miR-144-3p靶向调控E2F3抑制膀胱癌T24细胞的增殖与侵袭

目的:探讨miR144-3p在膀胱癌组织及细胞中的表达及其对T24细胞增殖与侵袭的影响.方法:选用2018年2月至2018年12月空军军医大学唐都医院手术切除的36例膀胱癌组织及10例正常膀胱上皮组织标本,以及人膀胱癌细胞株T24和正常尿路上皮细胞株SV-HUC-1,用qPCR法检测膀胱癌组织和细胞中miR144-3p...     

lncRNA SBF2-AS1 通过调控miR-140-5p/VEGFA 分子轴促进宫颈癌HeLa细胞上皮间质转化

目的：探讨lncRNA SBF2-AS1 通过调控miR-140-5p/血管内皮生长因子A（VEGFA）分子轴对宫颈癌HeLa 细胞上皮间质转化（EMT）的影响。方法：细胞培养和转染后分为NC、miR-140-5p mimic、miR-140-5p mimic+pcDNA-VEGFA、si-lncRNASBF2-AS1+pcDNA-VEGFA及si-lncRNA SBF2-AS1+miR-140-5p mimic组5 组。采用qPCR检测lncRNA SBF2-AS1 在宫颈癌组织及细胞系中的表达水平,双荧光素酶报告基因验让lncRNA SBF2-AS1、miR-140-5p 与VEGFA的靶向关系,WB检测HeLa细胞中VEGFA及EMT标志物N-cadherin、Vimentin 和E-cadherin 的表达水平,Transwell 实验检测HeLa细胞侵袭和迁移能力。结果：lncRNASBF2-AS1 在宫颈癌组织及细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）,lncRNA SBF2-AS1 靶向结合miR-140-5p,且VEGFA 是miR-140-5p 的靶基因（P<0.05）。敲降lncRNA SBF2-AS1 抑制HeLa细胞侵袭、迁移及EMT。进一步实验证实,lncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p 上调VEGFA的表达水平,从而促进HeLa 细胞侵袭、迁移及EMT（P<0.05 或P<0.01）。结论：lncRNA SBF2-AS1通过miR-140-5p/VEGFA分子轴促进HeLa细胞EMT。     

lncRNA FOXD2-AS1通过靶向miR-506-5p调控宫颈癌细胞增殖与凋亡

[摘要] 目的: 探讨长链非编码RNA（lncRNA）FOXD2-AS1 是否通过靶向miR-506-5p 调控宫颈癌细胞增殖和凋亡。方法:体外培养人宫颈癌细胞系HeLa、Siha、Caski 与正常宫颈细胞株Ect1/E6E7,用qPCR检测细胞中FOXD2-AS1 和miR-506-5p 的表达水平。用脂质体转染技术分别构建抑制FOXD2-AS1 表达和过表达miR-506-5p 的宫颈癌细胞,用MTT实验和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡情况,WB实验检测细胞中增殖相关蛋白CyclinD1、p21 和p27 及凋亡相关蛋白Bcl-2、BAX和cleaved-capase-3的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证FOXD2-AS1 是否靶向miR-506-5p,并分析同时抑制FOXD2-AS1 和miR-506-5p 表达对宫颈癌细胞增殖与凋亡的影响。结果：与Ect1/E6E7 细胞比较,宫颈癌HeLa、Siha 和Caski 细胞中FOXD2-AS1 表达水平显著升高,miR-506-5p 表达水平降低（均P<0.01）。抑制FOXD2-AS1 表达可显著抑制宫颈癌细胞中CyclinD1 蛋白和Bcl-2 蛋白表达,并促进p21、p27 和BAX、cleaved-capase-3 蛋白的表达,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡（均P<0.01）。过表达miR-506-5p 可显著抑制宫颈癌细胞中CyclinD1 和Bcl-2 蛋白表达,促进p21 和BAX蛋白表达,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实宫颈癌细胞中FOXD2-AS1 靶向负调控miR-506-5p 的表达（P<0.01）。抑制miR-506-5p 表达逆转了抑制FOXD2-AS1 表达对宫颈癌细胞增殖和凋亡的作用（P<0.01）。结论: FOXD2-AS1 通过靶向miR-506-5p 的表达调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡。     

