四君子汤多糖对IEC-6细胞迁移、钾通道蛋白及膜电位的影响

目的:观察四君子汤多糖对小肠上皮IEC-6细胞迁移及多胺调控信号通路钾通道蛋白和膜电位的影响,探讨四君子汤修复胃肠黏膜损伤的作用机制。方法:划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察正常培养及α-二氧甲基乌氨酸(DFMO,多胺合成抑制剂)或4-氨基吡啶(4-AP,钾通道抑制剂)负荷下四君子汤多糖对IEC-6细胞迁移的影响;分别以荧光定量PCR法和Western blot法检测四君子汤多糖对IEC-6细胞钾通道蛋白kv1.1 mRNA和蛋白表达的影响;流式细胞仪检测四君子汤多糖对IEC-6细胞膜电位的影响。结果:与空白对照组比较,四君子汤多糖(40、80、160 mg/L)可促进IEC-6细胞迁移,提高IEC-6细胞kv1.1 mRNA和蛋白表达水平及细胞膜电位超极化水平(P0.05或P0.01);与DFMO模型组比较,四君子汤多糖(40、80、160 mg/L)可逆转DFMO所致细胞迁移数减少、kv1.1 mRNA和蛋白表达的降低以及细胞膜电位去极化(P0.05或P0.01);与4-AP模型组比较,四君子汤多糖(20、40、80 mg/L)可逆转4-AP所致细胞迁移的抑制、kv1.1 mRNA和蛋白表达的降低(P0.05或P0.01)。结论:四君子汤多糖可促进IEC-6细胞迁移,作用机制与影响多胺调控信号通路钾通道蛋白表达和细胞膜电位有关。     

四君子汤总多糖及单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞迁移作用的比较研究

目的：研究四君子汤总多糖及各单味药多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6细胞研究迁移的影响。方法：以IEC-6细胞为研究对象，采用体外细胞迁移模型，观察四君子汤总糖及各单味多糖对该细胞迁移的影响。结果：各多糖作用存在差异，茯苓多糖具有明显抑制细胞迁移的作用，白术多糖作用不显著，甘草多糖和党参多糖具有明显促进细胞迁移的作用。当各单味药多糖与总多糖相比时，总多糖的效用优于各单味药多糖。结论：四君子汤总多糖的作用可能是各单味药多糖综合作用的结果，也提示中药复方用药具有一定的合理性。     

四君子汤含药血清上调c-Myc表达促进小肠上皮细胞迁移和增殖

目的:考察四君子汤含药血清(SJZ)对小肠上皮(IEC-6)细胞损伤后迁移、增殖及c-核蛋白类基因(c-Myc)mRNA和蛋白表达的影响,以探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:采用大鼠制备四君子汤含药血清,Tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤药物血清对细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测c-Myc mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测c-Myc蛋白表达。结果:中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P0.01);细胞损伤后12 h,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%),中(10%),高(20%)体积浓度的四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P0.05,P0.01);进一步研究发现,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可提高与胃肠黏膜损伤修复密切相关的c-Myc mRNA和蛋白表达(P0.01)。结论:四君子汤修复胃肠黏膜屏障损伤,促进溃疡愈合的作用可能与其提高c-Myc mRNA和蛋白表达,促进黏膜上皮细胞的迁移和增殖有关。     

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6基因表达谱影响的研究

目的:本研究主要观察四君子汤总多糖(TPSJ)对大鼠小肠上皮细胞株基因表达谱的影响,以进一步了解四君子汤总多糖的作用机制。方法:采用基因芯片技术观察给予四君子汤总多糖前后大鼠小肠上皮细胞株IEC-6基因表达谱的变化情况。结果:在给予TPSJ后,大鼠IEC-6细胞株共有123条基因表达出现明显差异,基中55条基因表达上调,68条基因表达下调,分别涉及包括细胞发育、细胞生长增殖、粘附以及信号转导和免疫应答等方面的基因。结论:TPSJ可通过多种途径影响小肠上皮细胞功能,并有可能通过对小肠上皮细胞的调节作用而实现对全身的免疫调节。     

