百令提取液对环孢素A导致肾小管损伤的防治作用

目的：从细胞水平观察百令提取液对环他素A(CsA)肾毒性的影响。方法：体外培养肾小管上皮细胞，通过^3H-TdR掺入、MTT比色法、PI染色法和细胞LDH释放等观察百令提取液对CsA引起的肾小管上皮细胞毒性的防治作用。结果：^3H-TdR掺入和MTT比色法显示在一定的剂量范围百令提取液可明显促进培养的肾小管上皮细胞增生，5mg／L以上的CsA抑制细胞增殖；细胞周期的石研究显示15mg／L以上的CsA使小管上皮细胞细胞周期5且滞在G2期；此外，更大剂量的CsA(25mg／L)对细胞有直接的毒性作用，使培养上清LDH值升高。百令提取液能部分逆转CsA引起的细胞增殖受抑和细胞周期阻滞，但足对CsA导致的细胞培养上清LDH的升高没有明显的影响。结论：本研究证实了百令提取液可以促进体外培养的肾小管上皮细胞增生，对CsA的肾小管细胞毒性具有一定的拈抗作用。     

曲尼司特对环孢素A慢性肾毒性大鼠肾间质骨桥蛋白表达及巨噬细胞浸润的影响

目的观察曲尼司特对环孢素A(CsA)慢性肾毒性大鼠肾功能及肾脏病理的影响。方法选取四川大学华西医院于2005年9月至2006年2月给低盐饮食SD大鼠灌胃20mg/(kg.d)剂量的CsA,制作大鼠CsA慢性肾毒性模型,同时喂饲400mg/(kg.d)剂量的曲尼司特。于治疗第1、2、4周末观察肾脏病理变化,并测定骨桥蛋白(OPN)、单核巨噬细胞抗原(ED1)的表达。结果曲尼司特能明显改善慢性CsA肾毒性大鼠的体重下降,减少肾小管上皮细胞空泡变性和细胞坏死及间质炎细胞浸润和间质纤维化,对肌酐清除率(Ccr)下降无明显影响;免疫组化结果显示曲尼司特治疗组大鼠肾小管-间质ED1阳性巨噬细胞数量及OPN表达较模型组显著减少(P<0.05)。结论曲尼司特能减轻CsA慢性肾毒性的肾脏病理损伤,这一防治作用与其减少ED1阳性巨噬细胞浸润及下调OPN表达有关。     

细胞凋亡和细胞自噬在慢性环孢素A肾毒性中的作用

目的探讨细胞凋亡和细胞自噬在慢性环孢素A(CsA)肾毒性中的作用。方法 Sprague-Dawley大鼠分为两组:对照组:皮下注射橄榄油(1 ml·kg-1·d-1)4 w;慢性CsA肾毒性组:皮下注射CsA(15 mg·kg-1·d-1)4 w。检测两组大鼠的体重和肾功能;三色染色检测肾小管间质纤维化程度;ELISA法检测血、尿8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平;原位末端标记法(TUNEL)染色观察细胞凋亡;免疫印迹法检测细胞凋亡调控基因(Bcl-2、Bax、Caspase-3)和细胞自噬体膜型LC3-Ⅱ蛋白的表达;Pearson直线相关分析肾小管间质纤维化程度与细胞凋亡和LC3-Ⅱ蛋白表达的相关关系。结果与对照组相比,毒性组大鼠体重减轻、肾功能低下、血尿8-OHdG水平升高,同时肾毒性组可见明显的肾小管间质纤维化和大量TUNEL阳性细胞。免疫印迹结果表明,毒性组Bax、Caspase-3、LC3-Ⅱ蛋白的表达明显增加,反之,Bcl-2的表达显著减少。直线相关分析提示,肾小管间质纤维化程度与TUNEL阳性细胞数和LC3-Ⅱ蛋白表达呈正向相关。结论细胞凋亡和细胞自噬参与了慢性CsA肾毒性肾小管间质的损伤。     