Upregulated lncRNA CASC2 May Inhibit Malignant Melanoma Development Through Regulating miR-18a-5p/RUNX1

This study aimed to investigate the effect and underlying mechanism of lncRNA CASC2 in malignant melanoma (MM). Expression of CASC2 in MM tissues and cells was detected. A375 cells were transfected with pc-CASC2, si-CASC2, miR-18a-5p inhibitor, or corresponding controls, and then cell proliferation, migration, and invasion were detected using MTT assay, colony formation assay, and Transwell analysis, respectively. The relationship of miR-18a-5p and CASC2 or RUNX1 was detected by luciferase reporter assay. The levels of CASC2 and RUNX1 were significantly reduced in MM tissues compared with normal skin tissues or cells, while the miR-18a-5p level was obviously increased (all p<0.01). Cell viability, colony number, migration, and invasion were significantly decreased in cells with pc-CASC2 compared with cells transfected with pcDNA3.1 (all p<0.05). These effects were consistent with the cells transfected with miR-18a-5p inhibitor. The luciferase reporter assay revealed that CASC2 acted as a molecular sponge for miR-18a-5p, and RUNX1 was a target gene of miR-18a-5p. Moreover, CASC2 overexpression promoted the expression of RUNX1, while upregulated miR-18a-5p significantly reversed the effect of CASC2 on the RUNX1 level (all p<0.05). Upregulated CASC2 may inhibit cell proliferation, migration, and invasion through regulating miR-18a-5p and its target gene RUNX1 in MM.     

lncRNA CTD-2196E14.5通过海绵吸附miR-744-5p抑制膀胱癌细胞的增殖和侵袭北大核心

目的:探讨CTD-2196E14.5通过调控miR-744-5p表达对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:通过检索TCGA数据库分析膀胱癌组织及癌旁组织中CTD-2196E14.5的表达水平及其与膀胱癌患者总生存期的关系。采用荧光实时定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测膀胱癌细胞株MGH-U3、T24、253J、J82和正常膀胱上皮细胞SV-HUC-1中CTD-2196E14.5的表达水平。采用脂质体介导技术将pcDNA-CTD-2196E14.5质粒、pcDNA空载质粒分别转染253J细胞,即CTD-2196E14.5组和NC组。采用MTT法、流式细胞术和Transwell实验检测CTD-2196E14.5对膀胱癌253J细胞增殖、细胞周期和侵袭的影响。应用lncRNA2function软件预测和双荧光素酶报告基因实验验证CTD-2196E14.5与miR-744-5p的靶向关系。qPCR检测miR-744-5p的表达。Western blotting检测AMPK信号通路蛋白和细胞周期蛋白的表达。结果:CTD-2196E14.5在膀胱癌组织中低表达(P<0.01),CTD-2196E14.5表达较高的患者总生存期较长(P<0.01)。CTD-2196E14.5在膀胱癌细胞株MGH-U3、T24、253J、J82中低表达(P<0.05),在253J细胞中表达水平最低(P<0.01)。与NC组相比,过表达CTD-2196E14.5抑制253J细胞的增殖能力(P<0.05)、细胞周期进展(P<0.01)和侵袭能力(P<0.01)。lncRNA2function软件显示,miR-744-5p可能是CTD-2196E14.5的靶基因。双荧光素酶报告基因实验结果显示,CTD-2196E14.5互补结合miR-744-5p(P<0.01)。与NC组相比,过表达CTD-2196E14.5负调控miR-744-5p的表达水平(P<0.01)。与NC组相比,过表达CTD-2196E14.5的253J细胞中AMPK信号通路蛋白p-AMPKα、p-AMPKβ1、p-TSC2、HNF4α、p-mTOR及细胞周期蛋白CDK4、Cyclin D1表达明显降低。结论:CTD-2196E14.5在膀胱癌组织和细胞中表达显著降低,其通过海绵吸附miR-744-5p下调AMPK信号通路蛋白及细胞周期蛋白的表达水平,抑制膀胱癌细胞253J的增殖和侵袭。     

