CD42a定量检测血小板

OBJECTIVE: To investigate a reference method for platelet (PLT) count. METHODS: 76 samples of daily whole blood of high, normal and low values in patients were collected and analyzed by flow cytometry (FCM) with CD42a monoclonal antibody that could combine specifically with the platelet membrane glycoprotein Ib-Ix (GPIb-Ix). PLT counts were analyzed by multiplying PLT/RBC ratio from FCM with the RBC that was counted by a calibrated blood analyzer. Meanwhile, the results of PLT from FCM were compared with that from blood analyzers SE-9500, NE-1500, CD-1600 or manual count. RESULTS: The within-replicate coefficient of variance(CV) of FCM was less than 4% for a high count(501 x 10(9)/L) and middle count(184 x 10(9)/L), the CV of low count(23 x 10(9)/L) was 11.432%, the between-replicate CV was 10.792%, and the overall reproducibility was less than 5%. Linearity was demonstrated well(r = 0.9975 P < 0.001) when the PLT counts were 20 x 10(9)/L-700 x 10(9)/L. PLT count was stable at room temperature within 6 hr. The carry-over was 0.87%. The results between FCM and SE-9500, NE-1500, CD-1600 or manual count was comparable (r > 0.975, P < 0.001). CONCLUSION: These findings confirm that FCM for PLT count is specific, accurate and precise and could be considered as a candidate of reference method for PLT count.     

CD42a定量检测血小板

目的　探讨血小板 (PL T)计数的参考方法。方法　以 FITC标记的 CD42 a单克隆抗体特异结合PL T膜糖蛋白 Ib- Ix(GPIb- Ix) ,用流式细胞仪术 (FCM)检测 76例全血 FITC-抗 CD42 a- GPIb/ Ix定量 PL T。用FCM测得 PL T/ RBC,乘以经准确校正的血细胞分析仪所测同一标本的 RBC值 ,得 PL T结果 (× 10 9/ L)。同时 ,将FCM所测 PL T结果与 SE- 95 0 0、NE- 15 0 0、CD- 160 0及手工法测定结果相比较。结果　 FCM批内重复性高值 (5 0 1× 10 9/ L)及中值 (184× 10 9/ L)标本的变异系数 (CV) <4% ,低值 (2 3× 10 9/ L)标本 CV=11.432 % ;批间重复性 CV为 10 .792 % ,总重复性 CV<5 % ;PL T在 2 0× 10 9/ L～ 70 0× 10 9/ L 范围内线性良好 (r=0 .9975 ,P<0 .0 0 1)。测定结果在标本采集后 6小时内稳定 ,携带污染率为 0 .87%。FCM与 SE- 95 0 0、NE- 15 0 0、CD- 160 0、手工法测定 PL T结果间有良好相关性 (r>0 .975 )。结论　 FCM测定 PL T- CD42 a定量 PL T特异、准确、精密 ,可望成为 PL T测定的参考方法。     

二甲亚砜与第二信使效应剂对深低温冻存血小板膜CD42b、CD62p表达的影响

①目的　观察体积分数0.02二甲亚砜(DMSO)联合第二信使效应剂(ThromboSol,TS)在-196 ℃时对浓缩血小板膜CD42b、CD62p表达的影响,并了解体积分数0.02 DMSO+TS对浓缩血小板的长期(6个月)保存效果。②方法　分别应用体积分数0.02 DMSO、体积分数0.06 DMSO、体积分数0.02 DMSO+TS作为冻存液-196 ℃冷冻保存浓缩血小板,并在冻存后1、3 及6 个月时分别取出复温,流式细胞仪检查血小板膜CD42b、CD62p表达水平。③结果　冻存后1、3及6个月,体积分数0.02 DMSO+TS组与体积分数0.06 DMSO组血小板CD42b的表达水平差异无显著性(F=3.13~5.01,q=1.12~1.76,P>0.05),两者均高于体积分数0.02 DMSO组(q=3.17~4.06,P<0.05);但与新鲜组相比, 3 组冷冻保存血小板CD42b 表达水平均有所下降(q= 3.09 ~4.15,P<0.05)。体积分数0.02 DMSO+TS组CD62p的表达水平低于体积分数0.06 DMSO组和体积分数0.02DMSO组,差异有显著性(F=5.75~9.77,q=3.20~4.34,P<0.05),后两组差异无统计学意义(q=1.55~2.02,P>0.05);与新鲜组相比,3组均明显升高,差异有显著性(q=4.85~7.35,P<0.01)。④结论　第二信使效应剂的应用降低了DMSO的使用浓度,在抑制血小板的体外激活方面,体积分数0.02 DMSO+TS的效果优于体积分数0.06 DMSO,且长期(6个月)保存效果稳定。     

