耐亚胺培南铜绿假单胞菌临床分离株金属酶检测的研究

目的了解云南省安宁地区临床分离的铜绿假单胞菌(PA)亚胺培南耐药株产金属酶β-内酰胺酶的情况。方法以头胞他啶、亚胺培南,美洛培南为底物,以地酸二钠(EDTA-Na2)为酶抑制剂,应用复合纸片法检测159株临床分离的PA亚胺培南耐药株β-金属内酰胺酶。结果 159株受试菌株中有35株复合纸片试验阳性,表示受试菌株产金属β-内酰胺酶。结论产金属酶是PA对碳青酶烯类抗菌药物耐药的机制之一;实验室重视对金属酶的检测可帮助临床合理选用抗菌药物并减少细菌耐药性的传播。     

临床分离产金属酶铜绿假单胞菌的耐药生分析

目的 研究临床分离耐亚胺培南(IPM)铜绿假单胞菌的产金属酶的检测方法及耐药特征.方法 收集我院临床分离的40株耐IPM铜绿假单胞菌作为研究对象,采用EDTA纸片复合法、E-test法和PCR法分别检测产金属酶菌株,用微量肉汤稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC).结果 40株耐IPM铜绿假单胞菌EDTA纸片复合法筛选9株产金属酶菌株;E-test法筛选6株产金属酶菌株;PCR法仅检测到1株bhIMP-1和3株bhVIM-2耐药基因.产金属酶菌株呈多重耐药,对头孢他啶、亚胺培南大多数表现为高水平耐药;阿米卡星抗菌活性最好,其次为环丙沙星.结论 目前从临床分离的产金属酶铜绿假单胞菌多重耐药现象严重.     

临床分离产金属酶铜绿假单胞菌的耐药性分析

目的研究临床分离耐亚胺培南(IPM)铜绿假单胞菌的产金属酶的检测方法及耐药特征。方法收集我院临床分离的40株耐IPM铜绿假单胞菌作为研究对象,采用EDTA纸片复合法、E-test法和PCR法分别检测产金属酶菌株,用微量肉汤稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC)。结果 40株耐IPM铜绿假单胞菌EDTA纸片复合法筛选9株产金属酶菌株;E-test法筛选6株产金属酶菌株;PCR法仅检测到1株blaIMP-1和3株blaVIM-2耐药基因。产金属酶菌株呈多重耐药,对头孢他啶、亚胺培南大多数表现为高水平耐药;阿米卡星抗菌活性最好,其次为环丙沙星。结论目前从临床分离的产金属酶铜绿假单胞菌多重耐药现象严重。     

下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制探讨

目的探讨下呼吸道感染铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制。方法取下呼吸道标本临床分离的铜绿假单胞菌80株,经纸片扩散法（K-B法）检测耐药性。采用双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶,采用标准纸片扩散法检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,采用酶提取物三维试验法检测头胞菌素酶（AmpC酶）,采用氰氯苯腙对主动外排泵出表型特征的影响检测细胞内主动外排泵出机制。结果80株临床分离菌株中48株对亚胺培南耐药,32株对亚胺培南敏感。48株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中检出产β-金属酶6株,检出率12.5%;检出产ESBLs11株,AmpC酶8株,其中同时产AmpC酶和ESBLs共4株,检出率分别为22.9%、16.7%和8.3%;检出9株（18.8%）菌株存在细胞内主动外排泵出的耐药机制。结论产生金属β-内酰胺酶、ESBLs和AmpC酶以及存在细胞内主动外排泵出机制是我院下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌对亚胺培南抗生素耐药的主要原因。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌及其产金属酶的相关基因blaVIM-2研究