灵芝多糖对IEC-6细胞促增殖、迁移与分化作用

 目的通过灵芝多糖作用于体外培养的大鼠小肠隐窝细胞株IEC-6细胞,观察灵芝多糖对IEC-6细胞增殖、迁移与分化的影响。方法不同浓度的灵芝多糖作用于正常IEC-6细胞44h后,用噻唑蓝(MTT)法测细胞的增殖。灵芝多糖预作用IEC-6细胞46h后,用500μmol·L^{-12O₂刺激IEC-6细胞40min,以MTT法测细胞的增殖变化。采用IEC-6单层肠上皮细胞损伤重建模型,检测灵芝多糖对IEC-6细胞迁移的影响,并用ELISA方法检测培养细胞上清中TGF-β的含量以探讨迁移途径。对细胞进行HE染色来观察IEC-6细胞的分化情况。结果灵芝多糖对正常及受H₂O₂损伤后的IEC-6细胞均有促增殖作用,并呈量效关系;10mg·L-1灵芝多糖可促进受损IEC-6细胞的迁移,但对细胞上清中TGFβ含量无影响。在10mg·L-1灵芝多糖作用下,IEC-6细胞分化程度增高。结论灵芝多糖可以促进IEC-6细胞增殖、迁移与分化。其促迁移作用是非依赖TGFβ途径的。}     

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮细胞株IEC-6迁移的影响

目的:观察四君子汤总多糖(PPS)在黏膜损伤后对小肠上皮细胞修复的影响。方法:采用大鼠小肠上皮细胞株IEC-6制成细胞迁移模型,观察四君子汤PPS在造模后0 h8、h及24 h对细胞迁移面积的影响。结果:四君子汤在细胞迁移的8 h及24 h,对IEC-6的细胞迁移均有促进作用。而其最佳剂量集中于100~400μg/ml范围内。结论:四君子汤可促进胃肠道黏膜损伤的修复,其机制与促进细胞迁移有关。     

白术多糖对IEC-6细胞迁移及细胞生长的影响

目的:观察3种白术多糖提取物对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及生长的影响,为研究调节细胞迁移药效物质基础提供参考。方法:从白术药材提取得到白术水提醇沉部位("白术多糖1"),去蛋白并经DEAE-纤维素柱层析得到"白术多糖2",再以Sephadex LH-20凝胶柱层析得到"白术多糖6"。在细胞迁移模型观察此3种样品调节IEC-6细胞迁移的活性;在实时细胞分析仪观察3种样品对IEC-6细胞生长的影响。结果:3种白术多糖样品(50μg/ml或100μg/ml或200μg/ml)能逆转DFMO(二氟甲基鸟氨酸)所致细胞迁移抑制,药效以"白术多糖6"最优。3种白术多糖样品需要更高剂量(200μg/ml或300μg/ml或400μg/ml)才有促进IEC-6细胞生长的作用。结论:调节细胞迁移是白术多糖的主要药效作用,其促进细胞生长的作用则相对较弱,实验结果为后续选择"白术多糖6"研究其结构表征提供了参考。     

四君子汤多糖分离纯化对IEC-6细胞迁移药效活性的影响

目的：本研究对四君子汤多糖进行提取和分离纯化,观察不同多糖样品对小肠上皮细胞（IEC?6）迁移的影响,从而进行多糖纯化过程的药效活性追踪,为探讨四君子汤多糖药效物质基础提供参考。方法：①四君子汤水提醇沉得到四君子汤多糖1;经Sevag法去蛋白得到四君子汤多糖2;经DEAE?52纤维素柱层析并超纯水洗脱得到四君子汤多糖3a;经Sephadex G?100葡聚糖凝胶柱层析并超纯水洗脱得到四君子汤多糖4a和多糖4b;并以苯酚?硫酸法检测各多糖样品糖含量（以葡萄糖计）。②凝胶渗透色谱法（GPC）检测四君子汤多糖3a、多糖4a和多糖4b纯度。③在IEC?6细胞迁移模型上,观察四君子汤多糖不同样品促进细胞迁移的药效活性。结果：4种多糖样品（四君子汤多糖1、2、3a、4b）糖含量分别为71.35%、75.45%、81.00% 和98.50%,其促进细胞迁移的最低有效剂量分别为200、100、50、30mg·L^?1;表明纯化步骤最多的多糖4b糖含量最高、药效最优,且GPC 法测得其为均一性多糖组分。结论：四君子汤多糖经不同纯化步骤后,糖含量和纯度提高,药效活性随之增强,研究结果为探讨四君子汤促进细胞迁移的药效物质基础研究提供参考。     