阿司匹林与血小板膜糖蛋白CD42b、CD41a的相关性研究

目的 探讨服用阿司匹林前后,心脑血管疾病患者外周血血小板表面CD42b、CD41a表达的变化,研究阿司匹林对血小板聚集功能及血小板表面糖蛋白表达量的影响.方法 用流式细胞仪测定31例心脑血管疾病患者在服用阿司匹林前及用药1周后外周血血小板膜CD42b、CD41a的表达,血小板聚集仪测定血小板聚集功能.结果 与服用阿司匹林前相比,用药1周后,ADP和AA诱导的血小板聚集率显著降低,而CD42b和CD41a的表达量改变并不十分显著.结论 长期服用小剂量(100mg)阿司匹林能够有效抑制血小板的聚集,但不能抑制血小板表面CD42b、CD41a的表达量.     

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS对血小板释放反应的影响

【目的】观察血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）拮抗剂——四肽Arg-Gly-Asp-Ser（RGDS）对血小板聚集和CD62p表达的作用,探讨RGDS对血小板聚集和释放反应的影响。【方法】检测二磷酸腺苷（ADP;终浓度5μmol/L,下同）诱导血小板聚集的最大聚集率（rPA,max）、静息血小板和ADP诱导的血小板CD62p表达,检测不同浓度RGDS对ADP诱导的rPA,max的抑制率和血小板CD62p表达的抑制率,进行回归分析。【结果】5种浓度（50、100、200、400、800μmol/L）的RGDS对rPA,max均有显著抑制作用。正常人静息血小板CD62p表达率为（3.5±0.6）%;ADP激动的血小板CD62p表达率为（65.6±13.8）%,两组比较有显著性差异（P〈0.01）;50、100μmol/L的RGDS对血小板CD62p表达无抑制作用;当RGDS浓度≥200μmol/L时（200、400、800μmol/L）,其可抑制血小板CD62p的表达;RGDS对rPA,max的抑制作用和其对血小板CD62p表达的抑制作用相关。【结论】RGDS浓度〈200μmol／L时，对ADP诱导的血小板释放反应无影响；RGDS浓度≥200μmol/L时，可抑制ADP诱导的血小板释放反应；与RGDS显著的抗聚集效应相比，其对血小板释放反应的影响比较小：RGDS抑制血小板释放反应的作用与其抗血小板聚集有关。     

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体拮抗剂RGDS对血小板释放反应的影响

 【目的】观察血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa（GPⅡb/Ⅲa）拮抗剂——四肽Arg-Gly-Asp-Ser（RGDS）对血小板聚集和CD62p表达的作用,探讨RGDS对血小板聚集和释放反应的影响。【方法】检测二磷酸腺苷（ADP;终浓度5μmol/L,下同）诱导血小板聚集的最大聚集率（rPA,max）、静息血小板和ADP诱导的血小板CD62p表达,检测不同浓度RGDS对ADP诱导的rPA,max的抑制率和血小板CD62p表达的抑制率,进行回归分析。【结果】5种浓度（50、100、200、400、800μmol/L）的RGDS对rPA,max均有显著抑制作用。正常人静息血小板CD62p表达率为（3.5±0.6）%;ADP激动的血小板CD62p表达率为（65.6±13.8）%,两组比较有显著性差异（P〈0.01）;50、100μmol/L的RGDS对血小板CD62p表达无抑制作用;当RGDS浓度≥200μmol/L时（200、400、800μmol/L）,其可抑制血小板CD62p的表达;RGDS对rPA,max的抑制作用和其对血小板CD62p表达的抑制作用相关。【结论】RGDS浓度〈200μmol／L时，对ADP诱导的血小板释放反应无影响；RGDS浓度≥200μmol/L时，可抑制ADP诱导的血小板释放反应；与RGDS显著的抗聚集效应相比，其对血小板释放反应的影响比较小：RGDS抑制血小板释放反应的作用与其抗血小板聚集有关。     

