病毒性心肌炎血和心肌CVB_3RNA含量与心肌病变的关系

目的研究小鼠柯萨奇Ｂ３病毒性心肌炎模型血、心肌柯萨奇病毒ＲＮＡ含量的关系;外周血中ＣＶＢ３ＲＮＡ含量与心肌病理积分的关系。方法利用定量ＰＣＲ方法检测病毒性心肌炎小鼠模型急性期外周血、心肌ＣＶＢ３ＲＮＡ含量。结果ＣＶＢ３感染所致心肌炎小鼠外周血、心肌中ＣＶＢ３ＲＮＡ含量显著正相关（ｒ＝０．９４,Ｐ＜０．０５）。外周血及心肌中ＣＶＢ３ＲＮＡ含量与心肌病理积分显著正相关（ｒ＝０．８０,Ｐ＜０．０１,ｒ＝０．８５,Ｐ＜０．０１）。结论病毒性心肌炎急性期外周血中ＣＶＢ３ＲＮＡ含量可以反映心肌中病毒ＲＮＡ含量水平,且两者与心肌病理损害均有一致性改变。     

柯萨奇B组病毒逆转录聚合酶链反应检测方法的建立

根据柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）基因组５’非编码区核苷酸序列，选用了一对组特异性吸收物，用于逆转聚合酶链反应检测ＣＢＶ－ＲＮＡ，结果显示该法可检出ＣＢＶ１～６型ＲＮＡ，灵敏度为１０ＰＦＵ不能检出其他病毒ＲＮＡ，采用的碘化钠－异硫氰酸胍－氯仿法提取ＣＢＶ－ＲＮＡ与传统的蛋白酶Ｋ－酚－氯仿法及异硫氰酸胍－酚－氯仿法比较，具有快速，简便，稳定，可靠的特点，应用该法检测ＣＢＶ－５感染鼠外周血ＲＮＡ，第３ｄ即为     

柯萨奇B组病毒逆转录聚合酶链反应检测方法的建立

根据柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）基因组５’非编码区核苷酸序列，选用了一对组特异性引物，用于逆转录聚合酶链反应检测ＣＢＶ－ＲＮＡ。结果显示该法可检出ＣＢＶ１～６型ＲＮＡ，灵敏度为１０ＰＦＵ，不能检出其他病毒ＲＮＡ。采用的碘化钠－异硫氰酸胍－氯仿法提取ＣＢＶ－ＲＮＡ与传统的蛋白酶Ｋ－酚－氯仿法及异硫氰酸胍－酚－氯仿法比较，具有快速、简便、稳定、可靠的特点。应用该法检测ＣＢＶ－５感染鼠外周血ＲＮＡ，第３ｄ即为阳性，提示本法可用于ＣＢＶ感染的早期诊断     

穿孔素介导的细胞毒效应在病毒性心肌炎小鼠发病中的作用

探讨穿孔素介导的细胞毒效应在病毒性心肌炎发病中的作用。方法４０只小鼠等分为ＣＶＢ３感染组及非染组，所有小鼠于感染后第１０天处死并取其心脏；采用免疫组化技术检测心肌浸润细胞中ＰＦＰ的表达，原位杂交方法检测心肌中ＣＶＢ３ＲＮＡ；半定分析ＰＦＰ抗原及ＣＶＢ３ＲＮＡ水平，并分析ＰＦＰ抗原水平与ＣＶＢ３复制及心肌病变程度的关系。     

RNA－RNA原位杂交检测和定量分析心肌中肠道病毒RNA

ＲＮＡ－ＲＮＡ原位杂交检测和定量分析心肌中肠道病毒ＲＮＡ上海医科大学中山医院上海市心血管病研究所彭天庆，杨英珍本研究以同位素Ｓ标记肠道病毒特异的柯萨奇Ｂ－３病毒（ＣＶＢ３）的负股ＲＮＡ为探针作原位杂交对多种心肌石蜡切片进行肠道病毒ＲＮＡ检测，同时结合...     

