率和侵袭细胞数减少,Bax蛋白表达增加(P<0...     

miR-641对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 研究微小RNA641(miR-641)对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制.方法 实验分为miR-NC组、miR-641组、si-NC组、si-S100A7组、miR-641+pcDNA组、miR-641+pcDNA-S100A7组.以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测牛皮癣素(S100...     

车前子多糖对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其机制

目的:研究车前子多糖对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并初步探究其作用机制.方法:以人乳腺癌细胞MDA-MB-231为对象,采用MTT法检测不同质量浓度车前子多糖(8、16、32、64 mg/L)对细胞增殖能力的影响并计算细胞存活率;采用划痕实验、Transwell侵袭实验分别检测不同质量浓度车前子多糖(8、16 m...     

低分子量肝素联合吉西他滨对乳腺癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的探讨低分子量肝素(low molecular weight hepa-rin,LMWH)对吉西他滨(gemcitabine,GEM)抗肿瘤作用的影响及其作用机制。方法实验分为对照组、LMWH组、GEM组、LMWH与GEM联合应用组。MTT法测定药物对MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞增殖的影响;细胞划痕实验、Tr-answell小室法检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的蛋白表达;ELISA法检测乳腺癌细胞培养液中乙酰肝素酶(heparanase,HPA)的表达。结果 LMWH对MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞的增殖没有明显影响,亦不能增强GEM的增殖抑制作用。30×104IU·L-1LMWH与2.5 mg·L-1GEM联合作用于MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞24 h的迁移抑制率分别为66.3%、76.5%,较单用GEM的迁移抑制率(MDA-MB-231细胞47.4%,MDA-MB-435细胞52.9%)明显提高。同时LMWH与GEM合用对乳腺癌细胞侵袭的抑制也明显高于GEM单用时的作用。GEM可下调MMP-9和HPA的表达,与LMWH合用时下调更加明显。结论 LM-WH具有增强GEM抑制乳腺癌细胞迁移和侵袭的作用,其机制可能与下调MMP-9和HPA的表达有关。     

细胞外基质的变化与乳腺癌的侵袭和转移

1　乳腺癌细胞外基质的变化细胞外基质包括基底膜,主要由各种类型胶原蛋白,结构糖蛋白(如纤维连接蛋白,层粘连蛋白等),弹力蛋白和蛋白多糖构成[1]。基底膜被认为是限制肿瘤生长的防线,主要由大量Ⅳ型胶原及多种糖蛋白组成。恶性肿瘤有不同程度的基底膜缺损并可穿过基底膜在间质中生长繁殖;良性肿瘤基底膜完整,须依托基底膜定位生长。恶性肿瘤的发展过程受肿瘤细胞本身和宿主因素的影响,细胞外基质的变化在肿瘤侵袭转移中起着十分重要的作用。乳腺癌基底膜变化规律的研究是揭示复杂癌肿浸润机制的基础。癌肿浸润转移首先穿过基底膜,然后到达…     

circ_0000264促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨环状RNA circ_0000264在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的功能及作用机制。方法 采用qRT-PCR检测乳腺癌组织和细胞系中circ_0000264的表达;利用si-circ_0000264构建敲低circ_000026的细胞模型;分别采用CCK-8、BrdU和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭;采用双荧光素酶报告基因实验验证circ_0000264与miR-622的靶向调控关系。结果 circ_0000264在乳腺癌组织和细胞中均呈高表达（P<0.05）。与对照组相比,敲低circ_0000264可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭（P<0.05）。circ_0000264对miR-622具有吸附作用。下调miR-622可部分逆转敲低circ_0000264对乳腺癌细胞增殖和转移的抑制作用。结论 circ_0000264在乳腺癌进展过程中发挥促进作用;circ_0000264通过负向调控miR-622促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

岩藻糖氟化模拟类似物对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响及机制研究

目的研究岩藻糖的氟化模拟类似物2-氟-L-岩藻糖(2-fluoro-L-fucose,2FF)对乳腺癌MDA-MB231细胞增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法凝集素染色法检测2FF处理后乳腺癌细胞中核心岩藻糖的表达情况;CCK-8法测定2FF处理对乳腺癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验法测定2FF处理后乳腺癌侵袭能力的变化;Western blotting分析Hippo信号通路相关蛋白的表达情况。结果 2FF可显著抑制乳腺癌MDA-MB231细胞中核心岩藻糖的表达,呈剂量和时间依赖性;2FF处理后可以显著抑制乳腺癌MDA-MB231细胞的增殖和侵袭;Westernblotting结果显示,2FF使用后,pYAP、pLATS、pMST1/2表达下降,总体YAP、LATS、MST1表达未见明显改变。结论 2FF可以抑制核心岩藻糖在乳腺癌细胞中的表达,并抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移;其机制可能与Hippo信号通路的调节有关。     