目的了解临床分离耐亚胺培南铜绿假单胞菌(Imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,IPMRPa)及其耐药特征,探讨该菌产金属酶和相关基因blaVIM-2对抗菌药物耐药性的影响。方法收集3年临床分离铜绿假单胞菌,采用MIC法测定抗生素耐药性;用复合纸片法筛查IPMRPa产金属β-内酰胺酶的菌株;聚合酶链反应(PCR)法对金属酶相关基因(blaVIM-2)检测并测序确定。结果 1426株铜绿假单胞菌中IPMRPa为910株(63.8%),均为多重耐药;非IPMRPa的516株(36.2%)中仅有71株多重耐药,两者的多重耐药率比较有显著性差异(P<0.05)。在IPMRPa与非IPMRPa的耐药性比较中发现:除四环素外的其他测试抗生素耐药率均有显著差异(P<0.05)。910株IPMRPa中经复合纸片法检出产金属β-内酰胺酶168株,占18.6%(168/910);168株采用PCR扩增出135株(80.4%,135/168)携带有blaVIM-2型基因,扩增产物经序列分析均为VIM-2型。结论 IPMRPa多重耐药现象严重,VIM-2型金属酶基因型在产金属β-内酰胺酶的IPMRPa菌株中检出率高,但该基因并不是产金属酶的铜绿假单胞菌对本研究中12种测试抗菌药物耐药的主要原因。     

院内感染嗜麦芽寡养单胞菌耐药性分析

目的 测定26株临床分离院内感染嗜麦芽寡养单胞菌对常用抗菌药物的耐药性，探索产β-内酰胺酶菌株对亚胺培南的耐药机制。方法 采用琼脂二倍稀释法测定19种抗菌药物对26株临床分离的院内感染嗜麦芽寡养单胞菌的体外抗菌活性，并比较产酶株与非产酶株对抗菌药物的敏感性；测定产酶株所产肛内酰胺酶对亚胺培南的稳定性和丝氨酸β-内酰胺酶、金属β-内酰胺酶抑制剂的抑酶保护效应。结果 新型氟喹诺酮类药物司帕沙星、左氧氟沙星、加替沙星和多西环素对26株嗜麦芽寡养单胞菌有较强抗菌活性。抑菌率分别为96．2％、96．2％、92．3％、84．6％，SMZ／TMP和替卡西林／克拉维酸抑菌率分别为65．4％和50％，亚胺培南、头孢他啶、头孢哌酮和氨曲南的敏感性较差，耐药率在80％以上；产酶株与非产酶株药敏结果比较，产酶株对含酶抑制剂β-内酰胺类抗生素的敏感性较非产酶株高，而对其它抗菌药物的敏感性变化不大。酶稳定性试验显示，有4株产酶菌产碳青霉烯水解酶，酶抑制试验表明，克拉维酸对这4株菌所产酶无抑酶保护效应，而金属β-内酰胺酶抑制剂EDTA对4株菌所产酶有抑制作用，且酶活性能被ZnCl2复活。结论 新型氟喹诺酮类药物对嗜麦芽寡养单胞菌院内感染株有较强的抗菌活性；4株产酶菌所产碳青霉烯水解酶可能为金属β-内酰胺酶。     

62株奇异变形杆菌的耐药性分析

目的检测从临床标本中分离的62株奇异变形杆菌对23种抗菌药物的体外活性以及这些杆菌产生超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶、金属争内酰胺酶的情况,正确指导临床合理使用抗生素。方法用API-20E对菌株进行鉴定,双纸片协同试验和确证试验筛选超广谱β-内酰胺酶,纸片扩散法检测AmpC酶,改良Hodge试验检测金属β-内酰胺酶,药敏试验采用标准的纸片扩散法。结果奇异变形杆菌的产酶率为25．8％（16／62）,其中超广谱β-内酰胺酶为16．1％（10／62）,AmpC酶为9．7％（6／62）、金属β-内酰胺酶为0（0／62）。头孢曲松钠、头孢他啶、头孢匹罗、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、头孢噻肟钠、丁胺卡那霉素和左氧氟沙星的敏感率大于80％。结论产β-内酰胺酶的奇异变形杆菌在临床中占较大的比例,实验室需加强检测。三代头孢菌素、四代头孢菌素、氨曲南、亚胺培南、丁胺卡那霉素和左氧氟沙星是治疗奇异变形杆菌感染的首选药物。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性分析及机制探讨

目的:研究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及其机制。方法:取痰液中培养分离的铜绿假单胞菌55株,经K-B法检测耐药性。采用外膜蛋白图谱,对其外膜蛋白OprD2进行SDS-PAGE分析,双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶。结果:根据耐药性分为铜绿假单胞菌亚胺培南菌耐药36株和敏感19株。铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株不同程度OprD2减少,耐药组OprD2相对含量明显低于敏感组(P<0.01);产金属β-内酰胺酶6株,检出率10.9%。结论:OprD2的减少和产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。     