FasL在CVB3心肌炎小鼠心肌当润细胞中表达及其与心肌病变 …

探讨Ｆａｓ／Ｆａｓ配体介导的细胞毒效应在小鼠柯萨奇Ｂ３病毒性心肌炎发病中的作用方法 ４０只小鼠等分为实验组即ＣＶＢ３感染组及对照组即非感染组，所有小鼠于感染后第１０天处死并取其心脏；采用ＲＴ－ＰＣＲ有免疫组化技术检测心肌浸润细胞中ＦａｓＬ的表达，并用原位杂交方法的检测心肌中ＣＶＢ３ ＲＮＡ；半定量分析ＦａｓＬ抗原及ＣＶＢ３ ＲＮＡ水平，并分析ＦａｓＬ表达水平与心肌中ＣＶＢ３复制及病变程度铁关系。     

定量PCR比较病毒性心肌炎血和心肌肠道病毒RNA含量及其与心肌病变的关系

目的 研究小鼠柯萨奇病毒性心肌炎模型血,心肌柯萨奇病毒ＲＮＡ含量的关系;外周血中肠道病毒ＲＮＡ含量与心肌病理积分的关系。方法 利用定量ＰＣＲ方法检测病毒性心肌炎小鼠模型急性期外周血,心肌肠道病毒ＲＮＡ含量。结果 ＣＶＢ３感染所致心肌炎小鼠外周血,心肌中肠道病毒ＲＮＡ含量显著正相关。     

荧光定量PCR技术在检测HCV—RNA中的应用

目的 评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值,探讨ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的意义。方法 采用荧光定量ＫＲ及ＲＴ－ＰＣＲ技术同时检测８７例血液透析患者的血清和淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果血清、淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４９．４％、６９．０％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率（３３．３％、３５．６％）（Ｐ ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率,荧光定量ＰＣＲ法（３１．０％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（６．９％）（Ｐ＜０．００１）． 荧光定量ＰＣＲ法,淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ检出率高于血清（Ｐ＜０．０１）。结论 与 ＲＴ－ＰＣＲ相比,荧光定量ＰＣＲ技术检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ敏感性较高,对ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ检测有利于提高ＨＣＶ检测的阳性率。     

实验性病毒性心肌炎药物治疗及凋亡的机制

目的以病毒性心肌炎（ＶＭＣ）细胞感染模型为基础，研究柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）细胞感染与心肌细胞凋亡的关系，并观察板蓝根对实验性ＶＭＣ的治疗效果。方法第一步建立稳定的ＶＭＣ细胞感染模型；第二步在ＣＶＢ３病毒感染心肌细胞后２４ｈ电镜观察超微结构改变，流式细胞仪检测“凋亡峰”，ＥＬＩＳＡ法定量检测ＣＶＢ３病毒感染后１，２，４，７，２４ｈ心肌细胞凋亡的情况；第三步将不同浓度的板蓝根与ＣＶＢ３病毒作用后在心肌细胞上检测病毒的ＴＣＩＤ５０。根据药物毒性测定的结果，取最大无毒浓度以下两种不同浓度的板蓝根按两种方式加药：（１）ＣＶＢ３病毒感染细胞后加药；（２）病毒先与药物作用后再感染细胞进行实验。以黄芪作为治疗阳性对照组，另设病毒感染组、正常细胞对照组。于药物作用４８ｈ后观察各组细胞搏动百分比、细胞病变（ＣＰＥ）、超微结构变化，并测定培养液中心肌酶水平，进行体外、细胞内药物疗效观察。结果（１）对ＣＶＢ３病毒感染后细胞的形态学检测（ＣＰＥ３＋～４＋），电镜下细胞内见包涵体，病毒颗粒及细胞培养液心肌酶（ＡＳＴ、ＬＤＨ、ＣＫ、ＣＫＭＢ、ＨＢＤＨ）水平升高，证实所建立的ＶＭＣ细胞感染模型是稳定的。（２）电镜观察ＣＶＢ３病毒感染心     

病毒性心肌炎患者的病原及病毒抗体和抗原核酸的研究

目的：探讨病毒性心肌炎患者１２９例，对照组４０例，血甭中柯萨奇Ｂ组病毒（ＣＢＶ）的中和抗体、ＩｇＭ抗体及其核糖核酸（ＲＮＡ）基因的关系。同时对白细胞（ＷＢＣ）、咽拭子、尿、血清中的ＲＮＡ阳性检测率的比较。方法：咽拭子分离病毒；微量法测血清中和抗体，间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测ＩｇＭ抗体；用反转录－结合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测ＣＢＶ特异性核糖核酸（ＲＮＡ）。结果：分离出病毒３２株     