miR-613对高尔基体磷蛋白3调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的研究miR-613靶向调控高尔基体磷蛋白3(GOLPH3)基因对乳腺癌MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法用脂质体技术分别将miR-NC、miR-613 mimic、anti-miR-NC、anti-miR-613、si-NC、si-GOLPH3、miR-613 mimic与pcDNA、miR-613mimic与pcDNA-GOLPH3转染至MCF-7细胞。用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-613和GOLPH3 mRNA的表达,用噻唑蓝法、Transwell法检测MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭。结果 HBL-100组和MCF-7组的miR-613表达量分别为1.03±0.09和0.37±0.04,GOLPH3 mRNA表达量分别为1.07±0.11和3.25±0.26,GOLPH3蛋白表达量分别为0.34±0.05和0.75±0.08,MCF-7组的上述指标与HBL-100组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-NC组和miR-613组72 h时细胞增殖率分别为(0.97±0.09)%和(0.63±0.06)%,迁移细胞数分别为(86.79±8.1...     

激光捕获显微切割技术纯化的乳腺癌上皮细胞和间质比较蛋白质组学研究

目的研究乳腺癌上皮细胞和间质间蛋白表达的差异。方法用改良HE染色法对临床侵润性导管内原位癌患者的石蜡包埋样品进行染色,用激光捕获显微切割技术(LCM)纯化分离癌变的乳腺上皮细胞和其周围间质后分别进行质谱分析。结果质谱总共检测了431种蛋白,上皮细胞和间质中分别检测到384和298种蛋白。251种共同表达的蛋白中,69种间质蛋白的含量比在上皮细胞中高,60种比在上皮细胞中低。所检测到蛋白的上皮细胞和间质定位及表达水平和它们在肿瘤发生、发展过程中的作用一致。结论在上皮细胞和间质中差异表达蛋白可以是疾病的筛选、诊断和预后判断的蛋白标志。     

肝素酶抑制剂OGT2115对口腔癌KB细胞侵袭迁移的影响

目的探讨肝素酶抑制剂OGT2115对人口腔上皮癌KB细胞增殖及侵袭迁移能力的影响,以期为治疗肿瘤转移提供思路。方法 MTT法和Transwell实验分别检测不同浓度OGT2115(0.4、0.8、1.6、3.2、6.4μmol.L-1)对口腔癌KB细胞增殖以及侵袭迁移的影响;Transwell实验和划痕实验检测OGT2115(0.4μmol.L-1)联合低浓度(2μmol.L-1)阿霉素(adriamycin,ADM)后对细胞侵袭迁移的作用;ELISA法观察不同浓度OGT2115、OGT2115联合ADM对乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)的影响。结果 MTT法结果显示,OGT2115对KB细胞的增殖具有一定的抑制作用,IC50为8.59μmol.L-1,抑制活性随着作用时间和浓度的增加而增加(P<0.05)。OGT2115可抑制KB细胞的侵袭和迁移,OGT2115(0.4μmol.L-1)与ADM(2μmol.L-1)联用后可以明显增强ADM抗KB细胞增殖和侵袭迁移能力(P<0.05)。结论肝素酶抑制剂OGT2115可以抑制KB细胞的侵袭和迁移,且可增强ADM抗KB细胞侵袭迁移的能力,其机制可能与抑制Hpa的活性有关。     

溶瘤腺病毒修饰间充质干细胞裂解上清对小鼠乳腺癌细胞4T1生物学特性的影响

目的评价溶瘤腺病毒(rAd)修饰间充质干细胞(MSC)裂解上清对小鼠乳腺癌4T1细胞生物学特性的影响。方法采用携带核心蛋白聚糖(DCN)基因的溶瘤腺病毒rAd.DCN和对照病毒rAd.Null感染MSC,命名为MSC.DCN和MSC.Null。感染后48 h,收集MSC.DCN,MSC.Null和MSC的裂解上清,将其与小鼠乳腺癌细胞4T1共培养,同时设4T1细胞对照组,用实时定量PCR法和Western印迹法检测小鼠乳腺癌4T1细胞DCN mRNA和蛋白表达;通过Dye670标记,用流式细胞术检测4T1细胞增殖;用FITCAnnexinⅤ/PI凋亡试剂盒检测4T1细胞凋亡;通过细胞划痕实验检测4T1细胞的迁移能力。结果 MSC.DCN裂解上清处理后,4T1细胞DCN mRNA和蛋白表达均高于其余2组(P<0.01)。共培养3 d后,与细胞对照组相比,MSC组4T1细胞增殖指数下降(P<0.01);共培养3和5 d后,与MSC组相比,MSC.Null组和MSC.DCN组4T1细胞增殖指数下降(P<0.05),凋亡比例上升(P<0.05);MSC.Null与MSC...     