miR-515-5p通过靶向HDAC2影响食管癌发生发展的分子机制

目的：探讨miR-515-5p对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法：选取2020年6月至2020年12月在河北医科大学第四医院手术切除的60例食管癌患者的癌组织标本和20例健康成人的食管上皮组织标本,以及食管癌细胞TE1、Eca109、KYSE30和KYSE170,用q PCR法检测食管癌组织和细胞中miR-515-5p的表达水平。在Eca109细胞中转染miR-515-5p模拟物以及其阴性对照物、在TE1细胞中转染miR-515-5p抑制剂以及其阴性对照物,q PCR法检测转染效率,用CCK-8法、Transwell实验分别检测转染细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用生物信息学方法分析预测miR-515-5p的下游靶基因,双荧光素酶报告基因实验验证组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase 2,HDAC2)为miR-515-5p的靶基因。应用GEPIA和TCGA数据集分析HDAC2在食管癌组织中的表达及其与患者临床特征的关系。结果：miR-515-5p在食管癌组织及细胞中表达降低（均P<0.01）。过表达miR-515-5p抑制食管癌Eca109细胞...     

胶质瘤组织中miR-205-5p的表达及其对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的 探讨miR-205-5p在胶质瘤中的表达以及对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的调控及可能的作用机制。方法 收集2018 年6 月至2019 年12 月于郴州市第一人民医院诊治的58 例新发神经胶质瘤患者的胶质瘤组织和癌旁组织标本。将miR-205-5p mimic转染至U251和T98G细胞,构建过表达细胞模型。采用RT-qPCR检测胶质瘤组织及细胞模型中miR-205-5p的表达水平并分析其表达水平与患者临床病理特征的关系,CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验和Transwell小室实验分别检测胶质瘤细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭情况,Western blot检测过表达miR-205-5p对Runt相关因子2（runt-related gene 2,Runx2）蛋白表达水平的影响;用双荧光素酶报告基因实验检测miR-205-5p与Runx2的靶向关系。结果 miR-205-5p在胶质瘤组织和胶质瘤细胞U251和T98G中低表达（均P＜0.01）,其表达水平与肿瘤大小和病理分级有关（均P＜0.05）。过表达miR-205-5p可以显著抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力（均P＜0.05）。双荧光素酶报告实验证实Runx2基因是miR-205-5p的潜在靶基因。过表达miR-205-5p可明显下调胶质瘤细胞中Runx2蛋白的表达水平（P＜0.001）。结论 miR-205-5p在胶质瘤中低表达,过表达miR-205-5p可抑制胶质瘤细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭,作用机制可能与靶向调控Runx2有关。     

MiR 142 5p通过靶向IGF2BP3调控多柔比星诱导的肝癌细胞凋亡

目的:探讨miR-142-5p对多柔比星诱导的原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞凋亡的影响及其作用机制.方法:收集广西医科大学附属肿瘤医院88例HCC患者手术切除的癌组织及癌旁组织(距癌灶组织边缘2～5cm)标本.采用实时荧光定量PCR检测人HCC组织和癌旁组织、人正常肝细胞以及HCC细胞系中miR-142-5p的表达量.向HCC细胞SMMC-7721中转染miR-142-5p mimics,流式细胞术检测过表达miR-142-5p后SMMC-7721细胞在多柔比星(doxorubicin)(1 μg/ml)诱导下凋亡的变化;生物信息学方法预测miR-142-5p可靶向结合胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白3(in-sulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 3,IGF2BP3)基因,并采用荧光素酶报告基因实验进行验证.采用实时荧光定量PCR及Western blotting检测过表达miR-142-5p的SMMC-7721细胞中IGF2BP3的mRNA及蛋白表达情况.结果:与癌旁组织和正常肝细胞相比,HCC组织(-6.91±2.61vs-11.59±2.59,P＜0.01)和多种HCC细胞系中miR-142-5p呈明显低表达(均P＜0.01);过表达miR-142-5p可显著促进多柔比星诱导的HCC细胞SMMC-7721的凋亡[(49.40±3.47)％ vs (19.50±1.74)％,P＜0.01];过表达miR-142-5p可明显降低HCC细胞中IGF2BP3的mRNA及蛋白表达水平(P＜0.01),敲减IGF2BP3表达可进一步促进多柔比星诱导的SMMC-7721细胞的凋亡(P＜0.01).荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-142-5p能够抑制IGF2BP3的3'UTR荧光素酶报告基因的活性.结论:miR-142-5p在HCC组织标本和体外培养细胞系中的表达水平均显著降低,转染miR-142-5p mimics后能够促进多柔比星诱导的HCC细胞的凋亡,其机制可能与miR-142-5p靶向作用IGF2 BP3从而促进HCC细胞凋亡有关.     