4种中药提取物对大鼠小肠上皮细胞IEC-6增殖及其葡萄糖吸收的影响

目的 利用大鼠小肠上皮细胞系(IEC-6),研究单味中药提取物对小肠上皮细胞增殖和葡萄糖吸收转运功能的调控作用.方法 藿香、苍术、黄柏和石膏等4种中药被定向提取,MTT细胞增殖试验筛选提取物的适宜作用质量浓度,测定各处理组细胞的葡萄糖吸收率和Na+,K+-SATP酶活性,同时采用荧光定量PCR技术分析细胞中钠-葡萄糖共转运载体(SGLT1)、葡萄糖转运载体2(GLUT2)和Na+,K+-ATP酶的mRNA表达量.结果 各中药提取物对大鼠小肠上皮细胞增殖的影响与其作用质量浓度有关.50μg/mL苍术挥发油和10μg/mL黄柏生物碱可提高IEC-6细胞葡萄糖的吸收功能,并显著上调了SGLT1和Na+,K+-ATP酶mRNA表达量;50μg/mL藿香挥发油促进了细胞的葡萄糖吸收,但仅对GLUT2的基因表达有上调效应(P<0.05);而50μg/mL石膏水提物对细胞葡萄糖的吸收无促进作用(P>0.05).结论 苍术挥发油、藿香挥发油和黄柏生物碱对细胞增殖和葡萄精吸收均有促进作用,但其影响机制并不完全一样.     

白术多糖对小肠上皮细胞细胞屏障及黏附连接蛋白表达的影响

目的观察白术多糖对小肠上皮细胞（IEC-6）渗透性的影响,并从其对黏附连接蛋白表达影响的角度, 探讨白术多糖对肠黏膜上皮屏障的作用及机制。方法在3 种实验条件下［正常含钙、含钙+多胺合成抑制剂 （DFMO）、无钙培养］,以检测Transwell 小室酚红透过率的方法观察细胞间渗透性;以Western Blot 法检测细 胞黏附连接蛋白（E-cadherin、α-catenin 和β-catenin）的表达。结果①正常含钙培养时,白术多糖（25、50、 100 mg·L-1）能降低细胞间渗透性并提高黏附连接蛋白表达（P＜0.05 或P＜0.01）;②含钙+DFMO 负荷时,细胞 间渗透性增加且黏附连接蛋白表达下降（P＜0.01）;各剂量的白术多糖能逆转DFMO 所致的细胞间渗透性增 加,且对黏附连接蛋白表达下降有拮抗作用（P＜0.05 或P＜0.01）;③无钙培养时,细胞间渗透性增加且黏附 连接蛋白表达下降（P＜0.01）,各剂量的白术多糖可逆转无钙培养所致的细胞间渗透性增加及E-cadherin 表达 降低（P＜0.05 或P＜0.01）,但对α-catenin 和β-catenin 表达无明显影响。结论白术多糖有增强小肠上皮屏障 的作用,其机制与影响黏附连接蛋白表达有关,研究结果为探讨益气健脾中药白术对胃肠黏膜保护作用提供了参考。     

甘草与白术配伍对IEC-6细胞p53,p21基因表达的影响

通过研究不同剂量甘草与白术配伍对DFMO模型小肠上皮细胞(IEC-6)增殖及p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,探讨甘草与白术配伍对细胞增殖影响的分子基础.采用流式细胞术分别检测药物对IEC-6细胞分裂速度及细胞周期的影响,qRT-PCR检测药物对IEC-6增殖相关基因p53,p21 mRNA的影响,Western blot检测药物对IEC-6细胞p53,p21蛋白表达的影响.白术颗粒可上调DFMO模型IEC-6细胞内p53,p21 mRNA和蛋白的表达水平;而甘草颗粒与白术颗粒不同比例配伍均能显著下调单独白术颗粒作用对DFMO模型IEC-6细胞p53,p21 mRNA和蛋白表达的影响,促进IEC-6细胞的增殖.对于DFMO模型IEC-6细胞,配伍用药甘草能调和白术对小肠上皮细胞的影响.     

