靛玉红甲肟对奈达铂抗人食管癌EC-1细胞的化疗增效作用

 目的 探讨靛玉红甲肟(Indirubin-3′-monoxime,IRO)与奈达铂联合应用对人食管癌细胞株EC-1的影响及其作用机制。方法 经不同浓度的IRO和(或)奈达铂处理EC-1细胞后,用MTT法测定细胞增殖抑制效应;流式细胞术观察细胞周期变化;免疫组织化学法观察凋亡相关基因表达变化。结果与IRO或奈达铂单药作用相比,IRO与奈达铂联合应用可显著增强人食管癌细胞增殖抑制作用,联合用药后细胞周期分布发生改变,G₀/G₁期细胞比例下降,G₂/M期细胞比例上升,癌细胞Bcl-2基因表达下降,Bax表达增强。结论 IRO与奈达铂联合应用具有协同抗食管癌作用,其机制可能与细胞周期调控及凋亡相关基因表达调控有关。     

靛玉红甲肟对HT-29细胞增殖和凋亡的影响及机制

背景与目的:近年来有报道称靛玉红甲肟(indirubin-3'-monoxime)在体内外实验中对部分实体肿瘤细胞具有明显的抑制作用,但尚未见其对人结肠癌HT-29细胞影响的研究报道,因而本文旨在研究其对HT-29细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法:MTT法检测不同浓度靛玉红甲肟处理HT-29细胞后细胞的增殖活性,制作生长抑制曲线.流式细胞仪检测凋亡率,RT-PCR检测细胞凋亡抑制基因survivin和bcl-2及凋亡促进基因Bax mRNA的变化.结果:靛玉红甲肟明显的抑制HT-29的增殖,其作用表现为剂量依赖性和时间依赖性(F=11.25,P<0.01).流式细胞仪检测发现:以10 μ mol/L的靛玉红甲肟处理HT-29细胞后,其凋亡率呈时间依赖性上升(F=195.25,P<0.01).RT-PCR检测发现HT-29细胞survivin(F=78.75,P<0.01)和Box(F=87.61,P<0.01)转录上升,而bcl-2转录显著下降(F=95.82,P<0.01).结论:靛玉红甲肟对人结肠癌HT-29细胞具有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,其作用机制与下调bcl-2/Bax比例有关.     

靛玉红甲肟对HT-29细胞STAT3和Bcl-2/Bax表达的影响

目的检测靛玉红甲肟（Indirubin-3’-monoxime,IRO）作用前后人结肠癌HT-29细胞转录活化因子3（STAT3）和凋亡调节基因Bcl-2/Bax表达变化,探讨IRO抑制HT-29细胞增殖的机制。方法MTT法检测不同浓度、不同作用时间IRO对HT-29细胞增殖活性的影响。RT-PCR法检测10μmol/L的IRO作用不同时间对HT-29细胞STAT3、Bcl-2和BaxmRNA表达的影响。结果IRO对HT-29细胞生长具有明显的增殖抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性（P〈0.01）。RT-PCR检测发现,以10μmol/L的IRO处理HT-29细胞后,STAT3和Bcl-2表达显著下降,而Bax表达上升,不同时间组间差异有统计学意义（P〈0.01）。结论IRO具有抑制人结肠癌HT-29细胞增殖的作用,其机制与下调STAT3、Bcl-2表达和升高Bax表达有关。     

钠氢交换蛋白1基因在体外对食管癌KYSE-70细胞增殖和侵袭作用的影响

目的:观察钠氢交换蛋白1(Na+/H-exchanger 1,NHE-1)基因对食管癌KYSE-70细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测NHE-1 mRNA及其蛋白在人食管癌EC-9706、KYSE-450、EC-1和KYSE-70细胞中的表达情况.将化学合成的靶向NHE-1的小干扰RNA (small interference RNA,si RNA)体外转染入KYSE-70细胞,实时荧光定量-PCR和蛋白质印迹法检测转染24、48和72 h后KYSE-70细胞中NHE-1 mRNA及其蛋白的表达,MTT和Boyden小室法检测KYSE-70细胞的增殖及侵袭能力.结果:NHE-1 mRNA及其蛋白在KYSE-70细胞中高表达.与阴性对照(转染阴性对照siRNA)及空白对照(未转染的KYSE-70细胞)组相比,靶向NHE-1的siRNA可抑制KYSE-70细胞中NHE-1 mRNA及其蛋白的表达,差异具有统计学意义(P＜0.05);与阴性对照组、空白对照组及NHE-1 siRNA转染24 h组比较,NHE-1 siRNA转染48和72 h后的KYSE-70细胞体外增殖能力和侵袭能力明显受到抑制,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:干扰NHE-1基因的表达可以抑制食管癌KYSE-70细胞的体外增殖和侵袭能力,NHE-1基因有望成为食管癌基因治疗的重要靶点.     