miR-409-3p靶向调控RRM2抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探究微小RNA-409-3p(miR-409-3p)对鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测人永生化鼻咽上皮细胞(NP69)、鼻咽癌细胞5-8F、6-10B中miR-409-3p、核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)的表达差异;细胞计数试剂盒(CCK-8)检测miR-409-3p过表达或RRM2过表达对6-10B细胞增殖的影响;Transwell小室实验检测miR-409-3p过表达或RRM2过表达对6-10B细胞迁移及侵袭的影响。双荧光素酶报告实验与Western blot测定miR-409-3p与RRM2在6-10B细胞中的调控关系;Western blot检测c-Myc、细胞周期蛋白1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达量。结果:与NP69细胞相比,5-8F、6-10B细胞中miR-409-3p的表达水平显著降低(P<0.05),RRM2的表达水平显著升高(P<0.05);miR-409-3p过表达后细胞存活率显著降低(P<0.05),迁移细胞数与侵袭细胞数显著减少(P<0.05),c-Myc、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-409-3p能够靶向结合RRM2,增强miR-409-3p的表达后6-10B细胞中RRM2的表达下调(P<0.05);RRM2过表达能够明显减弱miR-409-3p过表达对6-10B细胞增殖、迁移及侵袭能力的抑制作用(P<0.05)。结论:miR-409-3p可能通过负向调控RRM2的表达从而抑制鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

LncRNA NR2F2-AS1 induces epithelial-mesenchymal transition of non-small cell lung cancer by modulating BVR/ATF-2 pathway via regulating miR-545-5p/c-Met axis

Non-small cell lung cancer (NSCLC) is one type of the most common cancers, which results in the major death worldwide. This study focuses on the understanding of the molecular mechanism of lncRNA NR2F2-AS1 and its regulation on epithelial-mesenchymal transition (EMT) in the development of NSCLC. Expressions of lncRNA NR2F2-AS1, miR-545-5p, c-Met, biliverdin reductase (BVR), ATF-2 and EMT-related markers in NSCLC tissues and cells were measured by western blotting and RT-qPCR assays. The impact of lncRNA NR2F2-AS1 and miR-545-5p on the cell proliferation, migration, invasion and EMT were analyzed by CCK-8, colony formation, wound healing and transwell assays. The interactions among lncRNA NR2F2-AS1, miR-545-5p and c-Met predicted by bioinformatic analysis were evaluated through dual luciferase reporter assay and fluorescence in situ hybridization (FISH). After generating tumor xenografts, immunohistochemistry was utilized to measure the expression of Ki-67 and EMT-related proteins in vivo. Our results showed that lncRNA NR2F2-AS1, c-Met, BVR and ATF-2 were overexpressed while miR-545-5p was silenced in NSCLC tissues and cells. Silencing of lncRNA NR2F2-AS1 or upregulating miR-545-5p significantly inhibited the cell proliferation, migration, invasion and EMT process. The EMT process could be inhibited by suppressing c-Met/BVR/ATF-2 axis. The tumor xenograft experiments demonstrated that the tumor growth and EMT process were significantly inhibited by silencing lncRNA NR2F2-AS1 or overexpression of miR-545-5p in vivo. LncRNA NR2F2-AS1 promoted the NSCLC development through suppressing miR-545-5p to activate EMT process through c-Met/BVR/ATF-2 axis. Our study indicated that lncRNA NR2F2-AS1 and miR-545-5p could be used as potential therapeutic targets to improve NSCLC treatment.     