黄芪注射液通过激活鸟氨酸脱羧酶促进IEC-6细胞分化的研究

目的：观察黄芪注射液（Astragalus injection,AI)对小肠隐窝细胞株（IEC－6）增殖、分化、移行及其对细胞内鸟氨酸脱羧酶（ODC）和多胺含量的影响，探讨其粘膜修复的作用机理。方法：IEC－6细胞接种后24h,加入AI。加药后12h收获细胞，分别检测ODC mRNA水平、ODC蛋白、ODC活性及细胞内腐胺含量；24h观察细胞增殖和细胞分化；细胞接种后72h损伤细胞，并加入AI，加药后24h、48h及72h观察细胞移行。结果：AI能明显抑制IEC－6细胞增殖，促进细胞分化，对细胞移行无明显影响。AI62．5－250μg/ml各剂量组可明显增加ODC mRNA水平，与对照组比较差异有显著性（P<0．05－0．01）。AI各剂量组对ODC蛋白均无明显影响。AI随着剂量增加，逐渐升高IEC－6细胞ODC活性和腐胺含量，具有剂量依赖关系。结论：AI通过诱导IEC－6细胞ODC活性和多胺的生物合成促进细胞分化，而对细胞移行无明显作用。     

藤黄炮制品对大鼠肠道组织病理学研究

目的:观察藤黄各制剂单次大剂量ig给药后大鼠消化系统病变情况,并比较藤黄炮制前后对大鼠肠上皮细胞株IEC-6毒性差异,探讨藤黄炮制减毒机制.方法:单次ig给予藤黄生品(200 mg· kg-1)、清水制藤黄(200 mg· kg-1)和藤黄酸(50 mg· kg-1),观察给药后大鼠的活动情况,于24 h后处死并采集大鼠心、肝、肾、食管、胃、十二指肠、空肠、回肠和结肠等主要脏器,观察大鼠口服给药后消化系统病变情况.以大鼠肠上皮细胞株IEC-6为研究对象,采用MTT法检测藤黄炮制前后对IEC-6细胞增殖的影响,采用倒置显微镜观察细胞形态.结果:病理切片结果显示,给药后大鼠的肝脏、肾脏、心脏、胃和食道均未见明显的毒性反应;但十二指肠、空肠有轻度至重度的毒性作用,表现为肠绒毛水肿.3种藤黄制剂均会引起给药大鼠肠道的毒性作用,生品藤黄所致的十二指肠和空肠水肿程度最严重,其次是清水制藤黄和藤黄酸.细胞的毒性结果显示,与空白组相比,藤黄生品及炮制品均可明显降低IEC-6细胞的活性(P＜0.01)与形态,且呈一定的剂量相关性;与藤黄生品组相比,藤黄3种炮制品组对IEC-6细胞的增殖抑制作用(P＜0.01)和形态变差的趋势均显著性降低.结论:藤黄单次大剂量ig给药后大鼠的病理变化及IEC-6细胞的毒性作用结果表明,藤黄经炮制后毒性显著降低.     

醋制降低京大戟对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6毒性研究

目的：比较京大戟醋制前后对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6的毒性差异,初步探讨京大戟醋制减毒机制。方法：以大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,采用MTT法检测京大戟醋制前后对IEC-6细胞活性的影响,采用倒置显微镜观察醋制前后对细胞形态的影响;采用高内涵细胞成像系统（HCS）分析醋制降低肠细胞线粒体凋亡通路。结果：与阴性对照组比较,增殖抑制实验显示京大戟生品具有较强的肠细胞毒性（P<0.01）,HCS分析结果显示京大戟可显著降低细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度（P<0.05,P<0.01）,并显著增加Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度（P<0.01,P<0.01,P<0.01）;醋制后与京大戟生品各剂量组比较,京大戟醋品可显著降低京大戟生品对肠细胞的增殖抑制作用,增加细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度（P<0.05,P<0.05）,降低Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度（P<0.01,P<0.01,P<0.05）,且呈一定的剂量相关性。结论：醋制可降低京大戟对肠细胞的毒性,其可能机制为通过降低京大戟对IEC-6细胞膜通透性,从而为进一步阐明京大戟醋制减毒机制提供了一定的依据。     