微小 RNA-143抑制食管癌细胞株 ECA109的增殖、迁移和侵袭

目的：研究微小 RNA-143（miR-143）在食管癌细胞株 ECA109中的作用。方法 ECA109细胞分为转染阴性对照组、miR-143模拟剂组和 miR-143抑制剂组,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测各组细胞的增殖;Annexin V-FITC ／PI 凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡;Transwell 实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力;实时荧光定量 PCR 和 Western blotting 分别检测 K-ras mRNA 及蛋白表达水平。结果转染3 d和4 d 后,与阴性对照组相比（吸光度值分别为0．90±0．02和1．09±0．07）,miR-143模拟剂组 ECA109细胞增殖受抑制（吸光度值分别为0．66±0．05和0．80±0．04）,而 miR-143抑制剂组细胞增殖增加（吸光度值分别为1．13±0．09和1．51±0．08）,各组之间差异有统计学意义（F ＝49．16,P ＝0．000;F ＝100．34,P ＝0．000）。阴性对照组、miR-143模拟剂和抑制剂组的早期凋亡率分别为3．42％±0．72％、11．63％±1．15％和0．94％±0．10％,各组之间差异有统计学意义（F ＝151．61,P ＝0．000）。与阴性对照组相比（迁移细胞数336±13,侵袭细胞数147±16）,miR-143模拟剂组的细胞迁移（148±16）和侵袭（75±10）能力降低,而 miR-143抑制剂组的细胞迁移（510±14）和侵袭（238±16）能力增加,各组之间差异有统计学意义（F ＝470．99,P ＝0．000;F ＝90．04,P ＝0．000）。相对于阴性对照组（1．00±0．00）, miR-143模拟剂抑制 ECA109细胞中 K-ras mRNA（0．22±0．08）及蛋白（0．46±0．08）表达,而 miR-143抑制剂上调 K-ras mRNA（1．55±0．12）及蛋白（1．33±0．05）表达,各组之间差异有统计意义（F ＝131．36,P ＝0．000;F ＝88．17,P ＝0．000）。结论 miR-143在食管癌细胞株 ECA109中发挥抑癌基因作用,下调 K-ras 蛋白表达可能是其发挥抑癌作用的机制之一。     

过表达Numb基因对人膀胱癌5637细胞周期和增殖的影响

目的：：探讨 Numb 基因对人膀胱癌细胞周期和增殖能力的影响及相关机制。方法：选取人膀胱癌细胞5637为研究对象,采用 Numb-ORF 表达质粒转染细胞为实验组,设置阴性对照和空白对照组。采用荧光定量聚合酶链式反应和蛋白质印迹技术检测各组中 Numb 基因和细胞周期蛋白 D1（Cyclin D1）的表达;采用流式细胞技术检测各组的细胞周期;采用酶标仪检测细胞在490nm 的吸光度值,评价各组细胞的增殖活力。结果：实验组 Numb的△CT 值为1.58±0.41,阴性对照组为5.66±0.53,空白对照组为5.81±0.47,差异有统计学意义（F ＝77.39, P ＝0.00）;实验组 Cyclin D1的△CT 值为4.92±0.73,阴性对照组为2.59±0.33,空白对照组为2.45±0.26,差异有统计学意义（F ＝11.70,P ＝0.01）。实验组中 G0／G1期细胞的比例（％）为49.76±7.07,明显高于阴性对照组的36.52±3.32和空白对照组的38.21±2.06,差异有统计学意义（F ＝7.17,P ＝0.03）。增殖实验中,实验组24 h 的吸光度值为0.35±0.08,明显低于阴性对照组0.52±0.06和空白对照组0.55±0.04（F ＝9.03,P ＝0.02）。结论：Numb 基因可以提高 G0／G1期细胞比例,抑制膀胱癌细胞增殖,其机制可能是通过抑制 Cyclin D1表达实现。     

慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及机制

目的：研究慢病毒介导的TPX2基因沉默对人宫颈癌HeLa细胞系增殖、迁移和细胞周期的影响及其机制。方法：构建4种靶向TPX2基因的慢病毒表达载体（LV-TPX2-shRNA-1/2/3/4）,同时构建阴性对照质粒,将5种质粒分别转染到293T细胞中制备慢病毒。慢病毒感染宫颈癌HeLa细胞后,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测TPX2 mRNA和蛋白的沉默效果。选择沉默效果最佳的重组慢病毒进行后续功能实验。分别采用CCK-8法、Transwell迁移实验及流式细胞术检测各组细胞的增殖、迁移及细胞周期分布情况。Western blot检测TPX2-shRNA转染前后Ki-67、cyclin B2、Aurora-A及P53的表达。结果：与对照组比较,构建的靶向TPX2基因的RNA干扰慢病毒载体均可持续稳定的抑制HeLa细胞TPX2基因的表达,尤其以LV-TPX2-shRNA-1最为明显（P < 0.01）,故选择LV-TPX2-shRNA-1进行后续实验。与对照组比较,沉默TPX2基因的表达能降低HeLa细胞增殖及迁移能力（P < 0.05）,使G2及S期细胞比例明显增加（P < 0.05）,且上调P53蛋白的表达水平,下调Ki-67、cyclin B2及Aurora-A蛋白的表达水平（P均 < 0.05）。结论：沉默TPX2基因蛋白表达能抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力,可能与其改变细胞周期分布及下调Ki-67、cyclin B2、Aurora-A蛋白表达水平,上调P53蛋白表达水平有关。     

IL-1受体拮抗物基因克隆对 人食管癌细胞株生长的影响

目的：构建白细胞介素1受体拮抗物（interleukin 1- reptor antagonist,IL-1RA)基因的真核表达载体,并转 染人食管癌细胞株,以探讨IL－1RA与食管癌发生的关系。方法：利用PCR方法从正常食管组织cDNA中扩增IL－1RA,将IL－1RA重组到真核表达载体pcDNA3.1中,构建IL－1RA的真核表达载体pcDNA3.1-IL-1RA。然后将重组子导入人食管癌细胞株EC9706中,用RT－PCR及 Southern杂交的方法,筛选鉴定转染细胞,获得阳性克隆。并采用细胞计数法和流式细胞术（FCM）分析IL－1RA对EC9706细胞生长的影响。结果：RT－PCR及Southern杂交结果显示转染后的细胞克隆均呈现IL－1RA 细胞由于IL－1RA的表达,细胞增殖速度有不同程度的下降;FCM结果显示IL-1RA炒能诱导EC9706细胞的凋亡,对细胞生开的影响亦呈现不一致性。结论： 提示IL－1RA对食管癌的发生可能只起辅助作用。     

甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的:研究甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:采用MTT法检测甲异靛对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制;流式细胞仪测定细胞凋亡率;光学显微镜观察细胞形态的变化;westernblot法测定caspase-3、PARP及bcl-2表达。结果:甲异靛能明显抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖。甲异靛诱导MCF-7细胞凋亡,呈现典型细胞凋亡的形态变化,并呈时间和剂量依赖性,凋亡率最高可达(68.40±4.87)%,在细胞凋亡过程中出现PARP分子断裂和bcl-2下调,未检测到caspase-3。结论:甲异靛能诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡抑制细胞增殖,其发生机制可能与下调bcl-2有关。     

甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的：研究甲异靛对人乳腺癌MCF-7细胞增殖抑制和诱导凋亡作用。方法：采用MTT法检测甲异靛对MCF-7乳腺癌细胞的增殖抑制;流式细胞仪测定细胞凋亡率;光学显微镜观察细胞形态的变化;westernblot法测定caspase-3、PARP及bcl-2表达。结果：甲异靛能明显抑制MCF-7乳腺癌细胞增殖。甲异靛诱导MCF-7细胞凋亡,呈现典型细胞凋亡的形态变化,并呈时间和剂量依赖性,凋亡率最高可达（68.40±4.87）%,在细胞凋亡过程中出现PARP分子断裂和bcl-2下调,未检测到caspase-3。结论：甲异靛能诱导MCF-7乳腺癌细胞凋亡抑制细胞增殖,其发生机制可能与下调bcl-2有关。     

MT-3和MT-1E基因转染对食管癌细胞株增殖、细胞周期及凋亡的影响

背景与目的:金属硫蛋白(metallothionein,MT)-3具有细胞生长抑制活性,是目前已知唯一的具有独特生理功能的MT亚型.MT-1E是MT-1的1个亚型,有文献报道MT-1蛋白的表达量与食管癌的恶性程度呈正相关.本研究拟探讨MT-3和MT-lE基因转染对食管癌细胞株增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法:采用阳离子脂质体法,将己构建好的MT-3,MT-1E及其空载体4种质粒转染食管癌Eca-109和TE13细胞株:荧光显微镜判断转染效率,RT-PCR检测目的基因的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡.结果:转染MT-3和MT-lE基因的食管癌细胞株均有外源目的基因相应mRNA的高表达.转染MT-3基因的Eca-109和TE13细胞株,其增殖能力受到明显抑制(P<0.05),Go/G,期细胞比例明显升高(PO.05).结论:上调MT-3基因表达能抑制食管癌细胞增殖,促进其凋亡,这可能是通过阻滞肿瘤细胞的生长周期来实现的.而MT-1 E基因可能在食管癌细胞的增殖过程中作用不明显.     