不同制剂血小板的临床应用效果分析

输注血小板在临床治疗上具有不可替代的作用,近年来广泛应用新鲜机采血小板,其临床作用效果优于手工采集血小板和冰冻血小板,但却因种种原因而不能满足临床需要,同时从无偿献血中分离出的手工血小板又被大量浪费掉,为了充分利用无偿献血资源,及时满足患者治疗需求,本研究科学合理地使用不同的血小板制剂,以最大程度地满足患者的治疗需求,现将结果报道如下。     

血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa表达在特发性血小板减少性紫癜中的分析

目的:检测特发性血小板减少性紫癜(ITP)患者血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa表达阳性率的变化,探讨其对诊治ITP的作用.方法:应用血细胞分析仪和流式细胞仪分别检测22例ITP患者组和22例健康对照组的血小板数和血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa表达阳性率.结果:ITP患者组的平均血小板计数为(28.4±14.1)×109/L,明显低于健康对照组的(236.7±54.1)×109/L,两组比较有显著性差异(P＜0.05);ITP患者组的血小板膜糖蛋白Ⅱb/Ⅲa表达阳性率为50.5%±28.2%,显著低于健康对照组的88.7%±4.1%,两组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:血小板膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa表达阳性率与ITP患者的血小板数有一定的相关性,提示临床诊治ITP时血小板功能的异常应引起重视.     

广州地区无偿献血者中血小板CD36表达的筛查

目的 对广州地区无偿捐献血小板供者群体进行血小板上CD36抗原缺失型筛查,并统计缺失频率.方法 对2011年2-5月来我血液中心捐献机采血小板的249位献血者标本,应用流式细胞技术检测血小板上CD36抗原的表达.结果 在249位献血者中,共检出7例CD36抗原在血小板上表达缺失,频率为2.81%,且与血型无明显关联.结...     

68例不同疾病患者输注血小板效果分析

对我院2009年1～3月收治的68例不同疾病引起的血小板减少同时伴有出血倾向的患者输注机采血小板,在输注前和输注后1h、24h进行血小板计数,并对结果进行分析讨论,以探讨其影响因素,报告如下。     

急性脑梗死患者外周血CD54、CD42b的变化与临床意义

目的:探讨急性脑梗死患者外周血CD54、CD42b表达的变化、临床意义以及两指标间是否存在相关性。方法:用流式细胞仪测定29例(正常)对照者与30例急性脑梗死患者发病72h内、7天及14天时外周血CD54、CD42b的表达。结果:与对照组相比,除CD42b的表达在急性脑梗死发病14天时接近对照组外,其余各值均有显著改变,CD54表达上调而CD42b表达下调。结论:CD54、CD42b之间无相关性,是相对独立的指标;它们可能参与了急性脑梗死的病理过程,对临床治疗有参考价值。     

血必净注射液对脓毒症患者血小板活化因子CD62P和CD63的影响

目的 探讨血必净注射液对脓毒症患者血小板活化水平的影响。方法 选取2019年6月—2020年1月潍坊医学院附属医院抢救监护室（EICU）、重症监护治疗病房（ICU）收治的脓毒症患者42例进行前瞻性队列研究。通过随机分配原则将其分为常规治疗组与血必净组。收集患者入院24 h的基础资料及临床数据,同时比较两组的基础资料、CD62P和CD63的阳性表达率、序贯性器官功能衰竭评分（SOFA评分）和急性生理与慢性健康状况评分（APACHE Ⅱ评分）;采用Spearman法分析CD62P和CD63与凝血相关指标、SOFA评分及APACHE Ⅱ评分之间的相关性;采用多因素Logistic回归分析脓毒症患者14 d全因死亡的独立危险因素。结果 两组患者的年龄、性别、高血压、糖尿病、肾病、心脑血管病、感染部位比较,差异无统计学意义（P >0.05）。常规治疗组与血必净组治疗第8天临床资料比较,血必净组血小板计数水平升高（P <0.05）,降钙素原（PCT）水平、中性粒细胞百分比（NEUT%）水平、纤维蛋白原（FIB）水平、凝血酶原时间（PT）水平、部分活化凝血酶时间（APTT）水平、APACHE Ⅱ评分、SOFA评分、病死率、住院时间、CD62P阳性表达率、CD63阳性表达率下降（P <0.05）。Spearman相关性分析结果显示,血小板活化因子CD62P和CD63的阳性表达率与血小板计数水平呈负相关（P <0.05）,CD62P和CD63阳性表达与PT水平、APTT水平、SOFA评分、APACHE Ⅱ评分呈正相关（P <0.05）。多因素Logistic回归分析发现,CD62P和CD63阳性表达是脓毒症患者14 d死亡的独立危险因素（P <0.05）,血小板计数水平是其独立保护因素（P <0.05）。结论 血必净注射液可能通过抑制脓毒症患者血小板活化因子CD62P、CD63的阳性表达率,降低血小板活化水平,从而降低14 d全因死亡率,改善脓毒症患者的近期预后。     