慢性丙型肝炎患者混合感染庚型肝炎病毒的临床研究

目的 研究庚型肝炎病毒（HGV）混合感染对慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）临床、病毒复制及干扰素抗丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）疗效的影响及ＨＧＶ对干扰素治疗的反应。方法 以逆转录套式降合酶链反应（ＲＴ－nested PCR）检测９０例ＣＨＣ患者血清ＨＧＶ ＲＮＡ，比较ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组９０例ＣＨＣ患者的临床资料和对干扰素治疗的反应。结果 ＨＧＶ ＲＮＡ阳性１８例，阳性率２０％，ＨＧＶ ＲＮＡ阳性及阴性两组ＣＨＣ患者在性别、年龄、病程、丙氨酸氨基转移酶（ＡＬＴ）水平、ＨＣＶ ＲＮＡ水平和对干扰素治疗的反应等方面无明显差异。５例ＨＧＶ ＲＮＡ阳性ＣＨＣ患者接受干扰素治疗过程中，ＨＧＶ ＲＮＡ均转为阴性，停止治疗后１年，３例ＨＧＶ ＲＮＡ恢复治疗前水平。结论 混合感染ＨＧＶ对ＣＨＣ的临床、病毒复制及干扰素抗ＨＣＶ疗效无明显影响。ＨＧＶ对干扰素敏感，但停药后易复发。     

原发性肝癌患者肝组织中HCVRNA和HCV抗原的定位

分别用原位杂交过氧化物酶与抗氧化物酶复合物法检测了７３例肝细胞癌患者肝组织切片中的丙型肝炎病毒ＲＮＡ和ＨＣＶ抗原以及乙型肝炎病毒的表面抗原和核心抗原。结果显示：ＨＣＶＲＮＡ，ＨＣＶＡｇ，ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ的检测出率分别为２６．０％，２８．８％，７５．３％和２６．０％；ＨＣＶ阳性的肝细胞多呈散在型分布，可见有ＲＮＡ，ＨＣＶＡｇ，ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ的检测率分别为２６．０％     

穿孔素介导的细胞毒效应在病毒性心肌炎小鼠发病中的作用

目的探讨穿孔素（ＰＦＰ）介导的细胞毒效应在病毒性心肌炎（ＶＭＣ）发病中的作用。方法４０只小鼠等分为ＣＶＢ３感染组及非感染组;所有小鼠于感染后第１０天处死并取其心脏;采用免疫组化技术检测心肌浸润细胞中ＰＦＰ的表达,原位杂交方法检测心肌中ＣＶＢ３ＲＮＡ;半定量分析ＰＦＰ抗原及ＣＶＢ３ＲＮＡ水平,并分析ＰＦＰ抗原水平与ＣＶＢ３复制及心肌病变程度的关系。结果ＰＦＰ抗原阳性信号指数与ＣＶＢ３ＲＮＡ杂交阳性信号指数呈显著负相关（ｒ＝－０．８２,Ｐ＜０．０５）,与心肌病变积分呈显著正相关（ｒ＝０．９１,Ｐ＜０．０５）。结论ＰＦＰ介导的细胞毒效应在ＶＭＣ发病中可能具有抗病毒及致心肌损害双重作用。     

血浆及其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒检测比较

目的：了解慢性丙型肝炎患者的血浆及其外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌｓ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）的存在及存在形式。方法：反转录多聚酶链反应（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＲＴＰＣＲ）技术检测１２４例慢性丙型肝炎患者的血浆及ＰＢＭＣ中的ＨＣＶ。结果：在７０例抗ＨＣＶ及血浆ＨＣＶＲＮＡ阳性的患者中有２１例（３０％）的患者其ＰＢＭＣ内存在ＨＣＶＲＮＡ正链，仅１例存在ＨＣＶＲＮＡ负链。在５４例抗ＨＣＶ阳性、血浆ＨＣＶＲＮＡ阴性的患者中，仅有２例（３．７％）检出ＨＣＶＲＮＡ正链，未检出ＨＣＶＲＮＡ负链，这２例患者均为干扰素治疗３～６个月的病人。结论：ＰＢＭＣ可作为肝外病毒复制场所。对慢性ＨＣＶ感染者来说，３～６个月的干扰素治疗时间可能是不够的，ＨＣＶ在ＰＢＭＣ内的存在可能是干扰素治疗后复发的原因之一。     