促红细胞生成素对慢性环孢素A肾毒性细胞凋亡的抑制作用

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对慢性环孢素A(CsA)肾毒性致细胞凋亡的抑制作用及机制。方法 SD大鼠分为四组:对照组:给予橄榄油(1 mg·kg-1·d-1皮下注射);对照组+EPO(100 U/kg,3次/w腹腔注射);CsA毒性组:给予CsA(15 mg·kg-1·d-1皮下注射);CsA+EPO。检测各组大鼠的体重、肾功能、收缩期血压、血色素水平;肾小管间质纤维化和细胞凋亡分别以三色染色和TUNEL染色观察;利用RNA原位杂交和免疫印迹法检测转化生长因子(TGF)β1诱导基因h3(βig-h3)、细胞凋亡相关基因的表达。结果与对照组相比,CsA毒性组体重下降、肾功能低下、贫血,伴有肾小管间质纤维化和大量TUNEL阳性细胞。在分子水平上,CsA肾毒性组βig-h3 mRNA和蛋白的表达增加;凋亡基因Fas和Bax表达上调,而Bcl-2蛋白表达减少。EPO治疗均使上述指标逆转(P<0.05)。直线相关分析显示,肾小管间质纤维化程度与βig-h3蛋白表达(r=0.835,P<0.001)和TUNEL阳性细胞数呈正向相关(r=0.698,P<0.001)。结论在慢性CsA肾毒性中,EPO抑制细胞凋亡具有抗纤维化的肾脏保护作用。     

Suramin对环孢素A诱导的大鼠肾毒性的影响

目的 探讨Suramin对环孢素A（CsA）所致肾毒性的拮抗作用及其相关机制。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为对照组、CsA组、CsA+小剂量Suramin组和CsA+大剂量Suramin组,每组10只。分别给药5周后检测4组大鼠24h尿蛋白、尿α_1-微球蛋白（MG）、β₂-MG和N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶（NAG）、血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、血尿酸（UA）和胱抑素C（Cys C）,并计算内生肌酐清除率（Ccr）。通过Masson三色染色法对大鼠肾脏组织进行染色并计算其肾间质纤维化指数。采用免疫组化法检测4组大鼠转化生长因子（TGF）-β₁、胶原（collagen）-Ⅰ和纤维连接蛋白（fibronectin）在肾组织中的表达并计算上述指标的平均光密度值（AOD）。结果 CsA组大鼠的尿α₁-MG、β_2-MG、NAG、BUN、UA和Cys C水平均明显高于对照组,Ccr水平明显低于对照组（P<0.05）。CsA+小剂量Suramin组和CsA+大剂量Suramin组大鼠的尿α₁-MG、β₂-MG、NAG、BUN、UA和Cys C水平均明显低于CsA组,Ccr水平均明显高于CsA组（P<0.05）。CsA组大鼠肾间质纤维化指数和TGF-β₁、collagen-Ⅰ、fibronectin的AOD值均明显高于对照组,CsA+小剂量Suramin组和CsA+大剂量Suramin组大鼠的上述指标均明显低于CsA组（P<0.05）。结论 Suramin能拮抗CsA诱导的大鼠肾毒性,TGF-β₁表达下调可能参与了Suramin抑制肾间质纤维化的病理生理过程。     

雷公藤多甙对大鼠肾移植急性排异反应治疗作用的观察

利用大鼠肾移植模型,观察雷公藤多甙(GTW)、雷公藤甲素及小剂量环孢霉素A(CsA)对大鼠肾移植急性排异反应的影响。结果证实,应用GTW或CsA后大鼠移植肾肾长明显减少,肾重明显减轻,肾小球基底膜增厚,肾小管空泡变性、坏死及间质水肿明显减轻;利用微机肾组织切片定量分析示移植术后第四、八天,肾小管面积、数量也明量增加,而间质面积明显减少。雷公藤甲素来证实有上述作用.另外,观察应用GTW治疗者,移植术后第九～第11天存活率明显增加.     

百令(冬虫夏草)对糖尿病大鼠转化生长因子β及其受体表达的影响

目的:探讨百令(冬虫夏草)对STZ糖尿病大鼠肾组织转化生长因子β(TGF-β)及其Ⅰ型(TβRI)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)的影响及其可能作用机制。方法:采用STZ腹腔注射法建立糖尿病动物模型。96只3月龄雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组,糖尿病模型对照组,百令提取液低剂量治疗组[5g/(kg.d)]、中剂量治疗组[10g/(kg.d)]和高剂量治疗组[20g/(kg.d)]。第4、8、12周各组处死6只大鼠并收集标本,记录体重、左肾重,检测血糖、血肌酐、24h尿蛋白排泄量,ELISA法检测24h尿TGF-β水平。RT-PCR法、Westernblot法及免疫组化法检测肾组织TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ及纤维连接蛋白(FN)mRNA及蛋白质表达水平。结果:糖尿病模型大鼠血糖及24h尿蛋白排泄量明显增高,肾组织TGF-βmRNA和蛋白质表达以及TβRⅠ、TβRⅡ和FNmRNA表达均在8周时达到高峰值,12周时表现下降;TβRⅠ、TβRⅡ及FN蛋白质表达在12周内表现进行性升高。百令治疗可时间-剂量依赖性降低糖尿病大鼠血肌酐水平,肾重指数下降。百令治疗可下调糖尿病大鼠肾组织TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ及FNmRNA及蛋白质的表达水平。结论:百令可减少TGF-β的产生,下调TβRⅠ、TβRⅡ表达,降低肾内TGF-β系统活性,延缓糖尿病肾病的发展。     