下呼吸道标本铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制探讨

目的探讨下呼吸道标本铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及机制探讨。方法选择下呼吸道标本中培养分离的铜绿假单胞菌75株,从金属β-内酰胺酶,超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头胞菌素酶（AmpC酶）的产生状况方面来检测其耐药机制。结果 41株对亚胺培南耐药,34株对亚胺培南敏感。耐亚胺培南铜绿假单胞菌中检出产金属β-内酰胺酯酶6株（14.6%）;检出产ESBLs10株（24.4%）,产AmpC酶6株（14.6%）,其中同时产AmpC酶和ESBLs共3株（7.3%）。结论产生金属β-内酰胺酶、ESBLs和AmpC酶是下呼吸道感染患者铜绿假单胞菌对亚胺培能抗生素耐药的主要原因。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因的研究

目的:研究耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IMPRPa)β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因的存在情况。方法:对60株临床分离的IMPRPa,采用聚合酶链(PCR)方法检测β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因IMP、VIM、OprD2,并对部分IMP、VIM基因的PCR扩增产物进行序列分析。结果:60株受试菌中,β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因检测阳性为:IMP7株,VIM18株,有3株菌同时携带IMP、VIM基因,IMP、VIM基因序列分析为IMP-1型和VIM-2型,OprD2基因缺失29株。结论:OprD2蛋白通道缺失和产金属β-内酰胺酶是IMPRPa耐亚胺培南的主要机制。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌金属β-内酰胺酶类型的研究

目的了解耐亚胺培南铜绿假单胞菌对其它抗菌药物的耐药性及其产金属β-内酰胺酶的类型。方法收集同济医院2004年1月-9月耐亚胺培南铜绿假单胞菌29株，琼脂稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）；通过改良Hodge试验、双纸片协同试验（DDST）、聚合酶链反应（PCR）、序列分析等方法分析金属β-内酰胺酶类型，紫外分光光度法测定金属β-内酰胺酶的活性。结果29株细菌均为多重耐药株。11种常用抗菌药物中，仅对哌拉西林／三唑巴坦和阿米卡星敏感率较高，分别为69．7％和60．6％。29株菌中有2株产VIM-2金属β内酰胺酶（6．9％）。结论本院耐亚胺培南铜绿假单胞菌流行主要为医院感染所致，且里多重耐药，有2株发现产VIM-2型金属β-内酰胺酶．     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌耐药分析

目的:探讨大肠埃希菌(ECO)及肺炎克雷伯菌(KPN)产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的分布情况及其药敏特点,指导临床用药.方法:用K-B法及纸片确证实验对347株ECO及KPN产ESBLs菌株进行检测和分析.结果:347株菌中检测出83株产ESBLs菌株,总检出率22.6％,产ESBLs菌株对大部分抗菌药物耐药,而对亚胺培南100％敏感.结论:产ESBLs菌株是临床常见致病菌,亚胺培南是治疗产ESBLs菌株感染的首选药物.     

我院2010年大肠埃希菌耐药性监测与分析

目的了解我院临床大肠埃希菌的耐药性及产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况。方法应用Microscan Autoscan-4微生物分析仪进行细菌鉴定及药敏试验,并用纸片扩散法表型确证试验检测ESBLs。结果大肠埃希菌检出率居第1位(占37.47%),其中产ESBLs检出率为62.95%,对亚胺培南的耐药率为0;产酶菌株对抗菌药物的耐药率明显高于不产酶菌株。结论大肠埃希菌产ESBLs株与非产ESBLs株对抗菌药物的耐药率有显著差异,临床医师应根据药敏结果合理选择抗菌药物。     