RIBA在慢性丙型病毒性肝炎中的应用价值

采用含ＨＣＶ三种抗原（Ｃ２２，Ｃ３３Ｃ，Ｃ１９０）的重级免疫印迹试验（ＲＩＢＡ）检测了７１例抗－ＨＣＶ阳性一（ＲＩＡ－２法）的慢性非甲非乙型肝炎患者血清并与ＨＣＶＲＮＡ结果进行比较。ＲＩＢＡ阳性５６例，可疑８例，对应ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９４．６４％（５３／５６）和３７．５％（３／８），ＲＩＢＡ阴性的７例均未检出ＨＣＶＲＮＡ。ＨＣＶＲＮＡ阳性病例中ＲＩＢＡ多为阳性，可疑仅占５．３６％（３／５６０     

HBV,HCV,HGV重叠感染的回顾性研究

目的 了解１０年前我国ＨＢｓＡｇ阳性献血员ＨＢＶ,ＨＣＶ,ＨＧＶ重叠感染状况。方法 采用逆转录套式ＰＣＲ技术检测血清中ＨＢＶＲＮＡ、ＨＧＶＲＮＡ、免疫ＰＣＲ技术检测ＨＢＶＤＮＡ。结果 发现在ＨＢｓＡｇ阳性献血员中,ＨＢＶＤＮＡ阳性率９０％,ＨＣＶＲＮＡ阳性率２０％,ＨＧＶＲＮＡ阳性率６％,三重感是性率３％。结论ＨＢｓＡｇ阳性献血员吸较高比例的双重感染,且以ＨＣＶ感染为主。     

肝细胞癌患者GB病毒C感染状况及其相关性研究

为了解ＧＢ病毒Ｃ（ＧＢＶ－Ｃ）感染与肝细胞癌（下称肝癌）之间可能的相关性,采用一步法逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对１２４例肝癌患者进行了ＧＢＶ－Ｃ ＲＮＡ检测。结果：ＧＢＶ－Ｃ ＲＮＡ总检出率高达２６．６％（３３／１２４）,３３例ＧＢＶ－Ｃ ＲＮＡ检出阳性者中,９０．９％合并有ＨＢＶ、ＨＣＶ感染;３３例非Ｂ非Ｃ型肝癌中,ＧＢＶ－Ｃ ＲＮＡ检出率为９．１％（３／３３）。３３例ＧＢＶ－Ｃ感染阳性     

多重PCR扩增HAVRNA，HBVDNA和HCVRNA方法的建立

多重ＰＣＲ扩增ＨＡＶＲＮＡ，ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ方法的建立阎小君，肖乐义，李陕区，苏成芝，郭宴海，刘君，侯瑜，陈远鑫（西安全军基因诊断技术应用研究所７１００３３）关键词聚合酶链反应，甲型肝炎病毒，乙型肝炎病毒，丙型肝炎病毒中图号Ｑ５２３．３ＨＡ...     

原位PCR确诊一例由病毒性心肌炎所致心肌梗塞

目的：应用原位ＰＣＲ诊断青年型急性心肌梗塞的柯萨奇Ｂ组病毒（ｃｏｘｓａｃｋｉｅ ｖｉｒｕｓ Ｂ，ＣＶＢ）感染。方法：应用原位ＰＣＲ法对具有急性心肌梗塞临床演变年轻患者的心肌活检组织进行ＣＶＢ检测，以明确病因。结果：患者的心肌活检组织中ＣＶＢ－ＲＮＡ显示阳性。结论：柯萨奇Ｂ组病毒感染所致的急性病毒性心肌炎可导致急性心肌梗塞。     

HCV侵染患者外周血单个核细胞后对细胞免疫功能的影响

目的 探讨丙型病毒性肝炎（丙肝）患者外周血单个核细胞（ＰＢＦＭＣ）ＨＣＶ－ＲＮＡ（＋）后对其细胞免疫功能的影响及其在丙肝发病机制中的作用。方法 以ＲＴ－ＰＣＲ法检测１３５例丙肝患者ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ,同时用生物素－链霉亲和素（ＢＳＡ）系统检测其Ｔ细胞亚群及经ＰＨＡ诱导前后膜白介素－２受体（ｍＩＬ－２Ｒ）的表达水平。结果 丙肝患者与正常对照相比,ＣＤ＾＋３,ＣＤ＾＋４及ｍＩＬ－２Ｒ表达水平降低