Effects of ketoconazole on the proliferation and cell cycle of human cancer cell lines.

The growth-inhibitory effects of ketoconazole, an antifungal agent which inhibits arachidonic acid lipoxygenases and cytochrome P-450 enzymes, were tested in human colon and breast cancer cell lines. In the serum independent HT29-S-B6 colon cell clone, ketoconazole reduced cell proliferation and [3H]thymidine incorporation in a dose-dependent fashion, with a 50% inhibitory concentration of approximately 2.5 microM. Flow cytometry showed an accumulation of cells in the G0-G1 phase of the cell cycle and a concomitant decrease of the percentage of cells in S phase. Ketoconazole also inhibited [3H]thymidine incorporation in the hormone-independent breast cancer cells MDA-MB-231 and Evsa-T, with respective 50% inhibitory concentration of approximately 13 and 2 microM. The mechanism of action of ketoconazole is unknown. However, another lipoxygenase inhibitor, BW755C, inhibited only weakly [3H]-thymidine incorporation and accumulated the cells in S and G2. Conversely, clotrimazole and SKF525A, inhibitors of cytochrome P-450 enzymes, had effects similar to those of ketoconazole on HT29-S-B6 cells whereas metronidazole and secnidazole, other azole derivatives which do not inhibit cytochrome P-450 enzymes, had no effect. The results suggest that cytochrome P-450 enzyme(s) activity(ies) could be implicated in the antiproliferative effects of ketoconazole.     

Effects of SMYD3 over-expression on cell cycle acceleration and cell proliferation in MDA-MB-231 human breast cancer cells

Purpose The prognostic significance of epidermal growth factor receptor (EGFR) and cyclooxygenase-2 (COX-2) expression remains unestablished, although EGFR and COX-2 are frequently overexpressed in non-small cell lung cancer (NSCLC). Considering the importance of EGFR activation after ligand binding, however, the expression of phosphorylated EGFR (p-EGFR) may have more significance in predicting tumor aggressiveness in NSCLC than either EGFR or COX-2 expression. Patients and methods We studied the relationships between p-EGFR, EGFR, and COX-2 overexpression and examined their association with prognosis in localized NSCLC. The expression of p-EGFR, EGFR, and COX-2 was studied by immunohistochemistry in 77 surgically-resected stage I/II NSCLC cases. EGFR mutational status was determined by sequencing exons 18–21. Correlation of expression with clinical outcome and other biomarkers, including Ki-67 and microvessel density (MVD), was also examined. Results Out of the 77 patients, EGFR overexpression was observed in 37 (48.1%), p-EGFR expression was found in 22 (28.6%), and COX-2 overexpression was seen in 45 (58.4%). Expression of p-EGFR was associated with COX-2 overexpression (P = 0.047), but not EGFR overexpression or high Ki-67 (P = 0.087 and P = 0.092, respectively). COX-2 overexpression was significantly associated with high Ki-67 (P = 0.011). Expression of p-EGFR correlated with lower disease-free survival (P = 0.045), but not overall survival. Neither EGFR nor COX-2 overexpression was associated with prognosis. Conclusion p-EGFR appears to be a better indicator for lower disease-free survival than EGFR overexpression itself in localized NSCLC. Pathways other than EGFR activation may influence COX-2 overexpression.     

紫草素对人食管癌TE-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及其可能的机制

目的：观察紫草素对人食管癌TE-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,并探究其作用机制。方法：采用不同浓度的 紫草素（0、 1、 5、 10 μmol/L）处理TE-1细胞,MTT法检测24、 48、 72 h后各组细胞增殖水平;紫草素处理各组TE-1细胞48 h后,采用 Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡状况,流式细胞术检测细胞的凋亡水平及周期变化,Western blotting检测TRAP1/Akt/ mTOR信号通路相关蛋白表达变化。结果：紫草素呈时间和浓度依赖性抑制TE-1细胞增殖（P<0.05或P<0.01）;与对照组相比, 紫草素能显著促进TE-1细胞凋亡（P<0.01）, 使TE-1细胞周期发生G0/G1期阻滞（P<0.05或P<0.01）,同时降低TRAP1、p-Akt以及 p-mTOR表达水平（P<0.05或P<0.01）,以上作用具有剂量依赖性。结论：紫草素能显著抑制TE-1细胞的增殖,诱导细胞发生G0/ G1期阻滞并促进其凋亡,这可能与其抑制TRAP1/Akt/mTOR信号通路有关。     

Effects of HMGB1 expression suppressed by siRNA on cell cycle and proliferation of human cervical cancer cell line HeLa

Objective  

In this study, RNA interference was used to evaluate the effects of HMGB1 expression on cell cycle and proliferation of the human cervical cancer cell line HeLa.