lncRNA MALAT1/miR-141-3p/ZEB1 分子轴调控胃癌SGC7901 细胞的侵袭、迁移及上皮间质转化

[摘要] 目的：探究lncRNA MALAT1/miR-141-3p/ZEB1 分子轴对胃癌（GC）SGC7901 细胞侵袭、迁移及上皮间质转化（EMT）的调控作用。方法：收集2014 年4 月至2017 年5 月武汉商职医院普外科手术切除的GC组织（非坏死部分）和配对癌旁组织（距肿瘤组织>5 cm）标本38 例,同时选取正常胃上皮细胞GES1 及GC细胞系SGC7901、HGC27、BGC823、MKN45 和MKN28。qPCR实验检测MALAT1、miR-141-3p 在GC组织和细胞系中的表达水平,CCK-8 和Transwell 实验检测敲降MALAT1 对SGC7901 细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB 实验检测ZEB1、E-cadherin、N-cadherin 和Vimentin 的表达情况。双荧光酶素报告基因验证MALAT1、miR-141-3p 和ZEB1 的靶向关系,CCK-8 和Transwell 实验检测MALAT1/miR-141-3p/ZEB1 分子轴对SGC7901 细胞生物学行为的影响。结果：MALAT1 在GC组织和细胞系中高表达（P<0.05 或P<0.01）。敲降MALAT1 显著抑制了SGC7901 细胞增殖、迁移、侵袭及EMT（P<0.05 或P<0.01）;MALAT1 与miR-141-3p、miR-141-3p 与ZEB1 均具有直接靶向关系;进一步研究表明,同时过表达miR-141-3p 和MALAT1 或ZEB1 能够逆转miR-141-3p 对SGC7901 细胞生物学行为的抑制作用。结论：MALAT1通过靶向下调miR-141-3p 对ZEB1 的抑制作用,进而促进SGC7901 细胞侵袭、迁移及EMT。     

长链非编码RNA NR2F2-AS1对胃癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究lncRNA NR2F2-AS1对胃癌细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR法检测细胞中 NR2F2-AS1、miR-425-5p的mRNA表达情况;将pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-NR2F2-AS1组（转染pcDNA-NR2F2-AS1）、sh-NR2F2-AS1组(转染sh-NR2F2-AS1)、sh-NC组(转染sh-NC)、anti-miR-NC组（转染anti-miR-NC）、anti-miR-425-5p组（转染anti-miR-425-5p）、pcDNA-NR2F2-AS1+miR-NC组（共转染pcDNA-NR2F2-AS1和miR-NC）、pcDNA-NR2F2-AS1+miR-425-5p组（共转染pcDNA-NR2F2-AS1和miR-425-5p mimics）转染至MGC-803、MKN-45细胞;MTT法检测细胞的增殖;流式细胞术检测细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞MGC-803、MKN-45中NR2F2-AS1的表达显著降低,miR-425-5p的表达显著升高;过表达NR2F2-AS1、抑制miR-425-5p均可抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡;miR-425-5p可抑制野生型NR2F2-AS1的MGC-803、MKN-45细胞的荧光活性;过表达miR-425-5p可逆转过表达NR2F2-AS1对MGC-803、MKN-45细胞增殖和凋亡的作用。结论:lncRNA NR2F2-AS1可抑制胃癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与靶向miR-425-5p有关,将可为胃癌的治疗提供新靶点。     

Identification of lncRNA TRPM2-AS/miR-140-3p/PYCR1 axis’s proliferates and anti-apoptotic effect on breast cancer using co-expression network analysis