甘草对小肠隐窝干细胞增殖中p53mRNA稳定性及其表达的影响

目的研究甘草对小肠隐窝干细胞IEC-6细胞增殖及p53表达的影响。方法采用二氟甲基鸟氨酸（DFMO）耗竭细胞内多胺的方法诱导IEC-6细胞生长抑制模型,实验分4组,即对照组、DFMO组、甘草低剂量组和甘草高剂量组。对照组为正常细胞,其他3组均加入5 mmol/L DFMO,同时甘草低剂量组与甘草高剂量组分别添加40、80μg/mL甘草配方颗粒,均连续培养6天。利用流式细胞术检测各组细胞数量及存活率,Western blot检测p53蛋白水平,荧光定量RT-PCR检测p53 mRNA水平及mRNA稳定性。结果与对照组比较,第4天DFMO组IEC-6细胞生长明显受到抑制（P〈0.05）;第6天甘草低剂量组及甘草高剂量组细胞数量较DFMO组明显增加（P〈0.05）,且2个剂量的甘草组间具有量效依赖性。处理IEC-6细胞6天后,DFMO组p53蛋白及mRNA表达水平较对照组显著升高（P〈0.05）;与DFMO组比较,2个剂量的甘草组能够明显下调p53蛋白及mRNA的表达水平（P〈0.05）。对照组细胞的p53 mRNA降解最快,DFMO组细胞的降解速度最慢。结论甘草通过下调p53 mRNA的稳定性来降低p53表达,从而促进小肠隐窝干细胞的增殖,可能是甘草的肠黏膜保护和修复作用的机制之一。     

Assessment of a bioactive compound for its potential antiinflammatory property by tight junction permeability

Lactobacillus probiotic strains are proving to be abundant sources of bioactive components, including antiinflammatory components. Lifree was made of fruits fermented by Lactobacillus paracasei, Lactobacillus reuterrii and Saccharomyces cerevisiae. This study was designed to test these compounds in cell assays measuring epithelial barrier function and proliferation in the first instance. Cell proliferation was measured in mouse fibroblasts cells (3T3NIH) and rat intestinal epithelial cells (IEC-6), and tight junction activity in the kidney epithelial cell line (MDCK). Tight junction permeability was assessed by measuring transepithelial electrical resistance (TER) across confluent monolayers, following the addition of Lifree with or without a challenge with EGTA. Lifree promoted tight junction formation and recovery following loss of TER from challenge with EGTA. On the other hand, Lifree did not stimulate cell growth in either 3T3NIH and IEC-6 cells. Lifree stimulates tight junction maintenance and formation, suggesting it may have potential antiinflammatory properties.     

商陆正丁醇部位醋制前后肠道毒性变化研究

为探索商陆毒性部位炮制前后对肠道毒性变化的影响,提取分离获得了商陆正丁醇毒性部位,在整体动物模型水平,灌胃给药后观察小鼠肠道肿胀程度,测定小鼠肠道不同部位的含水量及粪便的含水量,考察商陆正丁醇部位炮制前后对腹泻及肠道肿胀的影响;在细胞水平,采用MTT法,测定肠细胞HT-29,IEC-6的IC50,比较醋制前后商陆正丁醇部位的毒性变化。结果显示商陆正丁醇部位能够导致肠道肿胀,表现为引起十二指肠、空肠的水肿,且可导致粪便含水量增加引起腹泻,可抑制肠细胞HT-29,IEC-6增殖,表明其具有肠细胞毒性,对HT-29细胞的IC5014.59 mg·L-1,IEC-6 IC5043.77 mg·L-1;经醋制,小鼠肠道肿胀程度显著减弱,肠道和粪便的含水量明显降低,对HT-29和IEC-6的抑制作用减轻,对HT-29细胞的IC5058.51 mg·L-1,IEC-6 IC5084.37 mg·L-1。由此可知,醋制法具有降低商陆正丁醇部位的毒性作用。