耐亚胺培南的肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的表达情况

目的 检测临床分离的耐亚胺培南肺炎克雷伯菌临床分布、耐药情况及碳青霉烯酶的表达情况,为临床合理使用抗生素提供依据。方法 收集徐州3家三级医院微生物室培养出的非重复肺炎克雷伯菌,并根据药敏结果筛选对亚胺培南耐药的菌株,对耐药菌株采用改良Hodge实验检测碳青霉烯酶、IPM/EDTA组合纸片法检测金属酶表现型,采用PCR实验检测耐药菌株中blaKPC-2,blaCTX-M-15,blaVIM-1,blaIMP-4,blaNDM-1和blaOXA-48的表达情况。结果 共收集107株非重复肺炎克雷伯菌,其中26株耐亚胺培南,耐亚胺培南菌株均为多重耐药菌株,对常见抗菌药物均为耐药;表现型结果26株耐亚胺培南菌株有23株改良Hodge实验阳性,阳性率为88.5%;6株组合纸片法阳性,阳性率为23.1%;PCR扩增具有碳青霉烯酶活性的相关基因：26株均检测到KPC-2酶基因,25株检测到CTX-M-15酶基因,8株检测到IMP-4酶基因,1株检测到NDM-1酶基因,1株检测到VIM-1酶基因,暂未扩增出OXA-48酶基因。结论 本地区肺炎克雷伯菌耐亚胺培南形势严峻,产生β-内酰胺酶为其主要的耐药机制,KPC-2、CTX-M-15产生率较高,占主导地位,已经存在产NDM-1菌株,相关部门应注意预防其流行和传播。     

耐亚胺培南铜绿假单胞茵的耐药机制研究

目的 对临床分离的14株耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药机制进行研究.方法药敏试验检测对15种常用抗菌药物的耐药情况;协同试验筛选产金属酶菌株和聚合酶链反应检测金属酶基因及oprD基因;氰氯苯腙检测主动外排情况及其对亚胺培南最低抑菌浓度(MIC)的影响.结果耐亚胺培南的铜绿假单胞菌对其它常用抗菌药物耐药率也很高,其中,5株产VIM-2型金属酶,11株oprD基因检测阴性.2株在有氰氯苯腙存在时对亚胺培南的MIC降低至原值的1/4,表明这2株有主动外排系统参与对亚胺培南的耐药.结论 OprD2蛋白表达缺失是本研究中铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因,其次为产VIM-2型金属酶和主动外排系统,且至少有4株存在两种以上耐亚胺培南的机制.     

大肠埃希菌ESBLs、AmpC酶的检测及耐药特性

目的 分析大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、头孢菌素（AmpC）酶的情况及耐药特性,指导临床合理用药.方法 收集2011年1月至2012年6月我院临床分离的大肠埃希菌287株.用双纸片确诊法检测ESBLs,三维试验检测AmpC酶,KB法进行药敏试验.结果 287株大肠埃希菌中,产ESBLs 119株（41.5％）,产AmpC酶47株（16.4％）,同时检出产ESBLs和AmpC酶16株（5.6％）.单一产ESBLs或AmpC酶的菌株有较高的耐药性,同时检出ESBLs和AmpC酶的菌株对多种抗菌药耐药,所有菌株对亚胺培南均敏感.结论 大肠埃希菌ESBLs和AmpC酶的分离率及耐药率都较高,同时检出ESBLs和AmpC酶的菌株具多重耐药性;亚胺培南具有良好的抗菌活性.临床应加强ESBLs和AmpC酶的检测及耐药监测,采取有效措施防止耐药菌株产生.     

儿童感染产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞茵耐药分析

目的：了解我院患儿感染产金属p内酰胺酶铜绿假单胞菌的情况并分析其耐药性。方法：标本纯培养后采用法国梅里埃公司的VITEK-2细菌鉴定系统鉴定到种，协同法检测铜绿假单胞菌产生金属8内酰胺酶的发生率，KB法测定铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性。结果：分离的198株铜绿假单胞菌检出36株产金属β-内酰胺酶，占18．18％（36／198）。产酶株对哌拉西林、头孢他啶、头孢哌酮、左氧氟沙星的耐药率较高（远远高于不产酶菌株），对阿米卡星的耐药率相对较低，对头孢哌酮／舒巴坦、头孢吡肟、环丙沙星部分敏感。结论：产金属β-内酰胺酶是我院患儿感染的铜绿假单胞菌对碳青霉烯孢类抗菌药物耐药的机制之一，实验室重视对金属β-内酰胺酶的检测可帮助临床合理选用抗菌药物并减少细菌耐药性的传播。     