Breast cancer (BC) is one of the most common malignancies occurring in women worldwide. Weighted gene co-expression network analysis (WGCNA) has not been widely utilized in uncovering the biomarkers which played pivotal roles in BC treatment. This study aimed to verify the proliferative and anti-apoptotic effect of lncRNA TRPM2-AS/miR-140-3p/PYCR1 axis on BC based on WGCNA. WGCNA was applied for determining hub genes using gene expression data gained from breast cancer and adjacent tissues which were downloaded from the Cancer Genome Atlas (TCGA) database. The correlative curves showed the correlation between OS/DFS of BC patients and TRPM2-AS expression or PYCR1 expression based on the data of survival rate of BC patients obtained from the TCGA database. QRT-PCR was employed in detecting the expression levels of TRPM2-AS, miR-140-3p and PYCR1, and western blot analysis was adopted for determination of protein expression level of PYCR1. Dual luciferase assay was applied to verify the targeting relationship between TRPM2-AS and miR-140-3p, as well as miR-140-3p and PYCR1. The roles of TRPM2-AS, miR-140-3p, and PYCR1 in proliferation, migration, and apoptosis of BC cell were identified by CCK-8 assay, cell migration assay and flow cytometry. Hub genes were also gained from WGCNA test. The prognostic study showed a significant negative correlation between the high expression of PYCR1 and TRPM2-AS and the BC survival. QRT-PCR demonstrated that PYCR1 and TRPM2-AS were both overexpressed, while miR-140-3p was greatly down-regulated in BC cell. In addition, it was validated by dual luciferase assay that miR-140-3p directly targeted both TRPM2-AS and PYCR1. Furthermore, down-regulation of TRPM2-AS and PYCR1 inhibited proliferation yet promoted apoptosis of BC cell, and up-regulation of miR-140-3p in BC cell showed the same tendency. Taken together, TRPM2-AS could promote proliferation and inhibit apoptosis of BC cell through TRPM2-AS/miR-140-3p/PYCR1 axis.     

微小RNA-380-5p 在宫颈癌组织及细胞中的表达及其通过下调RHOA抑制C33A细胞的增殖和迁移

[摘要] 目的：检测微小RNA-380-5p（miR-380-5p）在人宫颈癌组织和细胞系中的表达,探讨其抑制宫颈癌C33A细胞增殖和迁移的作用机制。方法：收集2016 年12 月至2017 年7 月同济医学院附属武汉中心医院妇产科手术切除的16 例宫颈癌患者癌组织和对应的癌旁组织标本,以及宫颈癌细胞系HCC94、C33A、Hela、SiHa 和人子宫颈上皮永生化细胞H8,用qPCR 法检测miR-380-5p 在癌及癌旁组织、4 种宫颈癌细胞及H8 细胞中的表达。用脂质体转染技术将miR-380-5p mimic（实验组）和miR-NC（阴性对照组）瞬时转染C33A细胞,用qPCR法检测转染后细胞中miR-380-5p 表达,CCK-8 法和Transwell 小室法分别检测转染细胞的增殖和迁移能力。用生物信息学软件TargetScan 预测miR-380-5p 的下游基因,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-380-5p 对下游基因Ras 同源基因家族成员A（Ras homolog gene family member A,RHOA）的结合作用,qPCR 法和Western blotting 检测miR-380-5p 下游基因RHOA的表达。结果：宫颈癌组织中miR-380-5p 表达水平明显低于癌旁组织（P<0.01）,宫颈癌细胞系中miR-380-5p 表达水平均明显低于H8 细胞（P<0.05）,以C33A细胞中的表达水平最低（P<0.01）。与阴性对照组比较,转染miR-380-5pmimic 能显著抑制C33A细胞的增殖（P<0.05）和迁移能力（P<0.01）,且下调RHOA、ROCK1、ROCK2、CDK2和N-cadherin蛋白的表达（均P<0.01）。生物信息学软件预测RHOA可能为miR-380-5p 的调控基因,双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-380-5p 可与RHOA 3’-非编码区（UTR）特异性结合,miR-380-5p 可明显下调RHOA基因的表达（P<0.01）。结论：miR-380-5p 在宫颈癌组织及细胞系中低表达,过表达miR-380-5p 可能通过下调RHOA及其下游蛋白的表达抑制宫颈癌C33A细胞的增殖和迁移。     

lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2 分子轴调控非小细胞肺癌细胞增殖及迁移

[摘要] 目的：探讨lncRNA HCG18/miR-17-5p/HMGA2 分子轴调控非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖及迁移的分子机制。方法：收集2017 年6 月至2018 年6 月承德市中心医院62 例NSCLC组织及对应的癌旁组织标本,以及NSCLC细胞系A549、NCIH1299、H1650、NCI-H460 和人肺上皮细胞BEAS-B,用qPCR法检测NSCLC组织及细胞系中HCG18、miR-17-5p 及高迁移率族蛋白A2（HMGA2）的表达水平。分别用Si-HCG18、miR-17-5p、miR-17-5p+HCG18 或pcDNA3.1-HMGA2 转染A549 和NCI-H460 细胞,用CCK-8 法、Transwell 实验、Wb检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和HMGA2 及EMT相关蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因验证HCG18 对miR-17-5p 或miR-17-5p 对HMGA2 的靶向调控作用。构建敲降HCG18 的A549 细胞小鼠移植瘤模型,观察对移植瘤的影响。结果：lncRNA HCG18 在NSCLC 组织和细胞中均高表达（均P<0.01）,发生淋巴结转移及晚期NSCLC 患者中HCG18 的表达显著提高,且HCG18 高表达的NSCLC患者预后较差、生存率较低（均P<0.01）。转染Si-HCG18 显著抑制NSCLC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（均P<0.01）,上调上皮钙黏蛋白的表达（P<0.01）、下调神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达（均P<0.01）,小鼠移植瘤体积显著减小（P<0.05）。双荧光素酶报告基因验证了HCG18 与miR-17-5p 靶向结合,以及miR-17-5p 与HMGA2 靶向结合。转染miR-17-5p 后NSCLC 细胞的增殖、迁移及侵袭受到抑制（均P<0.01）,促进上皮钙黏蛋白的表达（P<0.01）、抑制神经钙黏蛋白和波形蛋白的表达（均P<0.01）,而转染miR-17-5p+HCG18 后可抑制miR-17-5p 的作用。结论：HCG18通过调控miR-17-5p/HMGA2 分子轴促进NSCLC细胞的增殖及迁移。     

lncRNA XIST 通过miR-32-5p/EZH2 分子轴调控结直肠癌HCT-8细胞的恶性生物学行为

目的：探讨lncRNA XIST 通过miR-32-5p/果蝇Zeste 基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2,EZH2）分子轴调控结直肠癌HCT-8 细胞的恶性生物学行为。方法：收集2014 年7 月至2018 年8 月中南大学湘雅医院直肠肛门外科资料完整的结直肠癌患者28 例癌组织和配对的癌旁组织标本,采用qPCR检测结直肠癌组织及细胞系中lncRNA XIST 和miR-32-5p 的表达水平,双荧光素酶报告基因验证lncRNA XIST、miR-32-5p 和EZH2 的靶向关系,并进一步通过WB检测EZH2 的表达水平。CCK-8、Transwell 及Annexin V-FITC/PI 染色流式细胞术检测HCT-8 细胞增殖、迁移及凋亡情况。结果：lncRNA XIST 在结直肠癌组织及细胞系中高表达,且在HCT-8 细胞中表达最高（P<0.05 或P<0.01）。双荧光素酶报告基因证实,lncRNA XIST 靶向负调控miR-32-5p（P<0.05）,且EZH2 是miR-32-5p 的靶基因。敲降lncRNA XIST 抑制HCT-8 细胞增殖和迁移并诱导其凋亡（P<0.05或P<0.01）;进一步实验证明,敲降lncRNA XIST 上调miR-32-5p 的表达水平,从而下调EZH2 表达水平,进而抑制HCT-8 细胞增殖和迁移并诱导其凋亡。结论：lncRNA XIST通过miR-32-5p/EZH2 分子轴促进HCT-8 细胞增殖、迁移并抑制细胞凋亡。     