血小板第四因子对CD34+白血病细胞系KG1a粘附功能的影响

目的研究血小板第四因子(PF4)对CD34 白血病细胞系KG1a细胞与人脐静脉内皮细胞系ECV-304细胞之间粘附性及对多种粘附分子表达的影响。方法采用粘附实验、粘附阻断实验、MTT染色、半定量RT-PCR、免疫标记流式细胞仪测定等方法。结果穴1雪PF4可以增加KG1a细胞与ECV-304细胞之间的粘附作用。PF4与KG1a及ECV-304细胞同时孵育或与KG1a或ECV-304细胞单独孵育,均使KG1a细胞粘附能力增加。穴2雪抗粘附分子CD49d、CD106、CD54单克隆抗体可显著减少PF4对KG1a粘附的增加作用,而抗粘附分子CD62L、CD62E、CD62P单抗则对PF4的这种增加粘附的作用没有影响。穴3雪在PF4作用的3h内,半定量RT-PCR检测粘附分子CD49d、CD106、CD54mRNA表达水平有不同程度的上调。(4)PF4作用2h后,流式细胞仪分析显示KG1a细胞上的CD49d、ECV-304细胞上的CD54蛋白表达水平显著增加。结论PF4通过上调粘附分子的表达促进KG1a细胞的粘附功能。     

不同透析膜对血小板活化的影响

目的探讨不同种类透析膜对维持性血液透析患者血小板活化的影响。方法30个维持性血液透析患者随机分3组,分别应用二醋酸纤维素膜（CDA）、聚甲基丙烯酸甲酯膜（PMMA）和聚芳砜膜（PES）的透析器进行透析,采用流式细胞仪测定其血透前、血透10 min和血透180 min时的血小板活化指标（CD62P,CD63,PAC-1）的表达,并进行组间比较。结果血透患者在使用3种透析膜透析前血小板活化程度无显著差异;血透过程中血小板活化不断增强,CDA组的活化血小板百分率明显高于PMMA组和PES组;而PMMA组与PES组之间血小板活化改变无显著差异。结论CDA膜在血透过程中对血小板活化的影响明显高于PMMA和PES膜,PMMA和PES膜的生物相容性优于CDA膜。     

CD47和Cdc42蛋白在透明细胞性肾细胞癌中表达的意义

目的 分析CD47和Cdc42蛋白在透明细胞性肾细胞癌(clear cell renalcellcarcinoma,CCRCC)中表达的意义,探讨CCRCC转移的机制.方法 采用免疫组织化学方法(IHC)检测75例CCRCC及31例癌旁组织CD47和Cdc42蛋白的表达,分析两种蛋白表达与患者临床病理特征的关系及这两种...     