优降宁与多柔比星协同抑制小鼠三阴性乳腺癌4T-1细胞的增殖和迁移

目的研究赖氨酸特异性去甲基化酶1(lysine-specifc demethylase 1,LSD1)抑制剂优降宁(Pargyline)与化疗药物多柔比星(Doxorubicin)联合应用对小鼠三阴性乳腺癌4T-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法体外实验以小鼠三阴性乳腺癌4T-1细胞为模型,以CCK-8法、乳酸脱氢酶释放实验、Chou-Talay法、划痕实验、Transwell实验、Western blot等试验方法检测两药联合对4T-1细胞增殖、侵袭、迁移的影响;构建荷瘤小鼠模型研究两药联用对4T-1细胞体内增殖的影响。结果优降宁和多柔比星可有效抑制4T-1细胞增殖、迁移和侵袭,两药联用具有协同效应,且无明显细胞毒性。体内实验证明,与单用药组相比,两药联用可明显抑制乳腺癌的体内增殖并延长三阴性乳腺癌4T-1细胞荷瘤小鼠的生存期。结论优降宁与多柔比星联合应用对小鼠乳腺癌4T-1细胞的增殖、迁移和侵袭具有协同抑制效应,具有用于临床三阴性乳腺癌治疗的潜在价值。     

橙皮苷对TGF-β1诱导的A549非小细胞肺癌细胞上皮间质转化的影响

目的：探讨橙皮苷对转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）诱导的人非小细胞肺癌细胞上皮-间质转化的影响。方法：以A549人非小细胞肺癌细胞系作为研究对象。用MTT法,分别检测橙皮苷对正常培养条件或TGF-β1刺激下细胞增殖的影响。应用2种方法评估橙皮苷对TGF-β1刺激条件下A549细胞的上皮间质转化：圆形度值定量评估细胞的形态变化;双抗体夹心酶联免疫吸附法（enzyme linked-immuno-sorbent assay,ELISA）检测上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin,E-cad）、ɑ-平滑肌肌动蛋白（ɑ-smooth muscle actin,ɑ-SMA）、基质金属蛋白酶抑制因子-1（tissue inhibitors of metalloproteinases-1,TIMP-1）和基质金属蛋白酶-9（metallopreoteinases-9,MMP-9）水平。结果：0~40 μmol·L^-1的橙皮苷对正常培养条件或TGF-β1刺激后A549细胞的增殖没有显著影响。5 ng·mL^-1 TGF-β1能够诱导A549细胞的上皮间质转化：由上皮特征的铺路石状的细胞形态转化为梭形形态,圆形度值减少;E-cad分泌量减少和ɑ-SMA合成量增加。另外,MMP-9分泌量增加,MMP-9/TIMP-1比值增加。在细胞出现形态改变后,应用橙皮苷（20 μmol·L^-1或40 μmol·L^-1）能够降低ɑ-SMA、MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值,增加E-cad水平,对细胞的圆形度值没有影响。结论：橙皮苷减轻TGF-β1诱导的非小细胞肺癌细胞的上皮间质转化程度,对非小细胞肺癌的转移和扩散有一定的抑制作用。     

瑞香素对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的抑制作用及其机制研究

目的 探讨瑞香素对三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖、迁移及侵袭的抑制作用及其潜在机制。方法 体外培养MDA-MB-231细胞,随机分为对照组和瑞香素10,20,40 μg·mL^–1组。以MTT法检测细胞的增殖情况;通过克隆形成试验检测各组MDA-MB-231细胞克隆形成情况;划痕试验及Transwell观测细胞迁移和侵袭情况;Western blotting检测Vimentin、MMP9、Cyclin D1、CDK4蛋白表达量。结果 与对照组相比,瑞香素组（10,20,40 μg·mL^–1）显著抑制细胞增殖（P<0.05或P<0.01）;瑞香素组（10,20,40 μg·mL^–1）可以抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-231的克隆形成（P<0.01）;瑞香素组（20,40 μg·mL^–1）细胞的迁移能力和侵袭能力显著下降（P<0.01）;瑞香素组（20,40 μg·mL^–1）细胞Vimentin、MMP9、Cyclin D1、CDK4蛋白表达量显著降低（P<0.01）。结论 瑞香素可以抑制三阴性乳腺癌细胞株MDA-MB-231的增殖、迁移及侵袭能力,其作用机制可能与下调Vimentin、MMP9、Cyclin D1、CDK4的表达有关。     