miR-379-5p靶向CTSL调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的分子机制

目的:探讨微小RNA-379-5p（miR-379-5p）通过靶向组织蛋白酶L(CTSL)调控肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的作用机制。方法:选择本院收治的肺癌患者57例,取患者肺癌组织与癌旁组织,应用qRT-PCR法检测miR-379-5p与CTSL mRNA的表达水平;免疫组化法检测CTSL蛋白的表达情况。miR-con（miR-con组）、miR-379-5p mimics（miR-379-5p组）分别转染肺癌NC-H446细胞,miR-379-5p mimics与pcDNA（miR-379-5p+pcDNA组）、miR-379-5p mimics与pcDNA-CTSL（miR-379-5p+pcDNA-CTSL组）分别共转染肺癌NC-H446细胞,MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell迁移与侵袭实验检测细胞迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告实验验证miR-379-5p与CTSL之间的靶向关系。Western blot检测CTSL、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、Cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:肺癌组织中miR-379-5p的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）,而CTSL mRNA及蛋白阳性率均显著高于癌旁组织（P＜0.05）;与miR-con组比较,miR-379-5p组细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,明显抑制Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达（P＜0.05）,而促进Cleaved caspase-3蛋白表达（P＜0.05）;双荧光素酶报告实验证明miR-379-5p可负向调控CTSL表达与活性;CTSL过表达可逆转miR-379-5p过表达对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的调控作用。结论:miR-379-5p过表达通过靶向CTSL而减弱肺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞凋亡。     

过表达miR-145-5p 通过下调IGF1R抑制食管鳞状细胞TE-10 细胞的恶性生物学行为

目的：探究miR-145-5p 对食管鳞状细胞癌TE-10 细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）等恶性生物学行为的分子机制。方法：qPCR法检测miR-145-5p 在食管鳞状细胞癌细胞和正常食管上皮细胞中的表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-145-5p 与胰岛素样生长因子1 受体（insulin-like growth factor 1 receptor，IGF1R）的靶向调控关系，Western blotting 检测IGF1R蛋白和EMT相关蛋白的表达，CCK-8 法和Transwell 检测miR-145-5p/IGF1R分子轴对TE-10 细胞增殖、侵袭、迁移的影响。结果：miR-145-5p 在3 株食管鳞状细胞癌细胞中低表达且在TE-10 细胞中表达最低（P<0.01 或P<0.05）。过表达miR-145-5p 可显著抑制TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程（P<0.01 或P<0.05）。双荧光素酶报告基因证实miR-145-5p 靶向下调IGF1R表达（P<0.01）。回复实验进一步证实，与单独过表达IGF1R相比，同时过表达miR-145-5p 和IGF1R能显著缓解IGF1R 对TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT 进程的促进作用（P<0.01 或P<0.05）。结论：过表达miR-145-5p 通过靶向下调IGF1R进而抑制了食管鳞状细胞癌TE-10 细胞的增殖、侵袭、迁移和EMT进程。     

miR-143-3p通过靶向EZH2 调控结肠癌RKO细胞增殖、迁移和侵袭

目的：探讨miR-143-3p 通过靶向果蝇zeste 基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2, EZH2）调控结肠癌RKO细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制。方法：选用2015 年3 月至2017 年7 月昆明医科大学第一附属医院手术切除的40 例结肠癌患者的癌及癌旁组织标本,以及结肠癌细胞系COLO320、RKO、CL-11 和正常肠黏膜细胞株NCM460,用qPCR 法检测结肠癌组织和细胞系中miR-143-3p 的表达水平。分别将miR-143-3p mimics、miR-143-3p inhibitor、EZH2 shRNA 及阴性对照质粒转染进RKO细胞,用CCK-8 法、Transwell 小室法分别检测miR-143-3p/EZH2 分子轴对RKO细胞增殖、迁移和侵袭的影响,用Western blotting 检测RKO细胞中EZH2蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-143-3p 和EZH2 的靶向关系。结果：miR-143-3p在结肠癌组织和细胞系中均低表达（均P<0.01）。过表达miR-143-3p 显著抑制RKO 细胞的增殖、迁移和侵袭能力（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验证实miR-143-3p 靶向EZH2。同时敲降miR-143-3p 和EZH2 可逆转敲降EZH2 对RKO细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用。结论：miR-143-3p 通过靶向EZH2并下调其表达水平进而抑制结肠癌细胞的增殖、迁移与侵袭。