不同抗血小板治疗对急性脑梗死患者血小板活化聚集状态的比较

目的:探讨不同抗血小板治疗对脑梗死急性期患者血小板活化及聚集状态的影响?方法:97例脑梗死患者随机入组不同的抗血小板治疗组(阿司匹林治疗组?氯吡格雷治疗组?阿司匹林联合氯吡格雷治疗组),在入院第1天(治疗前)和第10天采用流式细胞仪检测血小板CD62P?比浊法检测花生四烯酸(arachidonic acid,AA)诱导的血小板最大聚集率(MARAA)和二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)诱导的血小板最大聚集率(MARADP)?结果:3组患者入院第1天CD62P?MARAA?MARADP无显著差异,治疗10 d后3组的CD62P?MARAA?MARADP值均下降,与入院第1天的CD62P?MARAA?MARADP值比较,差异有统计学意义?3组脑梗死患者血小板MARADP下降程度组间比较有差异,氯吡咯雷治组MARADP下降明显,阿司匹林联合氯吡格雷治疗组下降更明显?血小板MARAA?血小板CD62P下降程度组间比较无显著差异?结论:阿司匹林?氯吡格雷?阿司匹林联合氯吡格雷3种抗血小板治疗方法均能有效减少脑梗死急性期的血小板活化,降低血小板最大聚集率,提示临床治疗均有效;氯吡格雷和阿司匹林联合治疗更能抑制血小板的聚集,抗血小板疗效更好?     

疣状表皮发育不良患者皮损中朗格汉斯细胞CD1a和CD83表达

目的 观察疣状表皮发育不良(EV)患者皮损中朗格汉斯细胞(LC)的CD1a和CD83表达情况.方法 采用免疫组织化学方法检测10例EV患者皮损表皮中LC的表面标记分子CD1a和CD83的表达,并以10例正常人的眼皮标本作为对照.结果 所有组织中均未见CD83阳性LC,但均可见CD1a阳性LC.Ev组CD1a阳性Lc计数明显低于对照组(P<0.01),且分布不均匀.结论 EV患者的LC功能可能受到抑制.     

血小板采集后不同时间冷冻保存对其质量的影响

目的：观察血小板采集后不同时间冷冻保存对其质量的影响。方法：血小板采集后6h,24h,72h和96h加5％的DMSO于－80℃超低温冰箱冷冻保存。3个月后取出解冻,全自动生化细胞分析仪检测血小板计数（Pit）、血小板平均体积（MPV）。乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测血小板中LDH的含量,流式细胞仪检测血小板膜糖蛋白CD62p的表达。结果：血小板采集后6h和24h冷冻,Plt、MPV、pH、LDH和CD62p表达与新鲜血小板无明显差异,而采集后72h和96h冷冻血小板Pit、MPV和LDH含量明显降低,而pH和CD62p表达较新鲜血小板明显升高。结论：血小板采集后长时间放置后冻存会导致血小板激活,采集后应尽快冷冻保存,以保证冰冻血小板的质量。     

脑梗死急性期白细胞CD11a,CD18 和LFA-1表达与梗死体积的关系

目的: 探讨脑梗死患者急性期白细胞CD11a, CD18和LFA-1的表达及其免疫阳性细胞数与梗死灶体积的关系. 方法: 流式细胞技术测定30例脑梗死患者急性期(发病72 h内)和28例健康人多型核细胞(PMN)、单核细胞(MN)和淋巴细胞(LC) CD11a,CD18 和CD11a / CD18 (LFA-1)的表达,用阳性细胞百分率表示(%),并计算外周血中PMN,MN和LC CD11a,CD18,LFA-1免疫阳性细胞数. 结果: 脑梗死患者急性期PMN,MN和LC CD11a,CD18,LFA-1表达阳性百分率明显高于健康对照组(P<0.05), 在大( 大于 10 cm3 )、中( 5 cm3～10 cm3 )、小 ( 小于 5 cm3)3型不同梗死灶体积的脑梗死患者中,各型之间表达细胞百分率均无显著性差异( P>0.05 ). 外周血PMN表达 CD11a,CD18和LFA-1的阳性细胞数在3型梗死灶之间及与正常对照组之间均存在显著性差异( P<0.05), 表达阳性细胞数与梗死灶体积的大小有显著相关( r1 = 0.396, P<0.05; r2 = 0.987, P<0.01; r3 = 0.794, P<0.01). MN和LC CD11a,CD18,LFA-1表达阳性细胞数在3型梗死灶的患者中均无显著性差异( P>0.05),而与正常对照组之间均有显著性差异( P<0.05). 结论: 脑梗死急性期PMN, MN和LC CD11a,CD18,LFA-1表达上调,外周血中PMN CD11a,CD18和LFA-1表达免疫阳性细胞数增多且与梗死灶体积有关.