紫花牡荆素抑制小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌干细胞样细胞侵袭和转移的研究

目的探讨紫花牡荆素(CAS)抑制人小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌干细胞样细胞(LCSLCs)侵袭和转移作用。方法体外培养人小细胞肺癌NCI-H446细胞系细胞和LCSLCs。流式细胞术(FCM)检测CD133+表达。Trawell法检测LCSLCs侵袭和转移能力。Trawell法测定CAS对LCSLCs侵袭、转移能力的抑制作用。结果 LCSLCs呈现典型非黏附三维球状,并高表达CD133+。Trawell法结果显示LCSLCs具有很强的体外侵袭和转移能力,而CAS能显著抑制LCSLCs的体外侵袭和转移能力。结论 CAS能显著抑制LCSLCs的体外侵袭和转移能力。     

miR-96在人乳腺癌中表达及其对乳腺癌细胞侵袭和迁移活性的影响

目的研究miR-96在人乳腺上皮细胞株和乳腺病变组织中表达状况及其对人乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法抽提4株人乳腺上皮细胞系和28例人乳腺病变新鲜组织总miRNA,实时定量PCR方法检测它们miR-96的表达状况;脂质体介导的转染方法将miR-96抑制物转染人乳腺癌MCF-7细胞株;通过MTS试剂盒检测细胞增殖能力,Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭及迁移能力。结果miR-96在高侵袭乳腺癌细胞株中表达较低侵袭乳腺细胞明显下调(P<0.01);人乳腺癌组织中miR-96表达较乳腺良性病变组织明显下调(P<0.01);miR-96抑制物转染乳腺癌MCF-7后,乳腺癌细胞侵袭和迁移活力较阴性对照组细胞明显增强(P<0.05),而细胞增殖活力改变无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-96在人乳腺癌细胞株和乳腺癌组织中存在表达下调,并对人乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力可能存在一定负性调控作用。     

丹蒽醌对乳腺癌细胞MCF-7增殖及侵袭转移的抑制作用及其作用机制研究

目的 研究丹蒽醌对乳腺癌细胞MCF-7增殖及侵袭转移的抑制作用,并探讨其作用机制。方法 CCK-8法检测不同浓度（10、20、40、60、80、100 μmol/L）的丹蒽醌作用24、48 h对乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响;Transwell实验考察丹蒽醌对乳腺癌细胞MCF-7侵袭转移能力的影响。实时荧光当量PCR（RT-qPCR）法检测c-Myc、Cyclin D1 mRNA的表达水平;Western blotting法检测p-AMPKα、ACC、c-Myc、Cyclin D1蛋白的表达水平。结果 不同浓度的丹蒽醌作用不同时间对乳腺癌细胞MCF-7增殖均具有抑制作用;20、40 μmol/L的丹蒽醌能够明显的抑制乳腺癌细胞MCF-7的侵袭转移,同时能够激活p-AMPKα的表达,抑制ACC、c-Myc、Cyclin D1等基因的表达,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖。结论 丹蒽醌对乳腺癌细胞MCF-7增殖及侵袭转移具有抑制作用,其作用机制可能与激活AMPK信号通路抑制c-Myc、Cyclin D1等增殖相关基因表达有关。     

紫花牡荆素对人宫颈癌细胞凋亡和侵袭迁移的影响

目的 观察紫花牡荆素(CAT)对人宫颈癌HeLa和SiHa细胞凋亡和侵袭转移的影响。方法 不同浓度CAT作用于HeLa和SiHa细胞不同时间后,采用MTT法观察药物对细胞活力的影响,流式细胞仪检测凋亡率,划痕试验观察细胞迁移率,基质胶法测定细胞粘附百分率,Transwell试验检测侵袭细胞数,Western blotting分析CAT对SiHa细胞抑制转移蛋白nm23-H1和促转移蛋白MTA1表达的影响。结果 CAT显著抑制HeLa和SiHa细胞活力,增加细胞凋亡率;降低细胞迁移百分率和黏附百分率;减少侵袭细胞数;明显增加SiHa细胞nm23-H1蛋白表达,降低MTA1蛋白表达。结论 CAT显著诱导人宫颈癌HeLa和SiHa细胞凋亡,抑制其侵袭迁移,提示其具有潜在的抗宫颈癌作用。