谊肾颗粒对慢性肾功能衰竭大鼠的抗纤维化作用

建立腺嘌呤致慢性肾功能衰竭（CRF）大鼠模型,将60只Wistar大鼠随机分成模型对照组、正常对照组、洛汀新组、谊肾颗粒A组（10g／kg）、谊肾颗粒B组（5g／kg）,灌胃给药,连用6周。测定血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、纤维联接蛋白（FN）、层粘蛋白（LN）和尿蛋白水平,观察病理组织学变化,通过免疫组化法观察FN在肾组织中的表达。结果显示：①模型对照组血SCr、BUN及尿蛋白比正常对照组明显升高,模型成功;谊肾颗粒组血SCr、BUN及尿蛋白较模型对照组明显下降。②与模型对照组比较．谊肾颗粒组血LN降低,FN升高。③与模型对照组比较,谊肾颗粒组肾组织变性坏死及间质纤维化程度减轻,肾小管中的结晶性沉积物明显减少;细胞外基质FN积聚减少,肾小球硬化指数降低。认为谊肾颗粒能减轻肾小管变性坏死和肾小球硬化,通过抗肾脏纤维化作用延缓CRF进展。     

冬虫夏草对肾小球硬化大鼠肾脏组织抑制因子-1,2 mRNA表达的影响

肾小球硬化是多种慢性肾脏疾病进展至终末期肾衰的主要病理基础,在这一过程中,基质金属蛋白酶及其组织抑制因子失衡所致的细胞外基质的积聚发挥着重要作用[1].研究表明,冬虫夏草(Cordycepssinensis)能拮抗氨基糖甙类肾毒性;减少尿蛋白;改善CsA肾中毒大鼠的肾小管损害;延缓肾功能减退等等[2～5].但关于冬虫夏草在对肾小球硬化细胞外基质(ECM)积聚的影响尚未见报道.本研究利用5/6肾切除制备进行性肾小球硬化模型,观察了冬虫夏草水提取液对其的影响,以探讨冬虫夏草防治肾小球硬化的可能作用机制.     

姜黄素对腺嘌呤诱发的肾间质纤维化大鼠血及尿FN、TGF-β1、Col-Ⅳ水平的影响

目的 观察姜黄素对腺嘌呤诱发肾间质纤维化大鼠血、尿纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、胶原蛋白-Ⅳ（Col-Ⅳ）水平的影响.方法 选择雄性Wistar大鼠84只,其中72只采用腺嘌呤混悬液连续灌胃制作腺嘌呤诱发RIF大鼠模型,将其中60只模型制作成功的大鼠随机分为5个组,分别为模型组、尿毒清组、姜黄素低剂量组、姜黄素中剂量组和姜黄素高剂量组各12只,另12只正常大鼠作为空白对照组.造模后24d姜黄素低、中、高剂量组大鼠分别给予125、250、500 mg/（kg·d）姜黄素灌胃;尿毒清组大鼠给予尿毒清颗粒3.75 g/（kg·d）灌胃;模型组与空白对照组大鼠给予等量蒸馏水灌胃,共处理60 d.采用双抗体夹心ELISA法检测大鼠血液及尿液中FN、TGF-β1、Col-Ⅳ水平.结果 模型组大鼠血、尿FN、TGF-β1、Col-Ⅳ高于空白对照组（P均＜0.05）,姜黄素各剂量组各指标有所下降,以高剂量组效果最佳,尿毒清组各指标也有所下降,但高于姜黄素高剂量组.结论 姜黄素可能通过下调肾间质纤维化大鼠血、尿FN、TGF-β1、Col-Ⅳ水平干预肾间质纤维化,效果优于尿毒清.