老年患者感染铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性分析及其金属酶表型检测

目的:分析医院老年患者感染铜绿假单胞菌对抗菌药物的耐药性及其对产金属酶表型的检测情况。方法:抽取医院2017年3月—2019年3月间收治的老年住院患者的各类临床标本(采用美国BD凤凰100型细菌鉴定系统分离和鉴定)的细菌鉴定和药敏试验资料,分析其耐亚胺培南的菌株对产金属酶表型检测结果及其耐药性。结果:分离出的215株铜绿假单胞菌中,其对多粘菌素均敏感,而对阿米卡星呈低耐药(耐药率为4.19%);其对环丙沙星与左氧氟沙星的耐药率分别为39.53%和36.74%,以及对亚胺培南、美罗培南的耐药率分别为16.74%和12.56%;另外,36株耐亚胺培南的铜绿假单胞菌,采用组合纸片法筛选出1株产金属酶菌株。结论:针对医院老年患者中铜绿假单胞菌对抗菌药物均有不同程度的耐药,临床医生应遵循抗铜绿假单胞菌的治疗原则,合理选用抗菌药物治疗,同时规范控制高危感染因素;并且加强对铜绿假单胞菌耐药的趋势监测,尤其是碳青霉烯类药物,以便采取有效措施控制铜绿假单胞菌耐药的发展。     

产ESBLs大肠埃希菌77株耐药性分析

目的 探讨郑州地区产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌的耐药状况,以期指导临床用药.方法 收集临床分离的大肠埃希菌77株,采用纸片扩散法(K-B法)进行14种抗菌药物敏感性测定及产ESBLs耐药菌株的初步筛选,再通过双纸片协同试验(DDST)法确认产酶菌株.结果 77株大肠埃希菌对氨苄西林、哌拉西林、萘定酸、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大霉素的耐药率较高,而对阿米卡星、头孢吡肟的耐药率较低.我院临床分离大肠埃希菌产ESBLs率为36.36%,产:ESBLs大肠埃希菌对头孢噻肟、头孢曲松和氨曲南的耐药率明显较非产酶菌株增高,对氨苄西林、萘定酸全部耐药,而碳青霉烯类的亚胺培南敏感率100%.结论 郑州地区产ESBLs大肠埃希菌对临床常用抗生素耐药严重,亚胺培南是治疗产ESBLs菌感染的最有效抗生素.     

产金属β-内酰胺酶嗜麦芽寡养单胞菌的研究

目的 探讨嗜麦芽寡养单胞菌所产金属β-内酰胺酶的酶学特性及分子生物学特征。方法 采用纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株；测定产酶株所产β-内酰胺酶对亚胺培南的稳定性和丝氨酸β-内酰胺酶、金属β-内酰胺酶抑制剂的抑酶保护效应；检测金属β-内酰胺酶的等电点；用PCR法检测金属β-内酰胺酶全基因，并测序。结果 纸片协同法筛选产金属β-内酰胺酶菌株4株，药敏试验显示对多种抗菌药物耐药。酶稳定性试验显示，4株产酶菌产碳青霉烯水解酶。酶抑制试验表明，克拉维酸对这4株菌所产酶无抑酶保护效应，而金属β-内酰胺酶抑制剂EDTA对4株菌所产酶有抑制作用，且酶活性能被ZnCl2复活。等电聚焦显示，2株菌(710、750)产的碳青霉烯水解酶pI为6．6，l株菌(603)的pI为6．2，EDTA抑制试验证实均为金属β-内酰胺酶。PCR结果显示，以4株细菌基因组DNA为模板，用所设计的金属β-内酰胺酶全基因引物进行PCR扩增，2株(750，7lO)扩增结果为阳性，进行序列分析，均为867bp。经GeneBank网上同源性比较．发现与金属酶Ll的编码基因blaS(注册号AJ291672．1)的核苷酸序列同源性均为99％。结论 嗜麦芽寡养单胞菌710和750号产Ll型金属β-内酰胺酶；603号可能产非Ll型金属β-内酰胺酶。